野生蟬花多糖抗腫瘤活性及其作用機(jī)制

謝 飛，李 偉，陳美珍*，余 杰（汕頭大學(xué)理學(xué)院，廣東 汕頭 515063）

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野生蟬花多糖抗腫瘤活性及其作用機(jī)制

謝 飛，李 偉，陳美珍*，余 杰
（汕頭大學(xué)理學(xué)院，廣東 汕頭 515063）

摘 要：目的：研究野生蟬花多糖（wild Cordyceps sobolifera polysaccharide，CSP）體內(nèi)外抗腫瘤活性。方法：以3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴鹽（3-（4，5-dimethyl-2-thiazolyl）-2，5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，MTT）法考察不同劑量蟬花多糖體外對(duì)HeLa細(xì)胞的抑制作用，并以移植性S180實(shí)體荷瘤小鼠為模型檢測(cè)體內(nèi)抗腫瘤活性，通過機(jī)體免疫系統(tǒng)各項(xiàng)生化指標(biāo)的測(cè)定，初步探討其抗腫瘤作用機(jī)制。結(jié)果：當(dāng)蟬花多糖質(zhì)量濃度為400～800 μg/mL時(shí)，對(duì)體外培養(yǎng)的HeLa細(xì)胞具有抑制作用，并呈量效關(guān)系，當(dāng)作用質(zhì)量濃度為800 μg/mL時(shí)，抑制率達(dá)到61%。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，蟬花多糖高劑量組（200 mg/（kg·d））、低劑量組（100 mg/（kg·d））均有一定抗腫瘤活性。當(dāng)多糖給藥劑量為200 mg/（kg·d）（以體質(zhì)量計(jì)）時(shí)，對(duì)S180荷瘤小鼠抑瘤率達(dá)到42.9%；同時(shí)，荷瘤小鼠免疫器官指數(shù)顯著增大（P＜0.01），并激活淋巴細(xì)胞的增殖分化，對(duì)抗氧化應(yīng)激系統(tǒng)具有較好的保護(hù)作用。結(jié)論：野生蟬花多糖在體內(nèi)、外均有明顯的抗腫瘤活性，其原因可能與增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)能力及抗氧化活性有關(guān)。

關(guān)鍵詞：野生蟬花多糖；抗腫瘤活性；免疫調(diào)節(jié)；抗氧化

引文格式：

謝飛， 李偉， 陳美珍， 等.野生蟬花多糖抗腫瘤活性及其作用機(jī)制［J］.食品科學(xué)， 2016， 37（13）: 209-213.DOI:10.7506/ spkx1002-6630-201613038. http://www.spkx.net.cn

XIE Fei， LI Wei， CHEN Meizhen， et al.Antitumor activity and mechanism of action of wild Cordyceps sobolifera polysaccharide［J］.Food Science， 2016， 37（13）: 209-213.（in Chinese with English abstract） DOI:10.7506/spkx1002-6630-201613038. http://www.spkx.net.cn

蟬花（Cordycep scicadae）俗稱大蟲草，半翅目、蟬科蛁蟟的蛹被麥角菌科蟲草屬真菌寄生而形成的結(jié)合體［1］，蟲草屬，是一種具有很高藥食兩用價(jià)值的真菌，亦是我國傳統(tǒng)的中藥材。據(jù)報(bào)道［2-4］，蟬花具有免疫調(diào)節(jié)、滋補(bǔ)強(qiáng)壯、抗腫瘤、抗衰老、抗氧化應(yīng)激、降血糖及抗貧血等作用。溫魯?shù)龋?］測(cè)定了3 種蟲草樣品中蟲草酸、腺苷、蟲草多糖及蟲草素等活性成分的含量，結(jié)果顯示蟬花中蟲草酸和腺苷含量均高于冬蟲夏草，多糖和蟲草酸含量高于蛹蟲草，屬于優(yōu)質(zhì)蟲草，且具有2 種蟲草相近的醫(yī)療保健功效［5-6］。蘆柏震等［7］研究蟬花粗提物對(duì)PAA細(xì)胞株的作用發(fā)現(xiàn)，蟬花粗提物能選擇性殺傷G2（DNA合成后期）/M（細(xì)胞分裂期）期細(xì)胞，并顯著抑制PAA細(xì)胞生長(zhǎng)。金麗琴［8］研究發(fā)現(xiàn)，蟬擬青霉孢子粉能顯著抑制體內(nèi)外宮頸癌的生長(zhǎng)。此外，蟬花總多糖對(duì)細(xì)胞免疫和體液免疫均有促進(jìn)作用，能直接刺激小鼠脾細(xì)胞增殖，明顯促進(jìn)刀豆球蛋白A（concanavalin A，Con A）或脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)小鼠T、B淋巴細(xì)胞的增殖和免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）抗體的生成，增強(qiáng)遲發(fā)型超敏反應(yīng)［9］；亦可通過激活腹腔巨噬細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)正常大鼠的吞噬與轉(zhuǎn)化功能，提高機(jī)體的免疫能力等［10］。

