參一膠囊維持治療對(duì)晚期NSCLC患者NF-κb、STAT3影響的回顧性研究

徐　舒　馮高飛　宋雨鴻

1.廣州暨南生物醫(yī)藥研究開發(fā)基地，廣東　廣州　510632；2. 暨南大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合博士后流動(dòng)站,廣東　廣州　510632；3.深圳市龍崗區(qū)中醫(yī)院，廣東　深圳　518172；4.廣州市第一人民醫(yī)院，廣東　廣州　510180

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參一膠囊維持治療對(duì)晚期NSCLC患者NF-κb、STAT3影響的回顧性研究

徐舒1,2馮高飛2,3宋雨鴻4

1.廣州暨南生物醫(yī)藥研究開發(fā)基地，廣東廣州510632；2. 暨南大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合博士后流動(dòng)站,廣東廣州510632；3.深圳市龍崗區(qū)中醫(yī)院，廣東深圳518172；4.廣州市第一人民醫(yī)院，廣東廣州510180

【摘要】目的：對(duì)晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者進(jìn)行回顧性分析，探討參一膠囊維持治療對(duì)患者炎癥因子及STAT3 (信號(hào)傳導(dǎo)蛋白和轉(zhuǎn)錄激活物, signal transducers and activators of transcription 3) 和NF-κB(核因子-κB, nuclear factor kappa B)的影響。方法：經(jīng)一線化療后取得緩解或穩(wěn)定的40名晚期NSCLC患者意向性分為治療組(A組，20人)和對(duì)照組(B組，20人)。A組繼續(xù)服用參一膠囊每天2次，每次20mg，服藥至疾病進(jìn)展或無法耐受；B組未予特殊治療。分別于第1d、90d采血，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定患者外周血腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細(xì)胞介素6(IL-6)、SATA3和NF-κB。結(jié)果：治療前后比較，治療組各項(xiàng)炎癥指標(biāo)均未發(fā)生明顯變化,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；而對(duì)照組的TNF-α、IL-6、SATA3和NF-κB顯著上升，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；治療后兩組間比較，對(duì)照組TNF-α、IL-6、SATA3和NF-κB顯著高于治療組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論：參一膠囊維持治療可使晚期NSCLC患者TNF-α、IL-6、SATA3和NF-κB得到有效抑制，進(jìn)一步提示阻斷炎癥-癌癥正反饋惡性循環(huán)可能是參一膠囊維持治療抑制NSCLC進(jìn)展的機(jī)制之一。

【關(guān)鍵詞】參一膠囊；非小細(xì)胞肺癌；維持治療；信號(hào)傳導(dǎo)蛋白和轉(zhuǎn)錄激活物-3；核因子-κB

前期臨床觀察發(fā)現(xiàn)[1]，晚期NSCLC患者一線化療獲益后參一膠囊換藥維持治療可以延長(zhǎng)患者平均疾病無進(jìn)展生存期(PFS)和平均生存時(shí)間(OS)；除了參一膠囊抗血管生成機(jī)制外，我們發(fā)現(xiàn)參一膠囊維持治療可使晚期NSCLC患者TNF-α、IL-1β及IL-6的低表達(dá)，提示調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)可能是參一膠囊維持治療抑制NSCLC進(jìn)展的機(jī)制之一[2]。STAT3 和NF-κB是形成腫瘤炎癥微環(huán)境的關(guān)鍵分子，參一膠囊維持治療中炎癥因子表達(dá)的變化是否也伴隨有上述關(guān)鍵信號(hào)調(diào)控蛋白的變化。本文對(duì)此前參一膠囊換藥維持治療的晚期NSCLC患者進(jìn)行回顧性分析，進(jìn)一步探討參一膠囊抗腫瘤在炎癥方面的作用機(jī)制。

1資料與方法

1.1標(biāo)本采集血清樣品采集于2009年12月至2012年12月在廣州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院內(nèi)三科(部分病例來自廣州市第一人民醫(yī)院中醫(yī)科及東莞市人民醫(yī)院腫瘤科)收治的經(jīng)病理學(xué)確診為晚期NSCLC、按標(biāo)準(zhǔn)方案化療4～6個(gè)周期后療效評(píng)價(jià)為部分緩解(PR)或穩(wěn)定(SD)的患者共40例，根據(jù)意向分組，治療組(A組，20例)服用參一膠囊(20mg，口服，2次/d)維持治療，對(duì)照組(B組，20例)未接受維持治療。分別在末次化療周期后第1天及第90天抽取患者血液，4℃過夜，5000r/min離心5min取上清，-78℃低溫冰箱保存。兩組患者年齡、性別組成、吸煙情況(包括二手煙)、病理類型、化療前臨床分期、末次化療療效評(píng)價(jià)、腫瘤轉(zhuǎn)移情況、ECOG評(píng)分等組間無差異，具有可比性[1]。

