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    郁金散對(duì)大腸濕熱證大鼠血流變和血常規(guī)的影響

    2016-08-13 09:22:27王福男甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院甘肅蘭州730070
    甘肅畜牧獸醫(yī) 2016年13期
    關(guān)鍵詞:郁金全血造模

    王福男(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,甘肅 蘭州 730070)

    郁金散對(duì)大腸濕熱證大鼠血流變和血常規(guī)的影響

    王福男
    (甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,甘肅 蘭州 730070)

    目的:探討不同劑量的郁金散對(duì)大腸濕熱證大鼠血流變和血常規(guī)的影響,為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。方法:將60只Wistar大鼠隨機(jī)分為6組:正常對(duì)照組(A組)、模型組(B組)、自愈組(C組)、高劑量治療組(D組)、中劑量治療組(E組)、低劑量治療組(F組),每組10只,實(shí)驗(yàn)采用“高糖高脂飲食+高溫高濕環(huán)境+生物因子”綜合因素造模,造模后給予不同劑量的郁金散進(jìn)行治療,觀察治療前后大鼠的一般行為學(xué)并測(cè)定血液流變學(xué)和血常規(guī)的相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果:(1)造模后大鼠表現(xiàn)大便溏或有粘液,被毛泛黃,體溫升高,食欲減退等,符合大腸濕熱證所表現(xiàn)的癥狀;(2)與A組比較,B組的全血高、低切黏度極顯著高于A組(P<0.01);與B組相比,C、E、F組的的全血高、低切黏度顯著低于B組(P<0.05),D組的全血高、低切黏度極顯著低于B組(P<0.01);(3)與A組比較,B組的紅細(xì)胞數(shù)目、白細(xì)胞數(shù)目、中性粒細(xì)胞數(shù)目、紅細(xì)胞壓積以及血紅蛋白濃度和A組的差異極顯著(P<0.01);與B組比較,C、E、F組的這些指標(biāo)均顯著低于B組(P<0.05),但D組的這些指標(biāo)極顯著低于B組(P<0.01)。結(jié)論:各劑量的郁金散對(duì)大鼠大腸濕熱證均有治療效果,其中高劑量效果最好。

    郁金散;大腸濕熱證;血流變;血常規(guī)

    郁金散出自《元亨療馬集》,是治療馬的濕熱泄瀉的著名方劑,其主要功能為清熱解毒,澀腸止瀉。方中郁金清熱涼血,行氣散瘀,為主藥;黃連、黃芩、黃柏、梔子清三焦郁火兼化濕熱,為輔藥;白芍、訶子斂陰澀腸而止瀉,更以大黃清血熱、下積滯,共為佐藥[1]?,F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn),郁金散方劑中的郁金能降低紅細(xì)胞的聚集性,提高紅細(xì)胞的變形能力以及減少自由基對(duì)紅細(xì)胞膜的損傷,延長其壽命,維持正常的血液黏度[2]。本文就郁金散對(duì)大腸濕熱證大鼠的作用進(jìn)行研究,為臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

    中醫(yī)濕熱證以脾胃濕熱證為主,因?yàn)槠⑽肝挥谥薪?,脾為濕臟,胃為燥腑,容易滋生濕熱之邪。薛生白云:“中氣實(shí)則病在陽明,中氣虛則病在太陰,太陰內(nèi)傷,濕飲停聚,客邪再至,內(nèi)外相引,故病濕熱,此皆先有內(nèi)傷,再感客邪[3]”。脾胃濕熱下注大腸則成為大腸濕熱證?!秲?nèi)經(jīng)》云:“暴注下迫,皆屬于熱”。濕熱蘊(yùn)結(jié),困擾脾土,脾失健運(yùn),運(yùn)化失常,則清濁不分,水谷混雜而下,并走大腸則成大腸濕熱證泄瀉。大腸濕熱證的病機(jī)有外感暑濕邪氣,或因飲食不節(jié)[4]。大腸濕熱證以發(fā)熱、大便溏而不爽或有粘液等為必備主要臨床癥狀。

