化濁解毒活血通絡法對血管性癡呆小鼠學習記憶能力的影響

趙見文，王志勇，閆國強，張顏偉，田軍彪，宋書昌，解新苓

?

化濁解毒活血通絡法對血管性癡呆小鼠學習記憶能力的影響

趙見文1，王志勇1，閆國強1，張顏偉1，田軍彪2，宋書昌1，解新苓1

1.河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院(河北滄州 061001)；2.河北省中醫(yī)院

摘要：目的觀察化濁解毒活血通絡法對血管性癡呆小鼠學習記憶能力的影響。方法將60只昆明小鼠隨機分為模型組、陽性對照組、中藥治療組、假手術(shù)組，每組15只，前3組采用反復腦缺血再灌注法制備血管性癡呆模型。造模成功后假手術(shù)組、模型組灌服生理鹽水，陽性對照組灌服腦復康液，中藥治療組給予化濁解毒活血通絡中藥灌服。治療后對各組小鼠采用跳臺試驗進行行為學測試。結(jié)果與模型組相比，化濁解毒活血通絡法能夠提高血管性癡呆小鼠的行為學成績。結(jié)論化濁解毒活血通絡法可以改善血管性癡呆小鼠的學習記憶能力。

關(guān)鍵詞：血管性癡呆；化濁解毒活血通絡法；濁毒；濁瘀毒損；學習記憶能力

血管性癡呆(vascular dementia，VD)是指由腦血管病因素導致腦功能障礙而產(chǎn)生的獲得性智能損害綜合征，主要表現(xiàn)為記憶力、計算力、定向力等認知功能的減退以及情感行為的異常，是臨床上常見的慢性進展性疾病之一[1]。現(xiàn)代醫(yī)學對VD尚無確切有效的治療藥物或特異性方法。中醫(yī)學以整體觀與辨證論治為指導思想，在治療VD方面具有自身的特色與優(yōu)勢[2]?；瘽峤舛净钛ńj法是在濁毒理論[3-4]指導下，結(jié)合祖國醫(yī)學的血瘀學說，根據(jù)VD發(fā)病的病理基礎所創(chuàng)立的中醫(yī)治療體系，本研究旨在通過觀察化濁解毒活血通絡方藥對VD小鼠學習記憶能力的影響，了解該方法對VD的作用效果。

1材料與方法

1.1實驗藥物及儀器根據(jù)化濁解毒活血通絡法擬定中藥處方，其藥物組成及劑量(成年人用量)如下：天竺黃10 g，九節(jié)菖蒲12 g，半夏9 g，郁金15 g，地龍6 g，川芎9 g，赤芍9 g，當歸12 g，薏苡仁30 g，茯苓12 g，澤瀉9 g，梔子6 g，防風6 g。方中各藥材均購買于北京同仁堂股份有限公司。陽性對照組藥物為腦復康(國藥準字H37021040，山東方明藥業(yè)集團股份有限公司生產(chǎn)，規(guī)格400 mg)。實驗動物用藥劑量相當于臨床等效劑量3倍，按動物體表面積進行折算。實驗儀器主要有電子天平(瑞士METTER AE100型)、小鼠跳臺儀(中國醫(yī)學科學院藥物研究所制造)等。

1.2實驗動物成年健康昆明小鼠60只，雌雄各半，體重38 g～40 g，SPF級，由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供，隨機分為模型組、化濁解毒活血通絡法治療組(中藥治療組)、陽性對照組、假手術(shù)組，每組15只。

1.3構(gòu)建VD動物模型根據(jù)文獻采用腦組織反復缺血再灌注的方法制備小鼠VD動物模型[5]。小鼠術(shù)前隔夜禁食12 h，自由飲水。在室溫24 ℃～25 ℃的無菌環(huán)境內(nèi)行手術(shù)造模，手術(shù)動作輕柔，術(shù)中嚴格無菌操作。將小鼠腹腔注射10%水合氯醛(350 mg/kg)麻醉后，仰臥位固定于手術(shù)臺，對其頸部皮膚進行剪毛備皮，然后使用碘伏酒精進行常規(guī)消毒。制備VD動物模型時，小鼠頸正中切口，分離雙側(cè)頸總動脈并套四號絲線扣，然后拉緊絲扣，阻斷血流，同時在距尾尖約1 cm處斷尾放血，放血約0.3 mL迅速熱凝止血。頸總動脈血流被阻斷10 min后，將絲扣松開，灌注10 min后，再次阻斷血流10 min；第2次再灌注后觀察10 min，如小鼠呼吸、心跳平穩(wěn)，即可縫合皮膚，傷口處灑青霉素粉末，放回籠中正常飼養(yǎng)。假手術(shù)組只分離頸總動脈，套絲扣不阻斷血流，尾部不放血，觀察時間與其他各組相同。