國內(nèi)外有關(guān)野生蟬花的研究主要集中在有效成分的提取及小分子物質(zhì)活性等方面，但對(duì)其抗腫瘤活性的研究鮮見報(bào)道。為此，本研究通過考察蟬花多糖體外對(duì)HeLa細(xì)胞增殖的影響，以及體內(nèi)對(duì)S180荷瘤小鼠抑瘤作用、免疫功能的影響等，探討蟬花多糖的抗腫瘤作用，以期為更好地開發(fā)蟬花蟲草及其相關(guān)保健品、藥品提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、細(xì)胞株與試劑

野生蟬花，取自廣東省河源市，由汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)高分飛博士鑒定。

人宮頸癌HeLa細(xì)胞株、人腎上皮293T細(xì)胞株，由汕頭大學(xué)生物醫(yī)藥與先進(jìn)材料研究中心提供。

高糖培養(yǎng)基（Dulbecco's modified eagle medium，DMEM） 美國Hyclone公司；胎牛血清 杭州四季青科技有限公司；胰酶細(xì)胞消化液、青霉素-鏈霉素溶液碧云天生物技術(shù)公司；3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴鹽（3-（4，5-dimethyl-2-thiazolyl）-2，5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，MTT）、二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO） 美國Amresco公司；陽性藥物5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU） 上海源葉生物科技有限公司；Con A 廣州市齊云生物技術(shù)有限公司；總超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，T-SOD）試劑盒、丙二醛（malondialdehyde，MDA）試劑盒、過氧化氫酶（catalase，CAT）試劑盒 南京建成生物工程研究所；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

S180腹水瘤小鼠（SPF級(jí)），購于廈門大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.3 儀器與設(shè)備

WFZ UV-2100紫外-可見分光光度計(jì) 尤尼柯儀器有限公司；TDL-5M臺(tái)式大容量冷凍離心機(jī) 長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司；JFSD-100型粉碎機(jī) 上海嘉定糧油儀器有限公司；ER-12A0型電子天平 日本Tokyo公司；SY-10數(shù)顯式電熱恒溫水浴鍋 上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠；全波段掃描酶標(biāo)儀 瑞士Tecan公司；倒置顯微鏡光學(xué)顯微鏡 日本Olympus公司；3111二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱 美國Thermo公司；高壓滅菌鍋 深圳市深安企業(yè)有限公司。

1.4 方法

1.4.1 蟬花多糖的微波超聲波協(xié)同提取

野生蟬花干品除泥，60 ℃烘干粉碎，40 目過篩，95%乙醇70 ℃條件下回流2 次，每次2 h，3 000 r/min離心20 min，棄上清液，沉淀60 ℃真空條件下干燥，得蟬花粉末。取5 g蟬花粉末于55 倍體積蒸餾水中，依次經(jīng)微波5 min、超聲波25 min處理后，4 000 r/min離心10 min取上清液。上清液濃縮后于3 倍體積95%乙醇中醇沉過夜，Sevag法多次除蛋白，依次經(jīng)自來水、蒸餾水透析，冷凍干燥后得野生蟬花多糖樣品（wild Cordyceps sobolifera polysaccharide，CSP）。

