在線固相萃取/液相色譜-線性離子阱質(zhì)譜法同時檢測生物樣品中18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥

盧敏萍，黃克建，周　哲，林翠梧,4*，楊　寧，劉曉鋒，高凡欽

(1.廣西大學(xué)　化學(xué)化工學(xué)院，廣西　南寧　530004；2.廣西壯族自治區(qū)公安廳物證鑒定中心，廣西　南寧530012；3.賽默飛世爾科技(中國)有限公司，上海 　201206；4.廣西高校應(yīng)用化學(xué)技術(shù)與資源開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗室，廣西　南寧　530004；5.西安力邦醫(yī)藥科技有限責(zé)任公司，陜西　西安　710065)

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在線固相萃取/液相色譜-線性離子阱質(zhì)譜法同時檢測生物樣品中18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥

盧敏萍1，黃克建2，周哲3，林翠梧1,4*，楊寧2，劉曉鋒2，高凡欽5

(1.廣西大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，廣西南寧530004；2.廣西壯族自治區(qū)公安廳物證鑒定中心，廣西南寧530012；3.賽默飛世爾科技(中國)有限公司，上海 201206；4.廣西高校應(yīng)用化學(xué)技術(shù)與資源開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗室，廣西南寧530004；5.西安力邦醫(yī)藥科技有限責(zé)任公司，陜西西安710065)

建立了同時測定全血、尿液和肝組織等生物樣品中18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的在線固相萃取/液相色譜-線性離子阱質(zhì)譜(On-line SPE/LC-LIT/MS)分析方法。樣品經(jīng)乙腈處理，稀釋和離心后直接進(jìn)樣。經(jīng)Waters Oasis?HLB在線SPE柱富集純化，以BETASIL C18柱為分析柱，甲醇-水(均含0.1%甲酸)為流動相進(jìn)行梯度洗脫；使用電噴霧電離(ESI)正離子模式測定，掃描方式為選擇反應(yīng)監(jiān)測(SRM)和連續(xù)反應(yīng)監(jiān)測(CRM)。18種農(nóng)藥在考察的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(權(quán)重因子1/X)，相關(guān)系數(shù)為0.994 3～0.999 4；在全血和尿液中的檢出限為0.1～5 ng/mL，在肝組織中的檢出限為0.1～5 ng/g；3個加標(biāo)水平的回收率為90.2%～114.5%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=4)為0.5%～7.5%。該方法簡單準(zhǔn)確，靈敏度高，能夠滿足生物樣品中18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的快速分析要求。

在線固相萃?。灰合嗌V-線性離子阱質(zhì)譜法；連續(xù)反應(yīng)監(jiān)測(CRM)；氨基甲酸酯類農(nóng)藥；生物樣品

氨基甲酸酯類農(nóng)藥是繼有機(jī)氯、有機(jī)磷類農(nóng)藥后發(fā)展較為迅速的一類高效、廣譜殺蟲劑，具有分解快、殘留期短、高效、選擇性強(qiáng)的特點(diǎn)[1]。該類農(nóng)藥的毒性機(jī)理與有機(jī)磷類農(nóng)藥相似，主要通過抑制體內(nèi)乙酰膽堿酯酶的活性，使酶失去對乙酰膽堿的水解能力，造成組織內(nèi)乙酰膽堿的蓄積而中毒。20世紀(jì)70年代以來，由于有機(jī)氯農(nóng)藥品種相繼被不同國家禁用或限制使用，以及抗有機(jī)磷農(nóng)藥的昆蟲品種日益增多，氨基甲酸酯類農(nóng)藥的使用量逐年增加[2]，因不科學(xué)使用而造成的人畜中毒現(xiàn)象時有發(fā)生。近年來，該類農(nóng)藥的殘留分析備受關(guān)注[1]。

