不同證型膝骨關(guān)節(jié)炎患者紅細(xì)胞免疫功能變化及痹祺膠囊的干預(yù)效果研究

李 芳，姚建華，段哲萍，閆永龍，鄭桂敏，曹京旌，張風(fēng)肖

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·論著·

·中醫(yī)·中西醫(yī)結(jié)合研究·

不同證型膝骨關(guān)節(jié)炎患者紅細(xì)胞免疫功能變化及痹祺膠囊的干預(yù)效果研究

李 芳，姚建華，段哲萍，閆永龍，鄭桂敏，曹京旌，張風(fēng)肖

目的探討膝骨關(guān)節(jié)炎(KOA)不同中醫(yī)辨證分型患者紅細(xì)胞免疫功能差異,并觀察痹祺膠囊對(duì)不同證型KOA患者紅細(xì)胞免疫功能的影響。方法選取2013年3—6月于河北省人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科就診的KOA患者60例，參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》將KOA患者分為Ⅰ型組(肝腎不足、筋脈瘀滯型)27例、Ⅱ型組(脾腎兩虛、濕注骨節(jié)型)11例及Ⅲ型組(肝腎虧虛、痰瘀交阻型)22例。另選取同期于本院體檢健康者30例為對(duì)照組。KOA患者口服痹祺膠囊4片/次，3次/d，持續(xù)12周。對(duì)照組于體檢時(shí)，KOA患者分別于治療前及治療后取靜脈血2 ml,檢測紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)(RBC-C3bRR)和紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)(RBC-ICR)。結(jié)果各組RBC-C3bRR、RBC-ICR比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中，Ⅰ型組、Ⅱ型組、Ⅲ型組RBC-C3bRR低于對(duì)照組，Ⅱ型組、Ⅲ型組RBC-C3bRR低于Ⅰ型組，Ⅲ型組RBC-C3bRR低于Ⅱ型組(P<0.05)；Ⅰ型組、Ⅱ型組、Ⅲ型組RBC-ICR高于對(duì)照組，Ⅱ型組、Ⅲ型組RBC-ICR高于Ⅰ型組，Ⅲ型組RBC-ICR低于Ⅱ型組(P<0.05)。Ⅰ型組、Ⅱ型組、Ⅲ型組治療后RBC-C3bRR高于治療前(P<0.05)；Ⅰ型組、Ⅱ型組、Ⅲ型組治療后RBC-ICR低于治療前(P<0.05)。結(jié)論不同中醫(yī)證型KOA患者RBC-C3bRR、RBC-ICR存在差異,可作為中醫(yī)臨床辨證分型的參考指標(biāo)。痹棋膠囊在一定程度上可提高KOA患者紅細(xì)胞免疫功能。

骨關(guān)節(jié)炎，膝；紅細(xì)胞；免疫調(diào)節(jié)；痹祺膠囊

李芳，姚建華，段哲萍，等.不同證型膝骨關(guān)節(jié)炎患者紅細(xì)胞免疫功能變化及痹祺膠囊的干預(yù)效果研究[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2016，19(24)：2939-2942.[www.chinagp.net]

LI F，YAO J H,DUAN Z P，et al.Changes of red-cell immune function and Biqi capsule intervention in patients with knee osteoarthritis of different TCM syndromes[J].Chinese General Practice，2016，19(24)：2939-2942.

膝骨關(guān)節(jié)炎(KOA)是一種多發(fā)于中老年的慢性膝關(guān)節(jié)疾病，以關(guān)節(jié)軟骨進(jìn)行性退變、滑膜炎、關(guān)節(jié)邊緣骨贅形成為主要病理特征，最終致關(guān)節(jié)疼痛、畸形和功能障礙[1-2]。祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為，KOA屬于“骨痹”范疇，為本虛標(biāo)實(shí)之證，以肝腎不足、正氣虧虛為發(fā)病基礎(chǔ)，慢性勞損與外邪侵襲為發(fā)病誘因，其傳統(tǒng)辨證分型的客觀化一直是臨床研究重點(diǎn)[3-4]。有研究證實(shí)，紅細(xì)胞免疫功能在人體免疫復(fù)合物清除過程中發(fā)揮主導(dǎo)作用，其能力的強(qiáng)弱與中醫(yī)“正氣”的盛衰密切相關(guān)[5]。本研究通過檢測60例KOA患者的紅細(xì)胞免疫功能，并對(duì)其中醫(yī)各證型間進(jìn)行比較研究，旨在研究二者之間的關(guān)系,為KOA的中醫(yī)辨證分型提供客觀依據(jù)；同時(shí)采用以益氣養(yǎng)血、祛風(fēng)除濕、活血通絡(luò)為治則的傳統(tǒng)抗風(fēng)濕藥物痹祺膠囊治療KOA，觀察對(duì)紅細(xì)胞免疫功能的影響，為KOA的臨床治療提供參考。