1.4.2 CSP對(duì)HeLa及人腎上皮293T細(xì)胞的體外抑制實(shí)驗(yàn)

1.4.2.1 采用MTT法分別測(cè)定CSP對(duì)HeLa［11］及293T細(xì)胞的體外抑制作用

分別取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HeLa和293T細(xì)胞，胰酶消化后以含體積分?jǐn)?shù)10%的胎牛血清DMEM培養(yǎng)液進(jìn)行稀釋，制成濃度為5×104個(gè)/mL的細(xì)胞懸液，加入96 孔培養(yǎng)板中，每孔200 μL置于37 ℃體積分?jǐn)?shù)為5%的CO2孵箱中培養(yǎng)過夜。實(shí)驗(yàn)設(shè)給藥組，給予200 μL不同質(zhì)量濃度（400、500、600、700、800 μg/mL）多糖的蟬花多糖溶液，同時(shí)設(shè)空白組（含體積分?jǐn)?shù)10%的胎牛血清DMEM培養(yǎng)液）、對(duì)照組（細(xì)胞、DMEM完全培養(yǎng)基）和5-FU 陽性藥物組（25 μg/mL 5-FU），給藥后繼續(xù)培養(yǎng)48 h。培養(yǎng)結(jié)束前4 h，每孔加入20 μL 5 mg/mL MTT，37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 h，吸出上清液后加二甲基亞砜200 μL，微量振蕩器振蕩5 min，使深藍(lán)色沉淀物完全溶解，自動(dòng)酶標(biāo)儀于490 nm波長(zhǎng)處進(jìn)行檢測(cè)，分別按下式計(jì)算多糖對(duì)細(xì)胞的抑制率。

式中：A0為對(duì)照組吸光度；A1為給藥組吸光度；A 為空白組吸光度。

1.4.2.2 HeLa細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察

將5×104個(gè)/mL的HeLa及293T細(xì)胞接種于96 孔板中培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁后，小心棄去培養(yǎng)基，用不同質(zhì)量濃度（400、500、600、700、800 μg/mL）的蟬花多糖作用液200 μL分別處理HeLa細(xì)胞48 h，對(duì)照組加入等量DMEM完全培養(yǎng)基，48 h后于倒置顯微鏡下觀察HeLa細(xì)胞的形態(tài)變化，并拍照。

1.4.3 蟬花多糖體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)

1.4.3.1 S180荷瘤小鼠模型的建立［12］

S180瘤株在小鼠體內(nèi)腹水傳代3 次，每次7 d。無菌條件下，抽取最后1 次荷瘤小鼠腹水，用預(yù)冷的無菌生理鹽水調(diào)整細(xì)胞濃度至1.4×107個(gè)/mL，在小鼠左前肢腋下接種0.2 mL瘤細(xì)胞懸液。

1.4.3.2 分組與給藥

小鼠自由攝食飲水適應(yīng)喂養(yǎng)3 d后，按體質(zhì)量隨機(jī)分為5 組，各組體質(zhì)量無顯著差異，每組12 只，即空白組、模型組、5-FU陽性藥物組、蟬花多糖低劑量、高劑量組。

實(shí)驗(yàn)第1天，除空白組外，各組小鼠接種0.2 mL S180瘤細(xì)胞懸液，以建立腫瘤模型。接種24 h后開始給藥，其中陽性藥物組腹腔注射20 mg/（kg·d）（以體質(zhì)量計(jì)，下同） 的5-FU；高、低劑量組分別灌胃200、100 mg/（kg·d）的CSP溶液；空白組和模型組灌胃等量生理鹽水。連續(xù)給藥8 d，每天1 次，飼養(yǎng)過程中，小鼠自由攝食飲水，并對(duì)小鼠的體質(zhì)量、精神狀態(tài)等方面變化進(jìn)行觀察。

1.4.3.3 樣本處理及抑瘤率的計(jì)算

實(shí)驗(yàn)第10天結(jié)束給藥，小鼠稱體質(zhì)量，眼眶取血脫頸處死，3 800 r/min離心10 min，分離血清，無菌條件下解剖剝離出瘤塊、肝、脾、胸腺等器官稱質(zhì)量；血清于－20 ℃冰箱保存；腫瘤組織固定于4%甲醛后，4 ℃冰箱保存。

