黃芪提取物對(duì)IgAN患者IgA1異常糖基化的作用及其分子機(jī)制研究△

高植明（珠海市人民醫(yī)院藥學(xué)部　珠海　519000）

黃芪提取物對(duì)IgAN患者IgA1異常糖基化的作用及其分子機(jī)制研究△

高植明（珠海市人民醫(yī)院藥學(xué)部珠海519000）

目的：考察黃芪提取物對(duì)IgAN患者IgA1異常糖基化的作用及其分子機(jī)制研究。方法：本研究通過分離培養(yǎng)IgA腎病患者和非IgA腎病對(duì)照者的外周血淋巴細(xì)胞，運(yùn)用免疫組化結(jié)合分子生物學(xué)手段，研究黃芪提取物對(duì)IgA1異常糖基化的調(diào)節(jié)作用及其作用機(jī)制。結(jié)果：在IgAN患者的外周淋巴細(xì)胞上清液內(nèi)，黃芪提取物組的IgA1異常糖基化程度顯著降低（P＜0.05），Cosmc mRNA表達(dá)水平顯著提升（P＜0.05）。結(jié)論：黃芪提取物在體外實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出降低IgAN患者IgA1異常糖基化程度的能力，其機(jī)制可能與之調(diào)節(jié)Comsc的基因表達(dá)有關(guān)。

黃芪提取物 IgA腎病 異常糖基化 分子機(jī)制

IgA腎病是1968年首次報(bào)道的腎病類型，患者血清、扁桃體以及腎臟組織中均可發(fā)現(xiàn)IgA1分子鏈區(qū)糖鏈結(jié)構(gòu)異常，是導(dǎo)致腎臟衰竭的最常見原因之一。當(dāng)前針對(duì)IgA腎病還沒有常規(guī)的臨床藥物，尤其是針對(duì)IgA1異常糖基化作用的藥物研究較少。黃芪是用于腎病輔助治療的草本植物，研究顯示，黃芪對(duì)于IgA腎病中的IgA1異常糖基化具有調(diào)節(jié)作用。本文從臨床角度對(duì)黃芪活性成分對(duì)IgA1異常糖基化的作用進(jìn)行研究，探討可能的分子機(jī)制。

1資料與方法

1.1臨床資料：以2012年3月～2013年3月在我院腎內(nèi)科收治的11例IgA患者為研究組進(jìn)行研究，其中男性6例，女性5例，年齡23～45歲，平均年齡（31.5±3.5）歲，經(jīng)過腎穿刺免疫熒光以及病理學(xué)檢查確診為IgA腎病，病程為3個(gè)月～2年。排除標(biāo)準(zhǔn)：①肝腎功能不全者；②糖尿病腎病，狼瘡性腎炎等繼發(fā)性腎病患者；③酗酒或?yàn)E用藥物，以及精神異常者。以同時(shí)期的11例非IgA腎病患者為對(duì)照組，其中男性7例，女性4例，平均年齡（23.5±2.8）歲，患者腎功能正常，均無血尿和蛋白尿。研究組與對(duì)照組在性別構(gòu)成比、血清白蛋白、尿素氮等資料上差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），研究組的年齡、蛋白尿均高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。研究組與對(duì)照組均了解研究內(nèi)容，并且要求簽署知情同意書。

1.2藥品與試劑：黃芪提取物（黃芪多糖、黃芪總皂苷、黃芪總黃酮，自提?。?，試劑盒（AL，USA），小牛血清；RNA提取試劑（Trizol，Invitrogen公司），反轉(zhuǎn)錄酶系、Taq酶系（北京索奧公司），焦碳酸二乙酯（DEPC，美國Sigma公司），三磷酸堿基脫氧核苷酸（dNTPs，上海生物工程公司），RNA酶抑制劑（RNasin，美國Promega公司）。

1.3方法：采用血清樣本復(fù)孔中的吸光度值均值，測試IgA1濃度與糖基化水平。采用熒光定量PCR反應(yīng)測定β-1，3半乳糖基轉(zhuǎn)移酶及其伴侶分子Cosmc mRNA水平。

目標(biāo)引物：β1，3GT上游5’-GGC TCA CAG CCA GTA GGC ATA-3’；下游5’-GCT GCC CAC CAG ATT CTG A-3’；Cosmc上游5’-CTA GAC GCG GAT GAA GTG CAA-3’；下游5’-CCA ATG GAA TCT GAT TAC TGT TTG G-3’；GAPDH上游5’-GAA GGT GAA GGT CGG AGT C-3’；下游5’-GAA GAT GGT GAT GGG ATT TC-3’；

