DcR3聯(lián)合GPI、RF檢測對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的診斷價值

王　瑤， 李　卓， 楊　彪

(1西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗科，西安　710077； 2西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院骨科，西安　710077； *通訊作者，E-mail：yangbiao@126.com)

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DcR3聯(lián)合GPI、RF檢測對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的診斷價值

王瑤1， 李卓1， 楊彪2*

(1西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗科，西安710077；2西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院骨科，西安710077；*通訊作者，E-mail：yangbiao@126.com)

摘要：目的研究類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)患者血清誘騙受體3(DcR3)、葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶(GPI)和類風(fēng)濕因子(RF)水平，評價三者聯(lián)合檢測對RA的臨床診斷意義。方法收集68例RA患者的血清標(biāo)本和臨床資料，以55例健康體檢患者作為對照組。用ELISA法檢測DcR3和GPI含量，全自動特定蛋白免疫分析儀檢測RF含量，分析其與臨床特征的關(guān)系。采用Logistic回歸分析和ROC曲線比較DcR3、GPI和RF單獨(dú)檢測或三者聯(lián)合檢測的診斷價值。結(jié)果RA患者的DcR3水平顯著高于健康對照組(P﹤0.01)。DcR3水平與RA分型和關(guān)節(jié)侵蝕程度分期相關(guān)(均P﹤0.01)。DcR3、GPI和RF三者聯(lián)合檢測的敏感性(81.3%)和曲線下面積AUCROC(0.934)均比單獨(dú)檢測高，其特異性(90.4%)也處于較高水平，具有較好的診斷價值。結(jié)論DcR3、GPI和RF 三者聯(lián)合檢測對RA診斷具有較好的臨床應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；誘騙受體3；葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶；類風(fēng)濕因子

誘騙受體3(decoy receptor 3,DcR3)是一種新發(fā)現(xiàn)的可溶性誘騙受體，在自身免疫、移植免疫、腫瘤免疫和抗感染免疫中發(fā)揮重要作用[1]。近幾年來，有研究表明，DcR3參與了類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)的免疫紊亂過程，可作為判斷RA發(fā)生、發(fā)展的重要指標(biāo)[2,3]。目前臨床上用于診斷RA的指標(biāo)很多，常見的血清學(xué)指標(biāo)如類風(fēng)濕因子(rheumatoid factors, RF)、葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶(glucose-6-phosphateisomerase,GPI)等[4]已廣泛用于RA的篩查、輔助診斷和療效評價，但其存在特異性或敏感性不足的缺陷。本研究對RA患者、健康體檢者血清DcR3、GPI和RF的含量進(jìn)行檢測，旨在探討其單獨(dú)或三者聯(lián)合檢測對RA的診斷價值。

1材料和方法

1.1研究對象

RA患者入選及活動性判定標(biāo)準(zhǔn)符合1987年美國風(fēng)濕病學(xué)會分類標(biāo)準(zhǔn)[5],排除伴有其他自身免疫病、超敏反應(yīng)疾病、移植、腫瘤、感染等免疫相關(guān)疾病患者。符合上述標(biāo)準(zhǔn)的RA患者共68例，其中男17例，女51例，年齡(46.3±14.6)歲，均為西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院住院或門診患者。收集RA患者的骨關(guān)節(jié)X線資料，根據(jù)關(guān)節(jié)破壞程度，參照中華醫(yī)學(xué)會風(fēng)濕病分會的《類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷及治療指南》[6]將其分為4期(Ⅰ-Ⅳ)。55例本院健康體檢者入選標(biāo)準(zhǔn)：血常規(guī)、尿常規(guī)、肝腎功能、血脂、影像學(xué)檢查均正常，排除自身免疫病、腫瘤及近期感染者；其中男13例，女42例，年齡(42.5±16.5)歲，與RA組的年齡、性別相匹配。所有研究對象均在臨床干預(yù)治療前靜脈采血3 ml，3 500 r/min離心10 min，取血清于-80 ℃凍存。本研究經(jīng)西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理學(xué)委員會批準(zhǔn)，研究對象均簽署知情同意書。

1.2試劑與儀器

人DcR3 ELISA檢測試劑盒(批號：DEZ36501，北京方程公司)；GPI ELISA檢測試劑盒(批號：15101921，上海北加生化試劑有限公司)；RF測定試劑盒(批號：45590，西門子醫(yī)學(xué)診斷產(chǎn)品(上海)有限公司)。Multiskan FC型酶標(biāo)儀(賽默飛世爾(上海)儀器有限公司)；BNP全自動特定蛋白分析儀(西門子醫(yī)學(xué)診斷產(chǎn)品(上海)有限公司)。

1.3血清DcR3、GPI及RF測定

DcR3、GPI為雙抗體夾心ELISA法，按試劑盒說明書操作。DcR3于酶標(biāo)儀450 nm波長處讀取吸光度(A)值，GPI于酶標(biāo)儀492 nm波長處讀取吸光度(A)值，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法求得各標(biāo)本濃度；RF測定按照RF試劑盒和BNP全自動特定蛋白分析儀說明書完成操作，檢測方法為散射比濁法。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析

