男性不育因素的臨床研究*

鄧智標(biāo)　黎子輝　麥賢昌

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男性不育因素的臨床研究*

鄧智標(biāo)①黎子輝①麥賢昌①

目的：探討家具從業(yè)者男性不育相關(guān)因素，為男性家具從業(yè)者提供健康指導(dǎo)。方法：選取2013年1月-2015年12月于本院就診的男性家具行業(yè)不育患者50例作為試驗(yàn)組，選取同期有正常生育史者的男性50例作為對照組，對精液質(zhì)量進(jìn)行臨床分析，比較兩組精子平均曲線運(yùn)動速度（VCL）、平均直線運(yùn)動速度（VSL）、平均路徑運(yùn)動速度（VAP）、精子運(yùn)動直線性（LIN）、血清抑制素B（INHB）、精子頂體酶（AE）活性及睪酮（TEST）水平。結(jié)果：除TEST外，其余各項(xiàng)指標(biāo)試驗(yàn)組均低于對照組，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：家具從業(yè)不育患者精子質(zhì)量較正常生育組有統(tǒng)計學(xué)差異，顯示家居從業(yè)者不育患者的睪丸支柱細(xì)胞有一定損傷現(xiàn)象，該環(huán)境中工作的不育男性生殖狀況堪憂，職業(yè)教育及其健康防護(hù)顯得十分迫切。

男性不育；內(nèi)分泌激素；抑制素B

First-author’s address：Longjiang Hospital of Shunde District in Foshan City，F(xiàn)oshan 528318，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.18.021

男性不育已經(jīng)成為社會關(guān)注的公共衛(wèi)生問題，其中環(huán)境改變或生活方式的變化與男性不育關(guān)系密切，成為越來越多的學(xué)者共同探討研究的熱點(diǎn)課題。一般來說，男性不育的病因分類可根據(jù)生育能力分為絕對不育（無精子癥）和相對不育（精子數(shù)量少或精子質(zhì)量低下等），臨床表現(xiàn)可分為原發(fā)性和繼發(fā)性不育，按性器官病變部位可分為睪丸前性、睪丸性和睪丸后性等等，分類繁多但實(shí)質(zhì)所揭示的問題均顯示男性不育原因眾多。抑制素B（Inhibin B，INHB）是McCullagh于1932年在睪丸提取物中發(fā)現(xiàn)的、由生精細(xì)胞和睪丸支柱細(xì)胞分泌的一種可以作用于垂體卵泡刺激素（FSH）對精子的激發(fā)作用、反應(yīng)男性生精功能的一種糖蛋白，對男性激素有重要調(diào)節(jié)作用，抑制素B的水平還與睪丸體積、精子總數(shù)顯著相關(guān)，是新近公認(rèn)的評定精子生成的敏感指標(biāo)[1]。抑制素B水平反映了整個睪丸的生精功能，是輸精管道功能標(biāo)志的重要物質(zhì)，成年男性血清中維持可檢測的抑制素B水平需要生精細(xì)胞的存在并正常工作，因此抑制素B被認(rèn)為是男性精子發(fā)生的血清標(biāo)志物，其含量減少預(yù)示生精功能受到損傷[2-3]。頂體酶（AE）存在于精子頂體內(nèi)膜及赤道部膜上，通常以無活性形式存在，當(dāng)精子頭部進(jìn)入卵泡透明帶時，頂體酶原才被激活為頂體酶。此酶是受精過程中不可缺少的一種中性蛋白水解酶，其作用類似于胰蛋白酶，它能水解卵泡透明帶糖蛋白，使精子穿過卵丘再穿過透明帶，使精子與卵子融合；它還能促使生殖道中激肽釋放，從而增強(qiáng)精子的活力和促進(jìn)精子的運(yùn)動，頂體酶對于精子的運(yùn)動和受精過程都是不可缺少的，頂體酶活力不足可導(dǎo)致男性不育。因此精子頂體酶活性測定可作為精子受精能力和診斷男性不育癥的參考指標(biāo)[4-5]。本研究著重對從事家具生產(chǎn)這一特殊行業(yè)中男性不育患者因素進(jìn)行研究，旨在為該行業(yè)特殊群體生殖健康提供幫助和為該環(huán)境中工作的特殊群體提供健康咨詢指導(dǎo)，現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2013年1月-2015年12月于本院不育?？凭驮\的男性家具行業(yè)從業(yè)者50例作為試驗(yàn)組，年齡25~38歲，平均（29.8±3.6）歲；家具從業(yè)時間平均（5.5±2.8）年；不育時間2~8年，平均3.2年；另擇同期有正常生育史的男性50例作為對照組，年齡25~38歲，平均28.6歲；入選標(biāo)準(zhǔn)：結(jié)婚后2~3年、婚姻生活正常、生殖系統(tǒng)結(jié)構(gòu)正常且無器質(zhì)性病變者；排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）心、肝、脾、肺、腎有基礎(chǔ)疾病者；（2）先天無精、雙側(cè)輸精管完全堵塞或缺失、后天疾病如附睪結(jié)核等繼發(fā)性不育者；（3）配偶生殖系統(tǒng)功能異常。兩組平均年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2儀器與試劑精子質(zhì)量采用以色列產(chǎn)全自動精子質(zhì)量分析儀進(jìn)行檢測，試劑為原機(jī)配套產(chǎn)品；睪酮采用西門子全自動化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行測定，試劑為原機(jī)配套產(chǎn)品；運(yùn)用酶標(biāo)法測定患者血清抑制素B和精子頂體酶活性，試劑為深圳生物科技有限公司生產(chǎn)（批號：20150414012），儀器采用上?？迫A生物工程股份有限公司全自動酶標(biāo)儀。

