黔金蕎麥1號(hào)為主的中草藥飼料添加劑對(duì)仔豬腸道有害菌及免疫因子的影響

譚露霖，羅文菊，艾蓉，薛紅，鄧蓉

(貴州省畜牧獸醫(yī)研究所，貴州 貴陽(yáng) 550005)

黔金蕎麥1號(hào)為主的中草藥飼料添加劑對(duì)仔豬腸道有害菌及免疫因子的影響

譚露霖，羅文菊，艾蓉，薛紅，鄧蓉*

(貴州省畜牧獸醫(yī)研究所，貴州 貴陽(yáng) 550005)

為探究黔金蕎麥1號(hào)為主的中草藥飼料添加劑對(duì)仔豬腸道微生物及免疫功能的影響，將20頭生長(zhǎng)健康、發(fā)育正常、體重相近的60 d仔豬隨機(jī)分為4組，即試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組、試驗(yàn)3組、對(duì)照組，分別在全價(jià)日糧基礎(chǔ)上添加1%、1．5%、2%復(fù)合中草藥制劑和不添加復(fù)合中草藥制劑。采集仔豬直腸糞便和血清，分別進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)，血清免疫因子干擾素γ(INFγ)、白介素－2(IL－2)的檢測(cè)。結(jié)果:飼料中添加黔金蕎麥1號(hào)為主的復(fù)合中草藥，仔豬直腸糞便中大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的數(shù)量顯著降低(P＜0．05);血清中INFγ、IL－2的含量影響差異不顯著(P＞0．05)。結(jié)果表明:飼料中添加黔金蕎麥1號(hào)為主的復(fù)合中草藥能降低仔豬直腸糞便中有害菌的含量，改善仔豬腸道健康;對(duì)仔豬血清免疫因子無(wú)顯著影響。

黔金蕎麥1號(hào);中藥飼料添加劑;仔豬;大腸桿菌;沙門(mén)氏菌

金蕎麥(Fagopyrum dibotrys(D．Don)Hara)又名野蕎麥、天蕎麥等，是原產(chǎn)于我國(guó)的一種重要蓼科(Polygonaceae)、蕎麥屬(Fagopyrum Mill．)多年生植物，具有抗癌、抗炎、抗氧化、殺菌、降血糖、調(diào)節(jié)血脂等生理功能［1］。1999年金蕎麥被列為國(guó)家Ⅱ級(jí)重點(diǎn)保護(hù)野生植物［2］。

大腸桿菌病是危害養(yǎng)殖業(yè)最普遍且防治最棘手的疾病之一［3］，大腸桿菌能產(chǎn)生強(qiáng)烈的毒素，嚴(yán)重危害畜禽健康，已成為全球性的公共衛(wèi)生問(wèn)題。沙門(mén)氏菌病是一種重要的人畜共患病，由腸炎沙門(mén)氏菌引起的人急性胃腸炎(食物中毒)已成為國(guó)際公共衛(wèi)生問(wèn)題。許多中草藥不僅能提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能，還具有無(wú)殘留、無(wú)抗藥性的特點(diǎn)，能夠?yàn)樯a(chǎn)安全、健康的畜禽產(chǎn)品提供保障。

本試驗(yàn)探究黔金蕎麥為主的中草藥飼料添加劑對(duì)仔豬直腸糞便中的大腸桿菌和沙門(mén)氏菌數(shù)量，以及血清免疫因子的影響，以期為豬腸道疾病的防治提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)飼養(yǎng)試驗(yàn)時(shí)間為2014年4月5日，試驗(yàn)選用20頭生長(zhǎng)健康、發(fā)育正常、體重相近的60 d非免疫商品仔豬隨機(jī)分成4組，每組5頭豬，試驗(yàn)期為36 d，分組情況見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)分組

1．2 試驗(yàn)日糧試驗(yàn)選用不含抗生素、益生素及其它藥物制劑的全價(jià)日糧，參考中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T65—2004，基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表2。

1．3 復(fù)合中草藥制劑復(fù)合中草藥制劑的成分為金蕎麥、萹蓄、地榆和烏藥，按照質(zhì)量比3∶1∶2∶1將其混勻。

表2 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1．4 飼養(yǎng)管理試驗(yàn)在貴州省畜牧獸醫(yī)研究所麥坪豬場(chǎng)進(jìn)行，各組仔豬按照統(tǒng)一飼養(yǎng)管理方法飼養(yǎng)，人工控制溫度，自由采食與飲水。

1．5 樣品采集與檢測(cè)

