吡羅昔康注射液的有關(guān)物質(zhì)及含量分析

陳敬蘇 薛 薇

（錦州市中醫(yī)醫(yī)院，遼寧 錦州 121000）

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吡羅昔康注射液的有關(guān)物質(zhì)及含量分析

陳敬蘇 薛 薇

（錦州市中醫(yī)醫(yī)院，遼寧 錦州 121000）

【摘要】目的 高效液相法測(cè)定吡羅昔康注射液含量及有關(guān)物質(zhì)方法。方法 色譜柱：ODS-SP（4.6×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.5%冰乙酸溶液（55∶35）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：338 nm；柱溫：30 ℃。結(jié)果 吡羅昔康在7.8～192.9 μg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系y=66724x-172143（r=0.9999）?；厥章剩簻?zhǔn)確度試驗(yàn)測(cè)得高中低三個(gè)濃度的總平均回收率為101.01%，精密度試驗(yàn)RSD為0.11%（n=8）。結(jié)論 本法方便、簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確，適于吡羅昔康注射液含量及有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】高效液相；吡羅昔康注射液；含量測(cè)定；有關(guān)物質(zhì)

吡羅昔康是一種非甾體類抗炎藥物［1］，主要用于類風(fēng)濕，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和急性肌肉骨骼疾患等［2］。2010年版中國(guó)藥典采用容量法測(cè)定吡羅昔康含量［3-8］，但對(duì)吡羅昔康注射液的有關(guān)物質(zhì)尚未見(jiàn)報(bào)道，故此本文對(duì)HPLC法測(cè)定吡羅昔康注射液的含量和有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行研究，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

XS205型電子天平（瑞士梅特勒公司，精密度：0.01 mg），島津LC-20AT高效液相色譜儀，LabSolution（Lab工作站）。

吡羅昔康對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)201403）；吡羅昔康注射液（浙江尖峰藥業(yè)有限公司，規(guī)格為2 mL∶20 mg）；甲醇（色譜純），冰乙酸（AR天津市東區(qū)紅巖試劑廠），二甲基亞砜（AR天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司），水（超純水）。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件：色譜柱：ODS-SP（4.6×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.5%冰乙酸溶液（55∶35）；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：338 nm；柱溫：30 ℃，進(jìn)樣量：20 μL。

2.2干擾試驗(yàn)：精密稱取吡羅昔康對(duì)照品12.19 mg，置100 mL量瓶中，加2 mL二甲替甲酰胺，振搖使溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備液，精密量取儲(chǔ)備液5 mL置25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻；另按處方比例同法配制空白輔料溶液，分別測(cè)定，可見(jiàn)在該色譜條件下，吡羅昔康能達(dá)到基線分離且峰形穩(wěn)定，試劑及輔料不影響吡羅昔康含量測(cè)定。

2.3線性試驗(yàn)：精密量取儲(chǔ)備液1，5，10，15，20 mL，分別置25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，同時(shí)取儲(chǔ)備液，分別測(cè)定。以吡羅昔康對(duì)照品濃度C（μg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性范圍7.9～132.1 μg/mL，回歸方程為：y=66724x-172143 （r=0.9999，n=6），表明吡羅昔康在進(jìn)樣濃度7.9～132.1 μg/mL范圍

通過(guò)載氣可以把其放入到原子化器中進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)比以前的檢測(cè)方法，因?yàn)樵S多基體沒(méi)有辦法進(jìn)入到原子化器中，無(wú)法發(fā)揮出降低基體的作用，背景校正是沒(méi)有任何效果的。而且，儀器結(jié)構(gòu)不難被設(shè)計(jì)成同時(shí)測(cè)定多種元素的模式。目前，這種方法是原子熒光法在生物樣品理化檢驗(yàn)中應(yīng)用范圍最廣的一種形式。除此之外，在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)中，它都發(fā)揮著一定的作用。

內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

表1　含量及有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果（%，n=3）

2.4精密度試驗(yàn)：精密量取儲(chǔ)備液10 mL置25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻后測(cè)定；峰面積的RSD為0.23%（n=5）。

2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)：取精密度試驗(yàn)項(xiàng)下測(cè)試液，在0，2，4，6，12，24 h分別測(cè)定，6次測(cè)定，峰面積的RSD為0.31%，穩(wěn)定性良好。

2.6回收率試驗(yàn)：按處方比例（80%，100%，120%）模擬吡羅昔康注射液，精確配制200 mL，混合均勻，精密量取2 mL置100 mL量瓶中，加2 mL二甲替甲酰胺，振搖使溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取10 mL置25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻后測(cè)定，將所得峰面積代入回歸方程計(jì)算回收率（每個(gè)濃度做三份），結(jié)果3種濃度的總平均回收率為101.12%，RSD為0.13%，n=9。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)：取一樣品，按回收率項(xiàng)下方法制備測(cè)試液，測(cè)得平均含量為99.1%，RSD=0.19%（n=3）。