用SPSS18.0軟件(SPSS公司，美國)進(jìn)行。數(shù)據(jù)為非正態(tài)分布，以中位數(shù)(第25分位數(shù)，第75分位數(shù))[M(P25，P75)]表示，兩組比較采用Mann-WhitneyU檢驗，多組間比較采用Kruskal-WallisH檢驗。以P﹤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。用ROC曲線比較DcR3、GPI、RF單獨(dú)及聯(lián)合檢測對RA的診斷價值。

2結(jié)果

2.1RA患者DcR3與臨床參數(shù)關(guān)系

將RA患者DcR3水平結(jié)合性別、年齡、RA分型、關(guān)節(jié)侵蝕程度分期進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，DcR3水平與RA分型和關(guān)節(jié)侵蝕程度分期相關(guān)，在不同分型(活動期和緩解期)和不同關(guān)節(jié)侵蝕程度分期(Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期)患者間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.01)；而在不同性別(男/女)和不同年齡(≥60歲和﹤60歲)患者間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05，見表1)。

2.2RA患者DcR3、GPI和RF含量檢測結(jié)果

RA組的DcR3、GPI和RF含量均高于健康對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.01，見表2)。

表1RA患者血清DcR3含量與臨床參數(shù)關(guān)系

Table 1Relationship between serum DcR3 levels and clinical parameters in RA patients

臨床參數(shù)nDcR3(pg/ml)統(tǒng)計值P性別Z=-0.030.99 男171784.2(1174.3,2209.5) 女511861.7(1309.2,2387.4)年齡(歲)Z=-0.880.38 ≥60201684.5(1046.2,2025.3) ﹤60481798.6(1265.4,2098.7)RA分型Z=-6.67﹤0.01 活動期391989.2(1423.3,2343.1) 緩解期291323.4(898.6,1876.3)關(guān)節(jié)侵蝕程度分期H=55.600.02 Ⅰ期191209.2(783.6,1623.7) Ⅱ期251739.4(1023.6,2021.4) Ⅲ-Ⅳ期241996.3(1209.3,2301.5)

表2RA患者DcR3、GPI和RF含量檢測結(jié)果

Table 2Levels of DcR3, GPI and RF in RA patients

組別DcR3(pg/ml)GPI(mg/L)RF(IU/ml)健康對照組645.1(354.2,978.3)0.14(0.33,2.65)2.4(1.2,10.4)RA組1896.2(1235.2,2353.7)5.68(2.53,10.64)23.1(10.7,30.2) Z-8.29-8.68-5.40 P﹤0.01﹤0.01﹤0.01

2.3DcR3、GPI和RF單獨(dú)或聯(lián)合檢測對RA診斷價值

以RA患者為病例組，健康體檢者為對照組，繪制ROC曲線，見圖1。三者聯(lián)合診斷RA采用Logistic回歸分析(見表3)，以此回歸模型計算出各組樣本預(yù)測概率。三者聯(lián)合檢測的的ROC曲線下面積(AUCROC)為0.934(95%CI 0.884-0.983)，分別高于DcR3的0.796(95%CI 0.707-0.885)、GPI的0.661(95%CI 0.553-0.769)和RF的0.873(95%CI 0.802-0.944)。

對于DcR3和三者聯(lián)合診斷預(yù)測概率，分別取尤登指數(shù)(敏感性+特異性-1)最高時的值為診斷臨界點(diǎn)(cut off值)。經(jīng)計算，DcR3為847.5 pg/ml；三者聯(lián)合診斷預(yù)測概率cut off值為0.58。分別以DcR3≥847.5 pg/ml、GPI>0.33 mg/L和RF>24.3 IU/ml、三者聯(lián)合診斷預(yù)測概率≥0.58為陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，得出各檢測方法的敏感性、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值，結(jié)果表4。結(jié)果顯示，RF單獨(dú)檢測對RA診斷的特異性較高，但敏感性較DcR3低；DcR3敏感性高于GPI和RF，但特異性較GPI和RF差。三者聯(lián)合檢測的敏感性和AUCROC均高于單獨(dú)檢測，其特異性也處于較高水平。

圖1　DcR3、GPI和RF診斷RA的ROC曲線Figure 1　ROC curve of RA diagnosed by DcR3, GPI and RF

表3DcR3、GPI和RF三種指標(biāo)診斷RA的Logistic回歸結(jié)果

Table 3Logistic regression results of DcR3,GPI and RF for RA

指標(biāo)回歸系數(shù)標(biāo)準(zhǔn)誤Waldχ2值PDcR30.5460.07623.24﹤0.01GPI0.4610.11318.970.021RF0.0150.0199.420.013常量-3.521.2435.79﹤0.01

表4DcR3、GPI和RF對RA診斷效能比較(%)

Table 4Diagnostic efficacy of DcR3, GPI and RA for RA (%)

指標(biāo)敏感性特異性陽性預(yù)測值陰性預(yù)測值DcR373.765.484.163.6GPI57.676.780.659.8RF67.595.694.378.1三者聯(lián)合81.390.491.582.8

