南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2014年臨床常見(jiàn)革蘭陰性菌分布及耐藥分析

魯科峰，許雨喬，王　玨，夏文穎，孫鵬飛，文 怡，陳友華，梅亞寧

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南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2014年臨床常見(jiàn)革蘭陰性菌分布及耐藥分析

魯科峰1 ，2，許雨喬1，王玨1，夏文穎1，孫鵬飛1，文 怡1，陳友華1，梅亞寧1

摘要：目的 分析南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2014年臨床分離革蘭陰性菌的分布及其對(duì)常用抗菌藥物的耐藥性。方法 細(xì)菌鑒定采用API系統(tǒng)或VITEK-2 Compact自動(dòng)鑒定儀；細(xì)菌藥物敏感試驗(yàn)采用紙片擴(kuò)散法（K-B法）或稀釋法；數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析用WHONET 5.6軟件。結(jié)果 2014年共分離出各類細(xì)菌共7 931株，其中革蘭陰性菌5 088株，占64.2 %，排名前3位的是大腸埃希菌、鮑曼不動(dòng)桿菌和肺炎克雷伯菌。共分離耐碳青霉烯類腸桿菌科細(xì)菌195株，占腸桿菌科的6.9 %；多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌613株，占鮑曼不動(dòng)桿菌的66.5 %；多重耐藥銅綠假單胞菌197株，占銅綠假單胞菌的28.7 %。結(jié)論 2014年該院革蘭陰性菌耐藥主要為耐碳青霉烯類腸桿菌科細(xì)菌、多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌和多重耐藥銅綠假單胞菌，進(jìn)行細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)有利于指導(dǎo)臨床合理用藥。

關(guān)鍵詞：革蘭陰性菌； 耐藥監(jiān)測(cè)； 多重耐藥菌

革蘭陰性菌是引起醫(yī)院感染的主要病原菌。近10年臨床對(duì)廣譜抗菌藥物的廣泛使用，使耐碳青霉烯類腸桿菌科細(xì)菌（CRE）、多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌和多重耐藥銅綠假單胞菌數(shù)量不斷增加［1-3］，細(xì)菌耐藥已成為我們面臨并急需解決的一大挑戰(zhàn)。流行病學(xué)調(diào)查顯示細(xì)菌耐藥性具有地域性，不同地區(qū)不同醫(yī)院細(xì)菌的耐藥性不全相同，南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院是江蘇省規(guī)模最大的三級(jí)甲等醫(yī)院之一，患者覆蓋南京及周邊地區(qū)。為了解本地區(qū)細(xì)菌耐藥情況，本文分析了2014年我院臨床分離的革蘭陰性菌耐藥性監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)，為指導(dǎo)臨床合理用藥提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1菌株來(lái)源

5 088株革蘭陰性菌分離自我院2014年1—12月臨床標(biāo)本，包括呼吸道標(biāo)本、泌尿道標(biāo)本、傷口膿性分泌物、血液、無(wú)菌體液和糞便等。

1.2菌株鑒定及藥敏試驗(yàn)

細(xì)菌鑒定采用API鑒定系統(tǒng)或VITEK-2 Compact全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀。細(xì)菌藥物敏感試驗(yàn)采用VITEK-2 Compact全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀或紙片擴(kuò)散法（K-B法）。藥敏結(jié)果按照美國(guó)CLSI 2014年版標(biāo)準(zhǔn)判讀。質(zhì)控菌株為大腸埃希菌ATCC 25922、銅綠假單胞菌ATCC 27853和金黃色葡萄球菌ATCC 25923。

本研究中多重耐藥（MDR）菌株定義為：該菌株對(duì)青霉素類、頭孢菌素類、碳青霉烯類、氟喹諾酮類和氨基糖苷類中的3類或以上抗菌藥物不敏感［4］。

1.3統(tǒng)計(jì)方法

采用世界衛(wèi)生組織細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)網(wǎng)推薦的WHONET 5.6軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2.1細(xì)菌構(gòu)成及標(biāo)本來(lái)源

2.1.1 細(xì)菌 2014年1—12月全院共收集細(xì)菌7 931株，其中革蘭陰性菌5 088株，占64.2 %。本院革蘭陰性菌排名前5位的依次是大腸埃希菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、克雷伯菌屬、銅綠假單胞菌和腸桿菌屬，見(jiàn)表1。

2.1.2 標(biāo)本來(lái)源 標(biāo)本主要來(lái)自呼吸道、泌尿道、傷口膿性分泌物、血液、糞便、無(wú)菌體液和腦脊液等，排名前3的是呼吸道標(biāo)本、泌尿道標(biāo)本和傷口膿性分泌物，分別占59.8 %、18.3 %和10.4 %。呼吸道標(biāo)本分離菌主要是鮑曼不動(dòng)桿菌、肺炎克雷伯菌和銅綠假單胞菌；泌尿道標(biāo)本分離菌以大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇異變形桿菌為主；傷口膿性分泌物分離菌主要是大腸埃希菌、鮑曼不動(dòng)桿菌和銅綠假單胞菌。

