磷酸化蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶、C/E BP同源蛋白在慢性間歇低氧大鼠肺組織中的表達(dá)變化及意義*

張嘉賓，張盼盼，王紅陽，寇育樂，王玲

（華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院 呼吸科，河北 唐山 063000）

論著

磷酸化蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶、C/E BP同源蛋白在慢性間歇低氧大鼠肺組織中的表達(dá)變化及意義*

張嘉賓，張盼盼，王紅陽，寇育樂，王玲

（華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院 呼吸科，河北 唐山 063000）

目的探討慢性間歇低氧（C I H）大鼠肺組織中磷酸化的蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶（p-P E R K）、CC AAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白（C/EB P）同源蛋白（C H O P）表達(dá)變化及意義。方法將60只大鼠隨機(jī)分成正常組（U C組）、C I H組，每組各自分成3、7、14、21和28 d 5個(gè)時(shí)間亞組。采用H E法觀察U C組和C I H組大鼠肺組織病理形態(tài)變化；采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)p-P E R K、C H O P蛋白表達(dá)及兩者的相關(guān)性；采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（R T-P C R）方法檢測(cè)兩組大鼠肺組織C H O P mR NA表達(dá)。結(jié)果①C I H組肺泡壁及間質(zhì)輕度水腫，少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡結(jié)構(gòu)紊亂，部分肺泡融合；U C組大鼠肺組織無明顯病理變化。②C I H組肺組織p-P E R K、C H O P蛋白表達(dá)高于U C組，于21 d表達(dá)最高。③C I H組肺組織C H O P mR NA表達(dá)高于U C組，于21 d表達(dá)最高。④P-P E R K、C H O P表達(dá)的上調(diào)呈正相關(guān)。結(jié)論慢性間歇低氧可引起肺組織損傷，而p-P E R K、C H O P蛋白的活化表達(dá)在慢性間歇低氧大鼠肺組織的損傷中可能存在一定的作用。

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征；慢性間歇低氧；磷酸化蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶；C/EB P同源蛋白；肺損傷

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征（obstr u cti v e sleep apnea-hypopnea syndrome，O S A H S）是以反復(fù)發(fā)生的低氧/復(fù)氧過程為特征的睡眠障礙性疾病［1］，使人體在睡眠過程中處于慢性間歇低氧（chronic intermittent hypo x ia，CI H）狀態(tài)，目前已知這種特殊模式的低氧可對(duì)人體的多個(gè)系統(tǒng)造成損害，如心腦血管疾病、認(rèn)知功能障礙、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病及肝損害等［2-3］。而缺氧是誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)（endoplasmic retic u l u m stress response，E RS）的重要外界因素之一［4］。磷酸化的蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶（phosphorylatedprotein k inaser li k eE Rk inase，p-P E R K）、CC AA T增強(qiáng)子結(jié)合蛋白（C/E B P）同源蛋白（C HO P）是參與E RS的重要因子，當(dāng)E RS持續(xù)存在時(shí)細(xì)胞外受體激酶磷酸與葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（g l u cose-re g ulated protein 78，G R P78）解離，發(fā)生自身聯(lián)合，自身磷酸化而激活，p-P E R K磷酸化真核翻譯起始因子重組人真核起始因子2-α（e uk aryotic initiation f ac tor 2-α，e I F2a），繼而選擇性地增加活化轉(zhuǎn)錄因子4 （acti v atin g transcription f actor 4，A T F4）m R N A的表達(dá)，最終上調(diào)促凋亡因子C HO P的表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡［5］。本課題通過建立CI H大鼠模型，模擬O S A H S患者睡眠過程中的低氧狀態(tài)，探討E RS相關(guān)因子p-P E R K、C HO P在CI H大鼠肺組織的表達(dá)變化，闡述p-P E R K、C HO P蛋白的表達(dá)在CI H大鼠肺損傷發(fā)生過程中的作用，為臨床治療及預(yù)防O S A H S患者肺組織損傷提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1慢性間歇低氧模型的建立及分組

