鄧恩桉快繁再生體系建立及褐化現(xiàn)象的消除*

陸榮生,韓美麗,楊玉霞，梁志強(qiáng),覃建林

(廣西農(nóng)科院植保所/廣西作物病蟲害生物學(xué)重點實驗室,廣西　南寧530007)

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鄧恩桉快繁再生體系建立及褐化現(xiàn)象的消除*

陸榮生,韓美麗,楊玉霞，梁志強(qiáng),覃建林

(廣西農(nóng)科院植保所/廣西作物病蟲害生物學(xué)重點實驗室,廣西南寧530007)

為解決鄧恩桉組培中芽增殖率低及繼代中褐化現(xiàn)象嚴(yán)重的問題，以鄧恩桉9年生優(yōu)良母株新萌發(fā)枝條為外植體所建立的無菌苗為對象，研究了腋芽分化產(chǎn)生叢生芽過程所需的最適激素條件及繼代過程中褐化現(xiàn)象的消除方法。結(jié)果表明：以改良MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)，附加TDZ0.5～1.0mg/L有助于鄧恩桉初代叢生芽的誘導(dǎo)；培養(yǎng)基中含TDZ 0.5mg/L、NAA0.3mg/L時，芽繼代增殖倍數(shù)可達(dá)6.2倍。芽叢繼代中褐化現(xiàn)象減輕的最適條件為：材料繼代接種后先在黑暗下培養(yǎng)4～6d，然后移入光下培養(yǎng)25d，同時繼代培養(yǎng)基添加硫辛酸35mg/L,芽增殖系數(shù)可達(dá)10.2,褐化率降為3.7%。生根培養(yǎng)基以1/2MS為基本培養(yǎng)基，附加ABT生根粉0.75mg/L+IBA0.25mg/L的組合生根率最高，達(dá)91.5%。

鄧恩桉；叢生芽；分化；褐化

鄧恩桉(EucalyptusdunniiMaiden)是桉樹屬(Eucalyptus)植物的一個重要品種，它具有耐寒的特性，可以耐受-4℃的低溫，是寒冷地區(qū)造林桉樹種植之一[1]。鄧恩桉推廣中的主要問題是苗木供應(yīng)量不能滿足生產(chǎn)需求。由于鄧恩桉開花所需時間長，結(jié)實率低,難以獲得大量種子，國內(nèi)的實生苗培育的種子主要從國外購進(jìn),不僅價格昂貴且遺傳性狀不穩(wěn)定。開展鄧恩桉組培快繁研究是解決造林上優(yōu)良種苗供需矛盾的良好途徑之一。成熟的快繁技術(shù)不僅能為生產(chǎn)提供充足的組培苗供扦插育苗，也可直接用于造林，因此具有較為重要的意義。

自1996年ReginaR Termignoni[2]誘導(dǎo)鄧恩桉體細(xì)胞胚胎再生成功以來，鄧恩桉組織培養(yǎng)研究引起更多的關(guān)注。國內(nèi)外已有多起鄧恩桉組培快繁技術(shù)研究報道，在叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基篩選[3～4]、莖段離體培養(yǎng)，繼代[5～6]及生根苗[5～7]獲得方面取得了一定的進(jìn)展，但仍存在許多問題，其主要有：(1)多數(shù)研究采用試管實生苗及1年生種子實生苗為材料進(jìn)行研究，采用5年以上成年優(yōu)良母株枝條進(jìn)行研究的報道很少。由于桉樹種子后代有分化，因此用種子實生苗為材料進(jìn)行的組培苗難以保證其子代具有較好的優(yōu)良生長性狀；(2)多數(shù)研究結(jié)果所取得的芽增殖系數(shù)不高，通常30d為繼代周期下只有3.5倍左右；(3)鄧恩桉叢生芽繼代再生過程中存在較為嚴(yán)重的褐化現(xiàn)象，從而導(dǎo)致外植體死亡率高，間接造成有效分化率低;(4)組培苗生根率低，重復(fù)性差，也未見大規(guī)模移栽繁殖的后續(xù)報道。

