載脂蛋白E基因、TOMM 40基因多態(tài)性與海南省百歲老人長(zhǎng)壽的關(guān)聯(lián)性

劉正旺，張明，楊華，云美玲，蔡望偉，張?jiān)葡?/p>

（1.海南省中醫(yī)院 心內(nèi)科，海南 ?？?70102；2.海南醫(yī)學(xué)院 生物化學(xué)和分子生物學(xué)教研室，海南 ?？?571199）

論著

載脂蛋白E基因、TOMM 40基因多態(tài)性與海南省百歲老人長(zhǎng)壽的關(guān)聯(lián)性

劉正旺1，張明1，楊華1，云美玲2，蔡望偉2，張?jiān)葡?

（1.海南省中醫(yī)院 心內(nèi)科，海南 海口570102；2.海南醫(yī)學(xué)院 生物化學(xué)和分子生物學(xué)教研室，海南 ?？?571199）

目的探討載脂蛋白E基因、線粒體外膜轉(zhuǎn)位酶同工酶40的r s2075650多態(tài)性與海南省百歲老人長(zhǎng)壽的關(guān)聯(lián)性。方法用聚合酶鏈反應(yīng)法分析百歲老人組（n=259）和對(duì)照組（n=529）載脂蛋白E基因、線粒體外膜轉(zhuǎn)位酶同工酶40的r s2075650的基因型和等位基因頻率。結(jié)果①載脂蛋白Eε2ε3、ε2ε4基因型頻率百歲老人組低于對(duì)照組；ε2等位基因頻率對(duì)照組高于百歲老人組。②百歲老人組線粒體外膜轉(zhuǎn)位酶同工酶40型頻率AA基因型頻率高于對(duì)照組；等位基因頻率分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。按載脂蛋白E基因分為攜帶ε4和非攜帶ε4等位基因進(jìn)行分層分析：攜帶ε4的AA基因型頻率百歲老人組高于對(duì)照組；A等位基因頻率百歲老人組高于對(duì)照組。非攜帶ε4的G A、AA基因型頻率百歲老人組高于對(duì)照組。等位基因A在非攜帶ε4等位基因頻率百歲老人組高于對(duì)照組。結(jié)論載脂蛋白E和線粒體外膜轉(zhuǎn)位酶同工酶40連鎖分析顯示，線粒體外膜轉(zhuǎn)位酶同工酶40的r s2075650位點(diǎn)AA基因型與攜帶ε4與百歲老人長(zhǎng)壽相關(guān)。等位基因A與攜帶ε4百歲老人長(zhǎng)壽有關(guān)聯(lián)。

長(zhǎng)壽；載脂蛋白E基因；線粒體外膜轉(zhuǎn)位酶同工酶40；基因多態(tài)性

目前，長(zhǎng)壽的遺傳學(xué)背景研究是各國(guó)的熱點(diǎn)。有研究表明，基因?qū)勖挠绊懺?0歲之前表現(xiàn)并不明顯，而在60歲之后明顯，這證明了基因影響人類壽命的論據(jù)，而且這種現(xiàn)象在高齡人群中更突出［1］。其中載脂蛋白E（A polipoprotein E，A P O E）基因?yàn)槟壳皩W(xué)術(shù)界公認(rèn)的與長(zhǎng)壽有關(guān)的基因。線粒體外膜轉(zhuǎn)位酶同工酶40（the translocase o f the mitochondrial o u ter membrane 40，T O MM40）是一種在線粒體外膜控制各種酶進(jìn)入線粒體發(fā)揮作用的關(guān)鍵通道，對(duì)線粒體發(fā)揮正常作用有直接影響。其由核基因表達(dá)。有研究認(rèn)為其與阿爾茨海默等慢性病、長(zhǎng)壽有關(guān)，且和A P O E基因有連鎖可能。

本課題對(duì)259例海南百歲老人和529例健康人A P O E基因和T O MM40基因rs2075650多態(tài)性進(jìn)行基因連鎖研究，探討其與長(zhǎng)壽的相關(guān)性。

