羊四苗分點(diǎn)同時(shí)免疫與單苗免疫對(duì)比試驗(yàn)

姚菊霞，祁廣儀，任寶璽，朱 瑗，劉芳農(nóng)（.定西市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅定西743000；.通渭縣畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心）

羊四苗分點(diǎn)同時(shí)免疫與單苗免疫對(duì)比試驗(yàn)

姚菊霞1，祁廣儀2，任寶璽2，朱 瑗1，劉芳農(nóng)1
（1.定西市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅定西743000；2.通渭縣畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心）

為探索不同組合的免疫方法對(duì)其抗體產(chǎn)生的影響，確立合理有效的免疫程序。試驗(yàn)將口蹄疫、羊三聯(lián)四防、小反芻獸疫和羊痘4種疫苗進(jìn)行不同組合，即分別進(jìn)行單苗單獨(dú)、兩兩組合、三三組合、4種疫苗同時(shí)分點(diǎn)注射，共分為15組，每組20只，對(duì)各組免疫后副反應(yīng)觀察和抗體水平檢測(cè)。結(jié)果表明：口蹄疫、三聯(lián)四防、小反芻獸疫和羊痘4種疫苗分點(diǎn)同時(shí)注射組產(chǎn)生的抗體水平，與單苗注射組相比，差異不顯著（P﹥0.05），疫苗注射后產(chǎn)生的抗體效價(jià)相對(duì)較高且穩(wěn)定，不同疫苗產(chǎn)生的抗體之間相互干擾、拮抗作用不明顯，抗體合格率分別在70%以上，均能達(dá)到國(guó)家規(guī)定的免疫要求，因此該免疫接種方法在實(shí)際工作中可推廣應(yīng)用。

羊疫苗；不同組合；分點(diǎn)注射；免疫抗體；合格率

近年來(lái)，國(guó)家對(duì)動(dòng)物疫病防控工作高度重視，實(shí)施強(qiáng)制免疫的動(dòng)物疫苗種類(lèi)較多且逐年增加，目前正在使用的羊疫苗主要有口蹄疫、三聯(lián)四防、小反芻獸疫、羊痘4種疫苗。每年春秋兩季按照“一畜一針，分次注射”傳統(tǒng)免疫方法程序復(fù)雜，基層動(dòng)物防疫工作量大，重復(fù)注射次數(shù)多，耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)，工作效率低，免疫效果差，人力、物力、財(cái)力資源浪費(fèi)嚴(yán)重，直接影響動(dòng)物防疫水平和防疫質(zhì)量。為了探索和創(chuàng)新動(dòng)物免疫新方法，改進(jìn)和提高動(dòng)物防疫水平，2013 ～2015年在通渭縣開(kāi)展了羊口蹄疫苗、三聯(lián)四防苗、小反芻獸疫苗、羊痘苗分組分點(diǎn)同時(shí)免疫試驗(yàn)以及擴(kuò)大群體試驗(yàn)研究，從而確定羊4種疫苗分點(diǎn)同時(shí)免疫的新型免疫操作程序。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

在通渭縣轄區(qū)隨機(jī)選擇5個(gè)存欄量100只左右的養(yǎng)羊場(chǎng)，選取2～3月齡未經(jīng)任何疫苗免疫的健康綿羊300只作為試驗(yàn)羊，免疫前對(duì)試驗(yàn)羊進(jìn)行基礎(chǔ)抗體滴度測(cè)定，所選試驗(yàn)羊布魯氏菌病抗體陰性，口蹄疫感染抗體陰性，免疫抗體滴度低于1∶16的選擇為試驗(yàn)對(duì)象。

1.2 試驗(yàn)疫苗

口蹄疫O型－亞洲I型二價(jià)滅活疫苗（OS＋JS株），中牧實(shí)業(yè)股份有限公司蘭州生物制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)1412003；羊快疫、猝狙、羔羊痢疾、腸毒血癥三聯(lián)四防滅活疫苗，山東綠都生物科技有限公司生產(chǎn)，批號(hào)1407009；小反芻獸疫活疫苗，新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)2014046－2；山羊痘活菌苗，哈爾濱維科生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司生產(chǎn)，批號(hào)2014008。

1.3 檢測(cè)試劑

口蹄疫O型抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自蘭州獸醫(yī)研究所，批號(hào)2015550511201；小反芻獸疫競(jìng)爭(zhēng)ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自蘭州獸醫(yī)研究所，批號(hào)20150529118；山羊痘間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自蘭州獸醫(yī)研究所，批號(hào)20150603119；暫無(wú)羊三聯(lián)抗體檢測(cè)試劑盒。

1.4 試驗(yàn)分組

將選取5個(gè)養(yǎng)羊場(chǎng)的300只試驗(yàn)羊，分別編號(hào)1～300號(hào)，隨機(jī)分成15組，每組20只，依次為第1 組1～20號(hào)、第二組2～40號(hào)……第15組281～300號(hào)。

