槲皮素糖苷類化合物的合成及其對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制活性

文中行，胡占興，袁　潔，陳洪菊，張利梅，梁光義*，徐必學(xué)*

(1.貴州大學(xué) 藥學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025；2.貴州省中國(guó)科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽(yáng) 550002)

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槲皮素糖苷類化合物的合成及其對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制活性

文中行1，2，胡占興2，袁潔1，2，陳洪菊2，張利梅2，梁光義2*，徐必學(xué)2*

(1.貴州大學(xué) 藥學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025；2.貴州省中國(guó)科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽(yáng) 550002)

以蘆丁為原料合成了6個(gè)槲皮素糖苷類化合物，并經(jīng)MS，1H NMR及13C NMR 確證其結(jié)構(gòu)。以阿卡波糖為陽(yáng)性對(duì)照測(cè)試目標(biāo)產(chǎn)物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制活性，發(fā)現(xiàn)當(dāng)該類化合物中糖基上的羥基被苯甲?；竽茉鰪?qiáng)其對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制活性，其中V-b和V-c的IC50各為19.4 μmol/L，21.5 μmol/L，而未被苯甲?；幕衔颲I-b和VI-c的抑制活性相對(duì)較低。這將為該類化合物在降糖活性方面的深入研究提供參考。

槲皮素糖苷；抑制活性；α-葡萄糖苷酶

α-葡萄糖苷酶的抑制表達(dá)為治療II型糖尿病的一個(gè)重要方法，至今，盡管有很多有效的α-葡萄糖苷酶抑制劑，但他們的副作用不容忽視。例如，阿卡波糖可能會(huì)引起胃腸脹氣，腸鳴音，腹瀉，腹痛等不良反應(yīng)[1]。因此尋找更有效更安全的α-葡萄糖苷酶抑制劑是藥學(xué)工作者的一個(gè)重要任務(wù)。近年來，一些研究者發(fā)現(xiàn)很多黃酮糖苷類天然產(chǎn)物具有較好的降糖作用。例如6，8-二-C-葡萄糖基芹菜素 (1)[2]，4′-甲氧基-6-C-(6-乙酰氧基-葡萄糖基)-8-C-α-L-阿拉伯糖基芹菜素 (2)[3]，8-C-葡萄糖基芹菜素 (3)[4]，3′-O--D-葡萄糖基木犀草素 (4) 及3-O--D-葡萄糖基槲皮素 (5)[5]對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制活性要強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照阿卡波糖。另外，本課題組的前期研究工作發(fā)現(xiàn)3，5，5′-三-甲氧基-7-O--D-葡萄糖基槲皮素 (6)也具有明顯的α-葡萄糖苷酶抑制活性，此外槲皮素3，7位羥基的反應(yīng)活性較高，但選擇性較差，基于此，我們?cè)O(shè)計(jì)了以蘆丁為起始原料合成一系列3位羥基被烷基化，7位羥基被葡萄糖基化的槲皮素葡萄糖苷類化合物，并測(cè)試他們對(duì)α-葡萄糖苷酶的體外抑制活性。

圖 1　 6個(gè)槲皮素葡萄糖苷類化合物的結(jié)構(gòu)Fig.1　Structures of six flavonoid glycosides

1　儀器與試劑

HP-5793質(zhì)譜儀(美國(guó)Hewlett-Packard公司)，INOVA-400 MHz型超導(dǎo)核磁共振儀(TMS為內(nèi)標(biāo)，美國(guó)Varian公司)，WNMR-I 500 MHZ核磁共振儀(TMS為內(nèi)標(biāo)，中國(guó)WIPM公司)，柱色譜硅膠(300 ～ 400目)及GF254高效薄層板(青島海洋化工廠)，α-葡萄糖苷酶、牛血清白蛋白(BSA)及對(duì)硝基苯-α-葡萄糖昔(PNPG)(美國(guó)Sigma公司)，阿卡波糖(德國(guó)Bayer公司)，550型酶標(biāo)儀(美國(guó)Bio-Rad公司)，單道、多道移液器(德國(guó)Eppendorf公司)，96微孔板(德國(guó)Greiner公司)。其余試劑若無特別說明均為市售分析純或化學(xué)純產(chǎn)品。

2　合成路線及方法

2.1合成路線

本實(shí)驗(yàn)以蘆丁為起始原料，經(jīng)過7至8步反應(yīng)合成V和VI類槲皮素葡萄糖苷化合物，合成路線如圖2所示。

2.2化合物的合成

2.2.13′，4′，7-三-芐氧基槲皮素(I)[6]

