荔枝皮多酚體內(nèi)抗氧化的作用研究

楊子明，顏小捷，喬雪，黃永林，陳月圓，劉金磊，李典鵬，*（.廣西植物功能物質(zhì)研究與利用重點實驗室廣西壯族自治區(qū)中國科學院廣西植物研究所，廣西桂林54006；.廣西中醫(yī)藥大學，廣西南寧53000）

荔枝皮多酚體內(nèi)抗氧化的作用研究

楊子明1，顏小捷1，喬雪2，黃永林1，陳月圓1，劉金磊1，李典鵬1，*
（1.廣西植物功能物質(zhì)研究與利用重點實驗室廣西壯族自治區(qū)中國科學院廣西植物研究所，廣西桂林541006；2.廣西中醫(yī)藥大學，廣西南寧530001）

研究荔枝皮多酚對小鼠體內(nèi)抗氧化作用的影響。將小鼠隨機分成空白組、陽性組、多酚組、酸解組及堿解組5個組，分別灌胃蒸餾水、維生素E、荔枝皮多酚、荔枝皮多酚酸解產(chǎn)物及堿解產(chǎn)物。15 d后，眼球取血，分離血清，測定抗氧化酶活性及自由基濃度；取肝臟勻漿，低溫離心，取上清液測定抗氧化酶活性及自由基濃度。結(jié)果表明荔枝皮多酚、荔枝皮多酚酸解產(chǎn)物及堿解產(chǎn)物都可以升高肝臟、腎臟中總抗氧化能力，降低血清中總抗氧化能力；荔枝皮多酚及酸解產(chǎn)物可以降低血清、肝臟中MDA含量，荔枝皮多酚堿解產(chǎn)物可以降低血清中MDA含量、升高腎臟中MDA含量；荔枝皮多酚及酸解產(chǎn)物可以升高肝臟中SOD活性。因此荔枝皮多酚及其酸解產(chǎn)物、堿解產(chǎn)物具有一定的抗氧化作用。

荔枝皮多酚；超氧化物歧化酶；丙二醛；總抗氧化能力；小鼠

機體內(nèi)的抗氧化酶是一類在機體組織細胞內(nèi)具有極高的相對特異性，協(xié)同構(gòu)成阻止活性氧損傷機體防御體系的重要酶，起著清除體內(nèi)自由基的作用［1-2］。自由基是人體進行生命活動時所產(chǎn)生的一種活性分子。自由基對人體具有一定的生理作用，但是體內(nèi)自由基過多，就可導致細胞和組織器官損傷、誘發(fā)各種疾病、加速機體衰老。正常情況下，人體內(nèi)自由基的生成和清除處于動態(tài)平衡中。當機體處于某些疾病或外源物質(zhì)入侵后，自由基代謝就會發(fā)生異常而產(chǎn)生過多的自由基，過多的自由基造成體內(nèi)氧化應激而引發(fā)各種疾病。若此時人體內(nèi)的抗氧化能力不足，無法清除過多的自由基，就會導致人體健康受損［1，3-4］。

荔枝為無患子科常綠植物的果實，主產(chǎn)于我國廣東、廣西、福建等地，目前我國荔枝年產(chǎn)量約160萬t，占世界荔枝總產(chǎn)量80%以上［5］。在荔枝的深加工過程中產(chǎn)生了約40%鮮果質(zhì)量的果皮和果核廢棄物，大量荔枝果皮作為大宗農(nóng)產(chǎn)品廢棄物至今未能較好地得到有效開發(fā)和利用［6］。因此，減少荔枝采后損失、提高荔枝果皮加工利用率已成為荔枝產(chǎn)業(yè)發(fā)展中需要迫切解決的問題。研究表明荔枝果皮中含有大量的多酚類化合物，多酚類物質(zhì)具有抗氧化、抗腫瘤、預防心血管疾病、延緩衰老等多種生物活性［5-6］。已經(jīng)有研究報道荔枝皮多酚具有體外抗氧化作用［7］，但體內(nèi)抗氧化功能鮮見報道，為了更全面的掌握荔枝果皮多酚的抗氧化功能，本研究對荔枝多酚體內(nèi)抗氧化作用進行了研究。

1　材料與方法

1.1試劑及儀器

總抗氧化能力（T-AOC）試劑盒、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒、丙二醛（MDA）試劑盒：南京建成生物工程研究所。

RT-9100型半自動生化分析儀：深圳雷杜生命科學股份有限公司；TGL-16R型高速冷凍離心機：珠海黑馬公司；METTLER AT200電子天平：梅特樂-托利多儀器上海有限公司。

