電針小海與下巨虛穴對(duì)DU模型大鼠ChAT及α7 nAchR的影響

鄧石峰，許明，倪偉，張雨辰，楊璐佳，張泓（.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)沙 40007；.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，長(zhǎng)沙 4008）

·動(dòng)物實(shí)驗(yàn)·

電針小海與下巨虛穴對(duì)DU模型大鼠ChAT及α7 nAchR的影響

鄧石峰1，許明1，倪偉1，張雨辰2，楊璐佳1，張泓1
（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)沙 410007；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，長(zhǎng)沙 410208）

目的 觀察電針十二指腸潰瘍（duodenal ulcer， DU）模型大鼠小海、下巨虛對(duì)大鼠血清腫瘤壞死因子-α（tumour necrosis factor-α， TNF-α）、血清乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶（choline acetyltransferase， ChAT）及十二指腸組織煙堿型乙酰膽堿受體α7（neuronal acetylcholine receptorsα7， α7 nAchR）等表達(dá)的影響，朱步探討“合治內(nèi)府”中“合”穴的相對(duì)特異性。方法 將40只健康SD大鼠隨機(jī)分為空白組（A組）、模型組（B組）、小海組（C組）和下巨虛組（D組），每組10只。于大鼠右臀部皮下部注射10%鹽酸半胱胺建立大鼠DU模型，造模成功后，C組電針小海穴，D組電針下巨虛穴。肉眼觀察各組大鼠十二指腸組織潰瘍并評(píng)分，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法檢測(cè)大鼠血清中 TNF-α表達(dá)，用可見(jiàn)紫外分光光度計(jì)進(jìn)行比色，測(cè)量大鼠血清中ChAT的表達(dá)，蛋白質(zhì)印跡法（western blot）檢測(cè)大鼠十二指腸組織中α7 nAchR的表達(dá)。結(jié)果 造模后，B組、C組和D組大鼠十二指腸潰瘍?cè)u(píng)分較A組顯著增高（均P＜0.01），C組、D組評(píng)分顯著低于B組（均P＜0.01），且D組顯著低于C組（P＜0.01）。B組TNF-α表達(dá)較A組顯著增高（P＜0.01），C組、D組TNF-α顯著低于B組（均P＜0.01），且D組顯著低于C組（P＜0.01）。C組ChAT表達(dá)較B組有升高趨勢(shì)但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），D組ChAT表達(dá)明顯高于B組（P＜0.01），且高于C組（P＜0.05）。與B組相比，C組和D組α7 nAchR表達(dá)顯著增高（均P＜0.01）。各組ChAT與α7 nAchR表達(dá)呈顯著的正相關(guān)（r=0.444，P=0.007）。結(jié)論 電針小海、下巨虛均能降低DU大鼠血清中十二指腸潰瘍?cè)u(píng)分及TNF-α的表達(dá)，升高血清中ChAT與十二指腸組織中α7 nAchR的表達(dá)，說(shuō)明電針對(duì)十二指腸潰瘍產(chǎn)生治療作用有可能是通過(guò)調(diào)節(jié)TNF-α等來(lái)實(shí)現(xiàn)的，其機(jī)制有可能是通過(guò)激活膽堿能抗炎通路產(chǎn)生抗炎作用來(lái)完成的。D組效果優(yōu)于C組，提示下巨虛存在相對(duì)特異性。

電針；膽堿能抗炎通路；穴，小海；穴，下巨虛；十二指腸潰瘍；血清腫瘤壞死因子-α；血清乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶；十二指腸組織煙堿型乙酰膽堿受體α7；大鼠