2.2革蘭陰性菌藥物敏感性分析

2.2.1 腸桿菌科細(xì)菌 2014年共分離到腸桿菌科

2 　結(jié)果

細(xì)菌2 843株，占革蘭陰性菌的55.9 %。表2為腸桿菌科主要屬的細(xì)菌耐藥情況，大腸埃希菌對(duì)頭孢他啶的耐藥率為39.8 %，對(duì)頭孢哌酮-舒巴坦、亞胺培南和美羅培南的耐藥率分別為30.3 %、1.5 % 和0.8 %。克雷伯菌屬對(duì)美羅培南的耐藥率為8.2 %，對(duì)亞胺培南耐藥率為13.6 %。腸桿菌屬和枸櫞酸桿菌屬對(duì)亞胺培南和美羅培南的耐藥率均＜8 %。變形桿菌屬對(duì)美羅培南的耐藥率為0.6 %。沙雷菌屬對(duì)頭孢他啶、頭孢吡肟的耐藥率均＜10 %，對(duì)亞胺培南和美羅培南耐藥率分別為13.8 %和5.0%。2014年共分離5株沙門菌屬、1株志賀菌屬和17株摩根菌屬，因樣本量太少不予統(tǒng)計(jì)藥敏結(jié)果。

表1　革蘭陰性菌分布及構(gòu)成比Table 1 Distribution of gram-negative bacterial species in 2014

2014年共分離195株CRE，主要是肺炎克雷伯菌，占53.3 %，其次為大腸埃希菌，占12.3%。黏質(zhì)沙雷菌、變形桿菌屬和腸桿菌屬中碳青霉烯類耐藥菌株有增多趨勢(shì)。2.2.2 不發(fā)酵糖革蘭陰性菌 臨床該類菌占革蘭陰性桿菌的32.4 %，以鮑曼不動(dòng)桿菌和銅綠假單胞菌為最多。其中鮑曼不動(dòng)桿菌921株，占18.1 %；87.4 %鮑曼不動(dòng)桿菌來(lái)自痰液標(biāo)本；藥敏結(jié)果顯示，鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)亞胺培南和美羅培南的耐藥率分別為67.6 %和68.4 %，其中MDR有613株，占66.5 %；MDR鮑曼不動(dòng)桿菌主要分布在ICU，占全院的59.8 %。銅綠假單胞菌683株，占13.4 %，其中74.1 %的菌株來(lái)自痰液標(biāo)本，對(duì)亞胺培南和美羅培南的耐藥率分別為29.9 %和24.0 %，2014年共分離MDR銅綠假單胞菌197株，占28.7 %。嗜麥芽窄食單胞菌203株，對(duì)米諾環(huán)素、甲氧芐啶-磺胺甲唑和左氧氟沙星的耐藥率為4.1%～15.5 %。洋蔥伯克霍爾德菌42株，對(duì)頭孢他啶和美羅培南的耐藥率分別為36.1 %和44.3%，對(duì)甲氧芐啶-磺胺甲唑和左氧氟沙星的耐藥率則分別為12.9 % 和18.8 %，見(jiàn)表3。

2.2.3 其他革蘭陰性菌 2014年全年共分離了48株流感嗜血桿菌，對(duì)氨芐西林敏感率為42.9 %，對(duì)亞胺培南和美羅培南的敏感率分別為95.7 %和92.0 %，見(jiàn)表4。本實(shí)驗(yàn)室還分離了布魯菌屬、巴斯德菌屬、希瓦菌屬、金黃桿菌屬和艾肯菌屬等，均在10株以內(nèi)，不作統(tǒng)計(jì)分析。

表2　腸桿菌科細(xì)菌對(duì)抗菌藥物耐藥率和敏感率Table 2 Susceptibility of Enterobacteriaceae species to antimicrobial agents

.表3　不發(fā)酵糖革蘭陰性菌對(duì)抗菌藥物耐藥率和敏感率Table 3 Susceptibility of the non-fermenting gram-negative bacteria to antimicrobial agents

表4　流感嗜血桿菌對(duì)抗菌藥物耐藥率和敏感率Table 4 Susceptibility of Haemophilus infuenzae isolates to antimicrobial agents

3　討論

2014年我院臨床共分離出細(xì)菌7 931株，以革蘭陰性菌為主，占64.2 %。革蘭陰性菌中檢出率最高的是大腸埃希菌，其次為克雷伯菌屬和鮑曼不動(dòng)桿菌，與2013年江蘇地區(qū)革蘭陰性菌分離情況相似［5］。從標(biāo)本來(lái)源分析，2014年分離自呼吸道標(biāo)本的細(xì)菌占59.8 %，較2013江蘇地區(qū)平均水平39%明顯上升［5］，痰液臨床價(jià)值有限，比例過(guò)高，來(lái)自尿液、血液等無(wú)菌體液的比例則相對(duì)較低。

