四神丸對脾腎陽虛泄瀉模型大鼠實驗研究*

藺曉源　鄧　娜　李　霞　劉富林△（1.湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，湖南 長沙 410007；2.湖南省中藥粉體與創(chuàng)新藥物省部共建國家重點實驗室培育基地，湖南 長沙 410208；.湖南中醫(yī)藥大學，湖南 長沙 410208）

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四神丸對脾腎陽虛泄瀉模型大鼠實驗研究*

藺曉源1，2鄧娜3李霞3劉富林3△
（1.湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，湖南 長沙 410007；2.湖南省中藥粉體與創(chuàng)新藥物省部共建國家重點實驗室培育基地，湖南 長沙 410208；3.湖南中醫(yī)藥大學，湖南 長沙 410208）

目的 觀察四神丸對脾腎陽虛泄瀉模型大鼠的影響。方法 將40只SD大鼠隨機分為正常組、模型組、得舒特組和四神丸組各10只；除正常組外，其余各組均采用灌服大黃水煎液和肌內(nèi)注射氫化可的松復制脾腎陽虛泄瀉大鼠模型，灌胃14 d后觀察各組大鼠的一般狀態(tài)、腹瀉指數(shù)和臟器指數(shù)。結(jié)果 模型組大鼠的體質(zhì)量減輕，腹瀉指數(shù)增加，胸腺、脾、腎、睪丸各臟器指數(shù)均出現(xiàn)不同程度的降低或升高，與正常組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05或P＜0.01）；而四神丸組大鼠的體質(zhì)量增加、腹瀉指數(shù)降低，各臟器指數(shù)也明顯改善，與模型組比較有統(tǒng)計學差異（P＜0.05或P＜0.01）；但四神丸組上述指標與得舒特組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結(jié)論 四神丸能有效緩解脾腎陽虛泄瀉模型大鼠癥狀，具有良好的止瀉作用。

四神丸泄瀉脾腎陽虛大鼠

【Abstract】Objective：To investigate the effect of Sishenwan on model rats with diarrhea of asdthenic splenonephro-yang.Methods：40 SD rats were randomly divided into the normal group，the model group，Dicetel group and Sishenwan group with 10 rats in each.Except the normal group，the other groups were treated with intragastric administration of rhubarb decoction and intramuscular injection of hydrocortisone to replicate model rats with diarrhea of asdthenic splenonephro-yang.The general state，diarrhea index and organ index of rats were observed 14d after intragastric administration.Results：In the model group，the weight dropped；diarrhea index increased；indexes of thymus，spleen，kidney and testis organ reduced or increased to different degree.Compared with the normal group，the differences were statistically significant（P＜0.05 or P＜0.01）.In Sishenwan group，the weight gained；diarrhea index decreased；Viscera indexes were also significantly improved.Compared with the model group，there were significant differences（P＜0.05 or P＜0.01）.However，compared with Dicetel group，the above indexes of Sishenwan group had no significant difference（P＞0.05）.Conclusion：Sishenwan can effectively alleviate the symptoms of model rats with diarrhea of asdthenic splenonephro-yang，and has a good anti diarrhea effect.

【Key words】Sishenwan；Diarrhea；Asdthenic splenonephro-yang；Rats

腹瀉型腸易激綜合征（IBS-D）是臨床常見的功能性胃腸病，其發(fā)病率和復發(fā)率高，治愈難度大，嚴重危害了人們的身心健康。四神丸是治療脾腎陽虛型泄瀉的經(jīng)典方劑，臨床用于治療IBS-D等多種腸道疾病療效顯著［1-2］，其治病機理研究已逐漸成為當前的研究熱點，但目前使用病證結(jié)合的動物模型研究仍然少見。為了深入開展四神丸的作用機制研究，筆者先期觀察了四神丸對脾腎陽虛泄瀉模型大鼠的影響。現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1　材料與方法

1.1動物SPF級SD大鼠40只，雄性，體質(zhì)量180～ 220 g，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，動物許可證號：SCXK（相）2011-0003。