1．5．1 試驗(yàn)仔豬分組結(jié)束后、飼喂中草藥添加劑前，于早晨用滅菌棉塞刺激仔豬排糞并無(wú)菌采集糞便，每組采集3頭仔豬，采集后10 min內(nèi)無(wú)菌稱(chēng)取鮮糞1 g，用無(wú)菌生理鹽水99 mL充分混勻后，再用無(wú)菌生理鹽水按10倍稀釋法稀釋至10－4、10－5、10－6，分別取10 μL接種麥康凱平板培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)(大腸桿菌為粉紅色菌落、沙門(mén)氏桿菌為白色菌落)，每個(gè)稀釋度3個(gè)重復(fù)。正式試驗(yàn)進(jìn)行至20 d時(shí)，按上述方法進(jìn)行大腸桿菌和沙門(mén)氏桿菌數(shù)量檢測(cè)，對(duì)同一仔豬進(jìn)行檢測(cè)試驗(yàn)。

1．5．2 試驗(yàn)30 d后采血，檢測(cè)仔豬血清中INFγ、IL－2含量，同時(shí)首次免疫豬瘟弱毒疫苗，免疫3 d后采集血清檢測(cè)仔豬血清中INFγ、IL－2含量，接種豬瘟弱毒疫苗2次免疫，免疫3 d后采集血清檢測(cè)仔豬血清中INFγ、IL－2含量。

2 結(jié)果

2．1 細(xì)菌計(jì)數(shù)

2．1．1 通過(guò)細(xì)菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)，試驗(yàn)前各組豬糞便中大腸桿菌和沙門(mén)氏桿菌數(shù)量見(jiàn)表3。通過(guò)T檢驗(yàn)，對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，試驗(yàn)前各組間大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的數(shù)量差異不顯著(P＞0．05)。

表3 試驗(yàn)前各組試驗(yàn)豬糞便細(xì)菌數(shù)量統(tǒng)計(jì)

2．1．2 試驗(yàn)進(jìn)行20 d時(shí)，對(duì)各組豬糞便中大腸桿菌和沙門(mén)氏菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表4。由表4可見(jiàn)，添加復(fù)合中草藥后，試驗(yàn)組大腸桿菌數(shù)量均低于對(duì)照組，差異顯著性分析表明，試驗(yàn)1組與對(duì)照組之間差異顯著(P＜0．05);試驗(yàn)2組、試驗(yàn)3組與對(duì)照組之間差異極顯著(P＜0．01);試驗(yàn)1組與試驗(yàn)2組之間差異顯著(P＜0．05);試驗(yàn)1組與試驗(yàn)3組之間差異極顯著(P＜0．01);試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組之間差異不顯著(P＞0．05)。通過(guò)對(duì)沙門(mén)氏菌的數(shù)量統(tǒng)計(jì)，3個(gè)試驗(yàn)組沙門(mén)氏菌數(shù)量均低于對(duì)照組，差異顯著性分析顯示，試驗(yàn)1組與對(duì)照組之間差異顯著(P＜0．05);試驗(yàn)2組、試驗(yàn)3組與對(duì)照組之間差異極顯著(P＜0．01);試驗(yàn)1組與試驗(yàn)3組之間差異顯著(P＜0．05);試驗(yàn)1組與試驗(yàn)2組，試驗(yàn)3組與對(duì)照組之間差異不顯著(P＞0．05)。

根據(jù)上述差異顯著性分析，飼料中添加2%復(fù)合中草藥制劑對(duì)降低仔豬糞便中大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的效果最顯著。

表4 各組試驗(yàn)豬糞便細(xì)菌數(shù)量統(tǒng)計(jì)

2．2 INFγ和IL2檢測(cè)試驗(yàn)30 d后，對(duì)各組仔豬血清INFγ和IL2進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表5。由表5可知，試驗(yàn)各組3次檢測(cè)仔豬血清INFγ和IL2的含量與對(duì)照組相比，差異均不顯著(P＞0．05)。

表5 仔豬血清INFγ和IL2檢測(cè)

3 討論

3．1 大腸桿菌廣泛存在于自然界，在動(dòng)物體內(nèi)又是常在菌，感染途徑多，抵抗力強(qiáng)，可突破黏膜屏障迅速滲透至腸壁內(nèi)繁殖使動(dòng)物發(fā)病，引起畜禽腹瀉、敗血癥、乳腺炎等［4］。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組仔豬直腸糞便中大腸桿菌的數(shù)量均降低。沙門(mén)氏菌是最常見(jiàn)的重要人畜共患病原菌，畜禽感染沙門(mén)氏菌后，引起痢疾、敗血癥、實(shí)質(zhì)器官和淋巴結(jié)出血壞死、腸道潰瘍［5］。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組中沙門(mén)氏菌的數(shù)量均降低。表明黔金蕎麥1號(hào)為主的中藥飼料添加劑通過(guò)降低仔豬腸道中有害菌大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的數(shù)量，改善腸道微生物環(huán)境，降低仔豬腹瀉的發(fā)生，其中以2%添加量效果最顯著。