針對這些問題，本文采用鄧恩桉9年生優(yōu)良植株樹基環(huán)割、側(cè)剪后的新萌發(fā)枝條獲得的無菌試管苗為研究材料，以誘導(dǎo)腋芽產(chǎn)生叢生芽并解決叢生芽繼代過程中的褐化現(xiàn)象為切入點，通過改變激素種類與濃度、材料暗培養(yǎng)、抗氧化劑的添加等方法，以提高芽增殖率并消除褐化現(xiàn)象，以期建立一種高效的成年母株枝條為材料的組培快繁再生體系。

1　材料與方法

1.1材料

實驗材料采自廣西東門林場(22°33′52″E,107°83′98″N)選取鄧恩桉9年生優(yōu)良母株基部環(huán)割后的新萌發(fā)嫩枝。

1.2方法

1.2.1鄧恩桉無菌再生系的建立

所采鄧恩桉枝條用清水沖洗，插入營養(yǎng)液(培養(yǎng)液成分為1/2MS大量元素+多菌靈0.1%)中，無菌室暗培養(yǎng)3d后，進(jìn)行消毒處理。消毒程序為：清水沖洗30min—無菌水浸泡20min—70%酒精浸泡30s—0.1%HgCI2消毒3min—無菌水浸泡20min—0.1%HgCI2消毒2min—無菌水洗3次。處理后的莖段接種于MS附加6-BA0.2mg/L的固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)20d后，選取無污染且有腋芽萌發(fā)的枝條繼代培養(yǎng)為無菌苗,備用。

1.2.2不同種類及濃度的細(xì)胞分裂素對初代叢生芽誘導(dǎo)的影響

取鄧恩桉無菌苗帶腋芽的莖段，放置于添加不同濃度(0mg/L、0.25mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L、1.50mg/L、2.00mg/L)的噻苯隆 (Thidiazuron，縮寫TDZ )、6芐基腺嘌呤(6-BA)、6-呋喃甲基腺嘌呤(KT)的培養(yǎng)基上。光照強(qiáng)度2 000～3 000Lx,光下培養(yǎng)25d后，調(diào)查外植體腋芽萌發(fā)率、叢生芽發(fā)生率、外植體褐化率。

1.2.3不同種類及濃度的激素對叢生芽繼代分化的影響

取1.2.2誘導(dǎo)出的叢生芽，切成帶2～3個芽的小塊，放置于添加不同濃度TDZ、萘乙酸(NAA)的培養(yǎng)基上，光下培養(yǎng)25d后，調(diào)查外植體褐化率、外植體出芽率和芽增殖系數(shù)。

1.2.4暗培養(yǎng)時間對叢生芽繼代增殖中褐化現(xiàn)象的影響

將叢生芽切成帶2～3個芽的小塊，轉(zhuǎn)入繼代分化培養(yǎng)基上，先在黑暗中培養(yǎng)2d、4d、6d、8d、10d，然后光下培養(yǎng)，光照強(qiáng)度2 000～3 000Lx，25d后觀察外植體褐化率、外植體出芽率和芽增殖系數(shù)。

1.2.5抗氧化劑、PVP與活性炭對叢生芽繼代增殖中褐化現(xiàn)象的影響

將叢生芽切成帶2～3個芽的小塊，轉(zhuǎn)入添加不同濃度聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、活性炭、抗氧化劑(硫辛酸、L-半胱氨酸)的繼代培養(yǎng)基上，先在黑暗中培養(yǎng)5d，然后光下培養(yǎng)，25d后觀察外植體褐化率、外植體出芽率、芽增殖倍數(shù)。

1.2.6不同種類及濃度的生長調(diào)節(jié)劑對枝條生根的影響

將芽叢上芽高2～3cm的枝條切下，轉(zhuǎn)入添加不同濃度(0.25mg/L、0.50mg/L、0.75mg/L)生根粉(ABT)、吲哚丁酸(IBA)(0mg/L、0.10mg/L、0.25mg/L、0.50mg/L、0.75mg/L、1.00mg/L)的1/2改良MS培養(yǎng)基上，先在黑暗中培養(yǎng)3d，然后光下培養(yǎng)，25d后觀察生根情況。

以上研究內(nèi)容均以改良MS為基本培養(yǎng)基，每個處理接種18個外植體，3次重復(fù)，光照16h/d,光照強(qiáng)度2 000～3 000Lx，培養(yǎng)溫度26～28℃。