1.3方法所有受試者均于早上8~9點(diǎn)鐘空腹坐姿于前臂淺靜脈處采集靜脈血液5 mL，1 h內(nèi)分離血清備檢，若不能及時測定，血清標(biāo)本要求儲存于-20 ℃冰箱保存并于30 d內(nèi)檢測完畢，不得反復(fù)凍融；精液采集：禁欲3~5 d后按照WHO規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)手淫采集精液標(biāo)本，1 h內(nèi)完成精子質(zhì)量分析儀后離心分離精漿，洗滌精子，精漿標(biāo)本儲存于-20 ℃冰箱并于30 d內(nèi)完成檢測；取洗滌精子進(jìn)行頂體酶活性測定，方法采用BAEE-ADH法：（1）精子的洗滌和頂體酶的提?。喝?.25 mL液化的精液于塑料離心管中，以500×g離心5 min；棄上清，將離心管在吸水紙上倒置，以除去剩余溶液，再加0.25 mL 2%醋酸溶液，放4 ℃冰箱內(nèi)抽提過夜（16~24 h），取出后以1000×g離心10 min，取上清備用；（2）測定過程：在比色杯內(nèi)依次加入用pH值為 8.7 0.05 mol/L Tris-HCl緩沖液新鮮配制的NAD（1 mg/mL）0.1 mL，BAEE 1 mg/mL 0.5 mL，ADH（3.46 mg/mL）0.1 mL和Tris-HCl緩沖液2.25 mL，均勻混合后25 ℃下預(yù)溫5 min，再加入0.05 mL頂體酶抽提液立即混合均勻，加入酶液后記錄10 min，反應(yīng)液在366 nm下吸光度的變化值（△A366 mm/10 min）；（3）酶活力單位的定義和酶活力的計算：1個毫單位（mU）的頂體酶活力等于在上述反應(yīng)條件下（pH值為 8.5和25 ℃），每分鐘水解1 nmol/L的BAEE所需要的頂體酶量。水解1 nmol/L的BAEE使反應(yīng)液的吸光度變化0.0011，t是反應(yīng)時間（10 min），△A是在t分鐘內(nèi)吸光度的變化值，V是加入酶液的體積（0.05 mL），因?yàn)槌樘嵋旱捏w積和原始精液體積相同，故公式計算的就是每毫升精液內(nèi)的頂體酶活力。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 17.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以（±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組精液質(zhì)量比較試驗(yàn)組精子平均曲線運(yùn)動速度（VCL）、平均直線運(yùn)動速度（VSL）、平均路徑運(yùn)動速度（VAP）及精子運(yùn)動的直線性（LIN）均較對照組有不同程度的下降，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

表1　兩組精液質(zhì)量比較（±s）

表1　兩組精液質(zhì)量比較（±s）

組別　VCL（μm/s）VSL（μm/s）VAP（μm/s） LIN（%）試驗(yàn)組（n=50） 21.4±5.2　8.4±2.7　9.3±3.3　34.5±5.1對照組（n=50） 41.3±5.3　18.9±4.7　22.8±4.1　58.3±6.5 t值　5.872　6.341　3.356　4.537 P值　<0.05　<0.05　<0.05　<0.05

2.2兩組血清/精子生化指標(biāo)比較試驗(yàn)組血清抑制素B（INHB）、精子頂體酶（AE）活性均低于對照組，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），但兩組睪酮（TEST）比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表2。