1.5 免疫方法

按照表1所示進(jìn)行1～4種疫苗注射。單組疫苗免疫，注射部位為左右頸部；3種疫苗和4種疫苗同時(shí)分點(diǎn)免疫，注射部位為頸部左右和臀部左右各注射一針。注射時(shí)嚴(yán)格消毒，規(guī)范操作。免疫劑量：口蹄疫疫苗1mL／只，羊三聯(lián)滅活苗5mL／只，小反芻獸疫活疫苗1mL／只，山羊痘活菌苗1mL／只。

表1 試驗(yàn)羊疫苗注射分組表

1.6 臨床不良反應(yīng)觀察

所有試驗(yàn)羊在免疫注射后進(jìn)行臨床觀察7～10 d，主要觀察羊只的精神狀況、采食、體溫是否正常和是否有其他嚴(yán)重不良反應(yīng)等。

1.7 免疫抗體檢測(cè)

分別于免疫后15、30、45d和60d經(jīng)前腔靜脈采血，分離血清，用于抗體檢測(cè)。（1）O型口蹄疫抗體檢測(cè)：采用正向間接血凝試驗(yàn)，具體操作參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。判定標(biāo)準(zhǔn)：抗體效價(jià)≥1∶32，抗體陽(yáng)性；抗體效價(jià)＜1∶32，抗體陰性。（2）羊痘抗體檢測(cè)：采用間接ELISA方法檢測(cè)，具體操作參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。判定標(biāo)準(zhǔn)：OD450≥0.25，抗體陽(yáng)性；OD450≤0.2，抗體陰性。（3）小反芻獸疫抗體檢測(cè)：采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，具體操作參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。判定標(biāo)準(zhǔn)：PI≥45%，抗體陽(yáng)性，PI＜45%，抗體陰性。

1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

檢測(cè)數(shù)據(jù)按接種疫苗的種類(lèi)進(jìn)行分類(lèi)統(tǒng)計(jì)，口蹄疫、羊痘和小反芻獸疫均以抗體陽(yáng)性率表示，并應(yīng)用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)中單因素隨機(jī)分組方法進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床觀察

4種疫苗分組試驗(yàn)注射后，在24h內(nèi)個(gè)別羊只陸續(xù)出現(xiàn)精神沉郁、體溫升高、慢草不食、飲水少量、跛行等副反應(yīng)現(xiàn)象；有副反應(yīng)癥狀的主要是口蹄疫疫苗注射組，羊三聯(lián)苗注射組個(gè)別羊只有跛行癥狀，其它組未見(jiàn)明顯臨床癥狀。多種疫苗注射組與單苗注射組出現(xiàn)臨床癥狀的副反應(yīng)率沒(méi)有明顯差異，平均副反應(yīng)率15%以下。有臨床癥狀的羊只48h內(nèi)全部恢復(fù)正常，未出現(xiàn)過(guò)敏死亡情況。

2.2 不同免疫組口蹄疫抗體產(chǎn)生情況

從表2可以看出，每組試驗(yàn)于15d時(shí)抗體水平基本都達(dá)到最高值，且維持時(shí)間較長(zhǎng)，第60d時(shí)仍維持較高水平，抗體陽(yáng)性率均在70%以上。與其他組相比，第1組抗體水平較低，下降較快，且第1組與第15組之間差異顯著（P＜0.05），除第1組外其他各組之間差異不顯著（P＞0.05）。

表2 口蹄疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 不同免疫組羊痘抗體產(chǎn)生情況

從表3中可以看出，第10組抗體產(chǎn)生時(shí)間早，15d達(dá)到最高值，第9組、12組、14組在30d時(shí)抗體達(dá)到最高值，第4組、7組、13組、15組在45d時(shí)抗體達(dá)到最高值，除第4組和第7組外其余試驗(yàn)組抗體合格率于15d均已達(dá)到了國(guó)家規(guī)定70%的免疫要求，且維持時(shí)間較長(zhǎng)。方差分析顯示，第15組與其他各組之間差異不顯著（P＞0.05）。

2.4 不同免疫組小反芻獸疫抗體產(chǎn)生情況

從表4中可以看出，每組試驗(yàn)動(dòng)物在15d時(shí)已產(chǎn)生較高水平的抗體，30～45d抗體達(dá)到最高值，60d時(shí)抗體水平仍保持較高水平穩(wěn)定態(tài)勢(shì)。方差分析顯示，第15組與其他各組之間差異不顯著（P ＞0.05）。

表3 山羊痘抗體檢測(cè)結(jié)果

表4 小反芻獸疫抗體檢測(cè)結(jié)果

3 結(jié)論

口蹄疫、羊三聯(lián)、小反芻獸疫、羊痘4種疫苗兩兩組合、三三組合、或4種疫苗同時(shí)分點(diǎn)注射，副反應(yīng)率15%以下，與單苗注射組相比，臨床癥狀差異不顯著，未見(jiàn)不良反應(yīng)加重現(xiàn)象。