1.2藥物四神丸 （北京同仁堂天然藥物有限公司，國藥準字Z13020656，規(guī)格：27 g/瓶），研碎后過篩，用蒸餾水配制成 0.183 g/mL的混懸液放入4℃冰箱備用。得舒特（匹維溴銨片，法國蘇威制藥公司，批準文號20120519，規(guī)格：50mg/片），研碎后過篩，配制成1.523 mg/mL的藥液備用。

1.3試劑與儀器氫化可的松注射液（天津金耀氨基酸有限公司，國藥準字H12020887，規(guī)格20 mL∶100 mg）；AUW120D精密電子天平（日本島津）；Pureloab Classic UVF超純水儀（法國ELGA Labwater）。

1.4造模與分組將40只大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后，根據(jù)隨機數(shù)字表法選取10只為正常組，其余大鼠參考文獻［3］造模：第1階段灌服大黃水煎液50 g/（kg·d），14 d，第2階段肌內(nèi)注射氫化可的松25 mg/（kg·d），11 d。后將造模大鼠又隨機分為模型組、得舒特組和四神丸組，每組10只。

1.5給藥方法造模結(jié)束后開始灌胃給藥。四神丸組大鼠每日按1.83 g/kg劑量灌胃（按60 kg成人每日18 g劑量換算），模型組給予等容量蒸餾水，得舒特組按15.23 mg/kg劑量給予得舒特水溶液（按60 kg成人每日150 mg劑量換算），正常組常規(guī)喂養(yǎng)。給藥14 d。

1.6標本采集與檢測1）一般狀態(tài)：自造模后每日觀察各組大鼠的精神、活動、毛發(fā)、飲食量、二便等一般情況，并記錄各組大鼠給藥前后的體質(zhì)量。2）腹瀉指數(shù)：給藥前后觀察各組大鼠的腹瀉情況并計算腹瀉指數(shù)。腹瀉指數(shù)=稀便率×平均稀便級。稀便率指每只大鼠所排稀便數(shù)與總便數(shù)之比；稀便級是以稀便污染濾紙形成污跡面積的大小分4級，標準如下：污跡直徑＜1 cm 為1級，1～2 cm為2級，2～3 cm為3級，＞3 cm為4級，平均稀便級=稀便級數(shù)總和/稀便次數(shù)。3）臟器指數(shù)：給藥結(jié)束后處死大鼠，迅速摘取脾、胸腺、腎、睪丸稱質(zhì)量，計算臟器指數(shù)。臟器指數(shù)=臟器質(zhì)量/體質(zhì)量× 100%。

1.7統(tǒng)計學處理應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計軟件分析。計量資料以（±s）表示，組間比較采用t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)　果

2.1各組大鼠一般狀態(tài)變化見表1。正常組大鼠活動自如、毛發(fā)光澤、飲食、肛溫和大便均正常，體質(zhì)量也保持一定的增長。模型組大鼠從造模第2周起出現(xiàn)反應(yīng)遲鈍、活動也明顯減少、毛發(fā)逐漸枯萎，大便稀軟；第3周起飲食減少、爪甲色淡、尾巴變涼、肛溫下降、大便清稀、肛周污穢；模型組大鼠上述部分癥狀雖然在灌胃開始后有輕微好轉(zhuǎn)，但大便清稀一直存在；另外模型組1只大鼠因極度消瘦死亡。四神丸組和得舒特組大鼠經(jīng)灌胃給藥1周后，上述癥狀均有不同程度的緩解，主要表現(xiàn)在活動和飲食增多，糞便次數(shù)減少且成形；四神丸組1只大鼠因灌胃不當死亡。給藥結(jié)束后，模型組體質(zhì)量增長值明顯低于正常組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；四神丸組和得舒特組的體質(zhì)量增長值均高于模型組（P＜0.01）。