稱取無水蘆丁(50 g，0.08 mol)置于 1000 mL 反應(yīng)瓶中，加入 600 mL 無水 DMF，攪拌溶解后加入無水 K2CO3(56 g，0.41 mol)和溴芐(36.9 mL，0.3 mol)。室溫反應(yīng) 2.5 d后，將反應(yīng)液倒入冰水中，用濃鹽酸調(diào)節(jié) pH 至 6，析出大量沉淀，過濾，得到黃色粘稠物，粗品不需純化直接用600 mL乙醇加熱溶解，再加入200 mL濃鹽酸，于70℃加熱3 h，冷卻至室溫，倒入冰水中，過濾析出的沉淀，水洗至中性，干燥，得 46.8 g 土黃色粉末 I，兩步反應(yīng)總產(chǎn)率 80%。ESI-MSm/z: 595.2 [M + Na]+;1H NMR (400 MHz，DMSO-d6)δ(ppm): 12.48 (s，1H)，7.81 (d，J= 1.9 Hz，1H)，7.84 (dd，J= 8.8，1.9 Hz，1H)，7.30 - 7.55 (m，15H)，7.25 (d，J= 8.8 Hz，1H)，6.86 (d，J= 1.9 Hz，1H)，6.47 (d，J= 1.9 Hz，1H)，5.24 (s，4H)，5.21 (s，2H)。

2.2.2中間體 II-a ～ II-c總的合成方法[6]

稱取 I(10 g，17.5 mmol)置于 500 mL 反應(yīng)瓶中，加入 150 mL 無水 DMF，攪拌溶解后加入無水K2CO3(4.3 g，31.5 mmol)和 CH3CH2I(CH3CH2CH2I，(CH3)2CHCH2I)(1.2 eq.)，室溫反應(yīng) 8 h，反應(yīng)

圖2　V和VI類槲皮素葡萄糖苷化合物的合成路線Fig.2　Synthetic route of quercetin glycosides V and VI

反應(yīng)試劑與條件: (1) BnBr，K2CO3，DMF，25℃，2.5 d; (2) ethanol，concentrated hydrochloric acid，70℃，3 h; (3) R1I，K2CO3，DMF，25℃，8 h; (4) H2，10% Pd/C，THF，25℃，15 h; (5) dichlorodiphenylmethane，diphenylether，175℃，1 h; (6)α-D-glucopyranosyl bromide tetrabenzoate，K2CO3，TBAB，CHCl3/DMF/H2O，25℃，48 h; (7) 10% Pd/C，H2，CH3OH/THF/H2O，45℃，48 h; (8) CH3ONa，CH3OH/CH2Cl2，25℃，30 min.

液用乙酸乙酯和水萃取，有機(jī)層依次用 0.1 M 稀鹽酸和水洗滌，無水硫酸鎂干燥，濃縮至干，殘留物經(jīng)硅膠柱層析純化，得到中間體 II-a(II-b，II-c)。

3-乙氧基-3′，4′，7-三-芐氧基槲皮素(II-a)：黃色粉末，產(chǎn)率 81%；ESI-MSm/z: 623.2 [M + Na]+;1H NMR (400 MHz，DMSO-d6)δ(ppm): 12.51 (s，1H)，7.75 (d，J= 2.3 Hz，1H)，7.60 (dd，J= 8.7，2.3 Hz，1H)，7.49 - 7.26 (m，15H)，7.13 (d，J= 8.6 Hz，1H)，6.73 (d，J= 2.1 Hz，1H)，6.16 (d，J= 2.2 Hz，1H)，5.16 (s，2H)，5.15 (s，2H)，5.13 (s，2H)，3.80 (q，J= 6.8 Hz，2H)，1.24 (t，J= 6.8 Hz，3H).3-丙氧基-3′，4′，7-三-芐氧基槲皮素(II-b)：黃色粉末，產(chǎn)率 83%；ESI-MSm/z: 637.2 [M + Na]+;1H NMR (400 MHz，CDCl3)δ(ppm): 12.68 (s，1H)，7.77 (d，J= 1.9 Hz，1H)，7.67 (dd，J= 8.6，2.0 Hz，1H)，7.51 - 7.44 (m，5H)，7.44 - 7.29 (m，10H)，7.02 (d，J= 8.6 Hz，1H)，6.46 (d，J= 2.1 Hz，1H)，6.42 (d，J= 2.1 Hz，1H)，5.26 (s，2H)，5.23 (s，2H)，5.13 (s，2H)，3.90 (t，J= 6.9 Hz，2H)，1.72 - 1.61 (m，2H)，0.91 (t，J= 7.4 Hz，3H)。