表2　兩組血清/精子生化指標(biāo)比較（±s）

表2　兩組血清/精子生化指標(biāo)比較（±s）

組別　INHB（pg/mL）　AE（U/L）　TEST（nmol/L）試驗(yàn)組（n=50）　91.3±11.5　18.4±12.7　1.23±0.50對照組（n=50）　240.3±35.1　44.9±21.7　1.28±0.41 t值　7.972　6.851　0.356 P值　<0.05　<0.05　>0.05

3　討論

生活方式的改變和環(huán)境污染導(dǎo)致的男性不育現(xiàn)象越來越普遍，已經(jīng)成為危害家庭穩(wěn)定、導(dǎo)致社會不安定的重要因素。一直以來，男性不育的原因可分為先天生殖功能異常與后天生殖系統(tǒng)受損，可以同時存在。診斷方式主要包括影像學(xué)檢查與精液分析等，即使出現(xiàn)精液分析異常，臨床尚需做出相應(yīng)的病因判斷。本研究主要對家具行業(yè)從業(yè)者所導(dǎo)致的不育原因進(jìn)行研究，通過該類患者血清抑制素B （INHB）、睪酮（TEST）、精子頂體酶（AE）活性進(jìn)行檢測，旨在揭示特殊行業(yè)從業(yè)者不育原因，并為該行業(yè)提供健康咨詢。

精子質(zhì)量是反映精子活力的首要且直觀指標(biāo)，精子活力與男性不育直接相關(guān)。有觀點(diǎn)認(rèn)為：精子活力與精子頂體酶活性呈正相關(guān)，精子活力不足導(dǎo)致精子頂體酶活性降低進(jìn)而影響受精過程導(dǎo)致不育；劉錦宏等學(xué)者研究認(rèn)為：精液質(zhì)量與精子頂體酶活性關(guān)系密切，是評價男性生育指標(biāo)的重要參考依據(jù)，這也與本研究結(jié)論相近。INHB是由睪丸合成分泌的，主要是支持細(xì)胞和生精細(xì)胞合成，有兩個亞基構(gòu)成，與生殖能力有密切關(guān)系，對生殖功能具有內(nèi)分泌、旁分泌和自分泌的調(diào)節(jié)作用，研究證實(shí)在男性中血INHB與卵泡刺激素（FSH）成明顯的負(fù)相關(guān)，可以反饋抑制FSH的分泌。INHB與睪丸大小呈正相關(guān)性，INHB的測定反映了生殖細(xì)胞的數(shù)量，所以INHB是反映生精能力的指標(biāo)[6-8]。研究已經(jīng)證實(shí)抑制素B是卵巢儲備功能和睪丸曲細(xì)精管功能的主要標(biāo)記物，可以用于卵巢因素引起的女性不孕和曲細(xì)精管功能障礙引起的男性不育檢測[9-10]。在男性不育患者中，INHB分泌減少和FSH分泌增加常常同時出現(xiàn)，INHB與睪丸損害有明顯相關(guān)性，在睪丸受損的早期就可以發(fā)現(xiàn)INHB水平下降[11-12]。本研究發(fā)現(xiàn)：家具從業(yè)者不育患者血清抑制素B和反映精子運(yùn)動活力的指標(biāo)與健康對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），其直接表現(xiàn)在精子運(yùn)動的線性及運(yùn)動速度受到明顯影響，抑制素B減少，顯示家具從業(yè)者不育患者的生殖細(xì)胞分泌功能收到抑制，提示家具從業(yè)環(huán)境中有害氣體可能導(dǎo)致男性睪丸生精細(xì)胞受損，結(jié)論與文獻(xiàn)[13-15]報道相近。AE存在于精子頂體內(nèi)膜及赤道部膜上，通常以無活性形式存在，當(dāng)精子頭部進(jìn)入卵泡透明帶時，頂體酶原才被激活為頂體酶并能夠與卵子結(jié)合產(chǎn)生頂體反應(yīng)。AE是受精過程中不可缺少的一種中性蛋白水解酶，其作用類似于胰蛋白酶，當(dāng)精子與卵子相遇時，精子就臨時釋放出一種物質(zhì)，它能溶解卵子外圍的放射冠和透明帶，該透明帶成為阻斷精子與卵子受精的第一道屏障，精子只有借助頂體酶的作用，精子才能穿過卵子外部難以逾越的地帶，與卵子結(jié)合完成受精作用，在輸卵管內(nèi)形成受精卵。AE還能促使生殖道中激肽釋放，從而增強(qiáng)精子的活力和促進(jìn)精子的運(yùn)動。本研究發(fā)現(xiàn)：患者精子AE活性較正常對照組差異顯著（P<0.05），表明抑制INHB減少同樣對精子頂體酶活性產(chǎn)生連帶副作用，使得男性生精功能調(diào)控受到抑制，致使產(chǎn)生的精子不能穿透卵細(xì)胞透明帶，進(jìn)而影響精子受精過程而導(dǎo)致不育，這與國內(nèi)研究資料相近[16-18]。同時，家具從業(yè)環(huán)境由于有害揮發(fā)性化學(xué)制劑的作用，可導(dǎo)致相關(guān)從業(yè)人員內(nèi)分泌功能發(fā)生改變，而這一改復(fù)雜的內(nèi)分泌功能改變，促使人體將睪酮部分轉(zhuǎn)化為雌激素，進(jìn)而導(dǎo)致精子生成功能異常，增加了男性不育的風(fēng)險[19-20]。TEST是維持男性性征的重要激素，其主要作用在于維持并促進(jìn)男性第二性征的發(fā)育，并與促黃體素協(xié)同作用促進(jìn)精子的形成并成熟，與精子活力有直接關(guān)聯(lián)。TEST是人類于1935年發(fā)現(xiàn)并提純，歷經(jīng)多年研究，發(fā)現(xiàn)TEST不僅對維持人類第二性征起重要調(diào)節(jié)作用，還與人類生殖功能關(guān)系密切，本研究中雖然未能揭示家居從業(yè)者中的不育患者TEST與正常生育組有統(tǒng)計學(xué)差異，但從其他精子質(zhì)量分析數(shù)據(jù)顯示，家具生產(chǎn)環(huán)境中有害揮發(fā)性物質(zhì)對男性生殖系統(tǒng)的損傷作用明顯，本研究中的實(shí)驗(yàn)個體TEST水平未見明顯下降，可能與本研究中家居從業(yè)者從事工作年限較短或與實(shí)驗(yàn)個體數(shù)量不足有關(guān)。