目前，氨基甲酸酯類農(nóng)藥的檢測技術(shù)主要分為生物檢測(如酶抑制法、免疫分析法、生物傳感器法[3]等)和色譜檢測，涉及的樣品有糧谷、蔬菜、水果、茶葉、煙草、中藥材、水體等，而生物樣品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥的檢測方法鮮有報道。我國現(xiàn)行氨基甲酸酯類農(nóng)藥的國家標(biāo)準(zhǔn)及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)檢測方法包括酶抑制法[4]、氣相色譜法(GC)[5-6]、高效液相色譜法(HPLC)[7]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)[8-12]等。上述方法中，膽堿酯酶抑制法可快速判斷出樣品中是否含有對膽堿酯酶有抑制作用的高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥，但方法特異性差，無法定性確證；氨基甲酸類農(nóng)藥的極性較強(qiáng)、熱穩(wěn)定性差，部分化合物在氣相色譜分析的溫度下發(fā)生分解，采用GC或GC-MS并不理想[2]，同時也缺乏高靈敏度的選擇性檢測器[1]；HPLC的靈敏度較高，但在分析組分復(fù)雜的樣品時色譜分離難度較大，選擇性差，近年來多采用柱后衍生進(jìn)行熒光檢測[1]；LC-MS/MS適用于難揮發(fā)、熱不穩(wěn)定化合物的分析，因具有靈敏度高、選擇性好、結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，近年來已廣泛應(yīng)用于氨基甲酸酯類農(nóng)藥的檢測[2,8-15,17,20]。

生物樣品因基質(zhì)成分復(fù)雜，既需要高靈敏度的檢測技術(shù)，也需要快速高效的前處理方法。目前，檢測氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)及文獻(xiàn)研究最常用的前處理方法為離線固相萃取柱凈化法[2,8-14,17]，其他方法如液液萃取法(LLE)[15-16]、分散固相萃取法(dispersive SPE)[18-19]、基質(zhì)固相分散法(MSPD)[20]等也有報道。但上述前處理方法操作繁瑣、費(fèi)時費(fèi)力，難以滿足生物樣品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥的快速檢測要求。隨著色譜技術(shù)的迅速發(fā)展，儀器的自動化程度越來越高，在線固相萃取(On-line SPE)技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生。該技術(shù)可顯著簡化樣品的前處理步驟，具有自動化程度高、富集效果好、樣品損耗低、SPE柱可重復(fù)使用等優(yōu)點(diǎn)，近年來在法庭毒物分析[21-22]、藥物分析[23-24]、食品安全[25-26]、環(huán)境科學(xué)[27]等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。目前，尚未見采用在線固相萃取分析生物樣品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥的檢測方法報道。本研究建立了在線固相萃取技術(shù)結(jié)合液相色譜-線性離子阱質(zhì)譜同時檢測生物樣品中18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的分析方法，該方法快速簡便，采用選擇反應(yīng)監(jiān)測(SRM)和連續(xù)反應(yīng)監(jiān)測(CRM)模式進(jìn)行質(zhì)譜檢測，CRM掃描模式在氨基甲酸酯類農(nóng)藥的分析方法中為首次報道，可進(jìn)一步降低基質(zhì)干擾，方法檢出限遠(yuǎn)低于相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，適用于生物樣品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥的分析測定。

1　實(shí)驗部分

1.1儀器與試劑

DionexTMUltimate 3000TM雙三元液相色譜系統(tǒng)(美國賽默飛世爾科技有限公司)，配DGP-3600SD脫氣機(jī)、TCC-3000SD柱溫箱(帶六通閥)、WPS-3000TFC-ANALYTICAL自動進(jìn)樣器。質(zhì)譜系統(tǒng)：LTQ XLTM型線性離子阱質(zhì)譜儀(美國賽默飛世爾科技有限公司)，配加熱電噴霧離子源(HESI-II)、XcaliburTM數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)、Mass Frontier 7.0TM軟件。3-18R高速冷凍離心機(jī)(美國TOMOS公司)；SB 3200-DT超聲波清洗器(寧波新芝生物科技股份有限公司)；Master-s UV 超純水發(fā)生器(上海和泰儀器有限公司)。