1　資料與方法

1.1研究對(duì)象

百歲老人組259例。男性71例，女性188例；平均年齡（103.32±2.15）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)格按照長(zhǎng)壽老人年齡界定五步法確定長(zhǎng)壽老人［2］，取年齡≧100歲的長(zhǎng)壽老人作為研究對(duì)象。對(duì)照組529例。男性145例，女性384例；平均年齡（49.78±6.52）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：海南地區(qū)同一民族沒有血緣關(guān)系，無長(zhǎng)壽家族史，家族中至少2代無90歲的健康人群，所有對(duì)象經(jīng)調(diào)查組逐一核實(shí)篩選，驗(yàn)證確切無誤者確定為研究對(duì)象。根據(jù)中華人民共和國(guó)國(guó)務(wù)院《醫(yī)療機(jī)構(gòu)管理?xiàng)l例》規(guī)定［3］，本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)倫理審核通過，在實(shí)驗(yàn)前將實(shí)驗(yàn)方案和風(fēng)險(xiǎn)告知受試者及家屬，所有受試者或親屬簽署了知情同意書。

1.2材料與試劑

DN A M ar k erⅠ、DN A M ar k erⅡ、脫氧核糖核苷三磷酸（deo x y-ribon u cleotide triphosphate，dNT P）、Ta q酶、瓊脂糖、DN A提取試劑盒等購(gòu)自Tian g en公司，引物合成由上海生物技術(shù)有限公司完成。

1.3儀器與設(shè)備

電泳儀（JY600C，上海京工實(shí)業(yè)有限公司），微量移液器（德國(guó)Eppendor f公司），高速臺(tái)式離心機(jī)（H1650-W，湖南平凡儀器儀表有限公司），分析天平（上海升隆電子科技有限公司），超微量核酸蛋白測(cè)定儀（Nanodrop 2000/2000C，美國(guó)Thermo公司），聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PC R）儀（德國(guó)B iometra公司），凝膠成像分析系統(tǒng)（G el Doc 2000，美國(guó)B io-R ad公司），微波爐（MM721AA U-P W，中國(guó)美的公司），水浴箱（HH-W420，上海雙旭電子有限公司），通風(fēng)櫥（北京歐世佳實(shí)驗(yàn)室家具有限公司），搖勻器（WH-986，上海雙旭電子有限公司）。

1.4試驗(yàn)方法

1.4.1DNA的提取所有入組者取5m l靜脈血，乙二胺四乙酸（EDT A）抗凝，置入-80℃冰箱冷凍保存，標(biāo)本收集完成后，用改良酚-氯仿法［4］提取DN A，低溫下備用。

1.4.2P C R擴(kuò)增A P O E基因片段A P O E基因引物一參照文獻(xiàn)［5］，N1：5'-A T GCCG A T G A CC T GC A G A A TT-3'；N2：5'-A T GCCG A T G A CC T GC A G AA T C-3；N3：5'-CGCGG A C A T GG A GG A CG TTT-3'；N4：5'-CG CGG A C A T GG A GG A CG TT C-3'；N5：5'-G TT C A G T G A TT G T CGC T GGGC A-3'。反應(yīng)體系：總體積25μl，10×PC R B uff er 2.5μl，10mmol dNT P 2.5μl，N1/N2 1μl，N3/N4 1μl，N5 1μl，模板DN A 5μl，Ta q DN A聚合酶1μl，dd H2O 11μl。分A、B管進(jìn)行PC R擴(kuò)增，A管引物為N1、N3、N5，B管為N2、N4、N5。94℃預(yù)變性7min，94℃變性55 s，59℃退火45 s，72℃延伸1min，共循環(huán)30次，72℃再延伸7min。取5μl PC R反應(yīng)產(chǎn)物與1μl的6×加樣緩沖液混勻后，加樣于0.5×Tris-硼酸緩沖液（以下簡(jiǎn)稱T B E緩沖液）配制的含嗅化乙錠1.7%的瓊脂糖凝膠中，在0.5× T B E緩沖液以90 V電壓電泳約30min，紫外燈下觀察擴(kuò)增結(jié)果并照相。見圖1。

