肥胖相關(guān)基因rs9939609多態(tài)性與婦科腫瘤的相關(guān)性研究

舒龍　張澤　袁超燕　李素萍　武玉蓮

?

·基礎(chǔ)與臨床·

肥胖相關(guān)基因rs9939609多態(tài)性與婦科腫瘤的相關(guān)性研究

舒龍張澤袁超燕李素萍武玉蓮

經(jīng)研究者發(fā)現(xiàn),腫瘤與細胞增殖周期的失調(diào)相關(guān),尤其是G1期啟動的失調(diào)與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。肥胖相關(guān)基因(fat mass and obesity associated,FTO)是全基因組關(guān)聯(lián)研究中發(fā)現(xiàn)的與體質(zhì)量指數(shù)(BMI)顯著關(guān)聯(lián)的基因,正常人群中,攜帶單核苷酸多態(tài)性位點(single nucleotide polymorphism,SNP)rs9939609風險等位基因可使BMI增加,肥胖發(fā)生風險增加[1]。李建新等[2]發(fā)現(xiàn),女性更年期肥胖的發(fā)病率增高,且其腫瘤的發(fā)病率亦增加。到目前為止,許多流行病學研究發(fā)現(xiàn),肥胖會提高一些腫瘤疾病的發(fā)病率[3],如乳腺癌、食管癌、肝癌等。有報道顯示,在美國新確診的腫瘤病例中有3.2%要歸咎于肥胖[4]。

2012年2月至2015年1月,我們利用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法,分析了婦科腫瘤患者FTO基因rs9939609多態(tài)性位點的基因型,探討其與婦科腫瘤發(fā)病風險的關(guān)系。

1　資料與方法

1.1臨床資料無血緣關(guān)系的婦科腫瘤患者80例(腫瘤組),年齡45～76歲,平均(51.2±3.8)歲，其中宮頸癌35例,子宮內(nèi)膜癌17例,卵巢癌9例,其他腫瘤19例。另選健康婦女90例作對照(對照組),年齡44～75歲,平均(50.8±4.1)歲，其年齡與腫瘤組具有可比性。

1.2納入和排除標準(1)納入標準:根據(jù)《實用婦產(chǎn)科學》診斷標準[5],確診為婦科腫瘤。(2)排除標準:不符合腫瘤診斷標準的患者;確診為婦科良性囊腫的患者;轉(zhuǎn)移性腫瘤的患者以及患有其他疾病的妊娠婦女。

1.3rs9939609基因型檢測所有受試者抽取外周血3～5 ml,分置于EDTA抗凝管中,保存于4 ℃冰箱,1周內(nèi)采用Qiagen公司的小量血液基因組DNA抽提試劑盒提取基因組DNA,-70 ℃冰箱保存待用[6]。

PCR擴增引物序列:上游5′-TGGTGGTACGCTGCTATG-3,下游5′-ACGCTGCTGCCCTAGAAAT-3′,25 μl的PCR擴增反應(yīng)體系:10 mmol/L Tris-HCl(pH 8.3),50 mmol/L氯化鉀,1.5 mmol/L氯化鎂,200 pmol/L dNTPs,0.4 μmol/L引物,30～50 ng基因組DNA,1單位Taq DNA聚合酶。PCR擴增反應(yīng)條件為:94 ℃預變性5 min,94 ℃變性30 s,55～59 ℃退熱30 s,72 ℃延伸1 min,共37個循環(huán),最后72 ℃后延伸10 min。取20 μl的PCR產(chǎn)物經(jīng)PE Biosystem公司生產(chǎn)的含AmpliTaqDNA聚合酶熒光標記測序試劑盒純化,內(nèi)引物擴增,采用Applied Biosystem公司生產(chǎn)的ABI PRISM 377-96 DNA測序儀檢測,采用Chro-mas軟件讀取基因型。

1.4統(tǒng)計學方法采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件,頻率計數(shù)法計算腫瘤組和對照組基因型和等位基因頻率,并用Hardy-Weinberg 遺傳平衡定律檢驗。各組間基因型和等位基因頻率分布分析采用

χ2檢驗;計量資料比較采用成組t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1一般情況腫瘤組和對照組年齡、血壓和BMI比較差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05),見表1。

2.2rs9939609基因型分布利用PCR-RFLP方法確定該SNP位點的基因型,經(jīng)檢驗各組均符合Hardy-Weinberg 遺傳平衡定律。SNP位點的3種基因型(AA、AT、TT)在腫瘤組和對照組間差異有統(tǒng)計學意義(P=0.031),T和A等位基因在腫瘤組和對照組中的頻率分布不同,腫瘤組A等位基因的頻率低于對照組,T等位基因的頻率高于對照組,T為易感等位基因(OR=1.433,95%CI:1.029～1.996,P=0.033),見表2。

