AIDS患者新型隱球菌檢測方法比較①

熊倩妤，楊　俊，屠大朋

(貴陽市公共衛(wèi)生救治中心檢驗科，貴州 貴陽 550004)

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AIDS患者新型隱球菌檢測方法比較①

熊倩妤，楊俊，屠大朋

(貴陽市公共衛(wèi)生救治中心檢驗科，貴州 貴陽 550004)

摘要：目的：對比分析AIDS(艾滋病)患者新型隱球菌墨汁染色法，抗原凝聚法和培養(yǎng)法。方法：回顧分析我院2012-04～2015-06收治的培養(yǎng)出新型隱球菌的63例AIDS患者資料，觀察采用墨汁染色法和抗原凝聚法檢查63例患者新型隱球菌的陽性率。結(jié)果：采用抗原凝聚法檢驗63例患者的陽性率為85.7%，高于墨汁染色法的73.01%，兩種檢測方法的新型隱球菌陽性檢出率比較差異無統(tǒng)計學意義(x2=1.694，P>0.05)。結(jié)論：墨汁染色法和抗原凝聚法用于檢測AIDS患者新型隱球菌的檢測，均可獲得良好應(yīng)用效果。

關(guān)鍵詞：AIDS；新型隱球菌；墨汁染色；培養(yǎng)；陽性檢出率

新型隱球菌是一種鴿糞、牛乳、水果、土壤等物質(zhì)的腐爛菌，又被臨床稱為溶組織酵母菌，為人類條件致病菌，通常情況下為外源性感染，感染群體主要為細胞免疫功能受損人群[1]?，F(xiàn)階段，隨著抗生素類藥物的不合理使用，病原菌的耐藥性不斷增強，由新型隱球菌引發(fā)的腦膜炎已成為導(dǎo)致AIDS患者死亡的主要因素之一[2]。我院本次研究對63例AIDS患者采用墨汁染色法和抗原凝聚法鑒定新型隱球菌的結(jié)果進行了回顧分析，旨在能夠盡早發(fā)現(xiàn)病原菌，為患者制定有效的臨床治療方案。

1資料與方法

1.1一般資料

本次研究回顧性分析2012-04～2015-06在我院接受治療的63例AIDS患者的新型隱球菌檢驗資料，采用蛋白印跡法檢測63例患者的HIV(人類免疫缺陷病毒)結(jié)果均為陽性。63例患者中，男50例，女13例，年齡12～75歲，平均(49.5±1.3)歲。本次研究在事先獲取我院倫理委員會批準的前提下開展。

1.2研究方法

本組63例患者為新型隱球菌真菌培養(yǎng)法檢驗結(jié)果為陽性的患者，鑒定新型隱球菌采用MicroScan Walk Away 40微生物鑒定儀，檢查試劑為儀器原裝試劑。

1.2.1培養(yǎng)法

在兩個不同的靜脈穿刺部位分別無菌抽取患者血液10mL，于2個雙相需氧血培養(yǎng)瓶(由鄭州安圖生物工程股份有限公司提供)中，放入37℃溫箱培養(yǎng)7d，再放入25℃溫箱培養(yǎng)3d，腦脊液培養(yǎng)25d，每天檢查培養(yǎng)瓶是否長菌。若長菌后用血平板轉(zhuǎn)種于37℃CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。若涂片見到真菌孢子適時轉(zhuǎn)種馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基(血平板和PDA培養(yǎng)基由賽默飛世爾生物有限公司提供)，放入25℃溫箱培養(yǎng)48h可見奶油狀、凸起、濕潤的菌落生長后采用MicroScan Walk Away 40微生物鑒定儀鑒定，檢查試劑為儀器原裝試劑。

1.2.2墨汁染色法

將臨床送檢的腦脊液離心5min倒掉上清液，將沉淀物進行墨汁染色，最后用顯微鏡對染色的腦脊液涂片進行觀察。

1.2.3抗原凝聚法

使用新型隱球菌莢膜多糖抗原試劑盒(immuno-mycologicis,inc.)進行檢測，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。本次研究觀察墨汁染色法和抗原凝聚法檢測新型隱球菌的陽性率。