3-異丁氧基-3′，4′，7-三-芐氧基槲皮素(II-c)：黃色粉末，產(chǎn)率80%；ESI-MSm/z: 651.2 [M + Na]+;1H NMR (400 MHz，CDCl3)δ(ppm): 12.68 (s，1H)，7.72 (d，J= 2.0 Hz，1H)，7.67 (dd，J= 8.6，2.0 Hz，1H)，7.52 - 7.29 (m，15H)，7.02 (d，J= 8.6 Hz，1H)，6.46 (d，J= 2.1 Hz，1H)，6.42 (d，J= 2.1 Hz，1H)，5.25 (s，2H)，5.22 (s，2H)，5.13 (s，2H)，3.72 (d，J= 6.7 Hz，2H)，2.08 - 1.93 (m，1H)，0.95 (d，J= 6.7 Hz ，6H)。

2.2.3中間體III-a ～ III-c 總的合成方法[7]

稱取II-a(II-b，II-c)(9 mmol)置于500 mL反應(yīng)瓶中，加入無水乙醇和四氫呋喃各100 mL，加熱攪拌溶解后加10% Pd/C(于II-a質(zhì)量的20%)，并以氫氣置換反應(yīng)體系中的空氣，用氫氣球密封反應(yīng)體系，室溫反應(yīng)過夜，冷卻、過濾，濾液濃縮至干，所得產(chǎn)物無需純化，直接用于下一步反應(yīng)。

將上一步所得產(chǎn)物置于250 mL反應(yīng)瓶中，氬氣保護(hù)下，加入80 mL無水二苯基醚，攪拌溶解后加入二氯二苯甲烷(2.6 mL，0.135 mol)，175℃反應(yīng)1 h后，反應(yīng)液分散于氯仿和飽和碳酸氫鈉水溶液中，萃取，有機(jī)相用水洗滌，無水硫酸鎂干燥，濃縮至干，殘留物經(jīng)硅膠柱純化，得III-a(III-b，III-c)。

3-乙氧基-3′，4′-O-二苯基甲叉槲皮素(III-a)：土黃色粉末，兩步產(chǎn)率 56%；ESI-MSm/z: 517.1 [M + Na]+;1H NMR (400 MHz，DMSO-d6)δ(ppm): 12.60 (s，1H)，7.72 (dd，J= 10.4，1.9 Hz，1H)，7.71 (d，J= 2.2 Hz，1H)，7.58 - 7.52 (m，J= 7.7，1.5 Hz，3H)，7.49 - 7.43 (m，6H)，7.23 (d，J= 8.2 Hz，1H)，6.46 (d，J= 1.9 Hz，1H)，6.20 (d，J= 1.9 Hz，1H)，4.02 (q，J= 7.0 Hz，2H)，1.21 (t，J= 7.0 Hz，3H);13C NMR (100 MHz，DMSO-d6)δ(ppm): 178.29，164.41，161.36，156.58，155.12，148.59，146.86，139.41，137.30，129.77，128.85，125.93，124.44，124.18，117.46，109.12，108.59，104.42，98.81，94.03，68.19，15.46。

3-丙氧基-3′，4′-O-二苯基甲叉槲皮素(III-b)：土黃色粉末，兩步產(chǎn)率 58%；ESI-MSm/z: 531.1 [M + Na]+;1H NMR (400 MHz，DMSO-d6)δ(ppm): 12.59 (s，1H)，7.69 - 7.65 (m，2H)，7.57 - 7.53 (m，4H)，7.48 - 7.42 (m，7H)，7.22 (d，J= 8.8 Hz，1H)，6.44 (d，J= 2.1 Hz，1H)，6.19 (d，J= 2.1 Hz，1H)，3.88 (t，J= 6.5 Hz，2H)，1.66 - 1.52 (m，2H)，0.83 (t，J= 7.4 Hz，3H);13C NMR (100 MHz，DMSO-d6)δ(ppm): 178.21，164.37，161.36，156.57，155.19，148.57，146.78，139.38，137.44，129.76，128.82，125.91，124.34，124.17，117.42，109.06，108.78，104.45，98.79，94.00，74.00，22.89，10.51。