1.2血清炎癥因子、SATA3與NF-κb檢測(cè)炎癥因子TNF-α、、IL-6，SATA3、NF-κb亞基p65親和肽 (NF-κbp65)ELISA檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。按照試劑盒說明書操作，使用標(biāo)準(zhǔn)抗原作為對(duì)照，做標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線的r2>0.9(P<0.01)，分別檢測(cè)兩者的表達(dá)水平。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用SPSS21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用雙側(cè)檢驗(yàn)，取P<0.05為有差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差描述，組內(nèi)及組間差異采用t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1兩組炎癥因子變化比較兩組間第1天時(shí)各炎癥因子比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。90天后，治療組內(nèi)炎癥因子變化差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；但對(duì)照組內(nèi)TNF-α、IL-6顯著上升，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；同樣，第90天時(shí)兩組間比較，對(duì)照組TNF-α、IL-6顯著升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見表1。

2.2兩組SATA3及NF-κB變化比較兩組間第1天時(shí)SATA3和NF-κB比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性。90天后，治療組內(nèi)SATA3和NF-κB變化差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；但對(duì)照組內(nèi)SATA3和NF-κB顯著上升，差異均具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；同樣，第90天時(shí)兩組間比較，對(duì)照組SATA3和NF-κB顯著升高，差異均具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

表1　兩組治療前后外周血炎癥因子及SATA3、NF-κB變化比較　±s)

注：兩組自身前后比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；兩組間第90天比較，*P<0.05，**P<0.01。

3討論

近年來，通過大量的流行病學(xué)、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)研究，越來越多的證據(jù)證實(shí)炎癥在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中重要作用：腫瘤微環(huán)境中炎癥介質(zhì)不斷介導(dǎo)產(chǎn)生氧化應(yīng)激產(chǎn)物，誘導(dǎo)正常上皮細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化；同時(shí)，炎性細(xì)胞和/或腫瘤細(xì)胞通過分泌多種不同的生長(zhǎng)因子、炎性因子，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，從而使腫瘤成為“永不愈合的創(chuàng)傷”[3-4]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)[5-7]，SATA3與NF-κB可能是調(diào)控腫瘤細(xì)胞與炎性細(xì)胞交互作用的核心分子。SATA3可通過介導(dǎo)炎癥介質(zhì)的細(xì)胞外信號(hào)調(diào)控腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為，是慢性炎癥促進(jìn)腫瘤發(fā)生及腫瘤相關(guān)性炎癥形成過程中不可或缺的關(guān)鍵性分子。NF-κB則參與成百上千個(gè)轉(zhuǎn)錄基因的調(diào)節(jié)，控制重要的細(xì)胞活動(dòng)；炎癥因子激活NF-κB后可上調(diào)促生存基因的表達(dá)，并與STAT3產(chǎn)生相互作用促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、遷移、侵襲和增殖等生物學(xué)反應(yīng)。NF-κB與STAT3作用的靶基因廣泛且相互重疊，它們協(xié)同調(diào)控多種炎癥因子(TNF-α、IL-6、IL-1等)的表達(dá)，而炎癥因子的表達(dá)又可正反饋增強(qiáng)NF-κB和STAT3的活化，維持腫瘤的炎癥微環(huán)境，形成炎癥-癌癥正反饋的惡性循環(huán)。

炎癥在肺癌中的作用亦是如此：流行病學(xué)提示肺部慢性炎癥疾病人群發(fā)生肺癌的風(fēng)險(xiǎn)要明顯高于普通人群[8]；臨床研究表明，與健康者相比，NSCLC患者的TNF-α、IL-1β、IL-6顯著升高，而IL-10明顯下降[9,10]。作為調(diào)控腫瘤細(xì)胞與炎性細(xì)胞交互作用核心分子的NF-κB與STAT3也與肺癌進(jìn)展有關(guān)[11-13]，NF-κBp65和STAT3在肺癌組織中高表達(dá)，SATA3在NFSLC患者外周血中也是高表達(dá)，而且這種高表達(dá)都與腫瘤惡性程度和臨床分期正相關(guān)。