1.2動物及材料

SPF級昆明種小鼠，體重18 g～22 g，湖南斯萊克景達實驗動物有限公司。生產(chǎn)許可證號：SCXK（湘）2009-0004。

荔枝皮多酚的制備：取適量新鮮荔枝皮，用80%乙醇室溫浸泡2次，過濾，合并濾液，減壓濃縮濾液，濾除葉綠素及蠟質(zhì)后繼續(xù)濃縮得浸膏，浸膏冷凍干燥后得到干浸膏。測得干浸膏多酚含量為21%。

荔枝皮多酚酸解產(chǎn)物制備：稱取適量荔枝皮提取物，加入60%乙醇溶液及2 mol/L鹽酸溶液，加熱冷凝回流8 h，中和后減壓濃縮干燥即得荔枝皮提取物酸解產(chǎn)物。

荔枝皮多酚堿解產(chǎn)物制備：稱取適量荔枝皮提取物，加入60%乙醇溶液及2 mol/L氫氧化鈉溶液，加熱冷凝回流8 h，中和后減壓濃縮干燥即得荔枝皮提取物堿解產(chǎn)物。

1.3方法

將60只昆明小鼠隨機分成5組，每組12只：空白組（給予蒸餾水）、陽性組（給予維生素E150 mg/kg）、多酚組（給予荔枝皮多酚1 g/kg）、酸解組（給予荔枝皮多酚酸解產(chǎn)物1 g/kg）、堿解組（給予荔枝皮多酚堿解產(chǎn)物1 g/kg）。每天給藥一次，連續(xù)15 d。

1.4測定指標

全部小鼠末次給藥后，禁食不禁水，24 h后眼球取血，分離血清，-20℃保存?zhèn)溆?。處死后的小鼠，立即摘除肝臟、腎臟，用冰冷的0.9%的生理鹽水充分灌流、洗凈血液和血跡至白陶土樣，用濾紙吸干，稱重，快速地用剪刀將組織剪碎，加入冰冷的（4℃）0.9%的生理鹽水制成勻漿液，4℃，4 000 r/min離心15 min，棄去沉淀，留下上清液，T-AOC、SOD、MDA的測定均按試劑盒說明進行操作。

1.5統(tǒng)計學方法

實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，以x±s表示，多個樣本之間的兩兩比較采用單因素方差分析，P＜0.05為具有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1荔枝皮多酚對小鼠體重的影響

小鼠體重的變化在一定程度上可以反映小鼠生長發(fā)育情況［8］，也在一定程度上間接的反映藥物對小鼠的影響。荔枝皮多酚對小鼠體重的影響見表1。

表1　荔枝皮多酚對小鼠體重的影響（x±s，n=12）Table 1　Effect of litchi chinensis pericarp polyphenols on body weight in mice（x±s，n=12）

由表1可知，與空白對照組比較，給藥組的增重都沒有顯著性差異（P＞0.05），只是在第8天時，陽性組與酸解組體重小于空白組，有顯著性差異（P＜0.05），但體重只是稍微輕與空白組，且到第15天，各組之間體重沒有顯著性差異（P＞0.05）。與多酚組比較，酸解組和堿解組的增重都沒有顯著性差異（P＞0.05）。說明荔枝皮多酚及其酸解產(chǎn)物、堿解產(chǎn)物對小鼠體重沒有造成不良影響，藥物可能不會損害機體健康。在飼養(yǎng)過程中，我們也發(fā)現(xiàn)各組小鼠飲食良好，毛色正常。

2.2荔枝皮多酚對小鼠肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)的影響

肝臟、腎臟是動物機體重要的代謝器官［9］，肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)可以在一定程度上反映應對肝臟、腎臟的損害。若肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)降低，將直接影響動物代謝能力；若肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)升高，說明動物肝臟、腎臟腫大。荔枝皮多酚對小鼠肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)的影響見表2。

表2　荔枝皮多酚對小鼠肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)的影響（x±s，n=12）Table 2　Effect of litchi chinensis pericarp polyphenols on immune organ indexes in mice（x±s，n=12）

由表2可知，與空白對照組比較，陽性組肝臟指數(shù)降低，有顯著性差異（P＜0.01）；多酚組肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)降低，有顯著性差異（P＜0.05）；堿解組肝臟指數(shù)降低，有顯著性差異（P＜0.05）。與多酚組比較，酸解組、堿解組腎臟指數(shù)升高，有顯著性差異（P＜0.05）。說明荔枝皮多酚可以降低肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)，可能對動物的代謝有一定的影響，從數(shù)據(jù)中可以看出，荔枝皮多酚對肝臟指數(shù)的降低率為6.3%，對腎臟指數(shù)的降低率為11.2%，影響相對較小，聯(lián)系到上面荔枝皮多酚對體重、飲食等沒有影響，說明荔枝皮多酚對肝臟、腎臟可能有一定的損害作用，但需要進一步進行研究證實。荔枝皮多酚酸解產(chǎn)物、堿解產(chǎn)物對肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)基本沒有影響，只有堿解組肝臟指數(shù)降低了4.8%，說明荔枝皮多酚酸解產(chǎn)物、堿解產(chǎn)物不會損害肝臟、腎臟。