目前，研究腧穴臨床作用的相對(duì)特異性是針灸學(xué)領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。在特定穴中，手足六陽(yáng)經(jīng)除了五輸穴中各有 1個(gè)合穴（通常稱之為經(jīng)合穴）外，其所屬的六腑各自還有 1個(gè)下合穴（通常稱之為腑合穴或六腑下合穴）。對(duì)于合穴的臨床應(yīng)用，后世多遵循《靈樞·邪氣臟腑病形》提出的“滎輸治外經(jīng)，合治內(nèi)府”“治內(nèi)府奈何？取之于合”等應(yīng)用原則，即認(rèn)為合穴的臨床意義主要在于治療相應(yīng)的內(nèi)腑病變［1-2］。那么“合治內(nèi)府”之合究竟是指經(jīng)合穴還是六腑下合穴亦或包含了上述兩類合穴？現(xiàn)今為止，無(wú)論文獻(xiàn)研究還是實(shí)驗(yàn)研究均沒(méi)有明確的結(jié)論，也給臨床應(yīng)用帶來(lái)了一定的困惑。

筆者選取較為經(jīng)典的小腸腑病——十二指腸潰瘍（duodenal ulcer， DU）模型大鼠為研究對(duì)象，以手太陽(yáng)小腸經(jīng)經(jīng)合穴小海、下合穴下巨虛為刺激點(diǎn)，觀察電針與小腸相關(guān)的兩個(gè)“合穴”后，DU大鼠十二指腸潰瘍?cè)u(píng)分以及TNF-α、ChAT和α7 nAchR的表達(dá)，分析并比較電針小海、下巨虛是否能對(duì)十二指腸潰瘍炎癥反應(yīng)產(chǎn)生治療效應(yīng)以及膽堿能抗炎通路（cholinergic anti-inflammatory pathway， CAP）是否在其中發(fā)揮作用等，以期朱步探討其對(duì)十二指腸潰瘍可能的治療機(jī)制以及“合治內(nèi)府”的部分內(nèi)涵，同時(shí)也為特定穴臨床應(yīng)用的相對(duì)特異性研究進(jìn)行一些有益的嘗試。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物分組及處理

健康Sprague-Dawley大鼠40只，SPF級(jí)，雌雄各半，體重為205～235 g，飼養(yǎng)溫度為20℃～25℃，濕度為 50%～70%，動(dòng)物及飼料由湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供（湖南省動(dòng)物質(zhì)量合格證編號(hào)4304701041）。大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng) 1星期，給與充分的標(biāo)準(zhǔn)飼料和飲用水，光照充分。于實(shí)驗(yàn)前24 h禁食不禁水，隨機(jī)分為空白組（A組）、模型組（B組）、小海組（C組）和下巨虛組（D組），每組10只（每組雌雄各半）。A組以生理鹽水替代鹽酸半胱胺（Sigma公司）溶液造模，之后不做其他處理；B組造模成功后固定于鼠板上30 min；C組固定后取雙側(cè)小海進(jìn)行治療；D組取雙側(cè)下巨虛進(jìn)行電針治療。觀察各組大鼠的精神活動(dòng)、禁食飲水等情況。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)動(dòng)物的處置符合 2009年《Ethical issues in animal experimentation》［3］相關(guān)動(dòng)物倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)的條例。

1.2 主要材料、試劑與儀器

1.2.1 材料和試劑

鹽酸半胱胺（美國(guó)sigma公司進(jìn)口）、毫針（0.30 mm ×25 mm，蘇州醫(yī)療用品廠有限公司）、水合氯醛（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）、多聚甲醛（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）、75%乙醇（北海國(guó)發(fā)海洋生物股份有限公司）、TNF-α酶聯(lián)免疫分析試劑盒（上海國(guó)藥生物）、乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶測(cè)試盒（南京建成生物工程研究所）、兔抗大鼠α7 nAchR抗體（長(zhǎng)沙維爾生物科技有限公司）。

1.2.2 儀器

SDZ-V型電子針療儀（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司）、全套動(dòng)物手術(shù)器械、CBV-1500A型無(wú)菌工作臺(tái)（上海楊仰凈化裝備有限公司）、TGL16M臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（長(zhǎng)沙科威實(shí)業(yè)有限公司）、DYCZ-40A轉(zhuǎn)膜儀（北京六一儀器廠）。