1.2.7數(shù)據(jù)分析與處理

腋芽萌發(fā)率(%)=腋芽萌動外植體數(shù)/接種外植體數(shù)×100%；外植體出芽率(%)=產(chǎn)生新芽的外植體數(shù)/接種的外植體數(shù)×100%；叢生芽發(fā)生率(%)=產(chǎn)生叢生芽的外植體數(shù)/產(chǎn)生芽的外植體數(shù)×100%；褐化率(%)=褐化的外植體數(shù)/接種外植體總個數(shù)×100%；叢生芽增殖倍數(shù)=每個外植體培養(yǎng)25d產(chǎn)生的芽數(shù)(個)/接種外植體初始芽數(shù)(個)；其中，叢生芽為一個芽新增的芽數(shù)≥2。

數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析及Duncan氏新復(fù)極差檢驗。

2　結(jié)果與分析

2.1不同種類及濃度的細(xì)胞分裂素對初代叢生芽誘導(dǎo)的影響

將帶腋芽的莖段在光下培養(yǎng)7d時，可以看到外植體基部有輕微膨大，同時腋芽也開始萌動，10～15d可觀察到部分莖段腋芽處開始形成叢生芽；隨著培養(yǎng)時間的延長，叢生芽從腋芽處大量形成，但部分外植體出現(xiàn)褐化現(xiàn)象，導(dǎo)致腋芽死亡。培養(yǎng)至25d時，叢生芽發(fā)生達(dá)高峰。結(jié)果見表1。

表1　激素對鄧恩桉初代叢生芽誘導(dǎo)的影響

注： 不同小寫字母表示差異顯著P<0.05，不同大寫字母表示差異顯著P<0.01。表2～表5同。

由表1可看出，添加不同濃度TDZ、6-BA、KT的培養(yǎng)基均可誘導(dǎo)鄧恩桉腋芽分化，但不同種類激素處理效果有較大不同。在添加TDZ的處理中，M2、M3腋芽萌發(fā)率最高，分別達(dá)到77.8%、83.3%，顯著高于另外3個處理及對照。處理M2、M3、M4叢生芽發(fā)生率也顯著高于對照與其它2個處理，分別達(dá)到57.1%、60.0%、58.3%。對照與處理M1外植體褐化無顯著差異，其它處理外植體褐化率均高于對照。

添加6-BA與KT各處理的腋芽萌發(fā)率、叢生芽發(fā)生率均低于添加TDZ對應(yīng)處理，其外植體褐化率則高于添加TDZ的處理。

綜上，從外植體腋芽萌發(fā)率、叢生芽發(fā)生率、外植體褐化程度3方面考慮，培養(yǎng)基中添加0.5～1.0mg/LTDZ有助于腋芽萌發(fā)與叢生芽的形成。

2.2不同種類及濃度的激素組合對叢生芽繼代的影響

為了使初代誘導(dǎo)產(chǎn)生的叢生芽能在繼代過程中保持較高的芽增殖率，在含TDZ0.5mg/L及1.0mg/L的培養(yǎng)基基礎(chǔ)上，添加了不同濃度NAA，以觀察不同激素組合對叢生芽繼代增殖的情況，結(jié)果見表2。

表2　TDZ與NAA對鄧恩桉叢生芽繼代分化的影響

由表2可以看出，TDZ為0.5mg/L時，NAA添加量為0.2mg/L、0.3mg/L的2個處理外植體芽發(fā)生率最高，分別達(dá)到了64.8%、61.1%，顯著高于對照及其它處理；這2個處理芽增殖系數(shù)分別達(dá)到5.9、6.2。NAA添加濃度為0.4mg/L、0.5mg/L的2個處理外植體褐化率較高，分別為46.3%、50.0%,其它3個處理褐化率為33.3%～35.2%，處理之間無顯著差異。

TDZ濃度為1.0mg/L時，添加NAA濃度為0.1mg/L、0.2mg/L、0.3mg/L、0.4mg/L的4個處理的外植體芽發(fā)生率只有48.1%～53.6%,與對照無顯著差異，芽增殖系數(shù)最高只有4.8；添加TDZ濃度為1.0mg/L的各處理外植體褐化率總體高于添加TDZ0.5mg/L的各處理，最高達(dá)53.7%。

