猴頭菇多糖對D-半乳糖小鼠體內抗氧化作用的研究

吳美媛，余甜女，王喜周（麗水學院成教學院，浙江麗水323000）

猴頭菇多糖對D-半乳糖小鼠體內抗氧化作用的研究

吳美媛，余甜女，王喜周*
（麗水學院成教學院，浙江麗水323000）

研究猴頭菇多糖的體內抗氧化活性。通過頸背部皮下注射D-半乳糖，制備衰老小鼠模型，測定猴頭菇多糖對D-半乳糖小鼠血清及肝臟組織內總超氧化物歧化酶（T-SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）及蛋白質羰基含量的影響。結果表明，D-半乳糖衰老模型小鼠血清及肝臟內T-SOD、GSH含量顯著降低（P＜0.01），MDA與蛋白質羰基含量明顯升高（P＜0.01），猴頭菇多糖可以顯著提高D-半乳糖小鼠血清和肝臟內T-SOD、GSH含量，降低MDA與蛋白質羰基含量，對D-半乳糖小鼠，猴頭菇多糖表現(xiàn)出良好的體內抗氧化作用。

猴頭菇多糖；體內；抗氧化；自由基

猴頭菇是一種易人工栽培的食用真菌，味道鮮美，性平味甘，有補脾健胃，助消化，安五臟之功效，歷代醫(yī)學典籍中均有記載。猴頭菇不僅具有很高的食用價值，還具有一定的保健功能，是我國常用的健康食材。近年來，隨著人們養(yǎng)生理念的興起和對食用真菌的開發(fā)利用研究不斷深入，食用真菌中多糖逐漸成為研究熱點，研究發(fā)現(xiàn)多糖具有增強免疫力、抗氧化、降血脂、延緩衰老等活性［1］。本文研究了猴頭菇多糖對D-半乳糖所致的衰老模型小鼠體內抗氧化作用，為猴頭菇食品的進一步研究開發(fā)提供一些參考。

1　材料

猴頭菇多糖：浙江方格藥業(yè)，純度大于90%；D-半乳糖（sigma）；丙二醛（Malondialdehyde，MDA）試劑盒、總超氧化物歧化酶（Total Superoxide Dismutase，TSOD）試劑盒、谷胱甘肽（Glutathione，GSH）試劑盒、蛋白質羰基試劑盒均購于上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

昆明種雄性小鼠（清潔級），18 g～22 g：購自上海交通大學實驗動物中心，許可證號：生產許可SCXK（滬）2013-0021。

2　方法

2.1分組、造模與實驗方案

取60只小鼠，按照隨機隨機數字表法分為正常組、模型組、猴頭菇多糖低、中、高劑量組，每組12只，模型組和猴頭菇多糖組小鼠頸背部皮下注射D-半乳糖（200 mg/kg體重）復制衰老小鼠模型，正常組注射等體積的生理鹽水。每日給藥一次，連續(xù)給藥6周，注射D-半乳糖4周時，猴頭菇多糖組給藥組灌胃給于100、200 mg/mL和300 mg/mL的猴頭菇多糖溶液，灌胃體積為20 mL/kg體重，正常組和模型組灌胃相同體積的生理鹽水［2-3］。

2.2血清及肝組織樣品制備

各組小鼠眼眶取血，4℃條件下3 000 r/mim離心15 min，取上清（即血清）備用。小鼠取血后脫臼處死，快速取出肝組織，0℃～2℃生理鹽水洗去淤血。精密稱取肝組織0.5 g，加入0℃生理鹽水4.5 mL，置勻漿器中冰水浴迅速研磨制成組織勻漿，4℃條件下4 000 r/min離心10 min，取上清，備用［4-5］。

2.3T-SOD、MDA、GSH及蛋白質羰基含量測定

嚴格按照T-SOD、MDA、GSH及蛋白質羰基水平測定試劑盒操作說明測定血清及肝臟組織內T-SOD、MDA、GSH及蛋白質羰基水平含量。

2.4數據處理

3　結果與分析

3.1猴頭菇多糖對D-半乳糖小鼠血清中T-SOD、MDA、GSH及蛋白羰基含量的影響

猴頭菇多糖對D-半乳糖小鼠血清中T-SOD、MDA、GSH及蛋白質羰基含量的影響見表1。

表1猴頭菇多糖對D-半乳糖小鼠血清中T-SOD、MDA、GSH及蛋白質羰基含量的影響（±SD）Table 1　The effect of polysaccharide from Hericium erinaceus on the contents of T-SOD，MDA，GSH and protein carbonyl in serum of aging mice induced by D-galactose