1　對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象選取2013年3—6月于河北省人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科就診的KOA患者60例，其中男13例，女47例；年齡42～69歲；病程0.5～10.0年?；颊呔厦绹L(fēng)濕病協(xié)會(huì)關(guān)節(jié)炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。排除其他感染性關(guān)節(jié)炎、心肝腎疾病、結(jié)締組織病、內(nèi)分泌疾病、嚴(yán)重胃腸道疾病及腫瘤；1個(gè)月內(nèi)服用過其他中成藥或湯藥、西藥(非甾體抗炎藥物、皮質(zhì)激素類藥物)或免疫調(diào)節(jié)劑、免疫增強(qiáng)劑及免疫抑制劑或進(jìn)行過理療。另選取同期于本院體檢健康者30例為對(duì)照組，其中男6例，女24例；年齡40～68歲。受試者對(duì)本研究知情同意，本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1中醫(yī)辨證分型參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》[7]對(duì)KOA患者進(jìn)行分型：(1)Ⅰ型組(肝腎不足、筋脈瘀滯型)27例：主癥為關(guān)節(jié)疼痛，脛軟膝酸；次癥為活動(dòng)不利，運(yùn)作牽強(qiáng)，舌質(zhì)偏紅，苔薄或薄白，脈滑或弦。(2)Ⅱ型組(脾腎兩虛、濕注骨節(jié)型)11例：主癥為關(guān)節(jié)疼痛，腫脹積液；次癥為活動(dòng)受限，舌質(zhì)偏紅，或舌胖質(zhì)淡，苔薄或薄膩，脈滑或弦。(3)Ⅲ型組(肝腎虧虛、痰瘀交阻型)22例：主癥為關(guān)節(jié)疼痛，腫脹肥厚感，痿弱少力；次癥為骨節(jié)肥大，活動(dòng)受限，舌質(zhì)偏紅，或舌胖質(zhì)淡，苔薄或薄膩，脈滑或弦細(xì)。

1.2.2治療方法KOA患者口服痹祺膠囊(天津達(dá)仁堂京萬紅藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)301721，成分：馬錢子、茯苓、白術(shù)、黨參、丹參、地龍、牛膝、川芎、三七、甘草)4片/次，3次/d，持續(xù)12周。

1.2.3紅細(xì)胞免疫功能檢測對(duì)照組于體檢時(shí)，KOA患者分別于治療前及治療后取靜脈血2 ml,肝素抗凝，加0.9%氯化鈉溶液以2 000 r/min洗滌離心3次，3～5 min/次，離心半徑為13.5 cm。分離血漿和紅細(xì)胞，調(diào)至紅細(xì)胞濃度為1.25×107/ml備用。參考文獻(xiàn)[1]檢測紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)(RBC-C3bRR)和紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)(RBC-ICR)。

2　結(jié)果

2.1紅細(xì)胞免疫功能比較各組性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。各組RBC-C3bRR、RBC-ICR比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中，Ⅰ型組、Ⅱ型組、Ⅲ型組RBC-C3bRR低于對(duì)照組，Ⅱ型組、Ⅲ型組RBC-C3bRR低于Ⅰ型組，Ⅲ型組RBC-C3bRR低于Ⅱ型組(P<0.05)；Ⅰ型組、Ⅱ型組、Ⅲ型組RBC-ICR高于對(duì)照組，Ⅱ型組、Ⅲ型組RBC-ICR高于Ⅰ型組，Ⅲ型組RBC-ICR低于Ⅱ型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見表1)。

2.2各證型組治療前后紅細(xì)胞免疫功能指標(biāo)的比較Ⅰ型組、Ⅱ型組、Ⅲ型組治療后RBC-C3bRR高于治療前，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Ⅰ型組、Ⅱ型組、Ⅲ型組治療后RBC-ICR低于治療前，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見表2)。