3-異丁氧基-3′，4′-O-二苯基甲叉槲皮素(III-c)：土黃色粉末，兩步產(chǎn)率 55%；ESI-MSm/z: 545.1 [M + Na]+;1H NMR (400 MHz，DMSO-d6)δ(ppm): 12.59 (s，1H)，7.65 - 7.60 (m，2H)，7.57 - 7.51 (m，4H)，7.48 - 7.41 (m，6H)，7.20 (d，J= 8.3 Hz，1H)，6.43 (d，J= 2.1 Hz，1H)，6.18 (d，J= 2.1 Hz，1H)，3.68 (d，J= 6.4 Hz，2H)，1.92 - 1.80 (m，1H)，0.84 (d，J= 6.7 Hz，6H);13C NMR (100 MHz，DMSO-d6) δ (ppm): 178.15，164.37，161.39，156.59，155.28，148.59，146.74，139.38，137.58，129.76，128.82，125.92，124.27，124.18，117.41，109.02，108.99，104.51，98.81，94.00，78.64，28.56，19.13。

2.2.4中間體IV-a ～ IV-c總的合成方法[8]

取III-a(III-b，III-c)(0.416 mmol)、TBAB(14 mg，0.042 mmol)和K2CO3(0.403 g，2.91 mmol)混合于50 mL反應(yīng)瓶中，加入5 mL DMF和5 mL水，室溫?cái)嚢?5 min，緩慢加入用10 mL氯仿溶解的 2，3，4，6-四-O-苯甲?；?α-D-溴代吡喃葡萄糖(1.1 g，1.66 mmol)，室溫?cái)嚢?8 h。反應(yīng)液用稀鹽酸調(diào)pH至2-3，乙酸乙酯萃取，有機(jī)層以水洗滌，無水硫酸鎂干燥，濃縮至干，殘留物經(jīng)硅膠柱純化，得IV-a(IV-b，IV-c)。

3-乙氧基-3′，4′-O-二苯基甲叉-7-O-β-D-苯甲?；咸烟腔纹に?IV-a)：黃色油狀物，產(chǎn)率 52%；ESI-MSm/z: 1095.3 [M + Na]+;1H NMR (400 MHz，CDCl3)δ(ppm): 12.65 (s，1H)，8.00 - 7.93 (m，6H)，7.90 - 7.85 (m，2H)，7.66 (dd，J= 8.4，1.8 Hz，1H)，7.62 - 7.57 (m，5H)，7.55 - 7.50 (m，2H)，7.47 (t，J= 7.5 Hz，1H)，7.42 - 7.37 (m，9H)，7.36 - 7.29 (m，4H)，7.26 - 7.20 (m，3H)，7.19 - 7.13 (m，2H)，6.95 (d，J= 8.4 Hz，1H)，6.53 (d，J= 2.2 Hz，1H)，6.49 (d，J= 2.2 Hz，1H)，6.00 (t，J= 9.2 Hz，1H)，5.81 (dd，J= 9.1，7.4 Hz，1H)，5.74 (t，J= 9.3 Hz，1H)，5.57 (d，J= 7.3 Hz，1H)，4.74 (d，J= 9.7 Hz，1H)，4.50 - 4.40 (m，2H)，4.11 - 4.01 (m，2H)，1.33 (t，J= 7.1 Hz，3H);13C NMR (100 MHz，CDCl3)δ(ppm): 179.46，166.58，166.15，165.65，165.43，162.68，162.28，156.66，149.88，147.94，140.23，140.19，138.52，134.11，133.97，133.89，133.56，130.37，130.31，130.28，130.07，129.83，129.66，129.49，129.29，129.09，129.02，128.97，128.93，128.84，128.78，128.68，126.67，125.75，124.63，124.36，109.15，108.97，107.73，99.88，98.65，95.49，77.68，73.43，73.02，71.86，69.69，69.14，63.49.