2.3荔枝皮多酚對小鼠血清、組織中的MDA的影響

MDA是脂質(zhì)過氧化物的最終產(chǎn)物，它能使蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)發(fā)生交聯(lián)，使生物膜變性、細胞突變、衰老或死亡。因此測試丙二醛的量能反映出機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接地反映出細胞損傷的程度［10］。荔枝皮多酚對小鼠血清、組織中的MDA的影響見表3。

表3　荔枝皮多酚對小鼠血清、組織中的MDA的影響（x±s，n=12）Table 3　Effect of litchi chinensis pericarp polyphenols on MDA in plasma and tissue of mice（x±s，n=12）

由表3可知，與空白對照組比較，陽性組能夠降低血清、肝臟中MDA含量，其中血清中有顯著性差異（P＜0.05）；多酚組能夠降低血清、肝臟中MDA含量，其中血清中有顯著性差異（P＜0.05）；酸解組能夠降低血清、肝臟中MDA含量，其中肝臟中有顯著性差異（P＜0.05），可以升高腎臟中MDA含量，沒有顯著性差異（P＞0.05）；堿解組能夠降低血清中MDA含量，有顯著性差異（P＜0.01），能夠升高腎臟中MDA含量，有顯著性差異（P＜0.01）。與多酚組比較，堿解組升高腎臟中MDA含量，有顯著性差異（P＜0.01）。說明荔枝皮多酚具有一定降MDA的作用，可以減少脂質(zhì)過氧化損傷。但荔枝皮酸解產(chǎn)物及堿解產(chǎn)物可以升高腎臟MDA含量，其原因有待進一步研究。

2.4荔枝皮多酚對小鼠血清、組織中的SOD的影響

SOD是正常機體存在的清除氧自由基的一種重要酶類，它能使超氧化物陰離子轉(zhuǎn)變?yōu)闅潆x子和氧分子，從而清除氧自由基保護細胞免受損傷，SOD對機體的氧化與抗氧化平衡起著至關重要的作用，其活性越高清除自由基的能力越強［11］。荔枝皮多酚對小鼠血清、組織中的SOD的影響見表4。

表4　荔枝皮多酚對小鼠血清、組織中的SOD的影響（x±s，n=12）Table 4 Effect of litchi chinensis pericarp polyphenols on SOD in plasma and tissue of mice（x±s，n=12）

從表4中可知，與空白對照組比較，給藥組能夠升高血清、肝臟、腎臟中的SOD活力，其中陽性組肝臟、腎臟SOD活力有顯著性差異（P＜0.05，P＜0.01），多酚組肝臟SOD活力有顯著性差異（P＜0.01），酸解組肝臟SOD活力有顯著性差異（P＜0.05）。與多酚組比較，酸解組、堿解組隊血清、肝臟、腎臟中SOD的影響都沒有顯著性差異（P＞0.05）。說明荔枝皮多酚及其酸解產(chǎn)物、堿解產(chǎn)物都具有提高機體SOD活力，清除氧自由基，保護細胞免受損傷的作用。

2.5荔枝皮多酚對小鼠血清、組織中的T-AOC的影響

荔枝皮多酚對小鼠血清、組織中的T-AOC的影響見表5。

表5荔枝皮多酚對小鼠血清、組織中的T-AOC的影響（x±s，n=12）Table 5　Effect of litchi chinensis pericarp polyphenols on T-AOC in plasma and tissue of mice（x±s，n=12）