因此,在TDZ0.5mg/L的培養(yǎng)基中添加0.2～0.3mg/L的NAA可有效提高外植體芽發(fā)生率與芽增殖系數(shù)。

2.3不同暗培養(yǎng)時間對叢生芽繼代過程中褐化現(xiàn)象的控制效果

繼代芽叢切塊接種于繼代培養(yǎng)基中，先在黑暗下培養(yǎng)一定時間后再移到光下，觀察暗培養(yǎng)對外植體芽分化與褐化的影響，結(jié)果見表3。

表3　暗培養(yǎng)時間對叢生芽褐化現(xiàn)象的控制效果

注：表中試驗所用繼代基本培養(yǎng)基為M2-2。

由表3可以看出，一定時間的暗培養(yǎng)有助于減輕外植體的褐化程度，并提高外植體芽發(fā)生率及芽增殖倍數(shù)。暗培養(yǎng)時間為4d、6d、8d、10d 4個處理褐化率明顯低于對照及培養(yǎng)2d的處理，培養(yǎng)8d的處理其叢生芽褐化率最低，可降至18.5%。暗培養(yǎng)時間為4d、6d的二個處理在褐化率降低的同時，外植體芽發(fā)生率分別達(dá)到72.7%、75.9%，對應(yīng)的芽增殖倍數(shù)分別為7.5、8.2，明顯高于對照及其它處理。

暗培養(yǎng)時間為8、10d時，褐化率下降的同時，部分叢生芽葉子開始變黃，長勢變?nèi)酰庵搀w芽發(fā)生率與芽增殖倍數(shù)同時下降，而且這個狀況下長出的芽塊移到光下不長時間后即死亡。

因此，暗培養(yǎng)時間以4-6d為宜，時間過長，不利于芽發(fā)生率的最大化。

2.4不同濃度吸附劑與抗氧化劑對叢生芽繼代過程中褐化現(xiàn)象的影響

鄧恩桉叢生芽繼代培養(yǎng)基中加入不同濃度硫辛酸、L-半胱氨酸、PVP、活性碳后，外植體褐化得到不同程度的控制，其中以硫辛酸控制效果最好。結(jié)果見表4。

表4　吸附劑與抗氧化劑對鄧恩桉叢生芽繼代增殖的影響

注:表中試驗所用繼代基本培養(yǎng)基為M2-2。

(1)硫辛酸從表4可看出，硫辛酸加入濃度25mg/L、35mg/L、45mg/L這3個處理抑制褐化率效果明顯高于對照及其它處理，其褐化率分別降到了5.5%、3.7%、7.4%，3個處理之間無顯著差異。硫辛酸加入濃度25mg/L、35mg/L這2個處理外植體芽發(fā)生率明顯高于對照及其它處理，分別達(dá)到92.6%、94.4%；芽增殖系數(shù)分別高達(dá)9.8、10.2。

(2)L-半胱氨酸除5mg/L處理外，添加L-半胱氨酸的其它4個處理抑制褐化率效果明顯高于對照，褐化率降至16.7%～20.4%，4個處理之間無顯著差異。L-半胱氨酸加入濃度為15mg/L、25mg/L的2個處理外植體芽發(fā)生率略高于對照及其它處理，分別為77.8%、79.6%，但添加L-半胱氨酸的各處理芽增殖系數(shù)均低于對照。

添加聚乙烯吡咯烷酮與活性碳的各處理對外植體的褐化均有明顯的減輕作用，但二者均對芽的發(fā)生有抑制作用。

2.5不同種類及濃度的生長調(diào)節(jié)劑對枝條生根的影響

將分化出的長度已達(dá)2cm左右的枝條切下，轉(zhuǎn)入添加不同濃度IBA、ABT生根粉的培養(yǎng)基上，先在黑暗中培養(yǎng)3d，然后光下培養(yǎng)。培養(yǎng)25d左右，外植體生根率達(dá)最大，結(jié)果見表5。

表5　生長調(diào)節(jié)劑對枝條生根的影響

由表5可看出，IBA單獨使用時,IBA濃度為0.25mg/L、0.5mg/L這2個處理生根率較高，分別為43.4%、47.4%，明顯高于對照及其它處理。IBA與一定量的ABT結(jié)合使用時，枝條生根率有較大增加，其中IBA0.25 mg/L+ABT0.75 mg/L生根率最高，達(dá)91.5%。