1.4.4 蟬花多糖對(duì)荷瘤小鼠免疫功能的影響

1.4.4.1 免疫器官指數(shù)的測(cè)定

肝臟、胸腺、脾臟指數(shù)的計(jì)算見下式。

1.4.4.2 荷瘤小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力的測(cè)定

采用MTT法檢測(cè)脾淋巴細(xì)胞增殖能力［13］。無菌條件下取脾組織制成單細(xì)胞懸液，將其溶于2 mL完全培養(yǎng)基并稀釋至2×106個(gè)/mL。細(xì)胞懸液加入96孔培養(yǎng)板中，每孔200 μL，每樣做4 個(gè)復(fù)孔，3孔分別加入5 μL 200 mg/mL 的Con A（終質(zhì)量濃度為5 mg/L），剩余孔作為空白組。置于37 ℃培養(yǎng)箱3 d，于培養(yǎng)結(jié)束前4 h取出，吸取100 μL上清液，每孔加入20 μL 5 mg/mL經(jīng)過濾除菌的MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。培養(yǎng)結(jié)束吸取液體，每孔加入120 μL 37 ℃預(yù)溫的DMSO液振蕩10 min，酶標(biāo)儀作雙波長(zhǎng)檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)570 nm，參考波長(zhǎng)630 nm，按下式計(jì)算脾淋巴細(xì)胞增殖能力。

式中：A處理為Con A孔平均吸光度；A對(duì)照為空白孔平均吸光度。

1.4.4.3 荷瘤小鼠血清中SOD、CAT活力及MDA含量的測(cè)定

血清SOD、CAT酶活力、MDA含量均采用試劑盒測(cè)定，具體操作按其說明書進(jìn)行。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 蟬花多糖的體外抗腫瘤活性

2.1.1 對(duì)HeLa細(xì)胞的抑制作用

MTT法檢測(cè)蟬花多糖對(duì)HeLa細(xì)胞及細(xì)胞293T的作用，結(jié)果見表1，蟬花多糖對(duì)體外HeLa細(xì)胞的增殖有一定的抑制作用，其抑制率最高可達(dá)61.0%，并呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系。同時(shí)蟬花多糖對(duì)正常細(xì)胞293T的增殖有一定的促進(jìn)作用，而陽性藥物5-FU對(duì)HeLa細(xì)胞和293T細(xì)胞均有較強(qiáng)的殺傷作用。由結(jié)果推斷，蟬花多糖對(duì)細(xì)胞的抑制具有選擇性，有望作為一種高效、低毒的抗腫瘤制劑。

表 1 蟬花多糖對(duì)HeLa及293T細(xì)胞的抑制作用Table 1 Inhibitory effect of CSP on the proliferation of HeLa and293T cells組別 劑量/（μg/mL） 對(duì)HeLa細(xì)胞增殖抑制率/% 對(duì)293T細(xì)胞增殖抑制率/%對(duì)照組 0 0 0給藥組400 12.14±1.61 －12.62±0.46 500 21.70±0.87 －18.48±1.42 600 37.19±3.24 －22.13±1.84 700 48.17±3.66 －24.86±2.68 800 61.03±2.59 －28.34±2.45 5-FU陽性藥物組 25 59.75±3.53 50.83±2.60

2.1.2 對(duì)HeLa細(xì)胞形態(tài)學(xué)影響

用不同質(zhì)量濃度的蟬花多糖分別處理HeLa細(xì)胞48 h后，觀察細(xì)胞的形態(tài)變化。由圖1可知，對(duì)照組細(xì)胞排列緊密，胞漿豐富，體積較大，呈多邊形，多數(shù)細(xì)胞呈堆疊生長(zhǎng)，有少量漂浮細(xì)胞；而給藥組隨著質(zhì)量濃度增大，活細(xì)胞數(shù)量逐漸減少，細(xì)胞排列疏松，體積變小，呈長(zhǎng)梭形，且有不規(guī)則突起，同時(shí)部分細(xì)胞脫離周圍細(xì)胞，變圓，胞膜褶皺，形態(tài)學(xué)上呈現(xiàn)細(xì)胞凋亡狀態(tài)，可見凋亡細(xì)胞及凋亡小體形成，顯示蟬花多糖對(duì)HeLa細(xì)胞增殖具有抑制作用，與表1實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致。