1.4試驗動物的給藥方法實驗小鼠均于術(shù)后第2天開始給藥。假手術(shù)組、模型組給予生理鹽水以20 mL/(kg·d)灌服。中藥治療組給予上述化濁解毒活血通絡中藥以29.00 g/(kg·d)灌服，陽性對照組給予腦復康以0.72 g/(kg·d)灌服，各組治療均為每日1次，連續(xù)應用14 d。

1.5行為學檢測方法連續(xù)用藥14 d后采用跳臺試驗對各組小鼠進行行為學測試。跳臺儀的箱壁由黑色塑料板圍成，底板為可通過36 V交流電的多根銅柵，銅柵的一角放置橡膠圓臺作為安全區(qū)，小鼠可停留在圓臺上回避電擊。實驗前將小鼠放入箱中自由活動3 min熟悉環(huán)境，然后接通銅柵電源并持續(xù)5 min，觀察并記錄小鼠首次找到安全區(qū)所需要的時間(反應時間)和5 min內(nèi)受到電擊的總次數(shù)(錯誤次數(shù))，作為學習測試成績。24 h后將小鼠再次放入箱中自由活動3 min，然后將其放上橡膠圓臺，接通銅柵電源并持續(xù)5 min，觀察并記錄小鼠首次跳下圓臺的潛伏期和5 min內(nèi)受電擊的總次數(shù)(錯誤次數(shù))，作為記憶測試成績。

2結(jié)果

小鼠跳臺試驗結(jié)果如表所示，模型組小鼠較假手術(shù)組反應時間延長、潛伏期縮短、錯誤次數(shù)增多，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，提示模型組小鼠的學習記憶能力明顯下降，該實驗VD模型構(gòu)建成功。與模型組比較，中藥治療組和陽性對照組的反應時間均明顯縮短、潛伏期延長、錯誤次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，提示化濁解毒活血通絡中藥同腦復康一樣均能改善VD小鼠的學習記憶能力，提高VD小鼠的行為學成績。中藥治療組較陽性對照組反應時間縮短、潛伏期延長、錯誤次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，提示化濁解毒活血通絡中藥對VD小鼠行為學成績的改善優(yōu)于西藥腦復康。

表1　各組小鼠14d后的跳臺實驗結(jié)果(±s)

3討論

隨著我國人口老齡化進程的加快，包括VD在內(nèi)的認知障礙性疾病發(fā)病率日益增高。VD是老年期癡呆中最常見的類型，它是腦循環(huán)障礙缺血缺氧所導致的認知功能低下綜合征。很長時間以來，現(xiàn)代藥物治療是VD治療的主體，包括膽堿能類制劑、抗氧化劑、興奮性氨基酸受體拮抗劑和腦代謝增強劑等。隨著傳統(tǒng)醫(yī)學的發(fā)展和研究的深入，中醫(yī)中藥作為改善認知功能的治療手段被逐漸應用于VD的治療中。

VD隸屬于祖國醫(yī)學的“呆病”范疇，其“發(fā)于中風”“病變在腦”[6]，與肝脾腎等臟密切相關(guān)。王永炎院士就呆病進行了系統(tǒng)研究，并提出了“毒損腦絡、腦髓”學說[7]。VD病人多為年邁之人，其諸臟漸虛，氣機失布，水津不化，釀生痰濕，或兼中風，腦絡受損，髓海漸衰，元陽不足，痰濕不散，日久蘊藉，則成濁毒。濁毒一旦化生，便難以自除，必將結(jié)滯絡脈，擾于血循，凝塞為瘀。濁凝清竅，瘀損腦絡，則元神失養(yǎng)，神明不用，靈機記性漸失，發(fā)為該病。因此“濁瘀毒損”是VD發(fā)生發(fā)展的主要病理機制。在“濁毒致病理論”[8-9]與“血瘀學說”基礎上，根據(jù)VD的“濁瘀毒損”病理機制制定了針對VD發(fā)病的“化濁解毒活血通絡”治法。本研究中選用臨床常用的化濁解毒活血通絡中藥擬定為協(xié)定處方，對VD小鼠進行干預，并通過跳臺實驗評估其行為學成績。通過比較得知，化濁解毒活血通絡法能夠有效地改善VD小鼠的認知功能，提高其學習能力和記憶能力。

