Id-1和VEGF在涎腺腺樣囊性癌中的表達及臨床意義

汪　佳，安　峰，申葉春，謝麗娟，王鐘華

(河北北方學院附屬第一醫(yī)院，河北 張家口 075061)

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Id-1和VEGF在涎腺腺樣囊性癌中的表達及臨床意義

汪佳，安峰，申葉春，謝麗娟，王鐘華

(河北北方學院附屬第一醫(yī)院，河北 張家口 075061)

[摘要]目的探討DNA結合分化抑制蛋白-1(Id-1)和血管內皮生長因子(VEGF)在涎腺腺樣囊性癌中的表達及與腫瘤侵襲、轉移的關系。方法采用免疫組織化學方法檢測Id-1和VEGF在60例涎腺腺樣囊性癌組織與癌旁正常組織中的表達情況，分析二者的表達與涎腺腺樣囊性癌臨床病理特征的關系及二者表達的相關性。結果涎腺腺樣囊性癌組織中Id-1和VEGF陽性表達率均明顯高于癌旁正常組織(P均<0.05)；有淋巴結轉移、肺轉移者Id-1和VEGF陽性表達率高于無轉移者(P均<0.05)，Ⅲ+Ⅳ期者高于Ⅰ+Ⅱ期者(P<0.05)，中低分化者明顯高于高分化者(P<0.05)，有脈管浸潤者明顯高于無脈管浸潤者(P<0.05)，而不同性別、年齡及腫瘤部位患者Id-1和VEGF陽性表達率比較差異均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)；Id-1和VEGF在涎腺腺樣囊性癌組織中的表達呈正相關(r=0.469,P<0.05)。結論Id-1和VEGF與涎腺腺樣囊性癌的侵襲、轉移密切相關，兩者可能在涎腺腺樣囊性癌的演進中存在協同作用，相互影響。

[關鍵詞]涎腺腺樣囊性腫瘤；Id-1；VEGF；浸潤轉移

涎腺腺樣囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma，SACC)系口腔涎腺上皮組織發(fā)生的惡性腫瘤，病理類型以腺癌多見，惡性度較高，早期即可出現局部蔓延或沿神經及血管向遠處轉移[1]。SACC組織呈侵襲性生長，復發(fā)和遠處轉移是SACC患者預后較差的重要原因，而新生血管的形成是腫瘤侵襲、轉移的基礎[2]。DNA結合分化抑制蛋白-1(Id-1)能促進細胞增殖，誘導腫瘤血管生成，其表達沉默、缺失與乳腺癌、食管癌、子宮內膜癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生、進展密切相關[3-5]。血管內皮生長因子(VEGF)是體內特異性極高的血管內皮分裂原，能刺激血管內皮細胞增殖遷移，促進腫瘤血管形成[6]。目前，國內關于Id-1在SACC組織表達的相關報道較少，其在SACC組織中的浸潤轉移機制并不明確，本實驗以Id-1和SACC的關系為中心，通過免疫組化方法檢測Id-1和VEGF在SACC組織中的表達及與臨床病理特征之間的關系，并分析二者的相關性，旨在為探索SACC發(fā)生、浸潤、轉移的機制及精準化治療提供科學依據。

1臨床資料

1.1一般資料收集2013年6月—2015年6月在我院口腔科行手術切除的60例SACC患者組織標本，癌組織標本取自癌灶中心處，癌旁正常組織標本經病理證實為正常組織。所有患者術前均未接受放化療治療，男36例，女24例；年齡39～61(52±2.7)歲；2005版WHO涎腺腺樣囊性腫瘤病理分型：篩孔型22例，實體型18例，管狀型20例；TNM分期Ⅰ+Ⅱ期33例，Ⅲ+Ⅳ期27例；小涎腺22例，大涎腺38例。