2.2 蟬花多糖對(duì)荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用

注： #.與模型組比較差異顯著（P＜0.05）。下同。

由表2可知，CSP對(duì)小鼠S180實(shí)體瘤有一定的抑制作用，并呈現(xiàn)明顯劑量效應(yīng)，CSP各劑量組與模型組抑瘤率比較差異顯著（P＜0.05），且高劑量組對(duì)小鼠S180抑瘤率達(dá)到42.9%。

2.3 CSP對(duì)荷瘤小鼠免疫功能的影響

2.3.1 對(duì)荷瘤小鼠免疫器官指數(shù)的影響

胸腺和脾臟是機(jī)體重要的免疫器官，其指數(shù)大小直接反映機(jī)體免疫水平的高低［14］。由表3可知，造模后模型小鼠的肝臟、胸腺指數(shù)均降低，而脾臟指數(shù)明顯增加，表明移植瘤對(duì)機(jī)體免疫器官產(chǎn)生一定程度的損傷。陽性藥物組荷瘤小鼠對(duì)于模型組的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)均顯著降低，意味著荷瘤小鼠免疫器官受到嚴(yán)重?fù)p傷；而CSP給藥組小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)均有不同程度增加，其中高劑量組胸腺指數(shù)升高極顯著（P＜0.01），同時(shí)多糖給藥組具有顯著保肝作用，呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系。以上結(jié)果表明，蟬花多糖能較好保護(hù)機(jī)體免疫器官，抑制免疫器官功能喪失和防止免疫器官萎縮。

注：##.與模型組比較差異極顯著（P＜0.01）。下同。

2.3.2 對(duì)荷瘤小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力的影響

脾臟是機(jī)體主要的外周免疫器官，其淋巴細(xì)胞增殖能力直接反映機(jī)體的免疫功能。由圖2可知，同空白組相比，模型組小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力明顯降低，表明移植瘤的生長(zhǎng)導(dǎo)致機(jī)體免疫系統(tǒng)功能降低。而CSP給藥組均能極顯著提升脾淋巴細(xì)胞的增殖能力（P＜0.01），且優(yōu)于5-FU陽性藥物組，其中高劑量組淋巴細(xì)胞增殖能力達(dá)到76%。

2.3.3 對(duì)荷瘤小鼠抗氧化能力的影響

自由基學(xué)說認(rèn)為，不少致癌物必須在體內(nèi)經(jīng)過代謝活化形成自由基并攻擊DNA才能致癌［15-16］。由表4可知，CSP給藥組荷瘤小鼠血清中SOD、高劑量組CAT酶的活性均不同程度高于模型組，表明多糖能提高機(jī)體自身的抗氧化酶活性；同時(shí)，小鼠血清中MDA水平較模型組極顯著降低（P＜0.01）。以上結(jié)果表明，蟬花多糖能提高荷瘤小鼠抗氧化能力，顯著減少氧化產(chǎn)物MDA含量。蟬花多糖對(duì)S180腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用可能與其增強(qiáng)機(jī)體內(nèi)抗氧化能力相關(guān)。

表 4 蟬花多糖對(duì)荷瘤小鼠血清CAT、SOD酶活性、MDA含量的影響（x±s，n=8）Table 4 Effect of CSP on SOD and CAT activities and MDA level inserumofmicebearing S180sarcoma （x±s，n= 8）組別 劑量/（mg/ （kg·d））CAT酶活力/ （U/mL）SOD酶活力/ （U/mL）MDA含量/ （mmol/mL）空白組 0.81±0.50 92.65±28.33 5.08±0.70模型組 1.72±1.28 76.69±14.50 7.54±1.07 5-FU陽性藥物組 20 2.68±1.24##54.68±17.93#7.78±1.16##CSP低劑量組 100 1.41±0.28##84.24±19.12 5.88±1.47##CSP高劑量組 200 1.87±0.61##83.76±14.34 5.17±1.85##