采用隨機(jī)數(shù)字表法將60只W istar大鼠隨機(jī)分成正常組（U C組）、CI H組。每日于相同時(shí)間，將CI H組大鼠置于有機(jī)玻璃飼養(yǎng)箱內(nèi)，首先，給予氮?dú)?0 s（氧濃度低至5%），流速壓力為0.15MP a；其次，注入空氣40 s（恢復(fù)氧濃度至21%），流速壓力控制在0.8 MP a；再次，繼續(xù)注入空氣50 s（氧濃度維持在21%），流速壓力0.8MP a，使低氧箱內(nèi)氧濃度在5%～21%間形成周期交替，每120 s為1個(gè)循環(huán)周期，造成間歇低氧條件。將U C組大鼠每日于相同時(shí)間置于與5%CI H組相同的有機(jī)玻璃飼養(yǎng)箱內(nèi)，持續(xù)注入空氣120 s，流速壓力為0.8MP a，氧氣濃度維持在21%。兩組大鼠生活條件及飼養(yǎng)條件相同。兩組分別在建立模型的3、7、14、21和28 d隨機(jī)選取6只大鼠處死備用。

1.2方法

各組大鼠以10%水合氯醛（300m g/k g）腹腔注射麻醉后，開胸暴露心臟和雙肺。室溫肝素生理鹽水經(jīng)左升主動(dòng)脈將心臟血液快速?zèng)_洗干凈，取出雙肺，再次用生理鹽水沖洗2遍后，將左側(cè)肺浸入4%多聚甲醛中固定，石蠟包埋、切片，用于H E染色及免疫組織化學(xué)法染色；將右側(cè)肺組織置入-80℃冰箱冷凍保存，用于逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（re v erse transcription polymerase chain reaction，R T-PC R）檢測(cè)C HO P m R N A。

1.3病理形態(tài)觀察

4%多聚甲醛固定肺組織，常規(guī)石蠟包埋、切片，經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫水、蘇木精-伊紅染色法（hemato x ylin-eosin stainin g，H E）染色，光鏡下觀察病理形態(tài)變化。

1.4免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組肺組織p-P E R K、C H OP蛋白的表達(dá)

分別于3、7、14、21和28 d的兩組大鼠中隨機(jī)抽取2張切片，經(jīng)3%過氧化氫溶液浸潤(rùn)10min去除內(nèi)源性過氧化物酶，按照免疫組織化學(xué)法試劑盒說明書進(jìn)行操作。運(yùn)用M otic醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，以每張切片的積分光密度值（inte g ral optical density，I O D）代表蛋白相對(duì)表達(dá)水平，每張切片在×200鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，檢測(cè)I O D值，取平均值作為樣本。

1.5RT-PCR法檢測(cè)C H OP m RN A的表達(dá)

C HO P基因引物序列的設(shè)計(jì)與合成由上海生物工程有限公司完成。于冰上取凍存的右側(cè)肺組織，每份樣本約30m g，嚴(yán)格按照R N A提取試劑盒（日本Ta K a R a公司）提取m R N A，并檢測(cè)其濃度，將提取的R N A進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳判斷所提取的R N A有無降解，根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（日本Ta K a R a公司）合成cDN A，再按照擴(kuò)增試劑盒（Ta K a R a）操作步驟進(jìn)行擴(kuò)增，C HO P cDN A正反向引物各取0.4μl（其中正向引物為：5'-C TT C T C T GGC TT GGC T G A C T-3'，反向引物為：5'-T CCC TT GG T C TT CC T CC T C T-3'），之后一次添加產(chǎn)物片段，cDN A模板2.0μl、R O X1 0.4μl以及熒光（避光）10μl，將以上混合物按照以下條件進(jìn)行擴(kuò)增：95℃預(yù)變性30 s，95℃變性5 s，60℃退火31 s，共40個(gè)循環(huán)。分別得到擴(kuò)增曲線、熔解曲線及待測(cè)樣本表達(dá)量，應(yīng)用R otor-G ene 3000分析軟件判斷熔解曲線特異性及擴(kuò)增曲線是否為陽性；采用2-△△ct相對(duì)定量分析法計(jì)算兩組C HO P m R N A的相對(duì)含量。1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用S P SS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較用單因素方差分析，若方差齊則用兩兩比較t檢驗(yàn)，用P earson相關(guān)性分析法分析p-P E R K與C HO P表達(dá)的關(guān)系，P＜0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組大鼠肺組織病理形態(tài)的變化

