不同工藝炮制山茱萸多糖含量比較

鮑 潔， 呂雨晴， 許海丹

(臺州學院醫(yī)藥化工學院，浙江臺州 318000)

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不同工藝炮制山茱萸多糖含量比較

鮑 潔， 呂雨晴， 許海丹*

(臺州學院醫(yī)藥化工學院，浙江臺州 318000)

[目的]對山茱萸不同炮制品(醋制、酒制、鹽制、蜜制、蒸制)中多糖含量進行提取分析。[方法]采用恒溫水浴法對山茱萸不同炮制品的多糖進行提取，測定多糖含量，考察炮制溫度、炮制時間、炮制輔料用量對山茱萸不同炮制工藝(醋制、酒制、鹽制、蜜制、蒸制)的影響。[結(jié)果]得出山茱萸在不同炮制條件下多糖溶出的變化規(guī)律，酒制和蒸制可使山茱萸中多糖含量明顯增加。[結(jié)論]研究可為合理制定炮制方法提供依據(jù)。

山茱萸；炮制；多糖；含量；工藝

山茱萸(CorniFructus)為山茱萸科植物山茱萸(Cornus officinalisSieb.etZucc.)的干燥成熟果肉，又名山萸肉、藥棗、肉棗等，主產(chǎn)于浙江、河南、安徽等地，具有補益肝腎、收澀固脫的功效[1]，是我國40多種用量最大的骨干中藥之一。山茱萸臨床調(diào)劑多以“蒸法”炮制后使用，主要方法有：酒蒸、清蒸、醋蒸、鹽蒸、蜜蒸等，其中尤以酒制山茱萸為常用[2-3]?！吨袊幍洹肥蛰d的方法為“去核”“酒燉”“酒蒸”，蒸制時間及輔料用量均沒有明確規(guī)定，僅要求“燉或蒸至酒吸盡，表面紫黑色或黑色，質(zhì)滋潤柔軟”，并且沒有飲片質(zhì)量標準的具體要求，為臨床應(yīng)用帶來很多不便[1-3]。

山茱萸的有效成分大部分是水溶性的，如：有機酸、多糖、環(huán)烯醚萜苷、維生素等；其中多糖是山茱萸的重要生物活性組分，常被視為中藥中重要的補益成分之一[4-5]。山茱萸多糖的藥理活性豐富，具有顯著的增強免疫、抗腫瘤和抗氧化作用[6-8]。該文主要對山茱萸不同炮制品(酒制、蒸制、醋制、鹽制、蜜制)中多糖含量進行提取分析，為合理制定炮制方法提供依據(jù)，以期完善山茱萸飲片或者中藥材質(zhì)量控制體系。

1　材料與方法

1.1試驗材料山茱萸：山茱萸科植物山茱萸(Cornus officinalisSieb.etZucc.)的干燥成熟果實，購自浙江省臨海市醫(yī)藥有限公司；黃酒：中國紹興花雕酒(紹興縣越景酒業(yè)有限公司)，酒精度12.0±1.0%(V/V)；米醋：雙魚米醋(杭州市食品釀造有限公司)，總酸(以乙酸計)≥3.50g/100mL；蜂蜜：蜂之語洋槐蜜(浙江蜂之語蜂蜜蜂業(yè)集團有限公司)，以5g蜂蜜加1g水的比例混勻制成稠的蜂蜜水；食鹽：食用精制鹽(湖北藍天鹽化有限公司)，將25g鹽溶解在100g水中制成鹽水備用。實驗用水為蒸餾水，其余試劑均為分析純。

1.2試驗儀器UV-2450型紫外分光光度計(日本島津公司)；DF-101S型集熱式恒溫加熱磁力攪拌器(鞏義市予華儀器有限責任公司)；DZF-6021型真空干燥箱(寧波江南儀器廠)；ZXZ-2型旋片式真空泵(中國臨海市譚氏真空設(shè)備有限公司)；TG16-WS型臺式高速離心機(長沙湘儀離心機儀器有限公司)；DKS-24型不銹鋼新型電熱恒溫水浴鍋(寧波江南儀器廠)；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)等。

1.3試驗方法

1.3.1山茱萸炮制品的制備。

1.3.1.1不同炮制溫度的樣品。取山茱萸生品30g/份，直接放于保鮮盒中密閉或加米醋(黃酒、蜂蜜或鹽水)拌勻后密閉放置2h，然后將保鮮盒分別于80、85、90、95、100 ℃的水浴中蒸4h，取出置于80 ℃真空干燥箱中干燥5h，晾涼后備用(輔料與山茱萸生品按20g/100g加入)。