3 討 論

真菌多糖具有多種生物活性和保健功能，近年來已成為生命科學(xué)、醫(yī)藥和食品科學(xué)領(lǐng)域的研究重點(diǎn)。諸多研究發(fā)現(xiàn)，真菌多糖多具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性，對(duì)許多腫瘤細(xì)胞均有良好的抑制作用。同時(shí)大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，其抗腫瘤作用途徑并不直接殺滅腫瘤細(xì)胞，而是通過增強(qiáng)機(jī)體免疫功能及提高機(jī)體拮抗氧化應(yīng)激損傷的能力［17］，間接地抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)［18-19］。

本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)野生蟬花多糖的提取，進(jìn)一步對(duì)多糖的體內(nèi)、外抗腫瘤活性進(jìn)行了研究。體外實(shí)驗(yàn)表明，CSP 在400～800 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)對(duì)HeLa細(xì)胞均有抑制作用，當(dāng)質(zhì)量濃度為800 μg/mL時(shí)，HeLa細(xì)胞抑制率達(dá)到61%，并呈現(xiàn)量效關(guān)系；體內(nèi)以移植性荷瘤小鼠為模型，當(dāng)以200 mg/（kg·d）灌胃時(shí)，能有效抑制荷瘤小鼠腫瘤的生長(zhǎng)，抑瘤率達(dá)到42.9%，顯示出良好的抗腫瘤作用。

胸腺、脾臟均為機(jī)體重要的免疫器官，作為淋巴細(xì)胞分化和成熟的重要場(chǎng)所，其指數(shù)的大小一定程度上直接體現(xiàn)免疫水平的高低，反映機(jī)體免疫功能狀況［20-22］；同時(shí)機(jī)體內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量的增加，轉(zhuǎn)化率的提高亦可促進(jìn)淋巴因子的產(chǎn)生，是反映機(jī)體細(xì)胞免疫功能的重要指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)中腫瘤模型組小鼠由于受到腫瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)而導(dǎo)致胸腺細(xì)胞逐步凋亡、胸腺萎縮，經(jīng)過多糖處理后，小鼠免疫器官指數(shù)顯著提高，激活和促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞的增殖分化進(jìn)而增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能，說明CSP抗腫瘤機(jī)制與其促進(jìn)機(jī)體免疫系統(tǒng)的活性有關(guān)，對(duì)免疫系統(tǒng)有著一定程度的保護(hù)及修復(fù)作用。

自由基學(xué)說認(rèn)為，腫瘤的發(fā)生發(fā)展與機(jī)體內(nèi)自由基穩(wěn)態(tài)的破壞有關(guān)，其穩(wěn)態(tài)的維持主要靠抗氧化酶系功能的發(fā)揮［23］。機(jī)體抗氧化酶系活力的大小反映其對(duì)自由基的清除能力，而MDA含量的高低直接反映機(jī)體的氧化應(yīng)激損傷程度。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，移植瘤小鼠隨著腫瘤的生長(zhǎng)，體內(nèi)抗氧化酶系活力降低、MDA含量升高；而給予蟬花多糖處理后，此種情況得到改善，說明蟬花多糖能夠激活或者促進(jìn)抗氧化酶系的表達(dá)，降低機(jī)體受自由基損壞的程度。

綜上所述，野生蟬花多糖具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性，其功能的發(fā)揮與提高免疫調(diào)節(jié)能力及抗氧化活性密切相關(guān)。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 吳遠(yuǎn)征.蟬花: 一種藥用真菌［J］.生物學(xué)通報(bào)， 1992（3）: 17.

［2］ FUJITA T， INOUE K， YAMAMOTO S， et al.Fungal metabolites.Part 11.A potent immunosuppressive activity found in Isaria sinclairii metabolite［J］.Journal of Antibiotics， 1994， 47（2）: 208-215.DOI:10.1002/chin.199432253.