3-丙氧基-3′，4′-O-二苯基甲叉-7-O-β-D-苯甲?；咸烟腔纹に?IV-b)：黃色油狀物，產(chǎn)率 63%；ESI-MSm/z: 1109.3 [M + Na]+;1H NMR (400 MHz，CDCl3)δ(ppm): 12.66 (s，1H)，7.99 - 7.93 (m，6H)，7.90 - 7.86 (m，2H)，7.65 - 7.57 (m，6H)，7.55 - 7.44 (m，3H)，7.42 - 7.37 (m，9H)，7.37 - 7.30 (m，4H)，7.25 - 7.21 (m，2H)，6.95 (d，J= 8.3 Hz，1H)，6.53 (d，J= 2.2 Hz，1H)，6.50 (d，J= 2.2 Hz，1H)，6.01 (t，J= 9.2 Hz，1H)，5.82 (dd，J= 9.2，7.4 Hz，1H)，5.74 (t，J= 9.4 Hz，1H)，5.57 (d，J= 7.4 Hz，1H)，4.74 (d，J= 9.5 Hz，1H)，4.50 - 4.40 (m，2H)，3.98 - 3.87 (m，2H)，1.79 - 1.68 (m，2H)，0.95 (t，J= 7.4 Hz，3H);13C NMR (100 MHz，CDCl3)δ(ppm): 178.93，166.08，165.66，165.16，164.94，162.20，161.78，156.18，149.37，147.41，139.73，139.70，138.22，133.62，133.47，133.40，133.07，129.88，129.82，129.79，129.59，129.33，129.18，128.80，128.60，128.53，128.48，128.44，128.37，128.34，128.29，126.19，124.08，123.90，108.79，108.46，107.29，99.37，98.17，95.00，74.55，72.94，72.53，71.37，69.20，63.01，23.30，10.38。

3-異丁氧基-3′，4′-O-二苯基甲叉-7-O-β-D-苯甲?；咸烟腔纹に?IV-c)： 黃色油狀物，產(chǎn)率 52%；ESI-MSm/z: 1123.3 [M + Na]+;1H NMR (500 MHz，CDCl3)δ(ppm): 8.00 - 7.92 (m，7H)，7.90 - 7.84 (m，2H)，7.61 - 7.44 (m，10H)，7.41 - 7.30 (m，15H)，7.24 (s，2H)，6.94 (d，J= 10.0 Hz，1H)，6.53 (s，1H)，6.50 (s，1H)，6.00 (t，J= 8.8 Hz，1H)，5.81 (t，J= 7.6 Hz，1H)，5.74 (t，J= 9.2 Hz，1H)，5.56 (d，J= 6.2 Hz，1H)，4.73 (d，J= 11.5 Hz，1H)，4.52 - 4.38 (m，2H)，3.80 - 3.63 (m，2H)，2.09 - 1.97 (m，1H)，0.96 (d，J= 5.7 Hz，6H);13C NMR (125 MHz，CDCl3)δ(ppm): 178.91，166.11，165.69，165.18，164.97，162.25，161.80，156.22，149.40，147.40，139.75，139.72，138.40，133.63，133.49，133.42，133.09，129.90，129.85，129.81，129.62，129.35，129.21，128.84，128.63，128.57，128.50，128.46，128.39，128.35，128.32，126.22，124.04，123.95，117.89，108.94，108.43，107.37，99.38，98.23，95.03，79.24，72.97，72.56，71.40，69.23，63.04，28.99，19.18。

2.2.5目標(biāo)產(chǎn)物V-a ～ V-c總的合成方法[9]

取 IV-a(IV-b，IV-c)(0.523 mmol)于250 mL反應(yīng)瓶中，加入80 mL甲醇、20 mL四氫呋喃和1 mL水溶解，加入10% Pd/C(于IV-a質(zhì)量的20%)，并以氫氣置換反應(yīng)體系中的空氣后，以氫氣球密封反應(yīng)體系，45℃反應(yīng)48 h，過濾去除鈀碳，減壓回收溶劑至干，所得殘留物經(jīng)硅膠柱層析純化，得V-a(V-b，V-c)。

3-乙氧基-7-O-β-D-苯甲?；咸烟腔纹に?V-a)：黃色油狀物，產(chǎn)率 51%；ESI-MSm/z: 931.3 [M + Na]+;1H NMR (400 MHz，CDCl3)δ(ppm): 12.54 (s，1H)，7.99-7.86 (m，8H)，7.75 (s，1H)，7.55 - 7.41 (m，5H)，7.40 - 7.23 (m，10H)，7.02 - 6.94 (m，1H)，6.46 (d，J= 1.9 Hz，1H)，6.45 (d，J= 2.0 Hz，1H)，6.03 (t，J= 9.2 Hz，1H)，5.81 (dd，J= 8.9，7.3 Hz，1H)，5.77 (t，J= 8.8 Hz，1H)，5.54 (d，J= 7.3 Hz，1H)，4.74 (dd，J= 12.0，2.5 Hz，1H)，4.55 - 4.39 (m，2H)，4.01 (q，J= 6.9 Hz，2H)，1.28 (t，J= 7.0 Hz，3H);13C NMR (100 MHz，CDCl3)δ(ppm): 179.17，166.58，166.06，165.39，165.26，162.05，161.95，157.28，156.31，147.58，143.72，137.84，133.82，133.74，133.67，133.39，130.02，129.98，129.78，129.22，128.87，128.64，128.57，128.51，122.66，122.41，115.83，115.32，107.22，99.60，98.26，95.35，77.36，72.85，72.78，71.61，69.46，69.03，63.26。