1.3統(tǒng)計學方法

采用軟件SPSS24.0處理研究過程中得到的符合正態(tài)分布的研究數(shù)據(jù)，觀察指標均采用百分率[例(%)]表示，采用χ2檢驗兩者之間存在的差異，以P<0.05表示兩者比較存在明顯差異，具有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

回顧分析發(fā)現(xiàn)采用墨汁染色法檢查63例患者新型隱球菌的陽性率為73.01%，采用抗原凝聚法檢查63例患者新型隱球菌的陽性率為85.7%，兩種檢查方法檢查AIDS患者新型隱球菌的陽性率比較存在的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。

表1　兩種新型隱球菌檢查方法的陽性檢出率比較 [n=63,(%)]

注：墨汁染色法與抗原凝聚法比較χ2=6.948,P<0.05。

3討論

AIDS是由HIV病毒感染引起的一種獲得性免疫缺陷性疾病，具有臨床治療難度大，預(yù)后不佳等臨床特點[3,4]?，F(xiàn)階段，全世界范圍內(nèi)仍無根治該疾病的有效方法，各國臨床治療該疾病的目標為最大限度的和持久性的降低患者機體病毒承載量，促使患者免疫功能獲得重建，提高患者的生存質(zhì)量[5]。近年來，不斷有臨床研究發(fā)現(xiàn)，合并新型隱球菌感染是導(dǎo)致AIDS患者死亡的主要原因[5～7]。新型隱球菌是一種具有莢膜的酵母樣真菌，屬于條件致病菌，主要傳播途徑為呼吸道，當AIDS患者機體免疫功能明顯下降時，新型隱球菌可經(jīng)血液侵入患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)，繼而導(dǎo)致AIDS患者并發(fā)新型隱球菌性腦膜炎，加重AIDS患者病情[8]。臨床盡早檢查出AIDS患者是否感染新型隱球菌，對于延長AIDS患者的生存期具有重要意義。

目前臨床上應(yīng)用的新型隱球菌檢查方法包括真菌培養(yǎng)法、墨汁染色法、抗原凝聚法等，真菌培養(yǎng)法是通過對檢驗標本進行培養(yǎng)、提取和鑒定，判斷患者是否發(fā)生相關(guān)病原菌感染，為現(xiàn)階段臨床檢查新型隱球菌的金標準，但該種檢測方法的靈敏度不高，培養(yǎng)時間長，不利于患者病情的早期診斷。墨汁染色法檢驗結(jié)果易受菌量多少的影響，當患者接受治療后，體內(nèi)的新型隱球菌會出現(xiàn)退形變，透明的莢膜在高倍鏡下觀察缺乏清晰性，辨認難度高。并且必須抽取腦脊液檢測，患者比較痛苦。隱球菌抗原乳膠凝聚法檢測新型隱球菌性的陽性率高。檢測需要時間短，操作方便，有利于患者病情的早期診斷。用墨汁染色法、和隱球菌抗原乳膠凝聚法檢測AIDS患者新型隱球菌性感染的陽性率均在70%以上，不過由于上述方法檢測新型隱球菌性陽性率均達不到100%。因此，臨床上應(yīng)聯(lián)合使用上述方法中的2～3種同時檢測，以確保檢查結(jié)果的準確性。

我院本次研究對抗原凝聚法和墨汁染色法檢查AIDS患者新型隱球菌的陽性率進行對比發(fā)現(xiàn)，兩種檢測方法檢測AIDS患者新型隱球菌的陽性率比較無明顯差異。但也有少數(shù)臨床研究與我院本次研究所得結(jié)果存在明顯差異，部分研究學者認為選擇優(yōu)質(zhì)墨汁，適當調(diào)整腦脊液與墨汁的比例，避免過度離心，可有效提高墨汁染色法的檢查準確性。但由于臨床對該方面課題開展的研究較少，我院本次研究所得結(jié)果以及上述學者的研究結(jié)果仍需通過大量的實踐研究進行證明。

參考文獻：

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作者簡介：①熊倩妤(1978～)女，貴州貴陽人，本科，主管檢驗師。

中圖分類號：R446.11

文獻標識碼：B

文章編號：1008-0104(2016)04-0149-02

(收稿日期：2016-04-18)