［3］ MIYAKE Y， KOZUTSUMI Y， NAKAMURA S， et al.Serine palmitoyltransferase is the primary target of a sphingosine-like immunosuppressant， ISP-1/myriocin［J］.Biochemical and Biophysical Research Communications， 1995， 211（2）: 396-403.DOI:10.1006/ bbrc.1995.1827.

［4］ 李挺， 宋斌， 林群英.蟬花的研究進(jìn)展［J］.中藥材， 2008， 31（9）: 1443-1447.DOI:10.3321/j.issn:1001-4454.2008.09.051.

［5］ 溫魯， 唐玉玲， 張平.蟬花與有關(guān)蟲草活性成分檢測(cè)比較［J］.江蘇中醫(yī)藥， 2006， 27（1）: 45-46.DOI:10.3969/j.issn.1672-397X.2006.01.029.

［6］ 官宗華， 宋玉良.蟬花的研究概況［J］.中國醫(yī)藥指南， 2012， 10（10）: 443-444.DOI:10.3969/j.issn.1671-8194.2012.10.334.

［7］ 蘆柏震， 姜志明， 牟翰舟.等.蟬花粗提物對(duì)肺癌細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國中醫(yī)藥科技， 2006， 9（13）: 328-329.DOI:10.3969/ j.issn.1005-7072.2006.05.019.

［8］ 金麗琴.蟬擬青霉孢子粉對(duì)體內(nèi)外宮頸癌生長(zhǎng)的抑制作用［C］.無錫: 長(zhǎng)三角科技論壇暨營(yíng)養(yǎng)科技論壇， 2012: 270-275.

［9］ 何曉波， 蘆柏震， 周俐斐， 等.蟬花總多糖對(duì)細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng)的促進(jìn)作用［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊， 2010， 28（7）: 1465-1468.DOI:10.13193/j.archtcm.2010.07.123.hexb.062.

［10］ 金麗琴， 呂建新， 楊介鉆， 等.蟬擬青霉總多糖對(duì)免疫抑制大鼠巨噬細(xì)胞激活作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中草藥， 2007， 38（8）: 1217-1220.DOI:10.3321/j.issn:0253-2670.2007.08.035.

［11］ 彭勤， 彭惠， 駱云鵬， 等.MTT比色法測(cè)定藥物對(duì)HeLa細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展， 2000， 9（5）: 341-343.DOI:10.13283/j.cnki.xdfckjz.2000.05.009.

［12］ 葉明霞， 周順長(zhǎng)， 孔利佳， 等.S180肉瘤， 艾氏腹水瘤腫瘤移植模型建立的研究［J］.中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)雜志， 2002， 12（1）: 14-16.DOI:10.3969/j.issn.1671-7856.2002.01.005.

［13］ 楊文超， 吳珍紅， 繆曉青， 等.蜂毒肽對(duì)受照小鼠脾細(xì)胞增殖的影響［J］.中國蜂業(yè)， 2007， 58（10）: 5-6.DOI:10.3969/ j.issn.0412-4367.2007.10.001.

［14］ KIM J W， FERRIS R L， WHITESIDE T L.Chemokine C receptor 7 expression and protection of circulating CD8+T lymphocytes from apoptosis［J］.Clinical Cancer Research， 2005， 11（21）: 7901-7910.DOI:10.1158/1078-0432.CCR-05-1346.

［15］ TAKEMURA G， ONODERA T， ASHRAF M.Quantification of hydroxyl radical and its lack of relevance to myocardial injury during early reperfusicn after graded ischemia in rat hearts［J］.Circulation Research， 1992， 71（1）: 96-105.DOI:10.1161/01.RES.71.1.96.

［16］ TOQASHI H， SHINZAWA H T， TAKEDA Y， et al.Analysis of hepatic oxidative stress status by electron spin resonance spectroscopy and imaging ［J］.Free Radical Biology & Medicine， 2000， 28（6）: 846-853.DOI:10.1121/1.2734487.

［17］ 陳麗芳， 吳文光， 陳國銳.真菌多糖的抗腫瘤作用探討［J］.海峽藥學(xué)，2002， 14（2）: 58.DOI:10.3969/j.issn.1006-3765.2002.02.037.