表2　各證型組治療前后紅細(xì)胞免疫功能指標(biāo)比較±s，%)

表1各組基線資料與紅細(xì)胞免疫功能指標(biāo)比較

Table 1Comparison of baseline characteristics and RBC immune function among each group

組別例數(shù)性別(男/女)年齡(歲)RBC-C3bRR(%)RBC-ICR(%)對(duì)照組306/2453.7±8.416.2±1.56.8±1.6Ⅰ型組276/2152.6±9.812.3±1.8a9.7±1.2aⅡ型組112/951.7±9.211.6±2.1ab13.5±2.4abⅢ型組225/1754.2±8.410.4±2.5abc11.2±1.7abcF(χ2)值0.102d0.32918.37517.538P值>0.05>0.05<0.001<0.001

注：RBC-C3bRR=紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)，RBC-ICR=紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)；與對(duì)照組比較，aP<0.05；與Ⅰ型組比較，bP<0.05；與Ⅱ型組比較，cP<0.05；d為χ2值

3　討論

傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為，正虛、外邪是影響KOA發(fā)生發(fā)展的重要因素[8]。隨著人老體衰，肝脾腎虧虛，筋骨失養(yǎng)，腠理空虛，加之風(fēng)寒濕邪乘虛侵襲留注關(guān)節(jié)，痹阻經(jīng)絡(luò)、血行不暢而發(fā)病，屬“本虛標(biāo)實(shí)”之證，正氣虛弱是KOA發(fā)生的根本原因[9]。外來病原微生物或炎性遞質(zhì)等邪氣侵襲機(jī)體后，若正氣充足,免疫功能正常，則正勝邪退，疾病趨于好轉(zhuǎn)；若正氣虛弱，免疫功能低下,則邪勝正衰，疾病趨于惡化。故中醫(yī)認(rèn)為，“正氣存內(nèi),邪不可干”“邪之所湊,其氣必虛”[10]。研究表明，紅細(xì)胞具有免疫黏附和免疫調(diào)控功能，是人體天然免疫系統(tǒng)的重要組成部分，在機(jī)體對(duì)免疫復(fù)合物的清除中發(fā)揮主導(dǎo)作用。因此,紅細(xì)胞免疫黏附能力可作為反映“正氣”的客觀指標(biāo)之一[11]。

脾腎兩虛、濕注骨節(jié)型KOA患者多有關(guān)節(jié)腫脹積液，活動(dòng)受限，提示此型KOA患者多處于急性期。肝腎不足、筋脈瘀滯型與肝腎虧虛、痰瘀交阻型患者臨床癥狀多表現(xiàn)為關(guān)節(jié)疼痛、脛膝酸軟、骨節(jié)肥厚、痿弱無力，提示其病程多纏綿，以慢性炎癥過程為主。《素問·宣明五氣》云:“肝主筋、脾主肉、腎主骨”，腎精虧虛，骨失所養(yǎng)，肝血不足，血不養(yǎng)筋，脾失健運(yùn)，氣血生化乏源,水濕疏布失常而流注關(guān)節(jié)，則筋脈拘急，腰膝酸痛，關(guān)節(jié)屈伸不利[10]；故《張氏醫(yī)通》指出“膝痛”“無有不因肝腎虛者，虛則風(fēng)寒濕氣襲之”[12]。