2.8樣品測(cè)定

2.8.1含量測(cè)定：精密量取吡羅昔康注射液2 mL置100 mL容量瓶中，按回收率項(xiàng)下方法操作，計(jì)算含量（n=3）。

2.8.2有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定。供試品溶液的制備：取本品4 mL，置100 mL量瓶中，加2 mL二甲替甲酰胺，振搖使溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，取5 mL置25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，既得。對(duì)照溶液的制備：精密量取供試品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。陰性空白試驗(yàn)：按處方配制吡羅昔康的陰性空白溶液。專屬性試驗(yàn)：將本品置不同條件下進(jìn)行加速破壞，考察破壞后的產(chǎn)物與主藥的色譜分離情況：取吡羅昔康儲(chǔ)備液5 mL，置4500 Lx光強(qiáng)度下10 d后，加甲醇至10 mL；作為光破壞樣品溶液。取吡羅昔康儲(chǔ)備液10 mL，水浴加熱30 min，放冷后加甲醇至10 mL，作為熱破壞樣品溶液。取吡羅昔康儲(chǔ)備液5 mL，加入1 mol/L的鹽酸溶液，放置1 h后，加1 mol/L的氫氧化鈉溶液1 mL中和，加甲醇至10 mL，作為酸破壞樣品溶液。取吡羅昔康儲(chǔ)備液5 mL，加入1 mol/L的氫氧化鈉溶液，放置1 h后，加1 mol/L的鹽酸溶液1 mL中和，加甲醇至10 mL，作為堿破壞樣品溶液。取吡羅昔康儲(chǔ)備液5 mL，加入10%雙氧水溶液2 mL，水浴30 min后，放冷，加甲醇至10 mL作為氧化破壞樣品溶液。取上述破壞性試驗(yàn)所得溶液，分別測(cè)定，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3倍。

3 結(jié) 果

在酸和堿以及熱、光照和氧化條件下均有不同程度的降解，各降解產(chǎn)物峰與主成分峰均能達(dá)到較好的分離。光破壞時(shí)間越長(zhǎng)，有關(guān)物質(zhì)越多，主成分越少；熱破壞生成的有關(guān)物質(zhì)數(shù)量多；強(qiáng)氧化劑10%雙氧水可以把吡羅昔康完全氧化為有關(guān)物質(zhì)，其中保留時(shí)間為3.802 min的占84.1%。

樣品中吡羅昔康有關(guān)物質(zhì)檢查：取供試品溶液和對(duì)照溶液各20 μL，分別測(cè)定，記錄供試品溶液的色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3倍，以自身對(duì)照法計(jì)算雜質(zhì)含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

4 結(jié) 論

本次選擇高效液相色譜法，線性關(guān)系良好，精密度好，準(zhǔn)確性高，該方法可以用于吡羅昔康的有關(guān)物質(zhì)和含量測(cè)定；吡羅昔康注射液有關(guān)物質(zhì)結(jié)果表明，易被熱，光，酸，堿，氧化物質(zhì)破壞，儲(chǔ)存宜密封避光。

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2.2微波消解-原子熒光光譜法：微波消解法主要是指：把特定酸以及樣品一起存放至消解罐之后，蓋好蓋子，并且放置到微波消解儀中，根據(jù)特定的程序使得生物樣品溶解。這與過(guò)去的消解方法相比，具備如下優(yōu)勢(shì)：①樣品可以被徹底消解掉，并且不易造成易揮發(fā)元素的過(guò)度損失，回收情況較好；②消化的速度相對(duì)較快，空白值不高、沒(méi)有元素?fù)p失并且沒(méi)有污染；③不易造成試劑的浪費(fèi)，給環(huán)境造成的影響比較小。

2.3液相色譜-原子熒光光譜法：這種方法相對(duì)復(fù)雜，它主要由兩個(gè)部分連接組成，即色譜分離系統(tǒng)和光譜檢測(cè)系統(tǒng)。所謂色譜分離系統(tǒng)，指的是把待測(cè)的元素的多種形態(tài)按照停留時(shí)間的差異進(jìn)行排序。換句話說(shuō)，就是使其達(dá)到形態(tài)分離。而接口裝置把色譜分離出來(lái)之后，其有機(jī)態(tài)元素能夠通過(guò)一系列的轉(zhuǎn)化反應(yīng)變成無(wú)機(jī)態(tài)；光譜檢測(cè)系統(tǒng)則會(huì)將待測(cè)的元素轉(zhuǎn)化成一種光譜信號(hào)。在這個(gè)過(guò)程中，要將保留的時(shí)間、光譜波長(zhǎng)等，當(dāng)作定性的參考資料，光強(qiáng)度峰高、峰面積則是用來(lái)作為定量的依據(jù)。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是，能夠使得元素的形態(tài)分析更加準(zhǔn)確，缺點(diǎn)是其儀器的組成部位過(guò)于復(fù)雜，應(yīng)用范圍相對(duì)狹窄。

3 展 望

使用熒光法檢測(cè)生物樣品，儀器方便操作，并且它的性能相對(duì)較好，價(jià)格比較便宜等，現(xiàn)已經(jīng)被廣泛地應(yīng)用到生物樣品檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)中來(lái)。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，當(dāng)下的熒光檢測(cè)研究方向集中表現(xiàn)為：①參照不同的基質(zhì)、目標(biāo)化合物，選擇最為合理的提取方式以及凈化方法。比如固相萃取小柱凈化等；②依據(jù)研發(fā)反應(yīng)活性高、量子產(chǎn)量大等特點(diǎn)，使得檢測(cè)領(lǐng)域得以擴(kuò)寬；③研究熒光檢測(cè)器，與別的分離裝置之間的聯(lián)用接口技術(shù)。最近幾年，由于電學(xué)的不斷進(jìn)步，原子熒光法也得到了一定層次的發(fā)展。在目前出現(xiàn)的新型光源中，如激光、發(fā)光二極管等，使得光強(qiáng)度不斷提升；小型化乃至微型化成為主要發(fā)展趨勢(shì)；在聯(lián)用技術(shù)方面，都得到了不同層次的發(fā)展。

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中圖分類號(hào)：R9

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文章編號(hào)：1671-8194（2016）04-0046-02