3　結(jié)論與討論

3.1結(jié)論

本研究針對鄧恩桉組培快繁中芽增殖率較低與繼代過程褐化現(xiàn)象較為嚴(yán)重的問題，從生長調(diào)節(jié)劑TDZ應(yīng)用并結(jié)合繼代培養(yǎng)條件改善以消除褐化2個方面進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：培養(yǎng)基中添加TDZ 0.5～1.0mg/L對初代叢生芽誘導(dǎo)效果好于同等濃度的6-BA與KT；0.5mg/L的TDZ配合NAA0.3mg/L使用時，芽繼代增殖系數(shù)可達(dá)6.2。叢生芽繼代培養(yǎng)中，材料繼代初期黑暗下培養(yǎng)4～6d后移入光下培養(yǎng)25d，有助于褐化現(xiàn)象的減輕；在此基礎(chǔ)上，繼代培養(yǎng)基添加硫辛酸35mg/L,可使芽增殖倍數(shù)提高至10.2,褐化率降為3.7%。以1/2MS為基本培養(yǎng)基，同時添加ABT生根粉0.75mg/L、IBA0.25mg/L，可使生根率達(dá)91.5%。

3.2討論

桉樹腋芽萌發(fā)與叢生芽誘導(dǎo)中常用的激素是6-BA，管朝旭等[8]、王以紅等[9]先后以截桿萌發(fā)的鄧恩桉枝條為材料，通過培養(yǎng)基中添加6-BA進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)與增殖研究，所取得的增殖系數(shù)為3.0～3.68。TDZ是一種新型植物生長調(diào)節(jié)劑，具有很強(qiáng)的細(xì)胞分裂素活性，它可以促進(jìn)植物芽的再生和繁殖，打破芽的休眠，促進(jìn)種子萌發(fā)，促進(jìn)愈傷組織生長，延緩植物衰老等，近年在植物組織培養(yǎng)中得到較大的應(yīng)用[10～12]。作為一種新型生長激素，TDZ至今還很少在桉樹組織培養(yǎng)中被應(yīng)用。

在本試驗中,TDZ的添加對叢生芽的發(fā)生有較好的促進(jìn)作用,特別是TDZ與NAA的配合可使芽增殖系數(shù)得到較大輻度的提高，且褐化率低于添加6-BA與KT的處理，這說明TDZ在促進(jìn)芽分化的同時，對于植物傷口愈合反應(yīng)與細(xì)胞的恢復(fù)性生長也有一定的幫助，這與有關(guān)報道TDZ的添加不僅大幅提高粉蕉(Musanana)芽增殖率同時降低叢生芽的褐化率和褐化程度研究結(jié)果相一致[13]。

植物愈傷組織繼代培養(yǎng)時,經(jīng)常發(fā)生材料褐變現(xiàn)象，一般認(rèn)為褐變的根源是切口細(xì)胞分泌酚類化合物所致。褐變輕則引起增殖率下降，重則導(dǎo)致全部接種塊死亡。褐化現(xiàn)象發(fā)生程度與培養(yǎng)基激素成分、培養(yǎng)條件有很大關(guān)系。減輕褐化的方法主要有材料繼代培養(yǎng)初期暗培養(yǎng)[14]、添加防褐劑(抗氧化劑、吸附劑)[15～16]、改變基本培養(yǎng)鹽濃度等。本文重點對暗培養(yǎng)和抗氧化劑在降低鄧恩桉繼代過程中褐化程度的影響進(jìn)行了研究。

前人研究認(rèn)為，暗培養(yǎng)降低外植體的褐化率的原因是它抑制了光引發(fā)的過氧化物酶(PPO)的活性，從而降低了多酚類物質(zhì)的氧化，因此減輕了外植體的褐變，但暗培養(yǎng)時間過長，愈傷生長過快不利于外植體形態(tài)建成的及時形成[17～18]。本研究發(fā)現(xiàn)，4～6d的暗培養(yǎng)對褐化作用有一定程度的減輕，且促進(jìn)外植體芽發(fā)生率的提高，但對芽的增殖系數(shù)無明顯促進(jìn)作用，而且暗培養(yǎng)時間過長，外植體白化死亡，這與前人的研究結(jié)論相一致。