1.3 造模方法

采用Szabo［4］法制造DU大鼠。在大鼠禁食不禁水24 h后，皮下注射10%鹽酸半胱胺（300 mg/kg），自由飲食。造模24 h后，為了保吳潰瘍的慢性過(guò)程，分別給造模大鼠飲用1%的半胱胺水。

1.4 電針?lè)椒?/p>

1.4.1 穴位定取

根據(jù)林文注主編《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》［5］及華興邦制定的《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物圖譜》提供的方法，并參照人體腧穴骨度分寸法量取。①小海位于大鼠前肘突與肱骨髁之間的凹陷中，直刺5 mm；②下巨虛位于大鼠膝關(guān)節(jié)后外側(cè)脛骨外上髁下約15 mm處，直刺5 mm。

1.4.2 電針操作方法

造模成功后第1天起，C組與D組大鼠捆綁后分別針刺雙側(cè)小海、下巨虛穴。使用SDZ-V型華佗牌電針治療儀，參數(shù)為疏密波（10/50 Hz），左側(cè)接正極，右側(cè)接負(fù)極，以肢體出現(xiàn)震顫為度，留針30 min。每日1次，治療10 d。

1.5 樣本的采集與處理

治療結(jié)束后將各組大鼠麻醉，立即開(kāi)腹，EP管行腹主動(dòng)脈采血，4℃，4000轉(zhuǎn)/min，15 min后取上清液于-70℃低溫冰箱保存；采血后迅速分離十二指腸，將十二指腸沿十二指腸系膜縱軸方向剪開(kāi)并用冰生理鹽水沖洗干凈，先行肉眼潰瘍?cè)u(píng)分，取出1塊約150 mg的腸組織，采用 10%福爾馬林溶液固定，石蠟包埋；另取部分十二指腸組織（約 5 mm×8 mm）迅速置于-70℃低溫冰箱保存。

1.6 觀察指標(biāo)

1.6.1 肉眼下觀察病損組織黏膜潰瘍指數(shù)并評(píng)分

按照Moraes等［6］的方法，并加以改良，評(píng)價(jià)十二指腸黏膜損傷程度。0分為黏膜正常；1分為黏膜充血、水腫；2分為黏膜糜爛、出血；3分為淺潰瘍；4分為深潰瘍；5分為潰瘍穿孔。

1.6.2 血清中TNF-α的檢測(cè)

采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法，嚴(yán)格按照試劑盒所述步驟操作。①建立標(biāo)準(zhǔn)曲線后加樣，每孔中加入血清100 μL，封板置37℃恒溫箱中120 min；②5次洗板后在每孔加入第一抗體工作液50 μL，旋渦振蕩器上混勻后封板置37℃恒溫，60 min；③洗板5次后每孔加入酶標(biāo)抗體工作液 100 μL，混勻后封板置37℃恒溫箱，60 min；④洗板 5次每孔加入底物液100 μL，混勻后封板 37℃置恒溫箱反應(yīng) 10 min；⑤每孔加入終止液50 μL，混勻，立即在450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中TNF-α的含量。

1.6.3 血清中的ChAT的檢測(cè)

采用可見(jiàn)紫外分光光度計(jì)進(jìn)行比色測(cè)量，嚴(yán)格按照試劑盒所述步驟操作。①按說(shuō)明準(zhǔn)備好試劑、標(biāo)準(zhǔn)品及樣品；②分別在對(duì)應(yīng)的測(cè)定管和空白管試劑中加入樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，混勻，于37℃水浴預(yù)溫5 min后水浴20 min，100℃沸水水浴 2 min終止反應(yīng)；③混勻后，4000 r/min×10 min后取上清液進(jìn)行顯色方應(yīng)；④混勻，靜置15 min后，在324 nm處，用1 cm光徑、2 mm內(nèi)徑的石英比色皿，蒸餾水調(diào)零，測(cè)定各管的吸光度值（OD值）；⑤在pH值為7.2的條件下，37℃時(shí)每1 mL血清樣本每分鐘轉(zhuǎn)移 1 μmol乙?；o膽堿的能力定義為1個(gè)酶活力單位（U/mL），根據(jù)公式ChAT活力（U/mL）=（測(cè)定管OD值—測(cè)定空白管OD值）×反應(yīng)總體積÷（反應(yīng)時(shí)間×1.98×10-5×比色光徑×取樣量）×1000 =128.78×（測(cè)定管 OD值—測(cè)定空白管 OD值）計(jì)算ChAT的含量。