3-丙氧基-7-O-β-D-苯甲?；咸烟腔纹に?V-b)：黃色油狀物，產(chǎn)率 49%；ESI-MSm/z: 945.3 [M + Na]+;1H NMR (400 MHz，CDCl3)δ(ppm): 12.58 (s，1H)，7.99 - 7.86 (m，8H)，7.69 (s，1H)，7.54 - 7.48 (m，3H)，7.47 - 7.39 (m，2H)，7.38 - 7.27 (m，8H)，6.97 (d，J= 8.4 Hz，1H)，6.44 (s，2H)，6.02 (t，J= 9.2 Hz，1H)，5.81 (dd，J= 8.8，7.2 Hz，1H)，5.79 - 5.74 (m，1H)，5.53 (d，J= 7.3 Hz，1H)，4.74 (dd，J= 12.0，2.6 Hz，1H)，4.54 - 4.39 (m，2H)，3.89 (t，J= 6.9 Hz，2H)，1.75 - 1.65 (m，2H)，0.88 (t，J= 7.4 Hz，3H);13C NMR (100 MHz，CDCl3)δ(ppm): 178.99，166.43，165.91，165.25，165.12，161.96，161.78，156.97，156.17，147.30，143.52，137.98，133.66，133.58，133.51，133.24，129.87，129.83，129.64，129.10，128.74，128.49，128.42，128.37，122.55，122.37，115.74，115.15，107.15，99.42，98.16，95.20，77.26，77.01，76.76，74.81，72.73，72.65，71.47，69.33，63.13，23.22，10.29。

3-異丁氧基-7-O-β-D-苯甲?；咸烟腔纹に?V-c)：黃色油狀物，產(chǎn)率 84%；ESI-MSm/z: 959.3 [M + Na]+;1H NMR (500 MHz，CDCl3)δ(ppm): 12.66 (s，1H)，8.00 - 7.92 (m，7H)，7.90 - 7.84 (m，2H)，7.61 - 7.44 (m，10H)，7.41 - 7.30 (m，15H)，7.24 (s，2H)，6.94 (d，J= 10.0 Hz，1H)，6.53 (s，1H)，6.50 (s，1H)，6.00 (t，J= 8.8 Hz，1H)，5.81 (t，J= 7.6 Hz，1H)，5.74 (t，J= 9.2 Hz，1H)，5.56 (d，J= 6.2 Hz，1H)，4.73 (d，J= 11.5 Hz，1H)，4.52 - 4.38 (m，2H)，3.80 - 3.63 (m，2H)，2.09 - 1.97 (m，1H)，0.91 (d，J= 6.7 Hz，6H);13C NMR (100 MHz，CDCl3)δ(ppm): 179.05，166.62，166.01，165.41，165.29，162.10，161.83，156.97，156.26，147.29，143.63，138.36，133.82，133.75，133.66，133.42，130.02，129.98，129.96，129.79，129.19，128.83，128.64，128.60，128.56，128.53，122.68，122.64，115.90，115.25，107.32，99.42，98.26，95.31，79.63，72.86，72.75，71.59，69.43，63.27，29.05，19.33。

2.2.6目標(biāo)產(chǎn)物VI-a ～ VI-c總的合成方法[8]

取V-a(V-b，V-c)(0.089 mmol)于10 mL反應(yīng)瓶中，加入4 mL甲醇和1 mL二氯甲烷溶解，緩慢加入甲醇鈉(0.41 mg，0.27 mmol)，室溫?cái)嚢?0 min。攪拌下加入陽(yáng)離子交換樹脂調(diào)節(jié)pH至5-6，過濾，濃縮濾液，所得殘留物經(jīng)硅膠柱純化，得VI-a(VI-b，VI-c)。