探針：β1，3GT 5’FAM-AGC GGG AAT GAA AAT CGA GC A C-T AMARA-3’；Cosmc 5’FAM-ACT TCT CCA TAG AGG AGT TGT TGC AA-TAMARA-3’；GAPDH5’FAM-CAA GCT TCC CGT TCT CAG CC-TAMRA-3’。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：將數(shù)據(jù)輸入SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1研究組與對(duì)照組結(jié)果比較

表1 IgA腎病患者和非IgA腎病患者外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液IgA濃度與糖基化程度比較

2.2 IgA腎病患者和正常人外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液β1，3GT mRNA和Cosmc mRNA表達(dá)水平

表2 IgA腎病患者和非IgA腎病患者外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液β1，3GT mRNA與上清液Cosmc mRNA表達(dá)水平（±s，n=11）

表2 IgA腎病患者和非IgA腎病患者外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液β1，3GT mRNA與上清液Cosmc mRNA表達(dá)水平（±s，n=11）

注：與對(duì)照組相比，*P＜0.05；與空白組相比，△P＜0.05。

組別　　β1，3GT mRNA Cosmc mRNA空白組　　黃芪提取物組　　空白組　　黃芪提取物組研究組　0.80±0.20　0.78±0.11　0.78±0.16　0.98±0.29△對(duì)照組　0.76±0.13　0.79±0.22　0.97±0.23　1.01±0.17

3討論

人體IgA有兩個(gè)亞類：IgA1和IgA2。IgA1的糖基化缺陷導(dǎo)致其自身聚集或與其他糖蛋白分子形成大分子復(fù)合物而沉積在腎小球系膜區(qū)，引起系膜細(xì)胞和基質(zhì)增生，最終導(dǎo)致IgA腎病。糖基化酶異常，IgA過量合成是低糖基化IgA分子形成的主要原因。本文的研究顯示，采用黃芪提取物能夠?qū)gA1的異常糖基化程度進(jìn)行抑制，檢測藥物干預(yù)后外周血淋巴細(xì)胞CIGALT1的活性和Cosmc mRNA的表達(dá)水平可知，IgA腎病患者的用藥組和空白組中的β-1，3GTmRAN表達(dá)沒有顯著差異，黃芪提取物的Cosmc mRNA的表達(dá)水平與空白組相比有顯著提高（P＜0.05），因此可以推斷，黃芪提取物可能是通過提高β-1，3GT的伴侶蛋白Cosmc的表達(dá)，從而起到對(duì)IgA異常糖基化的調(diào)節(jié)作用。

［1］謝林伸，王立，黃俊，等.IgA腎病中IgA1異常糖基化的致病機(jī)制［J］.生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志，2010，27（1）：221-228.

［2］沈穎，周楠.中西醫(yī)結(jié)合治療兒童IgA腎病現(xiàn)狀與展望［J］.實(shí)用兒科臨床雜志，2012，27（5）：321-323.

［3］昝日增，胡萬楊，余躍，等.黃芪中主要活性成分提取工藝的研究［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2010，128（12）：2570-2573.

［4］李翔，賀大林，陳興發(fā)，等.黃芪提取成分對(duì)沖擊波致家兔腎損傷模型中P-選擇素表達(dá)的影響［J］.中國中藥雜志，2005，30（20）：1606-1609.

△本文是珠海市醫(yī)學(xué)科研課題（No.2014098）支持。

Research of the regulation effect of Astragalus extract on abnormal glycosylation of IgA1 of lgA nephrosis patient and its mechanism

Gao Zhiming（Zhuhai People's Hospital，Guangdong Zhuhai 519000，China）

Objective：To investigate the effect of Astragalus extract on abnormal glycosylation of IgA1 in IgAN patients and its mechanism.Methods：In this study，peripheral blood lymphocytes in IgAN and non-IgAN patients were isolated and cultured，and we tried to found out whether and how Astragalus extracts could regular abnormal glycosylation of IgA1 by immunohistochemistry and molecular biology.Results：In IgAN patients，the degree of abnormal glycosylation of IgA1 in Astragalus extracts group reduced significantly（P＜0.05），while Cosmc mRNA levels rose significantly（P＜0.05）.Conclusion：In vitro experiments，Astragalus extracts could reduce the degree of abnormal glycosylation of IgA1 in IgAN patients，which might probably have something to do with increasing Comsc gene expression.

Astragalus extract IgA nephropathy Abnormal glycosylation Molecular mechanisms

R965

B

1672-8351（2016）08-0115-02