第15組口蹄疫免疫抗體水平高于第1組，維持時(shí)間較長(zhǎng)且穩(wěn)定，表明口蹄疫、羊三聯(lián)、小反芻獸疫、羊痘同時(shí)分點(diǎn)免疫的抗體水平要優(yōu)于單苗免疫組。羊痘苗、小反芻獸疫苗產(chǎn)生的抗體效價(jià)均較高，在抗體產(chǎn)生的整個(gè)時(shí)期，單苗注射組和4種疫苗同時(shí)注射組在抗體達(dá)到最高值時(shí)抗體合格率都在75%以上，均能達(dá)到或超過(guò)國(guó)家規(guī)定的免疫標(biāo)準(zhǔn)70%以上，且維持時(shí)間也較長(zhǎng)。從本次試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，一畜2苗、3苗、4苗分點(diǎn)同時(shí)注射后抗體產(chǎn)生過(guò)程中不會(huì)產(chǎn)生拮抗作用，反而在一定程度上還有促進(jìn)協(xié)同作用。

通過(guò)對(duì)通渭縣轄區(qū)30萬(wàn)只羊?qū)嵤耙恍蠖嗝缍帱c(diǎn)同時(shí)聯(lián)合注射效果研究”擴(kuò)群試驗(yàn)，疫苗注射副反應(yīng)率在15%以下，疫苗反應(yīng)死亡率在1／10 000以下，血清抽樣檢測(cè)抗體合格率達(dá)70%以上。

口蹄疫、羊三聯(lián)、小反芻獸疫和羊痘分點(diǎn)同時(shí)免疫對(duì)4種抗體的產(chǎn)生沒(méi)有顯著影響，沒(méi)有增加免疫副反應(yīng)，通過(guò)綜合分析，可在實(shí)際工作中大規(guī)模推廣“羊一畜多苗多點(diǎn)同時(shí)聯(lián)合注射”免疫操作程序。

本次試驗(yàn)不足之處在于缺少羊三聯(lián)抗體診斷試劑，項(xiàng)目實(shí)施中對(duì)羊三聯(lián)的免疫效果未進(jìn)行評(píng)價(jià)，影響試驗(yàn)的完整性；由于試驗(yàn)規(guī)模較大，對(duì)抗體監(jiān)測(cè)時(shí)間較短，對(duì)分點(diǎn)免疫注射后抗體消長(zhǎng)規(guī)律未能進(jìn)行深入跟蹤檢測(cè)，有待在今后的工作中進(jìn)一步完善。

［1］ 唐啟義，馮明光.實(shí)用統(tǒng)計(jì)分析及其DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)［M］.北京：科學(xué)出版社，2002：488－491.

［2］ 楊慧，封林，黎強(qiáng)，等.口蹄疫和豬瘟疫苗同時(shí)免疫注射豬的試驗(yàn)效果［J］.四川畜牧獸醫(yī)，2008，35（10）：29－31.

［3］ 華樹(shù)明.豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病分點(diǎn)免疫注射效果觀察［J］.獸醫(yī)導(dǎo)刊，2008，（4）：23－24.

［4］ 沈艷麗，蔡金山，趙志剛，等.豬多種疫苗分點(diǎn)同時(shí)注射的免疫抗體檢測(cè)試驗(yàn)［J］.山東畜牧獸醫(yī)，2011，32（1）：9－10.

［5］ 馬睿麟，蔡金山，沈艷麗，等.豬瘟、口蹄疫、豬繁殖與呼吸綜合征等多種疫苗免疫試驗(yàn)［J］.畜牧與獸醫(yī)，2010，42（10）：79－82.

［6］ 張長(zhǎng)龍，嚴(yán)寶英，賈文孝，等.豬瘟、豬口蹄疫、豬繁殖與呼吸綜合癥疫苗有效免疫試驗(yàn)初探［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2009，30（7）：101－103.

Contrast Test of Four Vaccine Immune Simultaneously at Different Points and Single Vaccine Immune in Sheep

YAO Ju－xia1，QI Guang－yi2，REN Bao－xi2，ZHU Yuan1，LIU Fang－nong1
（1.Dingxi Animal Disease Prevention and Control Center，Dingxi Gansu 743000 China；2.Tongwei Animal Disease Prevention and Control Center）

In order to determine the reasonable and effective immunization program，the different unities of vaccines impacting on the antibody production were explored.Four kinds of vaccines，including FMD vaccine，Combined Ovine／Caprine Clostridial Diseases Vaccine，Peste Des Petits Ruminants and Capripox，were immunized sheep through the procedures with respective single injection，every two or every three combinations and four vaccines immunized at the same time.The experiments were divided into 15groups，each group with 20sheep.The negetive effects and antibody levels in each group after immunization were observed.The results showed that antibody levels produced by four vaccines immunized at the same time had no significant differences in the antibody titers compared to that in single vaccine injection group.The mutual interference and antagonistic effects were not revealed between different vaccinations.The effective immune rate could reach more than 70%，which was coincided with the country standards.Therefore，the vaccination procedure can be popularized and applied in practical work.

Vaccines for sheep；different combinations of vaccines；injection at different points；antibody；qualified rate

S 852.4＋3

B

1004－6704（2016）03－0044－04

2015－09－17

姚菊霞1（1986－），女，甘肅通渭人，碩士，獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物疫病防治技術(shù)研究推廣工作。