本研究發(fā)現(xiàn)，各證型KOA患者RBC-C3bRR均低于對(duì)照組，而RBC-ICR均高于對(duì)照組,提示KOA患者存在紅細(xì)胞免疫黏附活性減弱。RBC-C3bRR在肝腎虧虛、痰瘀交阻型最低，脾腎兩虛、濕注骨節(jié)型次之，肝腎不足、筋脈瘀滯型最高；分析其原因可能為，肝腎不足、筋脈瘀滯型患者氣血虛弱程度較輕，紅細(xì)胞膜C3b受體數(shù)目減少程度、紅細(xì)胞對(duì)免疫復(fù)合物黏附及釋放障礙等異常較輕，而肝腎虧虛、痰瘀交阻型氣血虧虛較重，紅細(xì)胞免疫功能衰退更為嚴(yán)重，與《金匱要略》所強(qiáng)調(diào)痹證多“營衛(wèi)氣虛，運(yùn)行不暢”[13]，以虛立論相吻合。RBC-ICR在脾腎兩虛、濕注骨節(jié)型最高，肝腎虧虛、痰瘀交阻型次之，肝腎不足、筋脈瘀滯型最低，可能與KOA急性期滑膜炎性反應(yīng)明顯，自身免疫反應(yīng)使免疫復(fù)合物增加，紅細(xì)胞黏附免疫復(fù)合物過多,大量紅細(xì)胞C3b被覆蓋，致使紅細(xì)胞C3b空位及活性下降有關(guān)。免疫復(fù)合物及自由基等其他炎性產(chǎn)物蓄積增加，損害膜結(jié)構(gòu)和功能，改變紅細(xì)胞膜表面的抗原性，使紅細(xì)胞與C3b黏附功能障礙加重，又可引發(fā)機(jī)體紅細(xì)胞的免疫功能進(jìn)一步減低。RBC-ICR可能與關(guān)節(jié)急性炎癥活動(dòng)程度有關(guān)?！毒霸廊珪吩疲骸吧w痹者閉也，以血?dú)鉃樾八]，不得通行而病也[14]?！北狙芯拷Y(jié)果顯示，KOA患者存在紅細(xì)胞免疫功能障礙，證實(shí)痹癥乃“因虛致病”，且痹癥日久亦能“耗氣傷血”“因病致虛”的疾病過程。故紅細(xì)胞免疫功能下降程度與氣血虧虛程度密切相關(guān)，在一定程度上能夠反映KOA中醫(yī)證候的特征，可作為證候分型的客觀指標(biāo)。

本研究應(yīng)用痹祺膠囊治療KOA，方中君藥為馬錢子(調(diào)制粉)，具有散寒消腫、通絡(luò)止痛作用；臣藥由茯苓、白術(shù)、黨參、丹參構(gòu)成，可健脾益氣，養(yǎng)血和血；佐藥為地龍、牛膝、川芎、三七，可活血化瘀,通絡(luò)止痛，甘草調(diào)和諸藥為使藥。諸藥配伍,共奏益氣養(yǎng)血、祛風(fēng)除濕、散寒通絡(luò)、活血止痛之效。痹祺膠囊中白術(shù)、黨參、茯苓以及甘草是著名的具有健脾養(yǎng)胃、益氣補(bǔ)中功效的古方四君子湯的組分，其源自我國宋代時(shí)期的《太平惠民和劑局方》[15]。研究表明，四君子湯主要含有黃酮類、多糖類及有機(jī)酸類等成分，能有效調(diào)節(jié)胃腸功能，提高機(jī)體免疫力[16-17]，改善脾虛證大鼠模型紅細(xì)胞膜三磷酸腺苷酶的活性，增加組織器官和肌肉的能量供應(yīng)[18]。川芎的主要成分川芎嗪，可提高人體血紅蛋白水平、紅細(xì)胞膜超氧化物歧化酶(SOD)活性及總抗氧化能力(T-AOC)，降低紅細(xì)胞膜丙二醛(MDA)水平，從而減少對(duì)紅細(xì)胞的破壞,延長紅細(xì)胞壽命[19]。本研究發(fā)現(xiàn)，該藥可提高不同證型KOA患者RBC-C3bRR，降低RBC-ICR，改善紅細(xì)胞免疫功能。因此，改善紅細(xì)胞免疫功能，影響紅細(xì)胞膜代謝可能是痹祺膠囊益氣養(yǎng)血健脾的作用機(jī)制之一。

綜上所述，本研究通過分析不同證型KOA患者紅細(xì)胞免疫功能水平的差異，探討KOA中醫(yī)證型的微觀本質(zhì)，并觀察對(duì)紅細(xì)胞免疫功能的影響，揭示痹祺膠囊治療KOA的機(jī)制，為KOA的中醫(yī)診斷和治療的客觀化、標(biāo)準(zhǔn)化提供理論依據(jù)。然而，本研究采用自身對(duì)照反映痹祺膠囊對(duì)KOA的治療效果，在下一步研究中，以臨床常規(guī)治療方法為對(duì)照，進(jìn)一步探討痹祺膠囊對(duì)KOA的治療效果。