18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥單一標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 μg/mL)：涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜、滅多威、滅多威肟、抗蚜威、速滅威、殘殺威、呋喃丹、惡蟲威、西維因、硫雙威、異丙威、仲丁威、甲硫威、乙霉威、猛殺威、茚蟲威(農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所)；甲醇、乙腈、甲酸、乙酸銨(色譜純，美國Fisher公司)；實(shí)驗用水為超純水。

1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

將18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥單一標(biāo)準(zhǔn)溶液用甲醇稀釋，配成5 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。使用時根據(jù)需要以甲醇稀釋單一標(biāo)準(zhǔn)溶液和混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，配成不同質(zhì)量濃度的單一標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。所有標(biāo)準(zhǔn)溶液于4 ℃下保存。

1.3在線固相萃取與色譜條件

在線SPE柱：Waters Oasis?HLB(20 mm×3.9 mm，15 μm)；左泵為在線固相萃取泵，流動相：A為水，B為甲醇。分析柱：BETASIL C18(100 mm×2.1 mm，3 μm)；右泵為分析泵，流動相：A為水(含0.1%甲酸)，B為甲醇(含0.1%甲酸)。柱溫40 ℃；進(jìn)樣量50 μL；梯度洗脫條件及六通閥切換程序見表1，On-line SPE/LC-LIT/MS的流路圖見圖1。

表1梯度洗脫條件及六通閥切換程序

Table 1Gradient elution and valve switching programs

圖1在線固相萃取/液相色譜-線性離子阱質(zhì)譜的流路圖

Fig.1Diagram of on-line SPE/LC-LIT/MS a.Injection and enrichment of the sample;b.Transfer and elution process

1.4質(zhì)譜條件

電離方式為ESI正離子模式，掃描方式為選擇反應(yīng)監(jiān)測(SRM)和連續(xù)反應(yīng)監(jiān)測(CRM)；噴霧電壓為4 000 V；棱鏡電壓為57 V；鞘氣(35 arb)和輔助氣(15 arb)為氮?dú)?碰撞氣為氦氣；離子源溫度為300 ℃；毛細(xì)管溫度為350 ℃；隔離寬度為2 amu。18種農(nóng)藥的主要質(zhì)譜參數(shù)見表2。

1.5樣品處理

全血和尿液處理：吸取0.2 mL全血或尿液置于10 mL試管中，加入0.6 mL乙腈，渦旋振蕩1 min，再加入2.2 mL水，超聲提取5 min后，以10 000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min，上清液供On-line SPE/LC-LIT/MS分析。

表2　18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的主要質(zhì)譜參數(shù)

*quantitative ion pair

肝組織處理：稱取0.5 g經(jīng)絞碎均勻的肝組織，加入1.5 mL乙腈，渦旋振蕩1 min，再加入5.5 mL水，其余操作同全血處理。

2　結(jié)果與討論

2.1質(zhì)譜條件的優(yōu)化

通過蠕動泵向質(zhì)譜儀注入1 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，確定氨基甲酸酯類農(nóng)藥的最佳質(zhì)譜條件。在優(yōu)化過程中，發(fā)現(xiàn)棱鏡電壓對該類藥物的質(zhì)譜行為影響很大。當(dāng)棱鏡電壓達(dá)到60 V以上時，大部分藥物開始發(fā)生源內(nèi)裂解，其一級質(zhì)譜圖除準(zhǔn)分子離子峰外還同時出現(xiàn)二級甚至三級子離子峰，且隨著棱鏡電壓的繼續(xù)升高，子離子的豐度逐漸增強(qiáng)。通過自動優(yōu)化，得到最佳棱鏡電壓為57 V，此時母離子的豐度及穩(wěn)定性最佳。