1.3.1.2不同炮制時間的樣品。取山茱萸生品30g/份，直接放于保鮮盒中密閉或加米醋(黃酒、蜂蜜或鹽水)拌勻后密閉放置2h，然后將保鮮盒置于沸水浴中，分別蒸2、4、6、8、10h，取出置于80 ℃真空干燥箱中干燥5h，晾涼后備用(輔料與山茱萸生品按20g/100g加入)。

1.3.1.3不同炮制輔料用量的樣品。取山茱萸生品30g/份，直接放于保鮮盒中，分別加輔料量(米醋、黃酒、蜂蜜或鹽水)3、6、12、18、24g拌勻后密閉放置2h，然后將保鮮盒置于沸水浴中蒸4h，取出置于80 ℃真空干燥箱中干燥5h，晾涼后備用。

1.3.2山茱萸多糖的提取。取山茱萸炮制品粗粉置于具塞錐形瓶中，按料液比1∶15(g:mL)加入80%乙醇超聲提取30min，3 000r/min下離心15min，殘渣揮干乙醇后以相同料液比加水，80 ℃下回流提取2h，趁熱過濾，濾液濃縮至干后，以少量水溶解，再加適量無水乙醇使乙醇濃度為80%，置于冰箱冷藏24h，用少量乙醇與乙醚洗滌沉淀數(shù)次，沉淀于60 ℃干燥至恒重，即得水提粗多糖[9]。

1.3.3多糖含量測定方法。根據(jù)文獻方法[10]，對系列葡萄糖標準溶液進行顯色，試驗得葡萄糖濃度(C)與吸光度(A)之間的回歸方程為A=0.024 6+0.007 17C(n=6)，R=0.999 09，在20～120mg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

精密稱取水提粗多糖0.01g，加水溶解并定容至100mL，即得水提多糖供試品溶液。取水提多糖供試品溶液1mL，同法顯色分析，利用標準曲線回歸方程計算出多糖濃度，求得多糖含量。

2　結(jié)果與分析

2.1炮制時間對山茱萸多糖含量的影響炮制時間對山茱萸多糖含量的影響結(jié)果見圖1。試驗結(jié)果表明，不同炮制法的山茱萸隨炮制時間的變化略有不同?；旧戏兴谥?h后的山茱萸多糖含量明顯多于其他時間處理，且沸水6h的多糖含量最低，各炮制品中山茱萸多糖含量隨炮制時間的增加呈現(xiàn)先上升后下降再增加的趨勢?？煽闯鲈谕慌谥茣r間下，鹽制、蜜制之后山茱萸多糖含量處于較低水平；而蒸制品多糖含量則較高于其他輔料炮制結(jié)果，初步可認為鹽制、蜜制不利于山茱萸中多糖的浸取，不加輔料炮制反而可以增加山茱萸多糖的含量。和生品山茱萸(多糖含量1.53%)相比，山茱萸在炮制后多糖含量都有不同程度的增加，酒制、蒸制山茱萸多糖含量較高。

圖1　炮制時間對山茱萸多糖含量的影響Fig. 1　Effects of processing time on the polysaccharides content of Corni Fructus

2.2炮制輔料用量對山茱萸多糖含量的影響炮制輔料用量對山茱萸多糖含量的影響結(jié)果見圖2。結(jié)果表明，除鹽制外，隨著輔料用量的增加，山茱萸多糖含量呈現(xiàn)出先增后減的趨勢。當輔料用量為40g/100g時，醋制、酒制、蜜制山茱萸多糖含量達到最大值，且酒制山茱萸多糖含量整體水平高于其他輔料。但不同輔料還是各有不同。鹽制山茱萸多糖含量隨著炮制輔料用量的增加，呈現(xiàn)遞減趨勢。即當輔料用量為10g/100g時，含量最大。和生品山茱萸(多糖含量1.53%)相比，各炮制品多糖含量都有明顯的增加。可初步證明加輔料炮制對提高山茱萸多糖含量有明顯的作用，而酒制山茱萸可能是加輔料炮制山茱萸中最能提高多糖含量的物質(zhì)。炮制使山茱萸多糖含量升高的原因還有待進一步研究。

圖2　炮制輔料用量對山茱萸多糖含量的影響Fig. 2　Effects of processing auxiliary dosage on the polysaccharides content of Corni Fructus