    王新華[5]在模擬長夏氣候因素,飲食不節(jié)、過食肥甘基礎(chǔ)上再施以大腸桿菌內(nèi)毒素,復(fù)制成溫病濕熱模型。本次試驗(yàn)以“高糖高脂飲食加高溫高濕環(huán)境加大腸桿菌刺激”建立大腸濕熱證大鼠模型,用高糖高脂飲食使得大鼠飲食不節(jié),過食肥甘,損傷脾胃,脾傷則運(yùn)化水濕功能失常和脾失健運(yùn);再人工創(chuàng)造濕熱環(huán)境,模擬外感濕熱病邪而形成濕熱證[6]。造模完成后給予郁金散水煎劑進(jìn)行干預(yù),通過檢測(cè)大鼠血常規(guī)以及血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)來為探討郁金散對(duì)大腸濕熱證的作用機(jī)理作鋪墊。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    Wistar大鼠60只,雌雄各半,體重180~220 g,由蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,許可證號(hào)SCXK(甘)2013-0002。適應(yīng)環(huán)境3 d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)室溫度為22~25 ℃,相對(duì)濕度45 %~65 %,晝夜12/12 h明暗交替。

    1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

    郁金散水煎劑:郁金36 g,訶子18 g,黃芩36 g,大黃72 g,黃連36 g,梔子36 g,白芍18 g(比例按照文獻(xiàn)[1])。中藥經(jīng)三次水煎煮后合并三次濾液,低溫濃縮至1.04 g/mL,即濃縮成277 mL,郁金散高、中、低灌胃分別以200 %、100 %、50 %郁金散藥液。高劑量組給藥1.04 g/100 g,中劑量組給藥0.52 g/100 g,低劑量組給藥0.26 g/100 g。

    1.3 大腸桿菌

    大腸桿菌菌號(hào)為O101。

    1.4 試劑

    水合氯醛(上海展云化工有限公司,批號(hào)1402207)、氯化鈉(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,批號(hào)20150410)、牛肉膏(北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司,批號(hào)20131018)、營養(yǎng)瓊脂(青島高科園海博生物技術(shù)有限公司,批號(hào)20140807)、蛋白胨(北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司,批號(hào)20140318)

    1.5 儀器

    TDZ4-WS低速離心機(jī)(湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-6000(上海亞榮生化儀器廠);LBY-N6A型RHEOMETER全自動(dòng)血液流變儀(北京普利生公司);

    全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀BC-5300Vet(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)。

    1.6 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及處理

    將60只Wistar大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(A組)、大腸濕熱證模型組(B組)、自愈組(C組)、郁金散高劑量治療組(D組)、郁金散中劑量治療組(E組)和低劑量治療組(F組)6組,每組10只。造模需18 d,實(shí)驗(yàn)共用23 d。造模過程如下:(1)A組自然環(huán)境下飼養(yǎng)。(2)B組:高糖高脂飼養(yǎng)10 d(隔天禁食,隔天給予充足飼料并灌胃豬油4 mL/200 g,30 %蜂蜜水自由飲水)。然后將大鼠置于高溫高濕環(huán)境中(溫度32~35 ℃,相對(duì)濕度85~95 %),持續(xù)9 h,灌酒1 mL/100 g(56度紅星二鍋頭),連續(xù)5 d。最后腹腔注射大腸桿菌(0.2 mL/100 g),24 h后再注射一次,自然環(huán)境下飼養(yǎng)1 d后處死,腹腔注射10%水合氯醛麻醉大鼠,腹主動(dòng)脈采血,分別用EDTA-K2采血管和肝素鈉抗凝管采集血液。(3)高中低劑量的郁金散治療組造模結(jié)束后灌胃相應(yīng)劑量的郁金散,自愈組灌胃相應(yīng)體積的生理鹽水,5 d后處死,處死及采血方法同模型組。