化濁解毒活血通絡法對VD小鼠行為學成績的改善提示該方法對VD小鼠受損神經(jīng)元可能具有一定保護作用?；瘽峤舛净钛ńj法對VD小鼠發(fā)揮神經(jīng)保護作用的機制可能是多元性的，還需要大量的實驗研究進一步探索。在動物實驗研究的基礎上，借鑒現(xiàn)代醫(yī)學知識進一步開展該中醫(yī)治法的多中心隨機對照臨床研究，以便使VD的中醫(yī)藥預防和治療取得突破性進展。

參考文獻：

[1]Lewis PR.MERRTT’S 神經(jīng)病學[M].高旭光，譯.沈陽：遼寧科學技術(shù)出版社，2002：6.

[2]郝曉曉，陳烔華.中醫(yī)治療血管性癡呆的研究現(xiàn)狀及進展[J].四川中醫(yī)，2013，31(3)；150-153.

[3]高穎，謝穎楨.試論濁毒在血管性癡呆發(fā)病中的作用[J].中國中醫(yī)急癥，2000，12(9)：6.

[4]唐啟盛．“濁毒痹阻腦絡”對老年期癡呆的影響[J]．北京中醫(yī)藥大學學報，1997，20(6)：24-25.

[5]呂佩源，尹昱，王偉斌，等．二氫麥角環(huán)肽對血管性癡呆小鼠海馬鈣信號轉(zhuǎn)導機制的干預作用[J].中華老年醫(yī)學雜志，2004，23(3)：192-195.

[6]張志真，劉慧林.血管性癡呆發(fā)病機制及辨證論治的再認識與思考[J].北京中醫(yī)，1999，18(5)：9-12.

[7]王永炎，張伯禮．血管性癡呆現(xiàn)代中醫(yī)臨床與研究[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：49.

[8]王正品，李佃貴，杜艷茹，等.濁毒致病論與現(xiàn)代中醫(yī)病因?qū)W[J].中醫(yī)雜志，2010，51(1)：11-13.

[9]許筱穎，郭霞珍.濁毒致病理論初探[J].遼寧中醫(yī)雜志，2007，34(1)：28-29.

(本文編輯薛妮)

基金項目：河北省滄州市科技計劃項目(No.131302143)；河北省中醫(yī)藥管理局科研計劃課題(No.2014356)

通訊作者：趙見文，E-mail：zhaojianwen6@163.com

中圖分類號：R742.5R285.5

文獻標識碼：A

doi：10．3969/j．issn．1672-1349．2016．12．008

文章編號：1672-1349(2016)12-1335-03

(收稿日期：2015-09-29)

Effects of Huazhuo Jiedu Huoxue Tongluo Management on Learning and Memory Capability in Mice with Vascular Dementia

Zhao Jianwen，Wang Zhiyong，Yan Guoqiang，Zhang Yanwei，Tian Junbiao，Song Shuchang，Xie Xinling

Cangzhou Hospital of Integrated Traditional and Western Medicine，Cangzhou 061001，Hebei，China

Abstract：ObjectiveTo observe the effects of Huazhuo Jiedu Huoxue Tongluo method on learning and memory capability in mice with vascular dementia.MethodsSixty Kunming mice were randomly divided into model group，positive control group，traditional Chinese medicine(TCM) group and sham operation group.Each group had 15 mice.Models of vascular dementia in the first three groups were established through repeated cerebral ischemia-reperfusion.Physiological saline was given to the mice in the sham operation group and model group.Naofukang solution was given to the mice in the positive control group.Mice in TCM group were given Huazhuo Jiedu Huoxue Tongluo decoction after models were successfully established.To do behavioral testing by jumping test after treating.ResultsCompared with the model group，the learning and memory were improved in TCM group.ConclusionHuazhuo Jiedu Huoxue Tongluo method has protective effect on learning and memory capability in mice with vascular dementia.

Key words：Huazhuo Jiedu Huoxue Tongluo method；vascular dementia；learning and memory capability