家具行業(yè)是一種古老而傳統(tǒng)行業(yè)，從業(yè)者多以男性為主，由于環(huán)境中充斥有害化學(xué)氣體而從業(yè)者往往缺乏必要防護(hù)知識及措施而導(dǎo)致生殖系統(tǒng)受損，因此對家具從業(yè)者進(jìn)行適當(dāng)職業(yè)崗前教育，平常工作中注意適當(dāng)防護(hù)顯得十分必要。同時，家具從業(yè)者往往文化素質(zhì)相對低下而對自身健康狀況忽略，導(dǎo)致該行業(yè)從業(yè)者生殖系統(tǒng)的持續(xù)損害，故制訂切實(shí)可行的職業(yè)健康教育防護(hù)機(jī)制，并進(jìn)行持續(xù)教育，顯得尤為迫切。

致謝：本課題部分?jǐn)?shù)據(jù)得到廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)公司大力幫助，在此謹(jǐn)表謝意。

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Clinical Study of Male Infertility Factors

/DENG Zhi-biao，LI Zi-hui，MAI Xian-chang.//Medical Innovation of China，2016，13（18）：072-075

Objective：To study the related factors of male infertility in furniture practitioners and provide health guidance for the male furniture.Method：From January 2013 to December 2015，50 cases of male infertility with furniture industry in our hospital were selected as the experimental group，50 males with normal reproductive history were selected as the control group.Semen quality were carried on clinical analysis，the sperm mean curve movement speed （VCL），average linear motion velocity （VSL），average path velocity （VAP），sperm motion linearity （LIN），serum inhibin B （INHB），acrosomal enzyme （AE） activity and testosterone （TEST） level were analyzed.Result：Except TEST，the other indexes of the experimental group were lower than those of the control group，the differences were statistically significant（P<0.05）.Conclusion：The sperm quality of theinfertile patients with furniture industry is statistically different than that the normal control group，show that there is a certain degree of damage to the male infertility patients in the testicular pillar cells，the male sterile male reproductive condition is worrying，so vocational education and health protection is very urgent.

Male infertil；Endocrine hormone；Inhibin B

佛山市醫(yī)學(xué)類科技攻關(guān)項(xiàng)目（2014AB001793）

①廣東省佛山市順德區(qū)龍江醫(yī)院廣東佛山528318

鄧智標(biāo)

（2016-02-29）（本文編輯：李穎）