1.6.4 十二指腸腸組織中的α7 nAchR受體的檢測(cè)

采用蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)十二指腸組織中的α7 nAchR蛋白表達(dá)。①洗滌組織并加入裂解液，勻漿并離心，沉淀分離后得到膜蛋白并凍存；②BCA蛋白定量試劑盒（Wellbio）測(cè)定蛋白濃度，樣品加入等體積 2× SDS加樣緩沖液，煮沸5 min，經(jīng)電盧后轉(zhuǎn)膜，封閉液封閉 1 h；③加一抗 rabbit α7 AChR（封閉液稀釋），4℃孵育過(guò)夜，TBST洗15 min×3次；④TBST洗涕15 min ×3次；⑤加入二抗（封閉液稀釋），室溫孵育1 h，TBST 洗15 min×3次；⑥用ECL發(fā)光法檢測(cè)蛋白表達(dá)狀況；⑦顯影沖洗。每張膜上做一種目的蛋白和相應(yīng)內(nèi)參蛋白B，并用Image J分析軟件將圖片上每個(gè)特異條帶灰度值數(shù)字化。AChR α7蛋白值為目的蛋白的灰度值除以內(nèi)參β-actin的灰度值，將其上帶和下帶比值（相對(duì)灰度值）的平均值作為結(jié)果。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，均進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)。符合正態(tài)分布者，多組計(jì)量資料采用單因素方差分析（One-way ANOVA），方差齊者用LSD法和SNK法，方差不齊者用Dunnett’s T2或Dunnett’s T3法；ChAT 與α7 nAchR相關(guān)性采用直線相關(guān)分析。所有數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

B組大鼠造模后死亡1只（死于十二指腸穿孔），C組和D組在治療過(guò)程中分別死亡2只和1只（死于十二指腸穿孔及急性感染），故最終納入統(tǒng)計(jì)共36只。

2.1 各組大鼠十二指腸潰瘍?nèi)庋墼u(píng)分比較

由表1可見(jiàn)，B組、C組和D組十二指腸潰瘍?cè)u(píng)分與A組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.01）。C組和D組治療后十二指腸潰瘍?cè)u(píng)分與B組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。D組治療后十二指腸潰瘍?cè)u(píng)分與C組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表1 各組大鼠十二指腸潰瘍?nèi)庋墼u(píng)分比較 （±s，分）

表1 各組大鼠十二指腸潰瘍?nèi)庋墼u(píng)分比較 （±s，分）

注:與A組比較1）P＜0.01；與B組比較2）P＜0.01；與C組比較3）P＜0.01

組別 n 十二指腸潰瘍?nèi)庋墼u(píng)分A組 10 0.20±0.42 B組 9 4.00±0.501）C組 8 3.13±0.641）2）D組 9 1.89±0.601）2）3）

2.2 各組大鼠血清中TNF-α表達(dá)結(jié)果比較

由表2可見(jiàn)，B組、C組和D組TNF-α表達(dá)均升高，與A組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.01）。C組和D組治療后TNF-α表達(dá)較B組均顯著降低（P＜0.01）。D組治療后TNF-α表達(dá)與C組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表2 各組大鼠血清中TNF-α表達(dá)結(jié)果比較 （±s，ng/L）

