HPLC法測定萬通炎康片中苦玄參苷ⅠA的含量

翟金燕（廣西萬通制藥有限公司，廣西 南寧　530003）

HPLC法測定萬通炎康片中苦玄參苷ⅠA的含量

翟金燕
（廣西萬通制藥有限公司，廣西 南寧530003）

［目的］建立萬通炎康片中苦玄參苷ⅠA的含量測定方法。［方法］采用HPLC法，色譜柱為Wondasil GL Sciences C18柱（5.0μm，250 mm×4.6 mm）；流動相為乙腈-0.3%磷酸（35∶65）；流速為1.0 m l/min，檢測波長為264 nm；進(jìn)樣量為10μl；柱溫為30℃。［結(jié)果］苦玄參苷ⅠA在0.2338～1.4028μg間與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.9992），加樣回收率為98.27%，RSD= 1.52%（n=6）。［結(jié)論］本法操作簡便，精密度好，可作為萬通炎康片的質(zhì)量控制方法之一。

萬通炎康片；苦玄參苷ⅠA；HPLC

萬通炎康片由苦玄參、腫節(jié)風(fēng)組成，具有疏風(fēng)清熱、解毒消腫功效，用于外感風(fēng)熱所致的咽部紅腫、牙齦紅腫、瘡癤腫痛［1］?？嘈④闸馎是苦玄參的有效成分［2］，本實驗采用HPLC測定萬通炎康片中苦玄參苷ⅠA的含量，為控制該品的質(zhì)量提供依據(jù)?，F(xiàn)報道如下。

1　　儀器與試藥

1.1儀器LC-10ATVP高效液相色譜儀（日本島津公司）；SPD-10AVP紫外檢測器；SB3200超聲震蕩器（上海必能信公司）；BS210S電子天平（德國賽多利斯公司）。

1.2試藥苦玄參苷ⅠA對照品（供含量測定用，批號：11745-200501）；萬通炎康片為廣西萬通制藥有限公司產(chǎn)品（批號：130618）；乙腈、甲醇為色譜純試劑（美國Fisher公司）；水為二次重蒸蒸餾水；其余試劑為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：WondasilGLSciencesC18柱（5.0μm，250 mm×4.6 mm）；流動相：乙腈-0.3%磷酸（35∶65）；檢測波長：264 nm；柱溫：30℃；流速：1.0ml/min；進(jìn)樣量：10μl；理論塔板數(shù)按苦玄參苷ⅠA峰計算應(yīng)不低于3 500。

2.2對照品溶液的制備精密稱取苦玄參苷ⅠA對照品適量，加甲醇制成每1m l含90μg的溶液，即得。

2.3供試品溶液的制備取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，精密稱取0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20ml，超聲處理1 h，放冷，濾過，濾液置25m l量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4陰性溶液的制備按處方比例制備缺苦玄參藥材的陰性對照樣品，研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，按2.3項供試品溶液的制備方法進(jìn)行提取，制成陰性溶液。

2.5系統(tǒng)適應(yīng)性試驗精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性溶液各10μl，按2.1項色譜條件分析，色譜圖見圖1。由圖1可見，供試品中苦玄參苷ⅠA與其它雜質(zhì)峰達(dá)到基線分離，分離度大于1.5，按苦玄參苷ⅠA計算理論塔板數(shù)不低于3 500。在與苦玄參苷ⅠA相應(yīng)位置上，陰性樣品無干擾。

2.6線性關(guān)系考察取苦玄參苷ⅠA對照品，精密稱定為29.22 mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取0.5ml、1.0 ml、1.5m l、2.0m l、2.5ml、3.0ml對照品溶液，分別置于25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取10μl，按上述色譜條件測定峰面積值，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖2。并求得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：Y=363675X-328.73，r= 0.9992；表明苦玄參苷ⅠA在0.2338～1.4028μg之間呈良好的線性關(guān)系。