采用O li g o 6.0軟件設(shè)計(jì)A P O E基因引物：P1 為5'-T CC AA GG A GC T GC A GGCGGCG-3'；P2：5'-CC CGGCC T GG T A C A C T GCC A GG-3'。取100份標(biāo)本用P1/P2引物擴(kuò)增A P O E基因目的條帶。反應(yīng)體系10× PC R B uff er 2.5μl，10 mmol dNT P 2.5μl，P1/P2各1μl，模版DN A 1μl，Ta q聚合酶1μl，雙蒸水16μl，總體積25μl。PC R反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性7 min，94℃變性55 s，59℃退火45 s，72℃延伸1min，共循環(huán)30次，72℃再延伸10min。PC R產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖電泳證實(shí)為特異性條帶，經(jīng)超微量核酸蛋白測(cè)定儀檢測(cè)質(zhì)量在60 n g/μl以上，O D260/280在（1.91± 0.06）之間。每份標(biāo)本各取80μl由北京T I A N G EN公司測(cè)序，基因型與多重PC R所得出的結(jié)果吻合，提示多重PC R結(jié)果可靠，可以作為本次實(shí)驗(yàn)A P O E分型使用。見圖2。

圖1　PCR擴(kuò)增A PO E的6種基因型

圖2　ε3ε4基因型測(cè)序結(jié)果

1.4.3P C R擴(kuò)增TO MM 40基因片段采用O li g o 6.0軟件設(shè)計(jì)T O MM40基因引物：R1為5'-G A G AA G A G AAA CGC T G T C A C A C T CC A C T-3；R2：5'-G A G AA G A G AAA CGC T G T C A C A C T CC A CC-3'；R3：5'-GC A C A TT CG A GG A G T GCC A CCGG AA G T-3'。反應(yīng)體系：10× PC RB uff er 10μl，10 mmol dNT P2.5μl，P rimer R1/R2 1μl，P rimer R3 1μl，模板DN A 1μl，Ta q DN A酶1μl，dd H2O 17.5μl，總體積25μl。PC R反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性7min，94℃變性55 s，59℃退火45 s，72℃延伸1min，共循環(huán)30次，72℃再延伸10 min。A、B管進(jìn)行PC R擴(kuò)增，A管引物R1/R3，B管引物R2/R3取5μ1 PC R反應(yīng)產(chǎn)物與1μl的6×加樣緩沖液混勻后，加樣于0.5×T B E緩沖液配制的含嗅化乙錠1.7%的瓊脂糖凝膠中，在0.5×T B E緩沖液以90 V電壓電泳約30min，紫外燈下觀察擴(kuò)增結(jié)果并照相。PC R擴(kuò)增結(jié)果按5%比例進(jìn)行復(fù)檢，要求復(fù)檢和初檢的符合率達(dá)到100%。見圖3。

圖3　7份標(biāo)本TOMM40基因PCR目的條帶

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用S P SS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，H ardy-W einber g平衡用擬合優(yōu)度χ2檢驗(yàn)?；蛐团c等位基因頻率均以百分率（%）表示，組間比較用χ2檢驗(yàn)和F isher檢驗(yàn)，同時(shí)計(jì)算比值比（odds ratio，O R）和95%可信區(qū)間（con f idence inter v al，CI），P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1A PO E基因多態(tài)性

2.1.1經(jīng)吻合度檢驗(yàn)對(duì)照組A P O E基因型符合H ardy-W einber g平衡定律（χ2＜3.84，P＞0.05）。見表1。

2.1.2A P O E基因各基因型及等位基因分布經(jīng)吻合度檢驗(yàn)，百歲老人組、對(duì)照組A P O E基因型符合H ardy-W einber g平衡定律（χ2=1.84，P=0.062），百歲老人組和對(duì)照組的基因型分布頻率經(jīng)χ2檢驗(yàn)（χ2= 5.867，P=0.042），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，等位基因分布頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=20.512，P=0.003）。見表2。