表2 各組大鼠血清中TNF-α表達(dá)結(jié)果比較 （±s，ng/L）

注:與A組比較1）P＜0.01；與B組比較2）P＜0.01；與C組比較3）P＜0.01

組別 n TNF-α表達(dá)A組 10 110.76±13.92 B組 9 361.06±9.451）C組 8 317.87±19.691）2）D組 9 275.36±14.971）2）3）

2.3 各組大鼠血清ChAT表達(dá)比較

表3 各組大鼠血清ChAT表達(dá)比較 （±s，U/mL）

表3 各組大鼠血清ChAT表達(dá)比較 （±s，U/mL）

注:與A組比較1）P＜0.01；與B組比較2）P＜0.01；與C組比較3）P＜0.05

組別 n 血清ChAT表達(dá)A組 10 33.86±3.60 B組 9 27.37±3.051）C組 8 31.11±3.54 D組 9 35.74±4.852）3）

由表3可見(jiàn)，B組大鼠血清ChAT表達(dá)與A組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.01）。C組治療后血清ChAT表達(dá)較 B組有增高趨勢(shì)，但兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。D組治療后血清ChAT表達(dá)較B組顯著增高（P＜ 0.01），且與 C組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.4 各組大鼠十二指腸組織α7 nAchR含量比較

由圖1及表4可見(jiàn)，B組、C組和D組十二指腸潰瘍組織中α7 nAchR含量與A組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.01）。C組和D組治療后十二指腸潰瘍組織中α7 nAchR含量較B組均顯著增高（P＜0.01）。而D組治療后十二指腸潰瘍組織中α7 nAchR含量較C組有增高趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表4 各組大鼠十二指腸組織α7 nAchR含量比較 （±s）

表4 各組大鼠十二指腸組織α7 nAchR含量比較 （±s）

注:與A組比較1）P＜0.01；與B組比較2）P＜0.01

組別 n α7 nAchR含量A組 10 0.88±0.11 B組 9 0.51±0.031）C組 8 0.62±0.051）2）D組 9 0.70±0.091）2）

2.5 ChAT與α7 nAchR相關(guān)性分析

直線相關(guān)分析結(jié)果表明，各組大鼠血清中ChAT表達(dá)與十二指腸組織中α7 nAchR表達(dá)呈顯著的正相關(guān)（r= 0.444，P=0.007）。

3 討論

消化性潰瘍（peptic ulcer， PU）是最常見(jiàn)的消化系疾病之一，在人群中發(fā)病率較高，平均每 10人中就有1人患過(guò)PU［7］，而DU又是PU的主要病種。炎癥反應(yīng)為DU的基本病理變化之一，與DU的病理過(guò)程密切相關(guān)。TNF-α是諸多炎癥因子中重要的一種，在機(jī)體受到有害刺激后起關(guān)鍵的使動(dòng)作用。鄭海涵等［8］研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α作為細(xì)胞增殖和凋亡的主要促炎因子，在炎癥性腸病的發(fā)病機(jī)制中起到重要的調(diào)節(jié)作用。姚莉亞等［9］研究表明，TNF-α的測(cè)定可作為判斷 PU病變程度及療效的參考指標(biāo)。

本實(shí)驗(yàn)中，B組大鼠十二指腸潰瘍?nèi)庋墼u(píng)分及TNF-α的表達(dá)顯著高于A組（均P＜ 0.01），證實(shí)了促炎因子大量表達(dá)，表明炎癥反應(yīng)在DU病理過(guò)程中的重要作用；C組潰瘍?cè)u(píng)分及 TNF-α表達(dá)顯著低于 B組（均P＜0.01），表明電針小海穴能夠降低DU大鼠十二指腸潰瘍?cè)u(píng)分及TNF-α的表達(dá)，從而對(duì)DU大鼠起到一定的治療作用；D組潰瘍?cè)u(píng)分及TNF-α的表達(dá)顯著低于B組和C組（均P＜ 0.01），提示電針下巨虛穴可有效降低DU大鼠腸潰瘍?cè)u(píng)分及 TNF-α的表達(dá)，其療效優(yōu)于電針小海穴。