從表5中可知，與空白對照組比較，陽性組能夠升高肝臟、腎臟T-AOC能力，降低血清中T-AOC能力，其中肝臟中有顯著性差異（P＜0.01）；多酚組夠升高肝臟、腎臟T-AOC能力，降低血清中T-AOC能力，都有顯著性差異（P＜0.05，P＜0.01）；酸解組夠升高肝臟、腎臟T-AOC能力，降低血清中T-AOC能力，其中肝臟中有顯著性差異（P＜0.05）；堿解組夠升高肝臟、腎臟T-AOC能力，降低血清中T-AOC能力，其中血清、肝臟中有顯著性差異（P＜0.01）。與多酚組比較，酸解組能夠升高血清中T-AOC能力，降低肝臟中T-AOC能力，都有顯著性差異（P＜0.05）；堿解組能夠降低肝臟中T-AOC能力，有顯著性差異（P＜0.05）。說明荔枝皮多酚及其酸解和堿解產(chǎn)物能夠提高組織中的總抗氧化能力，但卻降低血液中的抗氧化能力。本實驗中總抗氧化能力的測定使用的是南京建成的試劑盒，其測定原理是根據(jù)抗氧化物質(zhì)可使Fe3+還原成Fe2+，F(xiàn)e2+可與菲琳類物質(zhì)反應形成穩(wěn)定的絡合物，在520 nm處測定吸光度，此處測定的主要抗氧化物質(zhì)含量，并不是機體內(nèi)所有抗氧化能力，但可以從此結(jié)果反映出機體部分的總抗氧化能力［12］。荔枝皮多酚及其酸解和堿解產(chǎn)物降低血液中的總抗氧化能力，其原因可能與藥物增加了組織中抗氧化物質(zhì)含量，使排放到血液中的抗氧化物質(zhì)含量減少有關。

3　討論

實驗發(fā)現(xiàn)，荔枝皮多酚及其酸解產(chǎn)物、堿解產(chǎn)物都具有一定抗氧化作用。荔枝皮多酚進行酸解和堿解，其產(chǎn)物在水溶液中溶解度上升。荔枝皮多酚酸解產(chǎn)物、荔枝皮多酚堿解產(chǎn)物溶解性好于荔枝皮多酚，理論上其在機體內(nèi)的吸收也較好，應該具有更好的生理作用。但我們發(fā)現(xiàn)荔枝皮多酚酸解產(chǎn)物、荔枝皮多酚堿解產(chǎn)物的抗氧化能力還稍低于荔枝皮多酚：荔枝皮多酚堿解產(chǎn)物能夠升高腎臟中MDA含量；荔枝皮多酚酸解產(chǎn)物、荔枝皮多酚堿解產(chǎn)物在肝臟中的總抗氧化能力遠低于荔枝皮多酚，其原因有待進一步的研究。我們的研究表明荔枝皮多酚具有體內(nèi)抗氧化作用，有進一步研究開發(fā)其功能的價值。

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Effects of Litchi Chinensis Pericarp Polyphenols on the Antioxidant Capacity in Vivo

YANG Zi-ming1，YAN Xiao-jie1，QIAO Xue2，HUANG Yong-lin1，CHEN Yue-yuan1，LIU Jin-lei1，LI Dian-peng1，*
（1.Guangxi Key Laboratory of Functional Phytochemicals Research and Utilization，Guangxi Institute of Botany，Chinese Academy of Sciences，Guilin 541006，Guangxi，China；2.Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530001，Guangxi，China）

To study effects of litchi chinensis pericarp polyphenols on the antioxidant capacity in mice，the mice were randomly divided into 5 groups，every group had 12 mice.To successively lavage vitamin E，litchi chinensis pericarp polyphenols，acid hydrolyzed products，alkaline hydrolysis products to mice while the control rats were given distilled water.After 15 days，serum，liver，kidney were taken.The amount or activity of antioxidant enzymes in serum，liver，kidney were tested.Compared with the group of distilled water，the litchi chinensis pericarp polyphenols group，acid hydrolyzed products group，alkaline hydrolysis products group could increase T-AOC capacity in liver，kidney of mice，could decrease T-AOC capacity in secum of mice；the litchi chinensis pericarp polyphenols group，acid hydrolyzed products group could decrease the content of MDA in serum，liver of mice；alkaline hydrolysis products group could decrease the content of MDA in serum of mice and increase the content of MDA in kidney of mice；the litchi chinensis pericarp polyphenols group，acid hydrolyzed products group could increase the activity of SOD in liver of mice.The litchi chinensis pericarp polyphenols and acid hydrolyzed products，alkaline hydrolysis products enhanced the antioxidant function of the body and could be used as effective antioxidants.

litchi chinensis pericarp polyphenols；superoxide dismutase；malondiadehyde；total antioxidant；mice

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.10.008

廣西科技合作與交流計劃項目（桂科合1298014-10）；廣西植物研究所基本業(yè)務費項目（桂植業(yè)：13002）；廣西植物功能物質(zhì)研究與利用重點實驗室主任基金項目（ZRJJ2012-6）

楊子明（1982—），男（漢），助理研究員，碩士，主要從事植物活性物開發(fā)與利用研究。
*

李典鵬（1968—），男（漢），研究員，博士，主要從事植物活性物開發(fā)與利用研究。

2015-04-24