3　討論

隨著人口老年化進程的加快,婦科腫瘤患者的數(shù)量呈明顯上升趨勢,其發(fā)病率已經(jīng)遠遠超過同期其他腫瘤的發(fā)病情況[7]。婦科腫瘤所帶來的危害有目共睹。肥胖是糖尿病和心腦血管疾病的高危因素。有研究顯示,通過減肥可以降低癌癥的發(fā)病率和死亡率,這也充分說明肥胖和癌癥之間存在一定的因果關(guān)系[8]。腫瘤細胞中的能量代謝方式有它的特殊性,主要以“有氧糖酵

表1　2組的一般臨床資料比較±s)

表2　對照組和腫瘤組rs9939609基因型分布(n,%)

解”為主,肥胖相關(guān)基因能否影響腫瘤細胞的代謝及生存情況至今仍無法定論。而且關(guān)于肥胖與婦科腫瘤之間關(guān)系的研究較少,為進一步降低婦科腫瘤的發(fā)病率及死亡率,提高患者患病后的生存質(zhì)量,本文特設(shè)計了此臨床研究。

婦科腫瘤的發(fā)生與激素分泌失衡和基因遺傳相關(guān)。本研究通過比較對照組和腫瘤組婦女的FTO基因rs9939609位點的基因分型,結(jié)果發(fā)現(xiàn),2組等位基因分布及基因型差異均有統(tǒng)計學意義;在腫瘤組中TT基因型患者的發(fā)病情況明顯高于AA基因型。因此推測在婦科腫瘤的發(fā)病中,該基因參與疾病的發(fā)病,調(diào)控的機制可能為:rs9939609基因位點的變異可能會引起氨基酸序列的改變,推測該位點是通過直接影響基因的表達量或與其他SNP位點連鎖間接影響基因的表達量,從而對激素分泌產(chǎn)生影響,此推測需要進一步實驗驗證。

綜上所述,TT+AT基因型的圍絕經(jīng)期婦女更易發(fā)生婦科腫瘤疾病。這個結(jié)果提高了對圍絕經(jīng)期婦女婦科腫瘤疾病發(fā)病機制的認識,有助于盡早做好圍絕經(jīng)期婦女婦科腫瘤疾病的預防。rs9939609基因多態(tài)性分析可作為預測婦科腫瘤易感性的分子指標。

由于本研究樣本數(shù)量較少,缺乏大規(guī)模多中心隨機對照研究,結(jié)論有待進一步完善。

[1]Frayling TM,Weedon MN. A common variant in the FTO gene is associated with body mass index and predisposes to childhood and adult obesity[J]. Science, 2007，316(5826): 889-894.

[2]李建新,樊森,李瑩，等.我國35～74歲成人肥胖發(fā)病率及其可控危險因素的前瞻性隊列隨訪研究[J].中華流行病學雜志,2014,35(4):349-353.

[3]Eliassen AH, Hankinson SE. Endogenous hormone levels and risk of breast, endometrial and ovarian cancers: prospective studies[J]. Adv Exp Med Biol, 2008， 630: 148-165.

[4]Polednak AP. Trends in incidence rates for obesity-associated cancers in the US[J]. Cancer Detect Prev, 2003, 27(6): 415-421.

[5]劉新民.婦產(chǎn)科手術(shù)學 [M].3 版.北京: 人民衛(wèi)生出版社,2010:31-34.

[6]王芳,宓為峰,盧天蘭,等.肥胖相關(guān)基因rs9939609多態(tài)性與利培酮4周治療所致體質(zhì)量增加的關(guān)聯(lián)分析[J].中國心理衛(wèi)生雜志,2013,27(2):157-160.

[7]韓素萍.老年婦科腫瘤的診治特點[J].實用老年醫(yī)學,2006,20(6):365-367.

[8]Sikalidis AK, Varamini B. Roles of hormones and signaling molecules in describing the relationship between obesity and colon cancer[J]. Pathol Oncol Res, 2011,17(4): 785-790.

[9]Doyle SL. Visceral obesity, metabolic syndrome, insulin resistance and cancer[J]. Proc Nutr Soc, 2012， 71(1): 181-189.

443000 湖北省宜昌市，三峽大學仁和醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科(舒龍)；445000 湖北省恩施市，湖北民族學院民大醫(yī)院婦產(chǎn)科(張澤，袁超燕，李素萍，武玉蓮)

武玉蓮，Email:33874979@qq.com

R 737.3

Bdoi:10.3969/j.issn.1003-9198.2016.04.026

2015-05-12)