3-乙氧基-7-O-β-D-葡萄糖基槲皮素(VI-a)：淡黃色粉末，產(chǎn)率 92%；ESI-MSm/z: 515.2 [M + Na]+;1H NMR (400 MHz，DMSO-d6)δ(ppm): 9.83 (s，1H)，9.40 (br，1H)，8.29 (br，1H)，7.60 (d，J= 2.2 Hz，1H)，7.47 (dd，J= 8.5，2.2 Hz，1H)，6.90 (d，J= 8.5 Hz，1H)，6.75 (d，J= 2.1 Hz，1H)，6.42 (d，J= 2.1 Hz，1H)，5.41 (br，1H)，5.13 (br，1H)，5.06 (d，J= 7.3 Hz，2H)，4.61 (br，1H)，4.11 (br，1H)，4.01 (q，J= 7.0 Hz，2H)，3.73 - 3.65 (m，1H)，3.49 - 3.45 (m，1H)，3.30 - 3.23 (m，2H)，3.17 (s，1H)，1.26 (t，J= 7.0 Hz，3H);13C NMR (100 MHz，DMSO-d6)δ(ppm): 178.33，162.90，160.95，156.60，156.03，148.86，145.21，136.85，120.91，120.79，115.73，115.67，105.84，99.86，99.21，94.48，79.21，77.18，76.42，73.15，69.57，67.81，60.65，48.66，15.37。

3-丙氧基-7-O-β-D-葡萄糖基槲皮素(VI-b)：淡黃色粉末，產(chǎn)率 63%；ESI-MSm/z: 529.2 [M + Na]+;1H NMR (400 MHz，DMSO-d6)δ(ppm): 12.72 (s，1H)，8.29 (s，1H)，7.55 (d，J= 2.2 Hz，1H)，7.45 (dd，J= 8.5，2.2 Hz，1H)，6.89 (d，J= 8.5 Hz，1H)，6.74 (d，J= 1.9 Hz，1H)，6.42 (d，J= 2.0 Hz，1H)，5.05 (d，J= 7.4 Hz，2H)，4.63 (s，1H)，3.89 (t，J= 6.6 Hz，2H)，3.72 - 3.64 (m，1H)，3.51 - 3.48 (m，2H)，3.29 - 3.22 (m，2H)，3.18 - 3.12 (m，1H)，1.65 (h，J= 7.3 Hz，2H)，0.89 (t，J= 7.4 Hz，3H);13C NMR (100 MHz，DMSO-d6)δ(ppm): 178.29，162.91，160.98，156.68，156.07，148.88，145.24，137.06，120.88，115.84，115.64，105.91，99.89，99.24，94.51，79.23，77.20，76.44，73.73，73.17，69.61，60.67，48.69，22.85，10.46。

3-異丁氧基-7-O-β-D-葡萄糖基槲皮素(VI-c)：淡黃色粉末，產(chǎn)率 68%；ESI-MSm/z: 543.3 [M + Na]+;1H NMR (400 MHz，DMSO-d6)δ(ppm): 12.67 (s，1H)，7.45 (d，J= 2.1 Hz，1H)，7.37 (dd，J= 8.4，2.1 Hz，1H)，6.84 (d，J= 8.4 Hz，1H)，6.69 (d，J= 1.3 Hz，1H)，6.37 (d，J= 1.5 Hz，1H)，5.40 (br，1H)，5.08 (br，1H)，5.00 (d，J= 7.3 Hz，2H)，4.60 (br，1H)，3.64 (d，J= 6.5 Hz，3H)，3.56 (s，2H)，3.28 - 3.16 (m，3H)，3.11 (t，J= 8.8 Hz，1H)，1.96 - 1.80 (m，1H)，0.85 (d，J= 6.7 Hz，6H).13C NMR (100 MHz，DMSO-d6)δ(ppm): 178.28，162.93，161.04，156.80，156.13，148.87，145.27，137.29，121.05，120.89，115.98，115.63，106.00，99.93，99.29，94.56，78.47，77.24，76.47，73.21，69.66，60.71，28.57，19.22。

2.3α-葡萄糖苷酶抑制活性測(cè)試

按照楊付梅等[10]的方法，將20 μL 0.1 mol/L的含有0.2 U/mLα-葡萄糖苷酶及 0.1% 牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液用50 μL 0.1 mol/L的磷酸鹽緩沖液稀釋后，加入10 μL 0.1 mol/L的含有1 μmol/L 的目標(biāo)化合物的磷酸鹽緩沖液，37℃ 孵育10 min，然后加入20 μL 0.1 mol/L的有含10 mmol/L的對(duì)硝基苯-α-葡萄糖昔的磷酸鹽緩沖液，37℃反應(yīng)15 min，加入反應(yīng)終止劑后測(cè)定405 nm OD值，阿卡波糖(Acarbose)為陽(yáng)性對(duì)照藥物。

