蒙藥額爾頓烏日勒對(duì)兔視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷的血液流變學(xué)影響

白斯琴　烏仁圖雅　李常勝　吳薩日娜　蘇倫高娃

內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古　呼和浩特　010110

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蒙藥額爾頓烏日勒對(duì)兔視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷的血液流變學(xué)影響

白斯琴烏仁圖雅李常勝吳薩日娜蘇倫高娃

內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古呼和浩特010110

【摘要】目的：觀察兔視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷血液流變學(xué)變化及額爾頓烏日勒的保護(hù)作用。方法：將95只日本大耳白兔隨機(jī)分為正常組、模型組、額爾頓·烏日勒(又名珍寶丸)組和原花青素組(PC組)，采用升高兔眼壓到50mmHg持續(xù)2h的方法制作視網(wǎng)膜缺血再灌注模型。除正常組外，每組分別在缺血再灌注1、6、12、24、48、72h后檢測(cè)視網(wǎng)膜組織中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性及血液流變學(xué)指標(biāo)。結(jié)果：除血漿黏度外，模型組與正常組比較，血液流變學(xué)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；珍寶丸組及PC組與模型組比較，血液流變學(xué)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，珍寶丸組與PC組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。SOD：模型組的24h、48h、72h與正常組比較視網(wǎng)膜組織中SOD活力均明顯下降，珍寶丸組及PC組的24 h、48h、72h視網(wǎng)膜組織中SOD活力均相應(yīng)的有所提高，且明顯高于同時(shí)間點(diǎn)模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。組內(nèi)24 h、48h、72h與1h、6h、12h比較，SOD活力均有降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。MDA：模型組24 h、48h、72h與1h、6h、12h比較，珍寶丸組及PC組與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：額爾頓烏日勒可改善視網(wǎng)膜的血流，防治視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷。

【關(guān)鍵詞】額爾頓烏日勒；視網(wǎng)膜；缺血再灌注；血液流變學(xué)

1材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組健康成年無眼疾雄性日本大耳白兔95只，體重2.5～3.0kg，室溫環(huán)境飼養(yǎng)。隨機(jī)分為正常組(5只)、模型組(30只)、珍寶丸組(30只)、PC組(30只)。

1.2主要儀器和試劑721分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠) ,JN-A型精密扭力天平(上海第二天平儀器廠)。丙二醛測(cè)試盒,超氧化物歧化酶測(cè)試盒(南建成生物工程研究所)。

1.3給藥方法于造模前7天按體重下胃管給藥,珍寶丸組灌入珍寶丸0.15g/kg,PC組灌入原花青素300mg/kg,1次/d。正常組及模型組給予等量生理鹽水。

1.4動(dòng)物模型制備采用前方灌注高眼壓致缺血的方法：將兔子稱體質(zhì)量，2%戊巴比妥鈉以劑量1 ml/kg,耳緣靜脈注射麻醉后，隨機(jī)選取每只兔的1只眼造模，復(fù)方托吡卡胺散瞳，滴鹽酸奧布卡因滴眼液眼表面麻醉，將連有生理鹽水灌注的7號(hào)頭皮針沿顳側(cè)角鞏膜緣斜面向上刺入兔眼前房，為了避免損傷晶狀體和虹膜，用膠布固定頭皮針于兔眼同側(cè)耳緣處。緩慢升高輸液瓶至兔眼實(shí)驗(yàn)眼垂直距離為90cm，此高度可在眼內(nèi)形成50mmHg的眼壓，使眼內(nèi)壓超過體循環(huán)收縮壓，從而阻斷視網(wǎng)膜血流，達(dá)到缺血的目的。當(dāng)球結(jié)膜及虹膜迅速變白時(shí)用直接檢眼鏡觀察視網(wǎng)膜蒼白，視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈的供血完全阻斷。實(shí)驗(yàn)過程中間斷點(diǎn)紅霉素眼膏以保持角膜濕潤并預(yù)防感染。持續(xù)2h后，逐漸降低輸液瓶高度至兔眼球水平使眼內(nèi)壓緩慢降低，以恢復(fù)視網(wǎng)膜血供，此時(shí)關(guān)閉輸液器并拔出前房灌注針頭，虹膜及球結(jié)膜顏色迅速恢復(fù)正常，眼底視網(wǎng)膜呈橘紅色，說明阻斷的血管重新開放，形成再灌注，即為IR模型建立成功。術(shù)畢結(jié)膜囊涂紅霉素眼膏，待清醒后回籠。

1.5取材造模后通血再灌注1h時(shí)間點(diǎn)從耳緣靜脈取血5ml進(jìn)行血流變檢查，分別再灌注1、6、12、24、48、72h后處死兔，立即摘取右眼剝離視網(wǎng)膜，取上清液做MDA、SOD吸光度值的測(cè)定。