    1.7 觀測(cè)指標(biāo)及方法

    1.7.1 一般行為學(xué)觀察

    觀察大鼠的一般行為學(xué),包括肛溫,精神活動(dòng),飲水量,采食量,尿量以及糞便等。

    1.7.2 血黏度檢測(cè)

    取腹主動(dòng)脈血2 mL,肝素抗凝,用全自動(dòng)血液流變儀進(jìn)行血液流變學(xué)測(cè)定,主要包括全血低切黏度和高切黏度。

    1.7.3 血常規(guī)檢查

    用全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀進(jìn)行血常規(guī)檢測(cè),主要包括紅細(xì)胞數(shù)目、白細(xì)胞數(shù)目、中性粒細(xì)胞數(shù)目、紅細(xì)胞壓積、血紅蛋白濃度。

    1.8 統(tǒng)計(jì)分析

    2 結(jié)果與分析

    2.1 大鼠行為學(xué)觀察

    A組:大鼠活躍,毛發(fā)有光澤,食欲良好,飲水量,尿量以及肛溫正常。

    B組:高糖高脂時(shí)期大鼠活躍,體重增長較快,飲食飲水量正常,糞便成形,較A組稍軟,高溫高濕時(shí)期大鼠精神不振,食欲減退,被毛泛黃,攻毒期間大鼠眼睛半閉并有分泌物,身體蜷縮,肛周紅腫肛門松弛,肛門周圍及尾部粘有黃色粘液稀便,大便味臭,肛溫較A組升高。

    C組:造模前癥狀同B組,造模后肛溫繼續(xù)上升,高于A組,體重開始下降后逐漸上升。尿量,飲水量減少,采食量開始減少后逐漸增加,仍有大鼠拉稀。

    D、E、F組:用藥前癥狀同B組,用藥后大鼠體重有所增加,但未達(dá)到高糖高脂時(shí)期體重,采食量,飲水量和尿量增加。D組大鼠肛溫開始下降接近A組,糞便較A組稍軟,大鼠精神有所好轉(zhuǎn)。E組大鼠肛溫先繼續(xù)上升,用藥兩天后開始下降接近A組,F(xiàn)組大鼠肛溫開始上升,但用藥兩天后開始下降,但高于A組。仍有大鼠拉稀軟糞便。

    2.2 血液流變學(xué)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果

    由表1可見,與A組相比,B組的全血低切和高切黏度都極顯著高于A組(P<0.01),表明大腸濕熱證模型組的血液粘稠度高于正常對(duì)照組,說明模型復(fù)制成功。與B組相比,D組的全血低切和高切黏度極顯著低于B組(P<0.01),C、E、F組的全血高、低切黏度顯著低于B組(P<0.05),表明該模型有一定的自愈能力,且高劑量的郁金散治療效果最好。

    表1 造模后各組大鼠血黏度的比較(±s,n=10)

    表1 造模后各組大鼠血黏度的比較(±s,n=10)

    注:與A組相比,bP <0.01;與B組相比,cP<0.05,aP<0.01

    項(xiàng)目(m P a · s) A組 B組 C組 D組 E組 F組全血低切黏度 1 0 . 7 2 ± 0 . 7 2a 1 5 . 3 4 ± 0 . 3 5b 1 3 . 4 7 ± 0 . 3 5c 1 0 . 9 2 ± 0 . 2 5a 1 2 . 2 1 ± 0 . 3 5c 1 3 . 4 7 ± 0 . 2 6c全血高切黏度  3 . 5 9 ± 0 . 2 0a 4 . 6 5 ± 0 . 1 8b 4 . 1 6 ± 0 . 2 6c 3 . 3 5 ± 0 . 0 3a 4 . 0 7 ± 0 . 2 6c 4 . 1 0 ± 0 . 3 1c