表1猴頭菇多糖對D-半乳糖小鼠血清中T-SOD、MDA、GSH及蛋白質羰基含量的影響（±SD）Table 1　The effect of polysaccharide from Hericium erinaceus on the contents of T-SOD，MDA，GSH and protein carbonyl in serum of aging mice induced by D-galactose

注：▲與正常組比較P＜0.05；▲▲與正常組比較P＜0.01；★與模型組比較P＜0.05；★★與模型組比較P＜0.01。

組別　T-SOD/（U/mL） MDA/（nmol/mL） GSH/（mg/L）　蛋白質羰基/ （nmol/mgprot）對照組　154.32±26.33　12.37±6.18　13.68±2.25　6.43±1.02模型組　94.21±23.17▲▲　37.25±13.14▲▲　7.12±1.33▲▲　12.80±1.54▲▲低劑量組　105.41±20.56　25.66±7.25★　8.92±2.17★　10.48±1.77中劑量組　122.88±23.72★★　19.68±9.44★★　10.15±3.72★　7.15±1.64★★高劑量組　147.25±25.34★★　15.50±4.13★★　12.65±3.27★★　7.13±2.22★★

由表1可知，模型組小鼠血清中T-SOD、GSH含量與對照組相比顯著下降（P＜0.01），MDA及蛋白質羰基含量顯著上升（P＜0.01），表明造模成功。100 mg/mL猴頭菇多糖對衰老小鼠血清中MDA含量下降和GSH含量上升有顯著影響（P＜0.05），對T-SOD水平升高及蛋白質羰基含量降低無明顯影響（P＞0.05），200 mg/mL 和300 mg/mL猴頭菇多糖對衰老小鼠血清中MDA及蛋白質羰基含量下降、GSH和T-SOD水平升高均有極顯著影響（P＜0.01）。猴頭菇多糖能提高衰老小鼠血清中SOD和GSH水平，并且能降低血清中MDA及蛋白質羰基的含量，且其活性與濃度正相關，其中高劑量多糖組效果最好，小鼠血清中T-SOD、MDA、GSH及蛋白質羰基含量基本接近對照組。

3.2猴頭菇多糖對D-半乳糖小鼠肝臟組織中TSOD、MDA、GSH及蛋白質羰基含量的影響

猴頭菇多糖對D-半乳糖小鼠肝臟組織中TSOD、MDA、GSH及蛋白質羰基含量的影響見表2。

表2猴頭菇多糖對D-半乳糖小鼠肝臟組織中T-SOD、MDA、GSH及蛋白質羰基含量的影響（±SD）Table 2　The effect of polysaccharide from Hericium erinaceus on the contents of T-SOD，MDA，GSH and protein carbonyl in liver tissue of aging mice induced by D-galactose

表2猴頭菇多糖對D-半乳糖小鼠肝臟組織中T-SOD、MDA、GSH及蛋白質羰基含量的影響（±SD）Table 2　The effect of polysaccharide from Hericium erinaceus on the contents of T-SOD，MDA，GSH and protein carbonyl in liver tissue of aging mice induced by D-galactose

注：▲與正常組比較P＜0.05；▲▲與正常組比較P＜0.01；★與模型組比較P＜0.05；★★與模型組比較P＜0.01。

蛋白質羰基/ （nmol/mgprot）對照組　197.43±20.68　0.82±0.30　6.72±1.34　3.43±0.42模型組　152.34±10.57▲▲　2.54±0.36▲▲　4.47±0.71▲▲　7.86±0.75▲▲低劑量組　164.94±18.61　1.97±0.28★★　5.27±0.88★　6.58±0.69★★中劑量組　186.74±21.33★★　1.51±0.17★★　6.34±1.14★★　4.36±0.53★★高劑量組　203.41±15.63★★　1.03±0.21★★　7.13±1.51★★　3.13±0.22★★組別　T-SOD/ （U/mgprot）MDA/ （nmol/mgprot）GSH/ （mg/gprot）