基于上述基礎(chǔ)研究，以及我們前期的回顧性研究[2]，有理由推測(cè)，抑制炎癥反應(yīng)、而且有可能是調(diào)控炎癥反應(yīng)信號(hào)通路的核心分子，也是參一膠囊抗腫瘤的重要機(jī)制之一。本研究進(jìn)一步證實(shí)了參一膠囊維持治療延長(zhǎng)患者生存期的過程中，持續(xù)抑制了炎癥因子TNF-α、IL-6的表達(dá)；更為重要的是也抑制了外周血NF-κBp65和STAT3的表達(dá)。具體表現(xiàn)為治療組90天后SATA3和NF-κB變化差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而對(duì)照組SATA3和NF-κB明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，在第90天兩組間比較，對(duì)照組SATA3和NF-κB也顯著高于治療組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說明TNF-α、IL-6、SATA3和NF-κB等與炎癥相關(guān)的重要分子在治療組得到了長(zhǎng)期的有效抑制，導(dǎo)致了較好的臨床結(jié)局。當(dāng)然，由于是回顧性研究，無法完全排除患者自身機(jī)會(huì)性感染、服藥情況等因素對(duì)這些炎癥因子的影響，但結(jié)合兩次對(duì)照分析來看，炎癥因子變化趨勢(shì)與療效(生存期)的變化是一致的。雖然不清楚是因?yàn)閰⒁荒z囊降低了TNF-α、IL-6等炎癥因子表達(dá)導(dǎo)致SATA3和NF-κB低激活水平，還是直接作用于SATA3和NF-κB，從而抑制了靶基因的表達(dá)，抑或?qū)ρ装Y相關(guān)的分子及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)均有抑制作用；但可以明確的是，參一膠囊的確抑制了炎癥的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，阻斷了炎癥-癌癥正反饋的惡性循環(huán)，從而起到抑制腫瘤的作用，即便這種作用還不夠強(qiáng)大。

腫瘤復(fù)雜的生物學(xué)特征和既往以化療為主要治療手段的歷程告訴我們，想要長(zhǎng)期控制腫瘤,最終治愈腫瘤，必須從多種機(jī)制著手，尋找更為合理的治療方案。本研究提示，參一膠囊能夠通過降低TNF-α、IL-6、SATA3和NF-κB等炎癥相關(guān)分子表達(dá)水平，發(fā)揮其抗腫瘤作用；因此阻斷炎癥-癌癥正反饋的惡性循環(huán)將是抗腫瘤的重要策略之一，有必要尋找針對(duì)此通路更為穩(wěn)定、高效的藥物，以提高臨床抗腫瘤療效。

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基金項(xiàng)目：2010年廣東省中醫(yī)藥管理局立項(xiàng)課題《參一膠囊對(duì)晚期NSCLC維持治療的策略優(yōu)化研究》(課題編號(hào)：2010292)。

作者簡(jiǎn)介：徐舒(1975-)，男，江蘇無錫人，副主任醫(yī)師，博士，廣州暨南生物醫(yī)藥研究開發(fā)基地(暨南大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合博士后流動(dòng)站)在站博士后，從事腫瘤的中西醫(yī)結(jié)合臨床與基礎(chǔ)研究。

【中圖分類號(hào)】R734

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號(hào)】1007-8517(2016)12-0121-02

(收稿日期：2016.04.15)

InfluenceofShenyiCapsuleMaintenanceTherapyonSATA3andNF-κBinPatientswithAdvancedNSCLC:aRetrospectiveStudy

XUShu1,2FENGGaofei2,3SONGYuhong4

1.GuangZhouJinanBiomedicalResearchAndDevelopmentCenter,Guangzhou510632,China;2.IntegratedChineseandWesternMedicinePostdoctoralresearchstation,JinanUniversity,Guangzhou510632,China;3.LonggangHospitalofTCM,Shenzhen518172,China; 4.GuangzhouFirstPeople’sHospital,Guangzhou510180,China

Abstract:Objective To retrospectively investigate the influence of Shenyi Capsule maintenance therapy on inflammatory factors, as well as STAT3 (signal transducers and activators of transcription 3) and NF-κB(nuclear factor kappa B) in patients with advanced NSCLC .Method Forty patients with advanced NSCLC, who had become palliative or stable after first-line chemotherapy , were intentionally assigned to treatment group and control group equally. Shenyi Capsule was given to treatment group (20mg p.o., bid) until appearance of deterioration or intolerance, while no special treatment was given to control group. Tumor necrosis factor α (TNF-α), interleukin-6(IL-6), STAT3 and NF-κB were tested by blood specimens taken respectively on 1st day and 90th day with ELISA test kit. Results In treatment group, there were no statistical differences (P>0.05) in the level of all the four indexes between 1th day and 90th day. In control group, however, TNF-α, IL-6, STAT3 and NF-κB altogether increased significantly (P<0.01) after 90days. Furthermore, the level of TNF-α, IL-6, STAT3 and NF-κB in treatment group were also lower (P<0.01) than control group on 90th day. Conclusion Shenyi Capsule maintenance therapy could inhibit the expression of TNF-α, IL-6 STAT3 and NF-κB in patients with advanced NSCLC, which once more indicates that blocking the positive feedback of inflammation-cancer vicious spiral may be one of the mechanisms of inhibition from NSCLC progression by Shenyi Capsule maintenance therapy .

Key words:Shenyi Capsule, NSCLC, Maintenance therapy, SATA3, NF-κB