    2.3 血常規(guī)測(cè)定結(jié)果

    由表2可知,與A組相比,B組的紅細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞壓積、中性粒細(xì)胞數(shù)和血紅蛋白濃度極顯著高于A組(P<0.01),與B組相比,C、E、F組的紅細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞壓積、中性粒細(xì)胞數(shù)和血紅蛋白濃度顯著低于B組(P<0.05),D組的紅細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞壓積、中性粒細(xì)胞數(shù)和血紅蛋白濃度極顯著低于B組。結(jié)果表明了該模型具有一定的自愈能力,三種不同劑量的郁金散對(duì)該模型均有治療效果,其中經(jīng)高劑量治療后大鼠的恢復(fù)程度較好。

    表2 造模后各組大鼠血常規(guī)的比較(±s,n=10)

    表2 造模后各組大鼠血常規(guī)的比較(±s,n=10)

    注:與A組相比,bP<0.01;與B組相比,cP<0.05,aP<0.01

    項(xiàng)目 A組 B組 C組 D組 E組 F組紅細(xì)胞數(shù)/ × 1 012· L-1 6 . 6 2 ± 0 . 2 8a 1 3 . 9 2 ± 0 . 3 9b 1 1 . 4 8 ± 0 . 3 5c 6 . 6 7 ± 0 . 6 3a 8 . 4 4 ± 0 . 3 4d 9 . 4 9 ± 0 . 3 5e白細(xì)胞數(shù)/ × 1 09· L-1 1 3 . 9 9 ± 0 . 5 5a 3 7 . 2 1 ± 3 . 7 7b 2 4 . 1 6 ± 2 . 1 5c 1 4 . 7 4 ± 0 . 8 8a 1 7 . 8 5 ± 1 . 1 4d 2 2 . 1 4 ± 2 . 2 6c紅細(xì)胞壓積/%  3 8 . 5 5 ± 4 . 4 2a 7 1 . 3 1 ± 5 . 0 1b 5 5 . 1 4 ± 2 . 6 1c 4 0 . 5 1 ± 2 . 1 3a 4 4 . 0 0 ± 3 . 2 9d 5 1 . 0 6 ± 2 . 9 6e中性粒細(xì)胞數(shù)/ × 1 09· L-1 5 . 0 8 ± 0 . 4 4a 1 7 . 3 0 ± 1 . 9 1b 1 1 . 0 1 ± 0 . 5 6c 6 . 1 2 ± 0 . 4 6a 8 . 2 8 ± 0 . 4 9d 1 0 . 2 6 ± 1 . 4 7c血紅蛋白濃度/ g · L-1 1 3 8 . 6 3 ± 1 2 . 6 5a 2 5 9 . 8 8 ± 1 6 . 4 7b 1 7 8 . 7 5 ± 3 1 . 5 4c 1 4 9 . 1 3 ± 4 . 0 5a 1 6 4 . 5 0 ± 1 1 . 1 0cd 1 7 2 . 0 0 ± 1 4 . 9 7c

    3 討論

    3.1 大鼠大腸濕熱證模型的建立

    本實(shí)驗(yàn)采用“高糖高脂飲食+高溫高濕環(huán)境+生物因子”綜合因素造模,造模后大鼠都有不同程度的拉稀,精神沉郁,食欲減退,嗜臥,被毛泛黃粗亂,肛周紅腫,肛門周圍粘有稀便,味臭。大腸濕熱證以發(fā)熱,大便溏而不爽或有粘液,糞便色黃而臭等為必備主要臨床癥狀。因此一般癥狀符合大腸濕熱證的癥狀,造模基本成功。對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠給予高糖高脂飲食,一方面可以使大鼠在短期內(nèi)增加體質(zhì)量,另一方面長期給予高糖高脂飲食,可造成大鼠脾胃功能損傷,為脾胃濕熱提供了前提條件[7]。外部濕熱可以造成脾胃功能失調(diào),張六通等[8]模擬自然發(fā)病環(huán)境,通過控制氣候箱的溫濕度來研究外濕致病機(jī)理,結(jié)果濕熱組出現(xiàn)納呆少飲,消瘦,大便不成形或稀便等癥狀。所以模擬濕熱環(huán)境是大腸濕熱證動(dòng)物模型的一個(gè)關(guān)鍵因素。