表1　各組大鼠體質(zhì)量比較（g，±s）

表1　各組大鼠體質(zhì)量比較（g，±s）

與正常組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

組別n　增長值正常組　10　70.37±9.86模型組　9　26.31±4.62**得舒特組　10　78.04±12.05△△給藥前　給藥后326.29±27.06　398.28±34.04 231.34±21.77　256.07±23.15 227.05±24.96　307.43±25.36四神丸組　9　229.52±19.43　335.30±28.39 103.18±15.29△△

2.2各組大鼠腹瀉指數(shù)比較見表2。給藥前四神丸組、得舒特組與模型組的腹瀉指數(shù)比較差異不顯著（P＞0.05）。給藥后四神丸組和得舒特組的腹瀉指數(shù)均明顯低于模型組（P＜0.05）。

表2　各組大鼠腹瀉指數(shù)比較（±s）

表2　各組大鼠腹瀉指數(shù)比較（±s）

組別　n正常組　10模型組　9得舒特組　10給藥前　給藥后0 0 1.33±0.16　1.30±0.15 1.32±0.13　1.05±0.11△四神丸組　9　1.34±0.15　0.97±0.12△

2.3各組大鼠臟器指數(shù)比較見表3。模型組大鼠的胸腺臟器指數(shù)降低，脾、腎、睪丸的臟器指數(shù)升高，與正常組比較差異均有統(tǒng)計學意義 （P＜0.05或P＜0.01）。四神丸組的胸腺臟器指數(shù)較模型組升高（P＜0.05），其脾、腎、睪丸的臟器指數(shù)較模型組降低（P＜0.05或P＜0.01），與得舒特組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

表3　各組大鼠臟器指數(shù)比較（%，±s）

表3　各組大鼠臟器指數(shù)比較（%，±s）

組別　n正常組　10模型組　9得舒特組　10胸腺　脾0.156±0.025　0.217±0.031 0.123±0.019**0.235±0.033*0.146±0.021△　0.223±0.028四神丸組　9　0.145±0.020△　0.220±0.032△睪丸0.316±0.042　0.533±0.076 0.428±0.050**0.652±0.091**0.357±0.046△△0.628±0.105△0.349±0.049△△0.617±0.083△△腎

3　討　論

IBS-D屬于中醫(yī)“泄瀉”范疇。目前西醫(yī)對癥治療IBS-D缺乏特效藥物及方法，且有明顯副作用；而中醫(yī)藥通過辨證論治療效可靠，且副作用小，在本病的防治中發(fā)揮了顯著優(yōu)勢［4］。泄瀉病位在腸，脾失健運是其關(guān)鍵，同時與腎臟密切相關(guān)。如《靈樞·邪氣臟腑病形》曰“腎脈小甚為洞泄”。在此認識的基礎(chǔ)上，后世明確提出了脾腎陽虛的五更泄瀉，基于“脾腎相關(guān)”理論，治當益火補土。趙獻可在《醫(yī)貫》中也指出“命門之火旺，火能生土，而脾亦強”?！秲?nèi)科摘要》所載四神丸由《普濟本事方》的二神丸與五味子散組合而成，為治療腎泄的名方。方中重用補骨脂為君，溫腎助陽，壯火益土，暖脾止瀉；臣以肉豆蔻溫中澀腸；佐以吳茱萸助陽止瀉，五味子收斂固澀。本方配伍精，藥味少，藥力專，應(yīng)用廣，自問世以來，經(jīng)歷代臨床實踐證實其療效卓越。文獻報道，四神丸臨床用于治療IBS-D效果顯著［1-2］。