2.1.3百歲老人組、對(duì)照組A P O E基因與長(zhǎng)壽的關(guān)聯(lián)性百歲老人組、對(duì)照組ε2ε2、ε4ε4、ε3ε4基因型頻率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而對(duì)照組ε2ε3、ε2ε4基因型頻率高于百歲老人組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

2.2TOMM40基因多態(tài)性

表1　百歲老人組和對(duì)照組的A PO E基因型構(gòu)成比　例（%）

2.2.1TO MM 40基因多態(tài)性H a rd y-W e in b e r g平衡對(duì)照組基因型符合H ardy-W einber g平衡，能夠代表群體的基因分布。見表4。

2.2.2TO MM 40基因各基因型及等位基因分布頻率T O MM40基因各基因型及等位基因分布中，百歲老人組和對(duì)照組的基因型分布頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=12.027，P=0.002），等位基因分布頻率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.798，P=0.094）。見表5。

2.2.3TO MM 40基因型、等位基因頻率與長(zhǎng)壽的相關(guān)性按是否攜帶A P O Eε4等位基因?qū)贇q老人組和對(duì)照組分為攜帶ε4組與非攜帶ε4組，對(duì)T O MM40基因型、等位基因頻率與長(zhǎng)壽的相關(guān)性進(jìn)行分析。結(jié)果表明，非攜帶A P O Eε4等位基因T O MM40基因型在百歲老人組和對(duì)照組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=249.658，P=0.000）。百歲老人組GG型的頻率為53.9%，G A型的頻率為33.3%，對(duì)照組GG型的頻率為63.0%，G A型的頻率為29.6%，兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ ＾O R=0.172，95%CI：0.165，0.180，χ2=2.028，P=0.028），百歲老人組GG型的頻率低于對(duì)照組，G A型的頻率高于對(duì)照組。百歲老人組AA型的頻率為12.8%，對(duì)照組為7.4%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＾O R=0.018，95%CI：0.015，0.020，χ2=5.884，P=0.000），百歲老人組高于對(duì)照組。百歲老人組等位基因G的頻率為70.5%，等位基因A 為29.5%，對(duì)照組等位基因G的頻率為77.8%，等位基因A為22.2%，兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＾O R= 0.007，95%CI：0.005，0.008，χ2=7.494，P=0.000）。百歲老人組等位基因G型的頻率低于對(duì)照組，等位基因A高于對(duì)照組。見表6。

表2　百歲老人組、對(duì)照組A PO E基因型、等位基因頻率分布　例（%）

表3　百歲老人組、對(duì)照組A PO E基因與長(zhǎng)壽的關(guān)聯(lián)性　例（%）

表4　TOMM40基因多態(tài)性H ar d y-We i n ber g平衡　例（%）

表5　百歲老人組和對(duì)照組TOMM40基因型、等位基因頻率分布　例（%）

攜帶A P O Eε4等位基因T O MM40基因型頻率百歲老人組與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2= 12.343，P=0.002）。G A型與GG型比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.010）；AA型與GG型比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.007）。等位基因A與G比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.027）。見表7。

表6　非攜帶ε4等位基因的TOMM40基因型、等位基因與長(zhǎng)壽的相關(guān)性　例（%）

表7　攜帶ε4基因型的TOMM40基因型、等位基因與長(zhǎng)壽的相關(guān)性　例（%）

3　討論

人類基因組計(jì)劃的研究結(jié)果表明，不同個(gè)體對(duì)疾病和環(huán)境有害因素的易感性是由細(xì)微的基因差異造成的［5］。細(xì)微的基因差異主要表現(xiàn)在基因多態(tài)性上，而單核苷酸多態(tài)性（sin g le n u cleotide polymorphism，S N P）與疾病及其他生命現(xiàn)象的相關(guān)性成為分子生物學(xué)及遺傳學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。除外顯子外，內(nèi)含子多態(tài)性與基因功能的關(guān)系也越來越受到人們的關(guān)注，其內(nèi)藏的可讀框架可以表達(dá)為成熟酶、逆轉(zhuǎn)錄酶和核酸內(nèi)切酶，對(duì)基因的表達(dá)和調(diào)控產(chǎn)生影響［6］。表觀遺傳學(xué)最新研究表明，核外分子構(gòu)成一個(gè)功能強(qiáng)大的信息緩沖區(qū)，內(nèi)含子被剪切后是該信息緩沖區(qū)中的分子來源之一。隨著研究的深入，內(nèi)含子基因多態(tài)性與長(zhǎng)壽的關(guān)系將會(huì)得到進(jìn)一步明確。