    3.2 郁金散對(duì)大腸濕熱證大鼠血流變的影響

    郁金散方劑中郁金具有調(diào)節(jié)免疫功能,抑制中樞神經(jīng),改善血液流變性,抗自由基損傷等作用[9]。黃連、黃柏和黃芩這三味藥都可以廣泛用于多種濕熱病,其中黃連主要作用在腸胃,尤其是大腸濕熱的濕性痢疾,所以黃連為中獸醫(yī)治療濕性痢疾的首選藥。梔子用于火毒熾盛,三焦俱熱配伍三黃。段文卓等[10]通過紅細(xì)胞的聚集性實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)郁金可以提高紅細(xì)胞的變形能力及抗氧化、免疫粘附能力減少了自由基對(duì)紅細(xì)胞模的損傷,延長其壽命,維持正常的血液黏度。

    本次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)模型組的全血高低切粘度均高于正常對(duì)照組,血液黏滯性增加明顯,提示其紅細(xì)胞變形能力下降,紅細(xì)胞聚集性增加及血液粘稠度增大,這符合中醫(yī)“血淤”征候所體現(xiàn)的血液“濃、黏、聚”的特點(diǎn)。中醫(yī)理論認(rèn)為濕為陰邪,易阻礙氣機(jī),氣機(jī)不利血運(yùn)不暢極易致瘀;熱為陽邪,其性炎上,煎熬津液,阻塞經(jīng)脈也易致血瘀。大量研究表明濕熱證與血流變有密切的聯(lián)系[11]。經(jīng)治療后,各劑量的郁金散均有一定的治療效果,其中高劑量組的全血高低切粘度和正常對(duì)照組無顯著性差異。說明高劑量的郁金散對(duì)大腸濕熱證血液流變學(xué)指標(biāo)有明顯的調(diào)節(jié)作用。

    3.3 郁金散對(duì)大腸濕熱證大鼠血常規(guī)的影響

    實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明模型組大鼠的白細(xì)胞數(shù)和中性粒細(xì)胞數(shù)相比正常對(duì)照組數(shù)量極劇增多,劉光華等發(fā)現(xiàn)濕證動(dòng)物模型可表現(xiàn)為免疫功能的下降,炎癥與濕熱證本質(zhì)有關(guān)[12]。此外,模型組大鼠的紅細(xì)胞壓積和血紅蛋白濃度也明顯高于正常對(duì)照組,提示了造模后大鼠的紅細(xì)胞聚集性增加,郁金散方劑中郁金的作用機(jī)制是將紅細(xì)胞壓積明顯降低,發(fā)揮出解聚紅細(xì)胞聚集的作用[13]。與模型組相比,經(jīng)郁金散治療后,不同劑量組大鼠的血常規(guī)指標(biāo)均有所恢復(fù),其中高劑量治療組的血常規(guī)這些指標(biāo)與正常對(duì)照組組差異不顯著,因此說明高劑量的郁金散對(duì)大腸濕熱證血常規(guī)指標(biāo)有明顯的調(diào)節(jié)作用。

    4 結(jié)語

    本實(shí)驗(yàn)通過“高糖高脂飲食+高溫高濕環(huán)境+生物因子”綜合因素復(fù)制大腸濕熱證模型,造模后并給予不同劑量郁金散進(jìn)行治療。通過郁金散對(duì)血流變學(xué)和血常規(guī)指標(biāo)的改善說明了郁金散對(duì)大腸濕熱證可能具有一定的治療作用,其中高劑量的郁金散的治療效果較好。另外,該模型具有一定的恢復(fù)能力,但是恢復(fù)能力不如郁金散治療組。

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    (編輯:晏兵兵)

    S858

    A

    1006-799X(2016)13-0090-04

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