在近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)抗炎通路——膽堿能抗炎通路中，下丘腦能夠接受炎癥刺激的信號(hào)，并通過(guò)興奮迷走神經(jīng)釋放乙酰膽堿（acetylcholine， Ach）調(diào)控下游的炎癥因子，從而達(dá)到抗炎的作用［10］。ChAT合成Ach，其在血清中含量的變化能夠一定程度地反映出Ach含量的變化。進(jìn)一步的研究證實(shí)，α7 nAchR是膽堿能通路中Ach與下游炎癥細(xì)胞結(jié)合發(fā)揮抗炎作用的特異性的受體，廣泛分布于巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞等免疫細(xì)胞表面［11］，其中，TNF-α是最早發(fā)現(xiàn)能夠被膽堿能通路調(diào)控的下游因子之一［12-13］。針灸對(duì)炎癥有較好的治療調(diào)節(jié)作用，近年來(lái)研究證明，其治療機(jī)理與膽堿能通路的調(diào)整關(guān)系密切［14-17］。

薛平等［18］研究表明，重癥胰腺炎大鼠血清中堿酯酶（true choline esterase， TChE）較假手術(shù)組顯著升高（P＜ 0.01），乙酰膽 ChAT表達(dá)較假手術(shù)組顯著降低（P＜0.01），提示膽堿能抗炎通路在正常情況下可能呈激活狀態(tài)，釋放較多的Ach以維吳正常的生理活動(dòng)。本研究中有類似的發(fā)現(xiàn)，A組ChAT和α7 nAchR表達(dá)較高，造模后ChAT和α7 nAchR表達(dá)顯著降低（P＜0.01），表明 DU炎癥發(fā)生時(shí)，膽堿能抗炎通路受到抑制；電針治療后，C組ChAT表達(dá)較B組呈增高趨勢(shì)（P＞0.05），α7 nAchR表達(dá)較B組顯著增高（P＜0.01）；D組ChAT和α7 nAchR表達(dá)較B組顯著增高（P＜0.01），直線相關(guān)分析結(jié)果表明，各組大鼠血清中ChAT表達(dá)與十二指腸組織中α7 nAchR表達(dá)呈顯著的正相關(guān)（r=0.444，P=0.007），提示電針治療后，膽堿能通路中 Ach釋放增多并與相應(yīng)受體結(jié)合發(fā)揮效應(yīng)，產(chǎn)生抗炎作用。與 C組比較，D 組ChAT表達(dá)增高（P＜0.05），α7 nAchR表達(dá)有增高趨勢(shì)（P＞0.05），提示下巨虛能更有效地激活膽堿能通路，其對(duì)通路的影響要優(yōu)于小海穴。

本實(shí)驗(yàn)中，B組、C組和D組的ChAT、α7 nAchR表達(dá)依次升高，且潰瘍?cè)u(píng)分及 TNF-α的表達(dá)依次降低，提示DU發(fā)病時(shí)，膽堿能抗炎通路受到抑制，電針小海、下巨虛可通過(guò)緩解膽堿能抗炎通路受到的抑制作用，減輕炎癥反應(yīng)，從而達(dá)到抗炎作用。同時(shí)比較而言，下D組效果優(yōu)于C組，說(shuō)明下巨虛穴存在相對(duì)特異性，由此觀之，“合治內(nèi)府”之“合”主要應(yīng)指下合穴。