作者貢獻(xiàn)：李芳進(jìn)行課題設(shè)計(jì)與實(shí)施、資料收集整理、成文并對(duì)文章負(fù)責(zé)；姚建華進(jìn)行課題設(shè)計(jì)與實(shí)施、資料收集整理；段哲萍進(jìn)行資料數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析；閆永龍、鄭桂敏、曹京旌負(fù)責(zé)患者隨診及資料整理，張風(fēng)肖進(jìn)行質(zhì)量控制及審校。

本文無利益沖突。

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(本文編輯：吳立波)

Changes of Red-cell Immune Function and Biqi Capsule Intervention in Patients With Knee Osteoarthritis of Different TCM Syndromes

LIFang，YAOJian-hua,DUANZhe-ping,YANYong-long,ZHENGGui-min,CAOJing-jing,ZHANGFeng-xiao.

DepartmentofRheumatismandImmunology,HebeiGeneralHospital,Shijiazhuang050051,China

LIFang,DepartmentofRheumatismandImmunology,HebeiGeneralHospital,Shijiazhuang050051,China;E-mail:yaoyaopangpang@sina.com

ObjectiveTo explore the differences of red-cell immune function among patients with knee osteoarthritis (KOA) of different TCM syndromes and to observe the effects of Biqi capsule on red-cell immune function of KOA patients.Methods60 KOA patients,who received treatment in Department of Rheumatism and Immunology of Hebei General Hospital from March and June 2013,were selected in the study.They were divided into three groups according to Guidance on the Clinical Research on New Traditional Chinese Medicine:Type Ⅰ group(marked by insufficiency of liver and kidney function with tendon stagnation,n=27),Type Ⅱ group(characterized by deficiency of spleen and kidney function with dampness infusion into bone and joints,n=11) and Type Ⅲ group(marked by insufficiency of liver and kidney function with obstruction due to phlegm and blood-stasis,n=22).30 subjects,who had been examined healthy during the same period,were enrolled as the control group.The KOA patients were given orally four Biqi capsules each time,three times a day for 12 weeks.The levels of RBC C3b receptor rosette (RBC-C3bRR) and RBC immune complex receptor (RBC-ICR) were tested individually in 2 ml venous blood from the control group during their physical examinations and from the KOA patients before and after treatment.ResultsThe levels of RBC-C3bRR and RBC-ICR in each group were significantly different(P<0.05);the RBC-C3bRR levels of Type Ⅰ,Type Ⅱ and Type Ⅲ groups were significantly lower than those in the control group,while the levels of RBC-C3bRR of Type Ⅱ and Type Ⅲ groups were significantly lower than those of Type Ⅰ group,and the level of RBC-C3bRR of Type Ⅲ group was significantly lower than that of Type Ⅱ group(P<0.05);the RBC-ICR levels of Type Ⅰ,Type Ⅱ and Type Ⅲ groups were significantly higher than those in the control group,while the levels of RBC-ICR of Type Ⅱ and Type Ⅲ groups were significantly higher than those of Type Ⅰ group,and the RBC-ICR level of Type Ⅲ group was significantly lower than that of Type Ⅱ group(P<0.05).The RBC-C3bRR levels of Type Ⅰ,Type Ⅱ and Type Ⅲ groups after treatment were significantly higher than those before treatment (P<0.05);the RBC-ICR levels of Type Ⅰ,Type Ⅱ and Type sⅢ groups after treatment were significantly lower than those before treatment (P<0.05).ConclusionThe RBC-C3bRR and RBC-ICR levels in KOA patients of different TCM syndromes are different,which can be used as the reference indexes for clinical TCM syndrome differentiation.Biqi capsule can improve the red-cell immune function of KOA patients to a certain degree.

Osteoarthritis,knee;Erythrocytes;Immunomodulation;Biqi capsule

河北省中醫(yī)藥管理局科研計(jì)劃項(xiàng)目(2015136)

050051河北省石家莊市，河北省人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科(李芳，閆永龍，鄭桂敏，曹京旌，張風(fēng)肖)，腫瘤科(段哲萍)；河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院老年病科(姚建華)

李芳，050051河北省石家莊市，河北省人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科；E-mail：yaoyaopangpang@sina.com

R 684.3

ADOI：10.3969/j.issn.1007-9572.2016.24.014

2015-12-10；

2016-06-24)