取濃度為200 ng/mL的18種氨基甲酸酯單一標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別進(jìn)行MS3數(shù)據(jù)依賴掃描，確定各化合物的母離子、二級子離子和三級子離子信息。結(jié)果顯示，滅多威肟的MS2離子為m/z58.0和m/z88.0，無法進(jìn)行下一級裂解，而其余農(nóng)藥均可裂解得到MS3子離子。除滅多威肟外，對其余17種農(nóng)藥的MS2和MS3子離子強(qiáng)度進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜、速滅威和硫雙威的MS3子離子強(qiáng)度相比MS2子離子明顯降低，不能滿足靈敏度要求，而其他12種農(nóng)藥的MS3子離子能獲得較高的靈敏度。目前，氨基甲酸酯類農(nóng)藥的分析主要采用LC-MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式進(jìn)行檢測[2,8-12,14-15,17,20]。本研究分別采用SRM和CRM掃描模式，對空白血添加低濃度藥物的樣品進(jìn)行測定，根據(jù)上述12種農(nóng)藥的測定結(jié)果確定最優(yōu)的掃描模式。結(jié)果顯示，與SRM模式相比，采用CRM模式時上述12種農(nóng)藥的響應(yīng)信號下降，但基質(zhì)干擾明顯降低，且仍能獲得較低的檢出限，因此這12種農(nóng)藥選擇采用CRM模式進(jìn)行檢測，而前述滅多威肟不能裂解MS3子離子，涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜、速滅威和硫雙威的MS3子離子靈敏度較低，因此，這6種農(nóng)藥采用SRM模式檢測。兩種掃描模式下獲得部分農(nóng)藥的色譜對比圖見圖2。18種農(nóng)藥定量離子對的可能裂解途徑見圖3。

2.2流動相的優(yōu)化

選擇BETASIL C18作為分析柱，考察了甲醇-20 mmol/L乙酸銨溶液(均含0.1%甲酸)和甲醇-水(均含0.1%甲酸)兩種流動相體系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)采用前者作為流動相時，18種農(nóng)藥的一級質(zhì)譜圖幾乎均出現(xiàn)[M+NH4]+離子峰，且大部分為最強(qiáng)峰，而相應(yīng)的[M+H]+離子峰卻很弱，將乙酸銨溶液的濃度由20 mmol/L降至4 mmol/L時，此現(xiàn)象未得到改善；將[M+NH4]+作為母離子進(jìn)行二級裂解，發(fā)現(xiàn)相應(yīng)的子離子響應(yīng)較低，表明[M+NH4]+離子并不穩(wěn)定，用其子離子來定量缺乏準(zhǔn)確性。當(dāng)采用甲醇-水(均含0.1%甲酸)作為流動相時，上述[M+NH4]+離子峰消失，其中涕滅威、涕滅威砜和涕滅威亞砜的最強(qiáng)峰為[M+Na]+離子峰，其余15種農(nóng)藥的最強(qiáng)峰為[M+H]+離子峰，兩者作為母離子進(jìn)行二級或三級裂解，其子離子的響應(yīng)穩(wěn)定、靈敏度較高，因此選擇甲醇-水(均含0.1%甲酸)作為流動相。

2.3在線SPE閥切換時間的優(yōu)化

采用Waters Oasis?HLB柱作為在線SPE柱，該柱為反相保留機(jī)理，對酸性、中性和堿性化合物均具有吸附作用[21]。合適的閥切換時間可以保證在上樣過程中有效除去基質(zhì)干擾，是在線SPE的一個顯著影響因素。本實(shí)驗采用在線SPE柱代替分析柱直接與質(zhì)譜檢測器連接，以水為流動相對空白基質(zhì)樣品進(jìn)行測試，通過觀察色譜圖確定合適的閥切換時間。結(jié)果表明，空白樣品中的強(qiáng)極性基質(zhì)流出SPE柱所需時間為3 min，為有效除去基質(zhì)干擾，閥切換時間應(yīng)設(shè)置晚于該時間，因此選擇在4 min時將六通閥由1_2切換至6_1狀態(tài)。