3．2 IL－2是一種具有高活化的多功能小分子蛋白，是由活化的CD4+T細(xì)胞及少量CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生的一種免疫調(diào)節(jié)淋巴因子，IL－2水平的高低反映了T細(xì)胞的功能狀態(tài)，其產(chǎn)生能力是機(jī)體細(xì)胞免疫功能的重要指標(biāo)［6］。INFγ具有抗病毒活性，參與機(jī)體的防御免疫，其活性增高則有利于感染的控制，但I(xiàn)NFγ亦有促炎活性，能增強(qiáng)細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)及自然殺傷細(xì)胞(NK)細(xì)胞的溶細(xì)胞活性，增加黏附分子在內(nèi)皮細(xì)胞表面的表達(dá)，促進(jìn)中性粒細(xì)胞的粘附、滲出和活化，是造成內(nèi)皮細(xì)胞損傷、毛細(xì)血管通透性增加的因素之一［7］。仔豬接種豬瘟弱毒疫苗前后，黔金蕎麥1號(hào)為主的中藥飼料添加劑對(duì)血清免疫相關(guān)因子IL－2和INFγ的含量都無(wú)顯著影響，說(shuō)明對(duì)仔豬的免疫功能無(wú)顯著影響。

［1］李蕾，孫美利，張舒媛，等．近十年金蕎麥化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展［J］．中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2015(4):46－48．

［2］盛華剛，朱立俏，林桂濤．金蕎麥的化學(xué)成分與藥理作用研究進(jìn)展［J］．西北藥學(xué)雜志，2011(2):156－158．

［3］曾俊棋，岳萬(wàn)福．豬源大腸桿菌耐藥性與毒力的研究［J］．現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2016(1):38－44．

［4］宋修慶．禽類(lèi)養(yǎng)殖場(chǎng)大腸桿菌病的危害及防治措施:第四屆(2011)中國(guó)水禽發(fā)展大會(huì)［Z］．南昌:2011．

［5］李潔萍，曾涼雄，尹杰，等．豬沙門(mén)氏菌病的危害及其防制［J］．中國(guó)動(dòng)物保健，2013(9):39－41．

［6］王著敏，金杰．紅景天對(duì)復(fù)合因素致慢性疲勞大鼠血清IL－2、TNF－α水平的影響［J］．河南醫(yī)學(xué)研究．2014(12):3－5．

［7］章莉莉，孫志堅(jiān)，張東軍，等．腎綜合征出血熱患者血清IL－12、IFNγ、IL－4、IL－10的變化及臨床意義［J］．南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2008(11):1476－1478．

The Effect of Chinese Herbal Medicinal Feed Additive Main Containing Qian Fagopyrum Dibotrys No．1 on the Intestinal Harmful Bacteria and Immune Factor in Piglets

Tan Lulin，Luo Wenju，Ai Rong，Xue Hong，Deng Rong*
(Guizhou Institute Animal Husbandry and Veterinary Medicine，Guiyang Cuizhou 550005，China)

The present research was carried out to evaluate the effect of Chinese herbal medicinal feed additive on intestinal harmful bacteria and immune factor in piglets．A total of 20 healthy growth，normal development，and body weight close sixty－day old piglets were assigned to 4 dietary treatments including no additives group(control group)，adding 1%Chinese herbal medicinal feed additive group(group one)，adding 1．5%Chinese herbal medicinal feed additive group(group two)，and adding 2%Chinese herbal medicinal feed additive group(group three)．Collecting rectal feces and serum in order to bacteria counting and the detection of Interferon gamma(INFγ)and interleukin－2(IL－2)．Result:Compared with the control group，F(xiàn)eeding Chinese herbal medicinal feed additive groups decreased(P＜0．05)the number of e．coli and salmonella in rectal feces of piglets．The concentrations of INFγ and IL－2 in serum had no effect(P＞0．05)．It was concluded that the Chinese herbal medicinal feed additive main containing Qian Fagopyrum Dibotrys No．1 can improve intestinal health through decreasing the number of harmful bacteria，but had no significant effect on immune factors in serum．

Qian Fagopyrum Dibotrys No．1;Chinese Herbal Medicinal Feed Additive;Piglets;E．coli;Salmonella．

S816．7

A

1007－1474(2016)04－0020－03

2016－05－27

國(guó)家農(nóng)業(yè)科技成果轉(zhuǎn)化資金項(xiàng)目“優(yōu)質(zhì)牧草黔金蕎麥1號(hào)中試與示范”［2014GB2F200250］;貴州省科技成果重點(diǎn)推廣計(jì)劃項(xiàng)目“黔金蕎麥1號(hào)配套技術(shù)應(yīng)用示范推廣”黔科合成字［2013］5084

譚露霖(1991—)，女，研究實(shí)習(xí)員，碩士，研究方向?yàn)閯?dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)。E－mail:359362195@qq．com

*通訊作者:鄧蓉(1966—)，女，副研究員，碩士，研究方向?yàn)椴輼I(yè)科學(xué)。E－mail:dr817@163．com．