圖2　　苦玄參苷ⅠA標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.7精密度試驗取苦玄參苷ⅠA對照品溶液（93.504μg/ml）分別連續(xù)進(jìn)樣6次，測得峰面積分別為337 166、331 630、333 327、330 231、321 619、324 701，平均峰面積值為329 779，RSD=1.73%（n=6）。相對偏差＜2%，表明儀器精密度良好。

2.8穩(wěn)定性試驗取同一批供試品（批號：130618），按2.3項方法制得供試品溶液，分別于0 h、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h后精密吸取供試品溶液10μl進(jìn)樣，測得峰面積分別為：636 108、612 140、616 686、618 911、612 027、613 247、618 186，平均峰面積值為636 108，RSD=1.49%（n=7），結(jié)果表明苦玄參苷ⅠA在6 h內(nèi)保持穩(wěn)定。

2.9重復(fù)性試驗取同一批供試品（批號：130618）適量，研細(xì)，分別取6份，每份重約0.5 g，精密稱定，按樣品測定方法進(jìn)行提取，測定，計算，結(jié)果見表1。

表1　　重復(fù)性試驗結(jié)果　?。╪=6）

2.10加樣回收率試驗取已知含量的樣品（批號：130618；8.3366 mg/g）6份，各0.25 g，精密稱定，分別精密加入苦玄參苷ⅠA對照品溶液2ml（濃度為1.0044mg/ml），按供試品制備方法提取，測定，結(jié)果見表2。

2.11樣品測定取10批不同批號的供試品，按供試品溶液的制備項下方法進(jìn)行提取，再按2.1項色譜條件測定苦玄參苷ⅠA含量，結(jié)果見表3。

序號　取樣量（g）　原有量（mg）　對照品加入量（mg） 平均峰面積　測出量（mg） 回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）1　0.2501　2.0852　2.0088　2864941　4.0594　98.27 2　0.2504　2.0871　2.0088　2862066　4.0791　99.16 3　0.2501　2.0853　2.0088　2852707　4.0648　98.54 4　0.2502　2.0862　2.0088　2874677　4.0748　98.99 5　0.2506　2.0893　2.0088　2878607　4.0849　99.34 6　0.2505　2.0880　2.0088　2823411　4.0027　95.32 98.27　1.52

表2加樣回收試驗結(jié)果（n=6）

表3 10批樣品中苦玄參苷ⅠA含量測定結(jié)果　　（n=2）

3　結(jié)論

3.1提取方法的考察本實驗分別采用加熱回流1 h和超聲處理1 h處理樣品，結(jié)果顯示，提取的有效成分差別不大，所以本研究選取較為便捷的超聲處理方式。

3.2色譜柱的選擇實驗中比較了3根不同色譜柱的分離效果：大連依力特C18柱（5μm，4.6mm×250mm），德國MNC18柱（5μm，4.6mm×250 mm），Wondasil GL Sciences C18柱（5μm，4.6mm×250mm）；結(jié)果表明，Wondasil GL Sciences C18柱分離效果良好，供試品中苦玄參苷ⅠA與其它雜質(zhì)峰達(dá)到基線分離，分離度大于1.5，按苦玄參苷ⅠA計算理論塔板數(shù)不低于3 500。

3.3限度的制定根據(jù)10批樣品測定結(jié)果，樣品中苦玄參苷ⅠA含量最高為11.1636mg/g（即3.729mg/片），最低為6.9714 mg/g（即2.333mg/片），考慮到不同藥材的來源苦玄參苷ⅠA含量不一，以及工業(yè)化生產(chǎn)的損失，故將樣品中苦玄參苷ⅠA含量的限度適當(dāng)降低，暫規(guī)定苦玄參苷ⅠA含量限度為每片不得低于1.0mg。

［1］方宏，梁小燕.苦玄參藥材中苦玄參苷ⅠA和ⅠB的含量分析［J］.廣西植物，28（5）：708-710.

［2］潘小姣，曾金強，韋志英，等.從苦玄參中制備苦玄參苷ⅠA的實驗研究［J］.廣西中醫(yī)藥，2008，31（4）：49-50.

（編輯陳明偉）

R284.1

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2095-4441（2016）02-0070-03

2016-01-23