2.4乙腈含量對在線SPE的影響

因生物樣品的基質(zhì)成分復(fù)雜，本研究選取乙腈對樣品進(jìn)行簡單處理，以避免堵塞SPE柱、污染離子源，同時減少基質(zhì)干擾，提高檢測靈敏度。配制乙腈含量分別為10%，20%，30%，40%，50%，60%，70%，80%，90%和100%的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，考察溶液中乙腈含量對在線SPE萃取效率的影響。結(jié)果顯示，當(dāng)溶液中乙腈含量為10%～30%時，18種農(nóng)藥的SPE萃取效果較好，其中乙腈含量為20%時的萃取效率最優(yōu)，均在85%以上。隨著乙腈含量的繼續(xù)升高，各目標(biāo)物的萃取效率發(fā)生不同程度的下降，其中涕滅威亞砜和滅多威最為明顯。因此，確定將樣品稀釋至乙腈含量為20%。

2.5樣品稀釋液對在線SPE的影響

考察了0.1%甲酸水溶液(pH 4.0)、中性水和三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液(Tris-HCl溶液，pH 9.2) 3種不同pH值的稀釋液對在線SPE的影響。結(jié)果表明，采用不同稀釋液的萃取效果各有差異，其中涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜和滅多威使用堿性稀釋液的萃取效果最好，使用酸性稀釋液的萃取效果最差，其余14種農(nóng)藥均為使用中性或酸性稀釋液的萃取效果較好，且中性或酸性稀釋液的萃取效果無明顯差異。綜合考察結(jié)果，選擇中性水作為樣品的稀釋液。

2.6標(biāo)準(zhǔn)曲線與檢出限

分別在空白全血、尿液和肝組織基質(zhì)中添加18種農(nóng)藥的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，配制濃度分別為0.1，0.2，0.5，1，2，5，10，20，50，100，200，500，1 000 ng/mL(肝組織為ng/g)的加標(biāo)樣品，按“1.5”方法進(jìn)行處理，在優(yōu)化實(shí)驗條件下進(jìn)行測定。以目標(biāo)物的質(zhì)量濃度(X，ng/mL或ng/g)為橫坐標(biāo)，對應(yīng)峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，用加權(quán)(權(quán)重因子為1/X)最小二乘法回歸運(yùn)算，建立線性標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。采用逐步稀釋法進(jìn)行測試，以信噪比S/N≥3確定檢出限(LOD)，以S/N≥10確定定量下限(LOQ)，結(jié)果見表3。18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥在考察的濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)(r2)為0.994 3～0.999 4。18種農(nóng)藥在全血和尿液中的LOD為0.1～5 ng/mL，肝組織中的LOD為0.1～5 ng/g。

表3　18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的線性范圍、檢出限和定量下限

*:ng/mL for whole blood and urine samples;ng/g for liver tissue samples

2.7回收率與精密度

分別在空白全血、尿液和肝組織基質(zhì)中添加18種農(nóng)藥不同質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，配制低、中、高3個濃度水平的加標(biāo)樣品，按“1.5”方法進(jìn)行處理，在優(yōu)化實(shí)驗條件下進(jìn)行測定，方法的精密度和回收率結(jié)果見表4。全血中18種農(nóng)藥的回收率為90.2%～114.3%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.5%～7.5%；尿液中的回收率為90.9%～114.5%，RSD為0.5%～7.2%；肝組織中的回收率為90.6%～114.2%，RSD為0.8%～6.5%。

表4　回收率與精密度實(shí)驗結(jié)果(n=4)

*:ng/mL for whole blood and urine samples;ng/g for liver tissue samples

2.8實(shí)際樣品分析

應(yīng)用本方法對廣西壯族自治區(qū)公安廳物證鑒定中心受理的3起中毒案件的樣品進(jìn)行檢測，分別取1例血樣、2例尿樣。其中，在血樣中檢出呋喃丹，濃度為11.8 ng/mL，2例尿樣中未檢出上述18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥。

3　結(jié)　論

本研究運(yùn)用在線SPE技術(shù)建立了同時測定生物樣品中18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的液相色譜-線性離子阱質(zhì)譜檢測方法。樣品經(jīng)乙腈處理，稀釋和離心后即可直接進(jìn)樣，通過在線SPE自動進(jìn)行富集純化。本方法快速簡便，避免了繁瑣的前處理過程，大大縮短了分析時間。液相色譜-線性離子阱質(zhì)譜采用SRM和CRM掃描模式，其中CRM模式首次用于氨基甲酸酯類農(nóng)藥檢測，其具有基質(zhì)干擾小、選擇性強(qiáng)、檢出限低等優(yōu)點(diǎn)，非常適用于生物樣品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥的分析。

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[9]NY/T 1679-2009.Determination of Carbamate Pesticide Residues in Vegetable Foods by LC-MS/MS.Agriculture Industry Standards of the People's Republic of China(植物性食品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法.中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)).