CI H組大鼠肺組織水腫，肺泡間隔增寬，部分肺泡融合成較大的含氣囊腔，肺泡腔可見出血和蛋白滲出物，毛細(xì)血管床可見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；與CI H組比較，U C組無明顯病理變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明慢性低氧環(huán)境可造成大鼠肺組織損傷。見圖1。

2.2免疫組織化學(xué)法檢測(cè)兩組大鼠肺組織p-P E R K、C H OP蛋白表達(dá)的變化

圖1　大鼠肺組織病理形態(tài) （H E×200）

光學(xué)顯微鏡下觀察陽性細(xì)胞，陽性細(xì)胞胞漿呈棕黃色或淺黃色。U C組僅見少量散在陽性表達(dá)，CI H組陽性細(xì)胞表達(dá)明顯增多，主要集中在肺泡上皮細(xì)胞。U C組各時(shí)間亞組p-P E R K、C HO P蛋白的表達(dá)未見明顯差異；與U C組比較，CI H組各時(shí)間點(diǎn)p-P E R K、C HO P蛋白表達(dá)I O D值均高于U C組（P＜0.05）。p-P E R K、C HO P蛋白表達(dá)I O D值均隨間歇低氧時(shí)間延長(zhǎng)呈逐漸上升趨勢(shì)，其中p-P E R K蛋白表達(dá)28 d最高，而C HO P蛋白表達(dá)21 d最高，21與28 d比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果說明，慢性間歇低氧環(huán)境可使大鼠肺組織p-P E R K、C HO P蛋白表達(dá)升高。見圖2、3和表1、2。

2.3RT-PCR法檢測(cè)C H OP m RN A表達(dá)的變化

圖2　大鼠肺組織p-P E R K表達(dá)（免疫組織化學(xué)法×200）

U C組各時(shí)間亞組C HO P m R N A的表達(dá)未見明顯變化；與U C組比較，CI H組各時(shí)間點(diǎn)C HO P m R N A的表達(dá)增強(qiáng)（P＜0.05），且C HO P m R N A的表達(dá)隨慢性間歇低氧時(shí)間的延長(zhǎng)呈逐漸增強(qiáng)趨勢(shì)，于21 d表達(dá)最高，21與28 d比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0. 05）。結(jié)果說明慢性間歇低氧可使大鼠肺組織C HO P m R N A的表達(dá)升高。見圖4和表3。

圖3　大鼠肺組織C H OP表達(dá)（免疫組織化學(xué)法×200）

表1　UC組與C I H組p-P E R K蛋白表達(dá)I OD值比較（n=6，）

表1　UC組與C I H組p-P E R K蛋白表達(dá)I OD值比較（n=6，）

組別2 8 d U C組　1 1 . 3 6 ± 0 . 5 1 1 1 . 4 1 ± 0 . 3 9 1 1 . 5 0 ± 0 . 7 0 1 1 . 2 7 ± 0 . 5 1 1 . 2 3 ± 0 . 4 2 C I H組　1 4 . 9 4 ± 0 . 4 8 3 0 . 1 9 ± 6 . 5 1 4 5 . 8 0 ± 6 . 1 4 6 1 . 8 5 ± 2 . 2 3 6 6 . 1 9 ± 7 . 4 0 F值　2 5 . 3 7 4 　9 6 . 2 1 5 　2 0 7 . 3 2 6 　2 7 8 . 1 7 5 　2 6 9 . 8 7 3 P值　0 . 0 0 0 　0 . 0 0 0 　0 . 0 0 0 　0 . 0 0 0 　0 . 0 0 0 3 d 7 d 1 4 d 2 1 d

圖4　大鼠肺組織C H OP m RN A表達(dá)