目前四神丸治療泄瀉的藥理機制研究主要集中在脾虛泄瀉和脾腎陽虛泄瀉兩大方面。研究發(fā)現(xiàn)，四神丸給藥組大鼠血漿胃動素、胃泌素含量均較模型組升高，并能抑制正常和脾虛小鼠的炭末推進率［5］。此外，四神丸還可升高脾虛泄瀉大鼠十二指腸黏膜分泌型IgA分泌量和IL-2含量，共同恢復細胞免疫和體液免疫功能而起作用［6］。筆者前期研究采用灌服大黃水煎液和肌內(nèi)注射氫化可的松已成功復制脾腎陽虛泄瀉大鼠模型，目前的氫化可的松模型是較為經(jīng)典的腎陽虛證動物模型，研究表明，使用25 mg/kg劑量的氫化可的松腹腔注射可成功復制腎陽虛小鼠模型［7］；而使用大黃水煎液灌服也可成功制備脾陽虛小鼠腹瀉模型［8］。因此，本研究動物模型的復制是基于“病證結(jié)合”研究中醫(yī)經(jīng)典方劑的關(guān)鍵，這不僅直接影響到藥物療效的研判，也是對中醫(yī)理論或治法研究的有益闡釋。研究發(fā)現(xiàn)，四神丸湯劑對脾腎陽虛泄瀉模型大鼠的作用可能與調(diào)節(jié)細胞因子TNF-α、IL-2、IL-4和外周血T細胞亞群水平有關(guān)［9-10］。

本研究中模型大鼠腎、睪丸臟器指數(shù)的降低說明其性腺軸水平降低，而現(xiàn)代研究認為，下丘腦-垂體-靶腺軸（腎上腺軸、性腺軸）的功能障礙和低下是腎陽虛的病理基礎(chǔ)，這說明模型大鼠符合腎陽虛證的表現(xiàn)。模型大鼠出現(xiàn)的爪甲色淡、行動遲緩、尾巴變涼、大便稀溏、體質(zhì)量減輕則是脾陽虛的表現(xiàn)?，F(xiàn)代研究表明，脾腎均與免疫功能有關(guān)，脾腎陽虛可導致機體免疫功能低下，模型大鼠血清細胞因子和外周血T細胞亞群的變化［2-3］，以及胸腺和脾臟器指數(shù)的降低，說明其脾腎功能下降。而且模型大鼠出現(xiàn)毛發(fā)枯萎、肛溫下降等癥狀和體征，均符合脾腎陽虛的辨證要點。經(jīng)灌胃給藥后，四神丸組大鼠的體質(zhì)量增加（P＜0.01），胸腺、脾、腎、睪丸各臟器指數(shù)均明顯改善（P＜0.05或P＜0.01），再結(jié)合大鼠一般狀態(tài)的顯著改變，表明四神丸能有效緩解脾腎陽虛泄瀉模型大鼠癥狀。同時，四神丸組的腹瀉指數(shù)較模型組降低（P＜0.05），與得舒特組比較無統(tǒng)計學差異 （P＞0.05），表明四神丸有良好的止瀉作用。此外，研究表明，IBS諸多發(fā)病因素皆與腦-腸互動理論密切相關(guān)［11-12］，腦腸軸在IBS-D的發(fā)病中被證實占據(jù)重要地位，上述發(fā)病因素均可整合到腦-腸互動框架中進行闡述，使得腦腸肽在IBS-D發(fā)病環(huán)節(jié)中起關(guān)鍵作用［13-15］。但四神丸治療IBS-D與腦腸軸調(diào)節(jié)機制的具體關(guān)系，仍有待下一步的研究。

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［12］鄭潔，黨彤．腸易激綜合征發(fā)病機制的研究進展［J］．胃腸病學，2015，20（9）：571-573．

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［14］唐洪梅，房財富，廖小紅，等．神經(jīng)肽Y和5-羥色胺在腹瀉型腸易激綜合征模型大鼠中表達的研究［J］．中國藥理學通報，2012，28（7）：916-920．

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Experimental Study of Sishenwan on Model Rats with Diarrhea of Asdthenic Splenonephro-yang

LIN Xiaoyuan，DENG Na，LI Xia，et al.The First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine，Hunan，Changsha 410007，China.

R285.5

A

1004-745X（2016）05-0756-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2016.05.002

國家自然科學基金項目（81403380）；湖南省教育廳科研優(yōu)秀青年項目（15B178）
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（電子郵箱：lfl1038@163.com）

2016-01-14）