[10]SN/T 2085-2008.Determination of Carbamate Pesticide Multiresidues in Grains for Import and Export——HPLC-MS/MS Method.Industry Standards of Entry-Exit Inspection and Quarantine of the People's Republic of China(進(jìn)出口糧谷中多種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量檢測方法 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法.中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)).

[11]SN/T 0134-2010.Determination for Pesticide Residues of 12 Kinds of Carbamates Including Oxamyl in Goods for Import and Export——LC-MS/MS Method.Industry Standards of Entry-Exit Inspection and Quarantine of the People's Republic of China(進(jìn)出口食品中殺線威等12種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的檢測方法 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法.中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)).

[12]SN/T 2560-2010.Determination of Carbamate Pesticides Residues in Foodstuffs for Import and Export——LC-MS/MS Method.Industry Standards of Entry-Exit Inspection and Quarantine of the People's Republic of China(進(jìn)出口食品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法.中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)).

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Simultaneous Determination of Eighteen Carbamate Pesticides in Biological Samples by On-line Solid Phase Extraction Coupled with Liquid Chromatography-Linear Ion Trap Mass Spectrometry

LU Min-ping1,HUANG Ke-jian2,ZHOU Zhe3,LIN Cui-wu1,4*,YANG Ning2,LIU Xiao-feng2,GAO Fan-qin5

(1.School of Chemistry and Chemical Engineering,Guangxi University,Nanning530004,China;2.Institute of Forensic Science,Public Security Department of Guangxi Zhuang Autonomous Region,Nanning530012,China;3.Thermo Fisher Scientific(China) Co.,Ltd.,Shanghai201206,China;4.Guangxi Colleges and Universities Key Laboratory of Applied Chemistry Technology and Resource Development,Nanning 530004,China;5.Xi'an Libang Pharmaceutical Technology Company,Xi'an710065,China)

A new and sensitive analytical method was developed for the simultaneous determination of eighteen carbamate pesticides in biological samples by on-line solid phase extraction(on-line SPE) coupled with liquid chromatography-linear ion trap mass spectrometry(LC-LIT/MS).The samples were treated with acetonitrile,followed by dilution and centrifugation.The resulting solution was injected into LC system directly and processed with an Waters Oasis?HLB On-line SPE column for enrichment and purification.Separation was performed on a BETASIL C18column with mixed mobile phases of methanol and water(both containing 0.1% formic acid) by gradient elution.The analytes were detected in selected reaction monitoring(SRM) or consecutive reaction monitoring(CRM) mode through positive electrospray ionization(ESI+).The calibration curves were linear within the investigated mass concentration ranges of the analytes(weighted 1/X),with correlation coefficients(r2) of 0.994 3-0.999 4.The LODs were in the ranges of 0.1-5 ng/mL for whole blood and urine,and 0.1-5 ng/g for liver tissue.The recoveries at three spiked levels ranged from 90.2% to 114.5%,with RSDs(n=4) of 0.5%-7.5%.The developed method is simple and accurate,and is sensitive for the rapid determination of eighteen carbamate pesticides in biological samples.

on-line solid phase extraction(on-line SPE);liquid chromatography-linear ion trap mass spectrometry(LC-LIT/MS);consecutive reaction monitoring(CRM);carbamate pesticides;biological samples

2015-12-08；

2016-01-26

林翠梧，博士，教授，研究方向：天然有機(jī)化學(xué)，Tel：0771-3275878，E-mail:lincuiwu@gxu.edu.cn

doi:10.3969/j.issn.1004-4957.2016.07.001

O657.63；F767.2

A

1004-4957(2016)07-0777-08

研究報告