表2　UC組與C I H組C H OP蛋白表達(dá)I OD值比較（n=6，）

表2　UC組與C I H組C H OP蛋白表達(dá)I OD值比較（n=6，）

組別2 8 d U C組　8 . 7 7 ± 0 . 6 1 8 . 8 3 ± 0 . 6 5 8 . 7 4 ± 0 . 4 8 8 . 5 3 ± 0 . 4 8 8 . 9 4 ± 0 . 5 2 C I H 組1 1 . 7 1 ± 0 . 6 2 2 5 . 8 6 ± 1 . 9 9 4 1 . 9 3 ± 3 . 3 8 6 2 . 8 9 ± 9 . 2 2 6 2 . 2 9 ± 5 . 5 4 F值　3 6 . 8 6 7 　7 2 . 6 1 5 　1 0 2 . 7 2 2 　2 8 5 . 2 6 7 　2 3 6 . 7 8 3 P值　0 . 0 0 0 　0 . 0 0 0 　0 . 0 0 0 　0 . 0 0 0 　0 . 0 0 0 3 d 7 d 1 4 d 2 1 d

表3　UC組與C I H組C H OP m RN A表達(dá)水平比較（n=6，）

表3　UC組與C I H組C H OP m RN A表達(dá)水平比較（n=6，）

組別2 8 d U C組　0 . 1 4 ± 0 . 0 2 0 . 1 5 ± 0 . 0 3 0 . 1 4 ± 0 . 0 2 0 . 1 6 ± 0 . 0 3 0 . 1 6 ± 0 . 0 4 C I H 組 0 . 1 8 ± 0 . 0 1 0 . 2 7 ± 0 . 0 4 0 . 3 7 ± 0 . 0 6 0 . 4 7 ± 0 . 0 5 0 . 4 4 ± 0 . 0 7 F值　2 3 . 5 7 8 　8 7 . 5 6 4 　1 8 4 . 2 2 6 　2 9 6 . 3 6 6 　2 6 9 . 7 8 8 P值　0 . 0 0 0 　0 . 0 0 0 　0 . 0 0 0 　0 . 0 0 0 　0 . 0 0 0 3 d 7 d 1 4 d 2 1 d

2.4大鼠肺組織p-P E R K蛋白與C H OP表達(dá)的相關(guān)性分析

模型組大鼠肺組織p-P E R K與C HO P蛋白表達(dá)I O D值呈正相關(guān)（r=0.937，P=0.000）。

3　討論

O S A H S是呼吸科常見的睡眠障礙性疾病，有近4%的人受其影響，有著較高的發(fā)病率及死亡率。研究證實(shí)，O S A H S增加了神經(jīng)認(rèn)知性疾病、代謝性疾病及心血管疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)［6-7］。關(guān)于O S A H S對(duì)肺組織影響的研究甚少，CI H為O S A H S獨(dú)特的病生理改變，通過建立CI H模型，模擬O S A H S患者睡眠過程中的低氧狀態(tài)，探討O S A H S對(duì)肺組織的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CI H組大鼠肺泡壁間隔增寬，部分肺泡結(jié)構(gòu)破壞、融合，間質(zhì)充血、水腫，同時(shí)伴有少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，說明CI H這種獨(dú)特的低氧模式可引起大鼠肺組織損傷。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是細(xì)胞代謝和蛋白折疊、修飾及轉(zhuǎn)運(yùn)的中心場(chǎng)所，當(dāng)細(xì)胞遭受缺氧、能量耗竭、鈣超載等外界刺激時(shí)，可誘導(dǎo)E RS的發(fā)生［8-10］。E RS參與多種疾病的發(fā)生、發(fā)展過程，如神經(jīng)退行性疾病、多發(fā)性硬化癥及糖尿病等［11-12］，目前其機(jī)制研究認(rèn)為，E RS狀態(tài)下，大量未折疊或錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)堆積，激活下游信號(hào)通路，引起一系列的偶聯(lián)反應(yīng)來應(yīng)對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，該反應(yīng)統(tǒng)稱為未折疊蛋白反應(yīng)（u n f old protein response，U P R）［13］。E RS持續(xù)存在時(shí)，U P R不能緩解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)，U P R中一些促凋亡信號(hào)通路被激活，分別為P E R K、活化轉(zhuǎn)錄因子6、人X盒結(jié)合蛋白13條信號(hào)通路，該3條信號(hào)通路均可激活C HO P蛋白，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［14-16］。然而目前關(guān)于E RS對(duì)CI H大鼠肺組織的影響研究較少。