可知模型組肝臟組織中T-SOD、GSH含量與對照組相比顯著下降（P＜0.01），MDA和蛋白質羰基含量顯著上升（P＜0.01）。100 mg/mL猴頭菇多糖可以顯著提高衰老小鼠肝臟組織中GSH水平（P＜0.05），極顯著降低MDA和蛋白質羰基含量（P＜0.01），對TSOD水平升高無明顯影響（P＞0.05）。200 mg/mL和300 mg/mL猴頭菇多糖對衰老小鼠肝臟組織中MDA和蛋白質羰基含量下降、GSH和T-SOD水平升高均有極顯著影響（P＜0.01）。綜上，猴頭菇多糖能提高衰老小鼠肝臟組織中SOD和GSH水平，并且能降低MDA和蛋白質羰基的含量，且其活性與濃度正相關，其中高劑量多糖組效果最好，小鼠肝臟組織中T-SOD、GSH和蛋白質羰基含量優(yōu)于對照組，MDA含量基本接近對照組。

4　結論與討論

在正常代謝條件下，生物體內自由基處于產生與消除的動態(tài)平衡中，若水平過量則會導致生物體代謝功能紊亂，引發(fā)疾病。D-半乳糖作為一種營養(yǎng)成分參與機體葡萄糖代謝過程，濃度增高則其代謝產物半乳糖醇會在細胞內大量堆積而引起細胞功能障礙，從而破壞機體抗氧化系統(tǒng)，引起自由基積聚，產生過氧化效應。本研究通過向小鼠注射D-半乳糖制造小鼠氧化衰老模型，考察不同劑量猴頭菇多糖對氧化衰老小鼠機體的修復能力。

SOD是構成機體酶促抗氧化防御系統(tǒng)的關鍵酶，參與機體自由基清除代謝反應，能直接反應體內抗氧化功能。MDA是不飽和脂肪酸被自由基攻擊后生成的氧化代謝產物，能反應體內脂質過氧化程度。GSH通過還原反應將自由基和過氧化物還原成水和羥基化物，降低兩者對細胞膜的損害，保障細胞的正常結構和功能，其水平高低可反映機體氧化修復能力的強弱［7-9］。蛋白羰基主要是由于蛋白多肽鏈的Pro、Ser、Thr 或Tyr等殘基被氧化而降解形成的衍生物，其含量高低可反映蛋白質氧化程度的高低［10］。本研究以D-半乳糖小鼠血清及肝臟組織內T-SOD、MDA、GSH及蛋白質羰基含量為指標評價猴頭菇多糖的抗氧化活性。

本研究結果顯示，模型組小鼠血清和肝臟組織中T-SOD、GSH水平顯著下降，MDA水平顯著升高，肝臟組織中蛋白羰基類化合物水平顯著升高，猴頭菇多糖對小鼠血清和肝臟組織中T-SOD、GSH水平，降低MDA水平有顯著提高作用，能顯著降低肝臟組織中蛋白羰基類化合物水平，高劑量多糖組小鼠的抗氧化修復能力基本接近甚至優(yōu)于對照組。研究結果表明猴頭菇多糖具有良好的體內抗氧化活性，且其抗氧化活性與濃度正相關，具有較大的開發(fā)潛力，在功能食品以及日化用品領域應用前景廣闊。

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Investigation on the Antioxidant Effects in Vivo of Hericium Polysaccharides on Aging Mice Induced by D-Galactose

WU Mei-yuan，YU Tian-nü，WANG Xi-zhou*
（Continuing Education College of Lishui University，Lishui 323000，Zhejiang，China）

To study the antioxidant effects in vivo of polysaccharide from Hericium erinaceus on aging mice induced by D-galactose.Mice were subcutaneous injected with D-galactose at the neck back to establish the aging model，the antioxidant activity in vivo of polysaccharide from Hericium erinaceus was evaluated by measure the contents of T-SOD，MDA，GSH and protein carbonyl in serum and liver tissue.The results showed that the contents of T-SOD and GSH in serum and liver tissue of aging mice induced by D-galactose were reduced significantly（P＜0.01），the contents of MDA and protein carbonyl were increased significantly（P＜0.01），Hericium polysaccharides was effective in improving the the contents of T-SOD and GSH in serum and liver tissue of aging mice induced by D-galactose and reducing the contents of MDA and protein carbonyl，have strong antioxidant activity in vivo.

Hericium polysaccharides；in vivo；antioxidant activity；free radical

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.10.014

吳美媛（1973—），女（漢），實驗師，學士，研究方向：天然藥物活性成分提取及純化研究。
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2016-03-24