圖1　目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)

CompoundR3R3'R4'R5RIC50(μmol/L)V-a-CH2CH3-H-H-H-Bz56.5V-bCH2CH2CH3-H-H-H-Bz19.4V-cCH2CH(CH3)2-H-H-H-Bz21.5VI-a-CH2CH3-H-H-H-H>100VI-b-CH2CH2CH3-H-H-H-H>100VI-cCH2CH(CH3)2-H-H-H-H>100Acarbose2.5×10-3

3　結(jié)果與討論

從以上活性測(cè)試結(jié)果可以看出，在所篩選的6個(gè)樣品中，當(dāng)化合物中糖基上的羥基游離時(shí)，所得衍生物活性相對(duì)較低，見VI-a、VI-b和VI-c；而當(dāng)糖基上的羥基苯甲?；?，所得衍生物V-a、V-b和V-c的抑制活性則大為提高，特別是V-b和V-c顯示出較好的抑制活性，其IC50各為19.4 μmol/L，21.5 μmol/L，以上結(jié)果表明苯甲?；鶗?huì)增強(qiáng)其抑制活性。該類化合物3位上的羥基被丙基取代所得衍生物與異丁基取代所得衍生物的活性相當(dāng)，而當(dāng)3位上的羥基被乙基取代后所得衍生物的活性明顯降低。這將為該類化合物在降糖活性方面的深入研究提供參考。

槲皮素酚羥基的相對(duì)活性總體表現(xiàn)為：7 > 3 ≈ 4′ > 3′ >> 5。5-羥基活性最弱是其與羰基形成分子內(nèi)氫鍵所致[11]。在本研究中，以槲皮素為起始原料來合成目標(biāo)化合物是難以實(shí)現(xiàn)的，所以選擇蘆丁為起始原料。先對(duì)蘆丁 7，4′，3′ 位的三個(gè)羥基用芐基保護(hù)，然后將 3 位上的蕓香糖基水解，再對(duì) 3-羥基進(jìn)行一系列烷基化修飾，最后將三個(gè)芐基脫掉，并對(duì) 3′，4′-羥基選擇性保護(hù)后即可實(shí)現(xiàn)對(duì) 7-羥基進(jìn)行糖基化修飾。該合成路線條件簡(jiǎn)單，原料易得，且糖基化收率較高。

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Synthesis of Quercetin Glycosides and Their Inhibitory Activities to α-Glucosidase

WENZhong-hang1,2,HUZhan-xing2,YUANJie1,2,CHENHong-ju2,ZHANGLi-mei2,LIANGGuang-yi2*,XUBi-xue2*

(1.SchoolofPharmaceuticalSciences,GuizhouUniversity,Guiyang,Guizhou550025,China; 2.TheKeyLaboratoryofChemistryforNaturalProductsofGuizhouProvinceandChineseAcademyofSciences,Guiyang,Guizhou550007,China)

Six quercetin glycosides were designed and synthesized andtheir structures were confirmed by1H NMR,13C NMR and MS. The inhibitory activities of those compounds to α-glucosidase were evaluatedinvitro.The benzoylated compounds V-b and V-c showed promising bioactivities with IC50of 19.4 μmol/L and 21.5 μmol/L,while the inhibitory activities of VI-b and VI-c were lower.These results suggested that the benzoyl substitutions on quercetin glycosides might enhance inhibitory activities. This research may provide a reference for the studies on the hypoglycemic activity of quercetin glycosides.

Quercetin glycosides; Inhibitory activity; α-Glucosidase

1008-0457(2016)03-0018-07國(guó)際DOI編碼：10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2016.03.003

2016-02-29；修回日期：2016-04-15

貴州省優(yōu)秀青年科技人才培養(yǎng)對(duì)象專項(xiàng)資金[黔科合人字(2015)24號(hào)]。

梁光義(1952-)，教授，博士生導(dǎo)師，主要研究方向：天然藥物化學(xué)，E-mail: guangyi_liang@126.com；徐必學(xué)(1976-)，博士，副研究員，主要研究方向：天然藥物化學(xué)，E-mail: bixue_xu@126.com。

R914

A