A P O E基因位于人類第19號(hào)染色體長(zhǎng)臂13區(qū)2帶（19q13.2）上，包含3個(gè)內(nèi)含子，4個(gè)外顯子?；虻淖罱K產(chǎn)物299個(gè)氨基酸殘基組成成熟蛋白［7］。其中外顯子4編碼112位半胱氨酸和158位精氨酸的DN A序列存在多態(tài)性，根據(jù)這2個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性，可將A P O E分為3種等位基因，即ε2、ε3和ε4。這3種等位基因又可構(gòu)成6種不同的基因型，即3種純合型（ε2/ε2、ε3/ε3、ε4/ε4）和3種雜合型（ε3/ε4、ε2/ε3、ε2/ε4）。

早期研究發(fā)現(xiàn)，載脂蛋白E與特異的脂蛋白受體作用而改變血循環(huán)中膽固醇的水平［8］。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，A P O E基因與影響人類健康長(zhǎng)壽的多種疾病有關(guān)，其中與L O A D的研究是近幾年較多。有研究［9］發(fā)現(xiàn)，A P O Eε4是患阿爾茨海默病和心血管疾病的高危因素。全基因組相關(guān)性研究發(fā)現(xiàn)，眾多阿爾茨海默病易感基因和等位基因，證實(shí)A P O E基因和阿爾茨海默病易感性有關(guān)［10-11］。A P O Eε4等位基因攜帶者阿爾茨海默病發(fā)病較早且存在更為廣泛的彌漫性老年斑，這與A P O Eε4等位基因數(shù)目有關(guān)。A P O Eε2等位基因則導(dǎo)致阿爾茨海默病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)下降和病理嚴(yán)重程度的減輕。S E R IP A等［12］對(duì)意大利86例診斷為癡呆漸進(jìn)性失語的患者和99例健康人作比較分析，發(fā)現(xiàn)A P O Eε3ε4、ε4ε4基因型與癡呆，尤其原發(fā)性失語顯著相關(guān)（P＜0.01）。糖尿病合并外周動(dòng)脈粥樣硬化的患者如果攜帶ε4等位基因更易出現(xiàn)認(rèn)知上的障礙［13］。胡才友等［14］研究表明，廣西巴馬地區(qū)老人A P O E基因多態(tài)性與其認(rèn)知功能改變相關(guān)，認(rèn)為A P O Eε4等位基因是長(zhǎng)壽老人認(rèn)知功能障礙發(fā)病的危險(xiǎn)因子。

J A C OB S EN等［15］對(duì)丹麥百歲老人進(jìn)行分析，認(rèn)為A P O Eε4等位基因與百歲老人的生存期有很大聯(lián)系。攜帶ε4等位基因者心血管疾病發(fā)生率高，壽命明顯縮短，非攜帶ε4等位基因者，生存期延長(zhǎng)。M A TE R A［16］對(duì)2 124例老人進(jìn)行A P O E基因分析和5年的生命質(zhì)量追蹤隨訪，發(fā)現(xiàn)女性ε2ε2基因型差異明顯（P＜0.01），女性老人ε2ε2基因型頻率明顯增多。A P O Eε4等位基因與其中觀察的671例老人死亡有關(guān)。相反，A P O Eε2等位基因降低總死亡率。MC K A Y等［17］通過對(duì)10 623例歐洲老年性黃斑變性患者和對(duì)照組10年的觀察，得出結(jié)論——A P O Eε4等位基因?qū)勖遣焕挠绕涫茿 P O Eε4ε4基因型。隨著年齡增加，檢測(cè)A P O E基因顯示ε4ε4基因型明顯減少，各個(gè)基因型無性別差異，這與M A TE R A［16］的研究結(jié)論不同。我國(guó)廣西巴馬地區(qū)、新疆長(zhǎng)壽老人A P O E基因多態(tài)性與長(zhǎng)壽現(xiàn)象的關(guān)聯(lián)研究發(fā)現(xiàn)，A P O E基因多態(tài)性與長(zhǎng)壽相關(guān)聯(lián)［18-19］，長(zhǎng)壽相關(guān)基因?yàn)锳 P O Eε2/ε2、ε3/ε3基因型。