P E R K通路是U P R中最先被激活也是最主要的信號(hào)通路。P E R K可誘導(dǎo)胰島B細(xì)胞凋亡、加重神經(jīng)元損傷、加重缺血再灌注損傷等［17-18］。免疫組織化學(xué)法結(jié)果提示隨間歇低氧時(shí)間的延長(zhǎng)，p-P E R K、C HO P蛋白在肺組織的表達(dá)均呈現(xiàn)逐漸升高趨勢(shì)，且兩者的升高趨勢(shì)一致，分別在28 d組和21 d組表達(dá)最多，21與 28 d組比較表達(dá)無明顯變化；同時(shí)R T-PC R結(jié)果顯示C HO P m R N A表達(dá)隨間歇低氧時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)逐漸升高，在21 d組表達(dá)最高，與28 d組比較表達(dá)無明顯變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，CI H這種特殊的低氧模式可能誘導(dǎo)E RS的發(fā)生，而p-P E R K、C HO P蛋白的表達(dá)趨勢(shì)呈正相關(guān)，進(jìn)一步說明CI H大鼠肺組織損傷可能與E RS激活P E R K通路，誘導(dǎo)C HO P蛋白高表達(dá)，從而介導(dǎo)細(xì)胞凋亡有相關(guān)性。

綜上所述，慢性間歇低氧可以引起肺組織損傷，而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)因子p-P E R K、C HO P可能參與慢性間歇低氧肺組織的損傷過程，為臨床預(yù)防及治療慢性間歇低氧造成的肺損傷提供靶點(diǎn)，同時(shí)也為診治O S A H S患者繼發(fā)的肺部疾病提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

［1］JU L I A N G S，O L I V E I R A DE，F(xiàn) A V A R O V M，et al.C hronic intermittent hypo x ia increases encodin g pi g ment epitheli u m-deri v ed f actor g ene e x pression，altho u g h not that o f the protein itsel f，in the temporal corte x o f rats［J］.J B ras P ne u mol，2015，41（1）:39-47.

［2］王玲，張盼盼，王紅陽，等.線粒體自噬對(duì)間歇低氧早期大鼠認(rèn)知功能影響的初探［J］.中華結(jié)核和呼吸雜志，2014，37（11）:840-844.

［3］劉志娟，郝青林.氧化應(yīng)激在O S A H S合并代謝綜合征作用機(jī)制研究進(jìn)展［J］.臨床肺科雜志，2011，16:1437.

［4］王琪，段冷昕.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中G R P78和A T F4-C HO P-P u ma信號(hào)通路與帕金森病的關(guān)系及其治療靶點(diǎn)的研究進(jìn)展［J］.神經(jīng)藥理學(xué)報(bào)，2013，3（3）:20.

［5］K A P OO R A，S A N Y A L A J.Endoplasmic retic u l u m stress and the u n f olded protein response［J］.C lin L i v er Dis，2009，13（4）:581-590.

［6］P A S C H ETT A E，B E L IC P，A L I S I A，et al.O S A S-related inf lammatory mechanisms o f li v er in j u ry in nonalcoholic f atty li v er disease［J］.M sdiators I n f lamm，2015，2015:1-10.

［7］DE W A N N A，N I ET O F J，S O M E RS V K.I ntermittent hypo x emia and O S A:implicationa f or comorbidities［J］.C hest，2015，147（1）: 266-274.

［8］L UO K，C A O S S.Endoplasmic retic u l u m stress in intestional epithelial cell fu nction and in f lammatory bo w el disease［J］.G as troenterol R es P ract，2015，2015:328791.D O I:10.1155/2015/ 328791.

［9］U L I A N IC H L，I N S A B A T O L.Endoplasmic retic u l u m stress in endometrial cancer［J］.F ront M ed（L a u sanne），2014，1:55.

［10］劉蜜，劉秀華.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與心血管疾?。跩］.國(guó)際病理科學(xué)與臨床雜志，2011，31（4）:305-309.

［11］Y A N G E S，B A E J Y，K IM T H，et al.I n v ol v ement o f endoplasmic retic u l u m stress response in oro f acial in f lammatory pain ［J］.E x p Ne u robiol，2014，23（4）:372-380.