2.3炮制溫度對山茱萸多糖含量的影響炮制溫度對山茱萸多糖含量的影響結(jié)果見圖3。結(jié)果表明，隨著炮制溫度的增加，多糖含量呈現(xiàn)先增加后降低再升高的趨勢；且可以發(fā)現(xiàn)炮制溫度為80 ℃時，山茱萸多糖含量超過其他炮制溫度。醋制品、鹽制品、蒸制品的最低含量都出現(xiàn)在100 ℃時，而酒制品、蜜制品的最低含量則出現(xiàn)在85 ℃。同一溫度炮制時，蒸制山茱萸的多糖較高，而其他輔料炮制品相差并不十分明顯。相較于生品山茱萸(多糖含量1.53%)，各炮制品多糖含量均明顯增加，證明適當?shù)臏囟扰谥坪蟮纳杰镙强商岣叨嗵呛俊?/p>

圖3　炮制溫度對山茱萸多糖含量的影響Fig. 3　 Effects of processing temperature on the polysaccharide content of Corni Fructus

3　結(jié)論

研究結(jié)果表明，炮制溫度、炮制時間以及炮制輔料用量對山茱萸的多糖含量有一定的影響，且對用不同輔料炮制的山茱萸制品的多糖含量變化規(guī)律的影響也不同。

從炮制對山茱萸多糖含量的影響結(jié)果來看，可基本得出以下結(jié)論：炮制時間為4h，炮制溫度為80 ℃，炮制輔料用量為40g/100g時，山茱萸多糖含量高于其他條件下的。酒制、蒸制山茱萸可使山茱萸中多糖含量明顯增加，鹽制、蜜制

則不利于多糖的浸出。試驗結(jié)果可指導改進山茱萸炮制方法，為山茱萸的炮制現(xiàn)代化奠定基礎(chǔ)。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015：27.

[2] 呼海濤,張振凌.山茱萸炮制歷史沿革及臨床應(yīng)用研究[J].河南中醫(yī)學院學報,2007,22(1):53-54.

[3] 曹崗,邵玉藍,張云,等.山茱萸炮制歷史沿革及現(xiàn)代研究[J].中草藥,2009,40(S1):69-71.

[4] 袁菊麗,姜紅波.山茱萸的主要化學成分及藥理作用[J].化學與生物工程,2011,28(5):7-9.

[5] 段國峰,陳文,李寶軍,等.不同的炮制方法對山茱萸多糖的含量影響[J].海峽藥學,2008,20(9):67-68.

[6] 鄒品文,趙春景,李攀,等.山茱萸多糖的抗腫瘤作用及其免疫機制[J].中國醫(yī)院藥學雜志,2012,32(1):20-22.

[7] 李永格,陳亞奇,王愛梅.山茱萸多糖對血管性癡呆大鼠抗氧化作用的研究[J].中藥藥理與臨床,2015,31(3):74-76.

[8] 楊雪,季紅,劉穎男,等.山茱萸多糖提取純化方法及藥理作用研究進展[J].中國老年學雜志,2015,35(7):1984-1986.

[9] 丁霞,蔡寶昌.山茱萸炮制前后有效成分含量比較[J].中成藥,2006,28(11):1598-1599.

[10] 王麗麗,許海丹,裘秋燕.山茱萸多糖含量測定方法的研究[J].科學技術(shù)與工程,2010,10(30):7494-7496.

ComparisonofPolysaccharidesContentinCorniFructusbyDifferentProcessingTechnologies

BAOJie,LUYu-qing,XUHai-dan*

(SchoolofPharmaceuticalandChemicalEngineering,TaizhouUniversity,Taizhou,Zhejiang318000)

[Objective]ToextractandanalyzethepolysaccharidescontentindifferentprocessedproductsofCorniFructus(vinegarprocess,wineprocess,saltprocess,honeyprocessandsteamingprocess). [Method]ConstanttemperaturewaterbathmethodswereadoptedtoextractthepolysaccharidesfromdifferentprocessedproductsofCorniFructus.Effectsofprocessingtime,processingtemperatureandauxiliarydosageontheprocessingtechnologiesofCorniFructuswereinvestigated. [Result]UnderdifferentprocessingconditionsofCorniFructus,wineprocessandsteamingprocesssignificantlyenhancedthepolysaccharidescontent.[Conclusion]Theresearchprovidesreferencesfortherationalestablishmentofprocessingmethod.

CorniFructus;Processing;Polysaccharides;Content;Technology

浙江省植物進化生態(tài)學與保護重點實驗室開放課題(EEC2014-08)；浙江省大學生科技創(chuàng)新項目(2016R430022)。

鮑潔(1995- )，女，浙江嘉興人，本科生，專業(yè)：制藥工程。*通訊作者，講師，從事天然產(chǎn)物的分離與分析研究。

2016-05-13

S567.23+9

A

0517-6611(2016)17-105-02