革蘭陰性菌對(duì)抗菌藥物耐藥問(wèn)題日益嚴(yán)重。2014年我院臨床分離的腸桿菌科細(xì)菌對(duì)第三代頭孢菌素的耐藥率為34.5 %，高于2013年全國(guó)平均水平27.6%［6］。腸桿菌科細(xì)菌對(duì)美羅培南的耐藥率為3.3%，低于2013年江蘇地區(qū)的8.1%和全國(guó)平均水平6.7%，對(duì)亞胺培南的耐藥率為5.8%，高于全國(guó)水平的5.1%，但比江蘇地區(qū)平均水平8.4%低［5-6］。2014年本院CRE的分離率為6.8 %，與2013年江蘇地區(qū)平均水平8%相比有所下降［4］，主要集中于ICU患者。與前幾年相比，除克雷伯菌屬和埃希菌屬，變形桿菌屬和腸桿菌科等CRE菌株有上升趨勢(shì)。CRE治療目前正面臨著無(wú)藥可用的困境，有研究表明，2種或2種以上抗菌藥物聯(lián)合用藥優(yōu)于單一用藥，碳青霉烯類協(xié)同氨基糖苷類或替加環(huán)素能夠降低CRE感染患者病死率［7］。

不發(fā)酵糖革蘭陰性桿菌耐藥也是近年來(lái)臨床抗感染的難點(diǎn)，尤其是在ICU。2014年本院分離的鮑曼不動(dòng)桿菌占革蘭陰性菌的18.1 %，高于2013年江蘇地區(qū)分離率［4］；MDR株的分離率為66.5 %，耐藥率高于2013年江蘇地區(qū)平均水平［4］，表明鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯類耐藥有重新上升趨勢(shì)。鮑曼不動(dòng)桿菌分離自痰液標(biāo)本，主要集中在ICU，因此，區(qū)分感染病原菌還是定植菌尤為重要。本次分離的銅綠假單胞菌占13.4 %，與2013年江蘇地區(qū)相比略有下降，其對(duì)碳青霉烯類的耐藥率無(wú)明顯變化。

醫(yī)院感染仍以革蘭陰性菌為主，細(xì)菌耐藥問(wèn)題較為突出的是CRE、MDR鮑曼不動(dòng)桿菌和銅綠假單胞菌。需加強(qiáng)醫(yī)院感染防控和細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)，指導(dǎo)臨床合理使用抗生素。

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中圖分類號(hào)：R378

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1009-7708（2016）03-0323-04

DOI：10.16718/j.1009-7708.2016.03.012

收稿日期：2015-06-11 修回日期：2015-11-29

基金項(xiàng)目：江蘇省實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室重大基金項(xiàng)目（XK201114）。

作者單位：1.南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，南京 210000；2.常州市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科。

作者簡(jiǎn)介：魯科峰（1980—），男，本科，主治醫(yī)師，主要從事細(xì)菌耐藥性研究。

通信作者：許雨喬，E-mail：joe8165@163.com。

Distribution and antimicrobial resistance of clinical gram-negative bacteria in the First Affliated Hospital of Nanjing Medical University during 2014

LU Kefeng， XU Yuqiao， WANG Jue， XIA Wenying， SUN Pengfei， WEN Yi， CHEN Youhua， MEI Yaning. （Department of Laboratory Medicine， the First Affliated Hospital of Nanjing Medical University， Nanjing 210000， China）

Abstract:Objective To investigate the distribution and antimicrobial resistance profile of clinical gram-negative bacterial isolates in the First Affliated Hospital of Nanjing Medical University during 2014. Methods Bacteria identifcation was performed by API system or the VITEK-2 Compact automatic identifcation system. Disk diffusion susceptibility testing or VITEK-2 Compact automatic identification system was used to determine the susceptibility to antimicrobial agents. All data were analyzed using WHONET 5.6 software. Results Among the total 7 931 clinical isolates in 2014， gram-negative bacteria accounted for 64.2% （5 088/7 931）. The top three pathogens were E. coli， A. baumannii and K. pneumoniae. Notably， during the year 2014， 195 strains of carbapenem-resistant Enterobacteriaceae were isolated， about 6.9% of all the Enterobacteriaceae isolates. Meanwhile， 613 （66.5%） strains of multiple drug resistant A. baumannii and 197 （28.7%） strains of multiple drug resistant P. aeruginosa were isolated. Conclusion During the year 2014， the resistance of the gram-negative bacteria in this hospital is mainly characterized by carbapenem-resistant Enterobacteriaceae， multiple drug resistant A. baumannii and multiple drug resistant P. aeruginosa. Surveillance of antimicrobial resistance is benefcial for rational use of antibiotics.

Key words:gram-negative bacterium； bacterial resistance surveillance； multiple drug resistant bacterium