筆者在該實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)，海南百歲老人組顯示ε3ε3基因型與百歲老人長(zhǎng)壽有關(guān)聯(lián)，但與ε2/ε2基因型不相關(guān)。

T O MM40是一種在線粒體外膜控制各種酶進(jìn)入線粒體發(fā)揮作用的關(guān)鍵通道，對(duì)線粒體發(fā)揮正常作用有直接影響。其由核基因表達(dá)。T O MM40基因位于染色體上位于19號(hào)染色體45312338～45422606區(qū)域，包含10個(gè)外顯子和9個(gè)內(nèi)含子。在第2內(nèi)含子基因位點(diǎn)45395619（rs2075650）存在G/A多態(tài)性。

DEE L EN等［20］通過對(duì)歐洲多個(gè)研究中心的薈萃分析發(fā)現(xiàn)，rs2075650與長(zhǎng)壽有關(guān)，主要表現(xiàn)在：與A P O E連鎖分析時(shí)，發(fā)現(xiàn)T O MM40的AA基因型與A P O E的ε4相關(guān)。M A R U SZ A K等［21］通過對(duì)414例L O A D患者、173位百歲老人、305位其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病的患者的T O MM40和A P O E基因進(jìn)行關(guān)聯(lián)性分析認(rèn)為，T O MM40AA基因型在遲發(fā)型阿爾茨海默病中更有意義。P O T K I N等［22］在對(duì)381例臨床診斷阿爾茨海默病患者進(jìn)行全基因關(guān)聯(lián)性分析發(fā)現(xiàn)，T O MM40基因的rs2075650多態(tài)性位點(diǎn)檢測(cè)率高出正常對(duì)照組2倍，認(rèn)為其能用來預(yù)測(cè)A D的發(fā)生。E L C O R O A R I S T I Z A B A L等［23］對(duì)90歲以上老人S N P位點(diǎn)進(jìn)行分析，認(rèn)為A D與T O MM40基因和A P O E基因多態(tài)性有關(guān)聯(lián)性。T O MM40基因與阿爾茨海默病易感性之間的聯(lián)系可能由于該基因與A P O E連鎖失衡所致［24-26］。

筆者對(duì)T O MM40基因的研究發(fā)現(xiàn)，百歲老人AA分布頻率高于對(duì)照組；等位基因A頻率在百歲老人組明顯高于對(duì)照組。對(duì)A P O E基因和rs2075650連鎖分析發(fā)現(xiàn)，A P O Eε4攜帶者中AA基因型與百歲老人長(zhǎng)壽有關(guān)。A等位基因與百歲老人長(zhǎng)壽有關(guān)。這與DEE L EN等［19-20，24-25］的報(bào)道一致。提示A P O E基因與T O MM40基因連鎖對(duì)長(zhǎng)壽產(chǎn)生影響，尤其在A P O Eε4攜帶者中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），提示其可能對(duì)ε4等位基因表達(dá)蛋白質(zhì)的功能產(chǎn)生積極效應(yīng)，限制ε4對(duì)機(jī)體的損害，具體機(jī)制有待深入研究。

［1］F O R NE Y K，D OB R I B A N E G A R A G N A N I P，et al.G enome-w ide scan in f ormed by a g e-related disease identi f ies loci f or e x ceptional h u manlon g e v ity［J］.P L o SG enet，2015，11（12）.D O I: 10.1371/j o u rnal.p g en.1005728.

［2］國(guó)家統(tǒng)計(jì)局人口統(tǒng)計(jì)司.中國(guó)人口統(tǒng)計(jì)年鑒［R］.北京:中國(guó)統(tǒng)計(jì)出版社，1993:52.