在抗氧化劑對褐變的影響方面，通常認(rèn)為對于酶促褐變，可以通過防止添加抗氧化劑去除氧化物質(zhì)而防治或減輕褐變。α-硫辛酸、L-半胱氨酸是2種常用的抗氧化劑。楊曉鳳等[19]在大豆(Glycinemax)轉(zhuǎn)基因研究中發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基中添加不同濃度的a-硫辛酸可以降低外植體的褐化率，間接提高瞬時表達(dá)率和芽的再生率。陳劍勇[20]發(fā)現(xiàn)L-半胱氨酸雖對愈傷組織生長有一定的抑制，但影響幅度較小，可作為杉木(Cunninghamialanceolata)愈傷組織培養(yǎng)的抗褐化劑，其濃度以200mg/L效果較佳。趙月明等[21]發(fā)現(xiàn)漆樹(Toxicodendronverniciflun)幼嫩葉片培養(yǎng)基中L-半胱氨酸濃度的升高，有利于褐化率的降低。在本研究中，與暗培養(yǎng)結(jié)合的情況下，15～35mg/L硫辛酸的加入有助于褐化率的減輕與芽增殖系數(shù)的提高，而L-半胱氨酸的加入雖然對褐化有一程度的減輕，但對芽增殖有一定的抑制作用，這與前人的報道不太一致，可能L-半胱氨酸的加入與植物品種有關(guān)。

與抗氧化劑相比，吸附劑PVP、活性炭對褐變雖有一定程度的減輕，但芽增殖系數(shù)也隨之下降，這可能與前人報道的PVP、活性炭的存在可能降低了培養(yǎng)基激素的有效成份類似[22～23]。

生根粉ABT是一種復(fù)合型植物生長調(diào)節(jié)，通常用于生根困難植株的生根。它不但能補(bǔ)充植物生根所需的外源生長素,而且對促進(jìn)其內(nèi)源生長素的合成也有一定的作用[24]。本試驗中ABT與IBA結(jié)合使用，在試驗濃度范圍內(nèi),它的加入對IBA的生根有協(xié)同促進(jìn)作用,IBA 0.25mg/L+ATB 0.75mg/L的處理,其生根率最高達(dá)91.5%。

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Rapid Propagation Regeneration System and Elimination of Browning for Eucalyptus dunnii Maiden

LU Rong-sheng,HAN Mei-li,YANG Yu-xia,LIANG Zhi-qiang,QIN Jian-lin

(Institute of Plant Protection,Gxaas/ Guangxi Key Laboratory of Biology for Crop Diseases and Insect Pests，Nannning Guangxi 530007,P.R.China)

For dealing with the lower bud proliferation s and serious browning phenome of its subculture during tissue culture ofEucalyptusdunniiMaiden,the optimal conditions for lateral bud differentiation and browning elimination methods were studied by using aseptic seedling based on new branch from excellent maternal plant with 9 years old as explant.The results showed that the modified Murashigeane and Skoog(MS) medium with TDZ 0.5～1.0mg/L could facilitate the induction of cluster bud,and buds proliferation of its subculture achieved to 6.2 times with TDZ 0.5mg/L & NAA 0.3 mg /L.The optimal conditions for browning elimination were 4-6 days’ culture under darkness after inoculation of subculture,and then 25 days’ culture under light.The bud proliferation rose to 10.2 and the explants browning rate dropped to 3.7% when the subculture medium supplemented alpha lipoic acid with 35 mg/L.91.5% rooting rate was achieved in 1/2 modified MS medium with ABT rooting powder 0.5mg/L,IBA0.25mg/L.

EucalyptusdunniiMaiden;buds cluster;differentiation; browning

2015-10-10

廣西自然科學(xué)基金資助項目(2013GXNSFAA019074)，廣西作物病蟲害生物學(xué)重點實驗室資助項目(13-051-47-KF-3)。

陸榮生(1962-)，男，高級工程師，主要從事植物組織培養(yǎng)及遺傳轉(zhuǎn)化研究。E-mail:lurong62@126.com

簡介：韓美麗(1963-)，女，研究員，主要從事植物生物技術(shù)研究。E-mail:hmlii@126.com

S 792.39

A

1672-8246(2016)04-0013-06

doi:10.16473/j.cnki.xblykx1972.2016.04.003