1.2試劑兔抗人單克隆濃縮型Id-1抗體、兔抗人濃縮型VEGF單克隆抗體均購于香港abcam公司, DAB顯色試劑盒購于武漢博士德公司。

1.3免疫組化染色方法10%福爾馬林溶液固定標本，石蠟包埋，切片厚度為4 μm，HE染色。80 ℃烤箱烤片30 min，乙醇脫水，滅活內源性過氧化物酶，枸櫞酸緩沖液高溫水化修復；PBS沖洗，加一抗(1∶100)、二抗(1∶200)。室溫下DAB顯色，蘇木精復染，乙醇分化、沖洗、梯度乙醇脫水，松節(jié)油透明，樹膠封片。PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4Id-1、VEGF陽性判定標準[7]Id-1和VEGF均以細胞質中出現棕黃色顆粒為陽性表達，根據著色細胞占視野細胞總數的百分比及著色細胞染色強弱評分計算總積分。著色細胞占視野細胞總數的百分比≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，> 75%為4分；細胞染色無著色為陰性計0分，細胞染色弱(+)計1分，中() 計2分，強() 計3分。上述2項積分相乘，0分為(-),1～4分為(+),5～8分為(),9～12分為(),(+)～()均視為陽性。

1.5統(tǒng)計學方法運用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件統(tǒng)計并分析數據。計數資料用百分率表示，采用2檢驗；計量資料用±s表示，相關性分析采用Spearmen檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1SACC組織和癌旁正常組織中Id-1和VEGF的表達情況Id-1和VEGF在SACC 組織和癌旁正常組織中的表達定位于細胞質和細胞膜，呈棕黃色或棕褐色顆粒，見圖1～4。Id-1和VEGF在SACC 組織中的陽性表達率分別為68.33%(41/60)和76.67%(46/60)，在癌旁正常組織中的陽性表達率分別為13.33%(8/60)和16.67%(10/60)，Id-1和VEGF在SACC 組織中的陽性表達率明顯高于癌旁正常組織(2=18.956，21.117，P均<0.05)。

2.2Id-1和VEGF表達與SACC臨床病理參數的關系有淋巴結轉移、肺轉移者Id-1和VEGF陽性表達率高于無轉移者(P均<0.05)，Ⅲ+Ⅳ期者高于Ⅰ+Ⅱ期者(P<0.05)，中低分化者明顯高于高分化者(P<0.05)，有脈管浸潤者明顯高于無脈管浸潤者(P<0.05)，而不同性別、年齡及腫瘤部位者Id-1和VEGF陽性表達率比較差異均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)。見表1。

圖1　癌旁正常組織中Id-1表達情況(SP×200)

圖2　癌旁正常組織中VEGF表達情況(SP×200)

圖3　SAAC組織中Id-1表達情況(SP×200)

圖4　SAAC組織中VEGF表達情況(SP×200)

2.3SACC組織中Id-1和VEGF表達的相關性SAAC組織中Id-1和VEGF共同陽性35例，共同陰性8例，表達一致率為71.67%(43/60)，兩者呈明顯正相關(r=0.469，P<0.05)。見表2。

表1　Id-1和VEGF表達與SACC臨床病理參數間的關系

表2　SACC組織中Id-1和VEGF表達的相關性　例

3討論

Id-1系螺旋-環(huán)-螺旋(HLH)轉錄因子家族重要成員，其在正常組織中呈不表達狀態(tài)或低表達，而在惡性腫瘤及體外培養(yǎng)的腫瘤細胞系中均呈高表達趨勢[8-9]。大多數HLH結構存在一個堿性HLH因子(bHLH)與其緊密相鄰，二者相互結合形成異質二聚體，其堿性區(qū)與目標DNA結合，誘導啟動子中的E-盒樣結構的靶基因轉錄并整合成所謂的“E-box”DNA序列，從而調控細胞增殖分化[8]。Id-1通過與E2A結合形成特異性復合物抑制E2A活化P21，激活CDK2誘導Rb蛋白磷酸化，而Rb蛋白的磷酸化在腫瘤增殖中發(fā)揮重要作用，能抑制細胞分裂周期中G1/S停滯，促使細胞分裂周期順利進行[9]。Lee等[10]報道Id-1表達上調能激活Raf-1及MAPK激酶信號傳導途徑，抑制細胞凋亡，參與腫瘤發(fā)生發(fā)展。