［3］中華人民共和國(guó)國(guó)務(wù)院.醫(yī)療機(jī)構(gòu)管理?xiàng)l例［Z］.1994.

［4］劉正旺，云美玲，鐘江華，等.提取陳舊血標(biāo)本中DN A的三種方法比較［J］.中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2012，12（3）:321-323.

［5］W A N G E.M icro R N A，the p u tati v e molec u lar control f or midli f e decline［J］.Ag ein g R es R e v，2007，6（1）:1-11.

［6］F IC HOU Y，G E H A NN I N P，C O RR E M，et al.E x tensi v e fu nctional analyses o f R H D splice site v ariants:I nsi g hts into the potential role o f splicin g in the physiolo g y o f R h［J］.Trans fu sion，2015，55（6 P t 2）:1432-1443.

［7］H A Y A S H I T，K A M A D A H，J I N G，et al.Di ff erent e x pression o f lo w density lipoprotein receptor and A P O E bet w een yo u n g ad u lt and old ratbrains a f ter ischemia［J］.Ne u rol R es，2006，28（8）:822-825.

［8］A C A R?I N L ET I B，Y A R D IMCI N，A Y TüR K Z，et al.The e ff ects and interactions o f A P O E and A P H-1A polymorphisms in A l z heimer disease［J］.T u r k J M ed S ci，2015，45（5）:1098-1105.

［9］L A B A T R OB E R T J，R OB E R T L.L on g e v ity and a g in g.R ole o f f ree radicals andx anthine o x idase.Are v ie w［J］.P athol B iol，2014，62（2）:61-66.

［10］B E R T R A M L.A l z heimer's disease g enetics c u rrent stat u s and fu t u re perspecti v es［J］.I nt R e v Ne u robiol，2009，8（4）:167-184.

［11］B E R T R A M L，T A N Z I R E.G enome-w ide association st u dies in A l z heimer's disease［J］.H u m M ol G enet，2009，18（2）:137-145.

［12］S E R IP A D，B I ZZ A RR O A，P A N Z A F，et al.The A P O E g ene loc u s in f rontotemporal dementia and primary pro g ressi v e aphasia［J］.A rch Ne u rol，2011，68（5）:622-628.

［13］S A V I N OV A O V，F(xiàn) I LL A U S K，H A RR I S W S，et al.E ff ects o f niacin and ome g a-3 f atty acids on the apolipoproteins in o v erw ei g ht patients w ithele v atedtri g lycerides andred u cedH D L cholesterol［J］.A therosclerosis，2015，240（2）:520-525.

［14］胡才友，楊澤，鄭陳光，等.廣西巴馬地區(qū)老人A P O E基因多態(tài)性與認(rèn)知功能的關(guān)系［J］.中國(guó)心理衛(wèi)生雜志，2005，19（6）:383-386.

［15］J A C OB S EN R，J A C OB S EN R，M A R T I N U SS EN T，et al.I ncreased e ff ect o f the A P O E g ene on s u r v i v al at ad v anced a g e in healthy and lon g-li v ed Danes:t w o nation w ide cohort st u dies［J］. Ag in g C ell，2010，9（6）:1004-1009.

［16］M A TE R A MG，S A N C A RL O D，P A N Z A F，et al.A polipoprotein E-related all-ca u se mortality in hospitali z ed elderly patients［J］. Ag e（Dordr），2010，32（3）:411-420.

［17］MC K A Y G J，S I L V E S T R I G，C H A K R A V A R T HY U，et al. V ariations in apolipoprotein E f re q u ency w ith a g e in a pooled analysis o f a lar g e g ro u p o f older people［J］.A m J Epidemiol，2011，173（12）:1357-1364.

［18］宗小芬，胡茂林，唐勁松，等.載脂蛋白E基因多態(tài)性與老年期抑郁癥的關(guān)聯(lián)性［J］.中華行為醫(yī)學(xué)與腦科學(xué)雜志，2015，24（4）: 319-322.

［19］C A P R I M，S A NT O R O A，G A R A G N A N I P，et al.G enes o f h uman lon g e v ity:an endless q u est［J］.C u rr V asc P harmacol，2014，12（5）:707-717.