［12］HU A N G L，X I E H，L I U H.Endoplasmic retic u l u m stress，diabetes mellit u s，and tiss u e in j u ry［J］.C u rr P rotein P ept S ci，2014，15（8）:812-818.

［13］JU N G E J，A V L I Y A KU L OV N K，BOO NT H E U N G P，et al. P ro-o x idati v e DE P chemicals ind u ce heat shoc k proteins and an u n f oldin g protein response in a bronchial epithelial cell line as determined by D IG E analysis［J］.P roteomics，2007，7（21）:3906-3918.

［14］劉寶琴，王華芹.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與未折疊蛋白反應(yīng)的研究進(jìn)展［J］.中華腫瘤防治雜志，2010，17（11）:869-872.

［15］U Z I D，B A R D A L，S C A I E W IC Z V，et al.Endoplasmic retic ul u m（Er）stress and the u n f olded protein response（U pr）are ma j or re g u lators o f acetaminophen（A pap）-ind u ced hepato x icity［J］. H epatolo g y，2011，59（3）:495-503.

［16］L I G，M O N GI LL OM，T HO R PE，et al.U P R-ind u ced macropha g e apoptosis in v ol v es a no v el C HO P-E R o x idase-calciu m/C a M KⅡ-R O S path w ay.A rteriosclerosis Thrombosis and-V asc u lar B iolo g y，2008.28（6）:E52-E53.

［17］W A N G C，C U A N Y，Y A N G J.C yto k ines in the propression o f pancreatic-cell dys fu nction［J］.I nt J Endocriol，2010，10:136.

［18］宋洋，袁宜勤，郁潔.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激P E R K凋亡通路研究進(jìn)展［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2013，31（5）:1009-1011.

（申海菊 編輯）

Expression and significance of p-PERK and CHOP protein in lung tissue of rats in chronic interm ittent hypoxia*

Jia-bin Zhang，Pan-pan Zhang，Hong-yang Wang，Yu-le Kou，Ling Wang
（Department of Respiratory Diseases，the Affiliated Hospital，North China University of Science and Technology，Tangshan，Hebei 063000，China）

Objective To investigate the changes of RNA-dependent protein kinase-like endoplasmic reticulum kinase（p-PERK）and CCAAT enhancer binding protein（C/EBP）homology protein（CHOP）expression in lung tissue of rats with chronic intermittent hypoxia（CIH）.Methods Wistar rats were selected to produce a sleep rat model with chronic intermittent hypoxia.Sixty rats were randomly divided into normal group （UC）and CIH group；and each group was separated into 3-d，7-d，14-d and 21-d and 28-d five subgroups. HE method was used to observe the pathological changes of the rat lung tissue in the control and model groups.Immunohistochemical method was used to detect the p-PERK and CHOP expressions and their correlation was analyzed.RT-PCR was adopted for detection of CHOP mRNA expression in the rat lung tissue of the two groups.Results In the CIH group，there were mild edema and a small amount of inflammatory cell infiltration in the alveolar walls and interstitium，alveolar structure disorder，and partial alveolar fusion；while there were no obvious pathological changes of rat lung tissue in the UC group.The expressions of p-PERK and CHOP in the CIH group was higher than those in the UC group，the expression levels on the 21st d were the highest.The expression of CHOP mRNA in the lung tissue of the CIH group was higher than thatin the lung tissue of the UC group，which was the highest on the 21st d.The up-regulated p-PERK and CHOP expressions were in a positive correlation.Conclusions Chronic intermittent hypoxia can cause lung injury；and the up-regulated expressions of p-PERK and CHOP may play certain roles in the injury of lung tissue in rats with chronic intermittent hypoxia.

obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome；chronic intermittent hypoxia；phosphorylated protein kinase-like ER kinase；CCAAT enhancer binding protein（C/EBP）；lung tissue

R 563.9

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.15.007

1005-8982（2016）15-0038-06

2015-08-12

河北省自然科學(xué)基金（No：H2014209231）

王紅陽，E-mail：tsmy w hy@163.com；Tel：15383056835