3討論

DcR3最早是1998年由Pitti等[7]發(fā)現(xiàn)的與腫瘤壞死因子受體(TNFR)高度同源的凋亡抑制因子，其氨基酸序列中缺乏跨膜結(jié)構(gòu)，是一種分泌性蛋白。DcR3基因定位于染色體20q13.3，全長11.14 kb，由271個氨基酸殘基組成。DcR3能競爭性結(jié)合Fas配體(Fas ligand,FasL)、腫瘤壞死因子配體超家族成員14抗體(LIGHT)和腫瘤壞死因子樣配體1A(TL1A)，在調(diào)節(jié)T細(xì)胞活化、增殖、分化以及凋亡中起重要作用[8]。研究表明，自身免疫性疾病患者血液中的DcR3水平高于正常人群[9]，在RA患者的血液和關(guān)節(jié)液中，DcR3含量的表達(dá)明顯升高[10]。

GPI最早于1968年因為非球形紅細(xì)胞溶血性貧血而得以認(rèn)識，是一種多功能分子，于真核生物、細(xì)菌和原核生物以及人體各組織細(xì)胞中廣泛存在[11]。在RA患者中，GPI可通過內(nèi)皮細(xì)胞或者滑液中的可溶性蛋白遞呈給免疫系統(tǒng)，引起患者的免疫系統(tǒng)發(fā)生紊亂[12]。GPI作為一種新型RA標(biāo)志物，在其他疾病及正常人群中的含量很低，但在RA患者血清中含量顯著增高。

RF是一種由感染因子引起體內(nèi)產(chǎn)生以變性IgG(屬IgM)為靶抗原的自身抗體(抗抗體)，主要存在于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的血清和關(guān)節(jié)液中[13]。RF目前已成為RA疾病篩查的最重要指標(biāo)之一。

一些常見的RA疾病篩查指標(biāo)，如：抗CCP抗體、抗RA33抗體、抗角蛋白抗體、GPI和RF 等，其彼此之間的聯(lián)合診斷目前早已有報道[14，15]。但DcR3作為一種新發(fā)現(xiàn)的RA疾病篩查輔助指標(biāo)，與其他指標(biāo)聯(lián)合檢測在RA中的診斷價值方面研究較少。本研究將DcR3聯(lián)合GPI和RF檢測，評價三者聯(lián)合檢測對RA的臨床診斷意義，結(jié)果發(fā)現(xiàn)三者聯(lián)合檢測對RA診斷具有較好的臨床應(yīng)用。

此外，RA患者DcR3含量高于健康對照組，且RA活動期高于RA緩解期，Ⅲ-Ⅳ期高于Ⅰ期和Ⅱ期，說明DcR3含量的表達(dá)隨病程的加重而升高，DcR3對RA的診斷具有一定的價值。DcR3單獨(dú)診斷RA的敏感性較高，特異性較低。DcR3、GPI和RF聯(lián)合檢測可使診斷效能處于較高水平。然而，本研究的樣本量較小，研究結(jié)論還有待更大樣本的臨床研究和病例隨訪加以驗證。

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作者簡介：王瑤，女，1984-04生，碩士，主管技師，講師，E-mail：95244556@qq.com

收稿日期：2016-04-06

中圖分類號：R593.22

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1007-6611(2016)07-0614-04

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2016.07.008

Diagnostic value of the detection of DcR3 combined with glucose-6-phosphateisomerase and rheumatoid factors for rheumatoid arthritis

WANG Yao1, LI Zhuo1，YANG Biao2*

(1DepartmentofClinicalLaboratory,FirstAffiliatedHospitalofXi’anMedicalUniversity,Xi’an710077,China;2DepartmentofOrthopaedics,FirstAffiliatedHospitalofXi’anMedicalUniversity;*Correspondingauthor,E-mail:yangbiao@126.com)

Abstract：ObjectiveTo investigate the levels of serum decoy receptor 3(DcR3),glucose-6-phosphateisomerase(GPI)and rheumatoid factors(RF)in rheumatoid arthritis(RA)patients,and to evaluate the clinical significance of combined detection.MethodsThe serum samples and clinical data of 68 RA patients were collected,and 55 healthy subjects were selected as the controls.The DcR3 and GPI levels were detected using ELISA method,and its correlation with clinical features was analyzed.The diagnostic values of the detection of DcR3,GPI and RF alone or their combination in RA were investigated by Logistic regression analysis and ROC curve.ResultsThe DcR3 level in RA patients was significantly higher than those in healthy controls(P﹤0.01).The DcR3 level was correlated with the RA typing and the joint erosion(P﹤0.01).The sensitivity(81.3%) and area under the curve(AUCROC)(0.934)of the combined detection of DcR3, GPI and RF for RA were higher than that of their single detection, and its specificity was 90.4%.ConclusionThe combined detection of DcR3, GPI and RF has preferable value in the diagnosis of RA.

Key words:rheumatoid arthritis;decoy receptor 3;glucose-6-phosphateisomerase;rheumatoid factors