［18］ LIN Z B， ZHANG H N.Anti-tumor and immunoregulatory activities of Ganoderma lucidum and its possible mechanisms［J］.Acta Pharmacologica Sinica， 2004， 25（11）: 1387-1395.

［19］ WANG Y Y， KHOO K H， CHEN S T， et al.Studies on the immunomodulating and antitumor activities of Ganoderma lucidum （Reishi）polysaccharides: functional and proteomic analyses of a fucosecontaining glycoprotein fraction responsible for the activities［J］.Bioorganic & Medicinal Chemistry， 2002， 10（4）: 1057-1062.DOI:10.1016/S0968-0896（01）00377-7.

［20］ CHEN X M， NIE W J， YU G Q， et al.Antitumor and immunomodulatory activity of polysaccharides from Sargassum fusiforme［J］.Food and Chemical Toxicology， 2012， 50（3/4）: 695-700.DOI:10.1016/j.fct.2011.11.015.

［21］ 梁永林， 吳玉泓， 殷銀霞， 等.久瀉靈對(duì)小鼠胸腺、脾臟重量及單核細(xì)胞吞噬功能影響的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國老年學(xué)雜志， 2006， 26（1）: 85-86.DOI:10.3969/j.issn.1005-9202.2006.01.042.

［22］ 王朝蘭， 劉向國， 方正清.等.補(bǔ)肺湯對(duì)COPD肺氣虛證模型大鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響［J］.甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)， 2011（3）: 1-4.DOI:10.3969/j.issn.1003-8450.2011.03.001.

［23］ 周國亮， 宋翼升， 辛艷飛.等.靈芝多糖抗氧化和抗腫瘤活性的研究進(jìn)展［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊， 2014， 32（5）: 1002-1005.DOI:10.13193/ j.issn.1673-7717.2014.05.013.

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201613038

中圖分類號(hào)：R931

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-6630（2016）13-0209-05

收稿日期：2015-08-06

基金項(xiàng)目：2013年汕頭大學(xué)教改項(xiàng)目；2013年廣東省高等學(xué)校教學(xué)質(zhì)量與教學(xué)改革工程本科類立項(xiàng)建設(shè)項(xiàng)目；高水平大學(xué)建設(shè)項(xiàng)目

作者簡(jiǎn)介：謝飛（1990—），男，碩士研究生，主要從事活性物質(zhì)研究與開發(fā)。E-mail：14fxie@stu.edu.cn

*通信作者：陳美珍（1956—），女，教授，本科，主要從事活性物質(zhì)研究與開發(fā)。E-mail：chenmz@stu.edu.cn

Antitumor Activity and Mechanism of Action of Wild Cordyceps sobolifera Polysaccharide

XIE Fei， LI Wei， CHEN Meizhen*， YU Jie
（College of Science， Shantou University， Shantou 515063， China）

Abstract:Objective: The antitumor activity of polysaccharides from wild Cordyceps sobolifera （CSP） was investigated in vitro and in vivo.Methods: 3-（4，5-dimethyl-2-thiazolyl）-2，5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide （MTT） assay was used to determine the anti-proliferative effect of CSP at different doses on HeLa cells.S180 sarcoma mouse model was established and used to detect the antitumor activity and the effect on the immune system of CSP.Results: CSP at concentrations of 400-800 μg/mL inhibited the growth of HeLa cells in vitro in a concentration-dependent manner， with a percentage inhibition of 61% at 800 μg/mL.In vivo， CSP at both high （200 mg/（kg·d）） and low （100 mg/（kg·d）） doses had antitumor effects， with a percentage inhibition of 42.9% at 200 mg/（kg·d）， and immune organ indices of tumor-burdened mice signifcantly increased （P ＜ 0.01）.CSP also activated the proliferation and differentiation of lymphocytes， and had an obvious protection on the antioxidant defense system in the body.Conclusion: CSP has obvious antitumor activity in vitro and in vivo， which may be related to enhancing the immune system adjustment capacity and antioxidant activity.

Key words:Cordyceps sobolifera polysaccharide （CSP）； antitumor activity； immune regulation； antioxidant