VEGF作為一種特異性極高的血管內皮分裂原，對腫瘤血管基質形成及腫瘤惡性生物學行為均有非常重要的影響。VEGF能促進內皮細胞變形、遷移，分裂和增殖，通過與相應受體結合引起一系列信號傳導，釋放FGF、EGF等因子來誘導內皮細胞生成新生血管[11]；此外，VEGF增加微血管通透性致血漿蛋白外滲，為腫瘤新生血管的生成提供必要的細胞外基質，通過加速金屬蛋白酶、間質膠原酶等蛋白的合成，促使血管間質纖維和基底膜屏障的降解，促進腫瘤血管生成[12]。

Ling等[13]研究發(fā)現，Id-1在前列腺癌組織中的異位表達可誘導VEGF 表達水平升高，通過應用RNA干擾抑制Id-1的表達，發(fā)現VEGF 的表達水平也明顯下調。Lee等[14]研究報道Id-1在肝細胞癌組織中能通過缺氧誘導因子(HIF)誘導VEGF的活化，從而促進癌細胞的血行轉移，但具體機制還需進一步探討。本研究結果表明，Id-1和VEGF在SACC組織中的陽性表達遠高于正常組織，Id-1和VEGF的表達與SACC的分化程度、TNM分期、肺轉移、淋巴結轉移和脈管浸潤均具有相關性，且兩者在SACC組織中的表達水平呈明顯正相關。

綜上所述，Id-1的異常表達參與SACC的發(fā)生、演進，并與血行轉移等惡性生物學行為密切相關，其誘導VEGF的過表達可能是促進其浸潤、轉移的重要途徑之一，因而對二者作用機制的深入探討將有望為SACC精準化治療提供科學依據。

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[作者簡介]汪佳，男，醫(yī)師，主要從事口腔頜面頭頸部腫瘤臨床研究。 [通信作者]安峰，E-mail：yfyanfen@163.com

[基金項目]河北省張家口市科學技術研究與發(fā)展計劃指令項目(11110012D)；河北北方學院自然科學面上項目(2013010)

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.21.002

[中圖分類號]R739.8

[文獻標識碼]A

[文章編號]1008-8849(2016)21-2286-04

[收稿日期]2016-01-10

Clinical significance of Id-1and VEGF expression in salivary adenoid cystic carcinoma

WANG Jia, AN Feng, SHEN Yechun, XIE Lijuan, WANG Zhonghua

(The First Affiliated Hospital of Hebei North University, Zhangjiakou 075061, Hebei, China)

Abstract:Objective It is to investigate the expression of DNA binding inhibitor of Differentiation-1(Id-1) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in salivary adenoid cystic carcinoma (SACC), and approach its relationship with invasion and metastasis. Methods The expression of Id-1 and VEGF in 60 cases of SACC group and 60 cases of tumor adjacent normal tissues were detected by immunohistochemical method. The relationship between their expression and clinic pathologic features in SACC and their correlation were analyzed. Results The positive expression rates of Id-1 and VEGF protein in SACC tissues were significantly higher than those in the normal tissues (all P<0.05), those in patients with lymph node metastasis and lung metastasis were significantly higher than those without metastasis (all P<0.05), those in stage Ⅲ+Ⅳ were higher than those in Ⅰ+Ⅱ stage (all P<0.05), those with low differentiation were significantly higher than those in high differentiation (all P<0.05), those with vascular invasion group were significantly higher than those without vascular invasion (all P<0.05), but there were no significant differences with positive expression rates of Id-1 and VEGF in gender, age and tumor size (all P>0.05). There was positive correlation between the positive expression rates of Id-1 and VEGF in SACC tissues (r=0.469, P<0.05). Conclusion The expression of Id-1 and VEGF are closely correlated to the invasion and metastasis of SACC and they may both play an important role in the progression of SACC.

Key words:salivary adenoid cystic carcinoma; DNA binding inhibitor of differentiation-1; vascular endothelial growth factor; clinical significances; invasion; metastasis.