［20］DEE L EN J，B EE K M A N M，UH HW，et al.G enome-w ide as-sociation st u dy identi f ies a sin g le ma j or loc u s contrib u tin g to s u r v i v al into old a g e［J］.Ag in g C ell，2011，10（4）:686-698.

［21］M A R U SZ A K A，P E P?O＇N S K A B，S A F R A N OW K，et al.T O MM40 rs10524523 polymorphism's role in late-onset A l z heimer's disease and in lon g e v ity［J］.J A l z heimers Dis，2012，28（2）:309-322.

［22］P O T K I N S G，G U FF A NT I G，L A K A T O S A，et al.H ippocampal atrophy as a q u antitati v e trait in a g enome-w ide association st u dy identi f yin g no v el s u sceptibility g enes f or A l z heimer's disease［J］.P L os O ne，2009，4（8）.D O I:10.1371/j o u rnal.pone.0006501.

［23］E L C O R O A R I S T I Z A B A L M X，GóM E Z B F，A R T A Z A A I，et al.G enetic pro f iles o f lon g e v ity and healthy co g niti v e a g in g in nona g enarians f romthe bas q u e co u ntry［J］.R e v EspG eriatr G erontol，2011，46（4）:217-222.

［24］YU C E，S E L T M A N H，P E S K I ND E R，et al.C omprehensi v e analysis o f A P O E and selected pro x imate mar k ers f or late-onset A l z heimer's disease:patterns o f lin k a g e dise q u ilibri u m and disease mar k er association［J］.G enomics，2007，89（6）:655-665.

［25］L A M B E R T J C，H E A T H S，E V EN G，et al.G enome-w ide association st u dy identi f ies v ariants at C L Uand C R1 associate associated w ith A l z heimer's disease［J］.Nat G enet，2009，41（10）: 1094-1099.

［26］I K ED A T，Y A M A D A M.R is k f actors f or A l z heimer's disease［J］. B rain Ner v e，2010，62（7）:679-690.

（申海菊 編輯）

Relationship of polymorphism s of APOE and TOMM 40 genes w ith longevity of Hainan centenarians

Zheng-wang Liu1，Ming Zhang1，Hua Yang1，Mei-ling Yun2，Wang-wei Cai2，Yun-xia Zhang2
（1.Cardiovascular Department，Traditional Chinese Medicine Hospital of Hainan Province，Haikou，Hainan 570102，China；2.Department of Biochemistry and Molecular Biology，Hainan Medical College，Haikou，Hainan 571199，China）

Objective To study the relationship of polymorphisms of apolipoprotein E（APOE）gene and translocase of outer mitochondrial membrane 40（TOMM40）gene with longevity of Hainan centenarians. M ethods Genotype and variation of allele frequencies of APOE gene and TOMM40 gene rs2075650 were analyzed in 259 cases of centenarian group and 529 cases of control group by polymerase chain reaction. Results The frequency of APOEε2ε3 andε2ε4 genotypes in the centenarian group was lower than that of the control group.Theε2 allele frequency of the control group was higher than that of the centenarian group. The frequency of AA genotype of TOMM40 gene in the centenarian group was higher than that of the control group，but there was no statistically significant difference in the allele frequency distribution.Stratification analysis was carried out based on carryingε4 allele of APOE gene or not.In the people who carriedε4，the frequency of AAgenotype of the centenarian group was higher than that of the control group，and the frequency of A allele of the centenarian group was also higher than that of the control group.In the people who did not carryε4，the frequency of GA and AA genotypes of the control group was lower than that ofthe centenarian group，and the same with the frequency of A allele.Conclusions Linkage analysis of APOE and TOMM40 genes showed that TOMM40 gene rs2075650 AA genotype and APOE ε4 are linked with longevity.Allele A may also be associated with longevity of the centenarians carrying APOEε4.

longevity；apolipoprotein E gene；translocase of outer mitochondrial membrane 40 gene；gene polymorphism

R 394

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.15.013

1005-8982（2016）15-0069-07

2015-10-21