綜上所述，①電針小海、下巨虛均能降低DU大鼠血清中十二指腸潰瘍?cè)u(píng)分及 TNF-α的表達(dá)，升高血清中ChAT與十二指腸組織中α7 nAchR的表達(dá)，說(shuō)明電針對(duì)DU產(chǎn)生治療作用有可能是通過(guò)調(diào)節(jié)TNF-α等來(lái)實(shí)現(xiàn)的，其機(jī)制有可能是通過(guò)激活膽堿能抗炎通路產(chǎn)生抗炎作用來(lái)完成的。②比較而言D組效果優(yōu)于C組，說(shuō)明下巨虛穴存在相對(duì)特異性。③本研究結(jié)果部分證實(shí)“合治內(nèi)府”之“合”主要應(yīng)指下合穴，其具體內(nèi)涵仍需進(jìn)一步研究。

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Effect of Electroacupuncture at Points Xiaohai and Xiajuxu on ChAT and α 7 nAchR in a Rat Model of DU

DENG Shi-feng1，XU Ming1， NI Wei1， ZHANG Yu-chen2， YANG L u-jia1， ZHANG Hong1. 1.Hunan University o f Traditional C hinese Med icine，Changsha 410007，China； 2.Hunan University of Traditional Chinese Medicine Second Hospital，Changsha 410208，China

Objective To investigate the effect of electroacupuncture at points Xiaohai and Xiajuxu on the expressions of tumour necrosis factor-α （TNF-α） and choline acetyltransferase （ChAT） in serum and nicotinic acetylcholine receptor α 7 （α 7 nAchR） in duodenal tissues in a rat model of duodenal ulcer （DU） and preliminarily explore the relative specificity of He-Sea point in “treating visceral diseases with He-Sea point”.Methods Forty healthy SD rats were randomized into blank （A）， model （B）， Xiaohai （C） and Xiajuxu （D） groups， 10 rats each.A rat model of DU was made by subcutaneous injection of 10% cysteamine hydrochloride at the right buttock.After successful model making， group C was given electroacupuncture at point Xiaohai and group D， at point Xiajuxu.Duodenal tissue ulcer was macroscopically observed and scored in every group of rats.Rat serum expression of TNF-α was determined by double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）； rat serum expression of ChAT， by ultraviolet spectrophotometry & colorimetry； rat duodenal expression of α7 nAchR， by Western blot.Results After model making，the duodenal ulcer score was significantly higher in groups B， C and D than in group A （all P＜0.01） and significantly lower in groups C and D than in group B （both P＜0.01） and in group D than in group C （P＜0.01）.TNF-α expression was significantly higher in group B than in group A （P＜0.01） and significantly lower in groups C and D than in group B （both P＜0.01）and in group D than in group C （P＜0.01）.ChAT expression tended to increase in group C compared with group B but there was no statistically significant difference （P＞0.05） and was significantly higher in group D than in group B （P＜0.01） or C （P＜0.05）.α7 nAchR expression was significantly higher in groups C and D than in group B （both P＜0.01）.There was a positive correlation between ChAT and α7 nAchR expressions in every group （r=0.444， P=0.007）.Conclusions Electroacupuncture at both points Xiaohai and Xiajuxu can reduce the duodenal ulcer score and serum TNF-α expression and increase serum ChAT and duodenal α7 nAchR expressions in DU rats.The results show that the therapeutic effect of electroacupuncture on duodenal ulcer may be produced by regulating TNF-α.Its mechanism may be activating cholinergic anti-inflammatory pathway to produce an anti-inflammatory effect.The effect being better in group D than in group C suggests that Xiajuxu has the relative specificity.

Electroacupuncture； Cholinergic anti-inflammatory pathway； Point， Xiaohai； Point， Xiajuxu； Duodenal ulcer； Serum tumour necrosis factor-α； Serum choline acetyltransferase； Duodenal nicotinic acetylcholine receptor α 7； Rats

2016-01-18

R2-03

A

10.13460/j.issn.1005-0957.2016.07.0876

1005-0957（2016）07-0876-05

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81173327/H2718）

鄧石峰（1987- ），男，2011級(jí)碩士生

張泓（1963- ），男，教授，博士生導(dǎo)師，Email:zh5381271@sina.com