1.6觀察內(nèi)容

1.6.1從各小組動(dòng)物耳緣靜脈抽取全血5ml，置于肝素鈉抗凝管，搖勻后置于北京塞科希德自動(dòng)血流變測(cè)試儀上立即檢測(cè)全血高切黏度、全血中切黏度、全血低切黏度、血漿黏度等指標(biāo)，其指標(biāo)由機(jī)載程序及特定公式導(dǎo)出；并將所檢測(cè)指標(biāo)的結(jié)果打印成表。

1.6.2分別于再灌注1h、6h、12h、24h、48h、72h后立即空氣栓塞處死動(dòng)物，迅速摘除眼球，在冰環(huán)境中環(huán)角鞏膜緣切開,棄去角膜和晶狀體等,外翻眼球,解剖顯微鏡下剝離視網(wǎng)膜,以分析天平稱視網(wǎng)膜濕重,再用雙蒸水配成2%的濕重,勻漿。將勻漿液倒入試管中, 3000r/min離心15min,取出上清液,測(cè)定其MDA 含量和SOD的活性值。具體操作方法依照MDA和SOD 試劑盒說明書步驟進(jìn)行。

2結(jié)果

2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物情況實(shí)驗(yàn)過程中3只兔因腹瀉死亡，2只兔因胃腸脹氣死亡，2只兔不明原因死亡，尸檢發(fā)現(xiàn)肺臟充血，纖維化嚴(yán)重，考慮肺炎，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中共死亡7只兔，與實(shí)驗(yàn)藥物作用無關(guān)。

2.2血液流變學(xué)的檢測(cè)結(jié)果除血漿黏度外，模型組與正常組比較，血液流變學(xué)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；珍寶丸組及PC組與模型組比較，血液流變學(xué)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，珍寶丸組與PC組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

全血高切粘度全血中切變率全血低切變率血漿粘度正常組3.36±0.774.54±1.6418.89±9.681.32±0.16模型組3.99±2.22▲5.02±3.46▲20.35±11.43▲1.06±0.55珍寶丸組1.82±0.96*2.32±0.96*11.68±3.69*1.22±0.58PC組2.87±1.1*3.53±1.43*17.39±13.24*1.31±0.36

注：與正常組比較,▲P<0.05；與模型組比較，*P<0.05。

2.3視網(wǎng)膜組織中MDA含量及SOD活性的檢測(cè)結(jié)果模型組的24h、48h、72h與正常組比較視網(wǎng)膜組織中SOD活力均明顯下降，珍寶丸組及PC組的24 h、48h、72h視網(wǎng)膜組織中SOD活力均相應(yīng)的有所提高，且明顯高于同時(shí)間點(diǎn)模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。MDA含量明顯低于模型組(P<0.05)，見表3。組間內(nèi)24h、48h、72h 與1h、6h、12h比較，SOD活力均有降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表2。

表2　額爾頓烏日勒對(duì)兔視網(wǎng)膜組織中SOD活性的影響　±s，U·ml-1)

注：與正常組比較,▲P<0.05；與同時(shí)間點(diǎn)的模型組比較，*P<0.05。

表3　額爾頓烏日勒對(duì)兔視網(wǎng)膜組織中MDA活性的影響　±s，nmol·ml-1)

注：與正常組比較,▲P<0.05；與同時(shí)間點(diǎn)的模型組比較，*P<0.05。

3討論

血液流變學(xué)是一門研究物體流動(dòng)、變形的科學(xué)。血液流變學(xué)是生物流變學(xué)的重要分支，是研究有關(guān)血液的變形性與流動(dòng)性的科學(xué)。血液流變學(xué)包括兩部分內(nèi)容: 宏觀血液流變學(xué)和微觀血液流變學(xué)。前者包括血液黏度、血漿黏度、血沉、血液及管壁應(yīng)力分布; 后者包括紅細(xì)胞聚集性、紅細(xì)胞變形性，血小板聚集性、血小板黏附性等，故又稱為細(xì)胞流變學(xué)[1]。血液為非牛頓液體,即血粘度隨切變率而改變。切變率是指在層流的情況下,相鄰兩層血液流速的差和液層厚度的比值,血流快和血管管徑小時(shí),切變率高;血流慢和血管管徑大時(shí),切變率低。當(dāng)血粘度增加時(shí),血管擴(kuò)張,維持正常的血容量。因此,如果外部壓力(如眼內(nèi)壓)阻止了血管擴(kuò)張或引起血管收縮,而自身血粘度又增高,此時(shí)血流量將減少,由此產(chǎn)生局部的血循環(huán)障礙,引起組織缺血、缺氧及功能代謝失調(diào),成為組織(如視神經(jīng))變性、萎縮等一系列病理變化的基礎(chǔ)[2]。

視網(wǎng)膜是代謝非常旺盛的組織,其耗氧及糖原分解能力超過全身其它任何組織,因此對(duì)缺血、缺氧極其敏感,當(dāng)眼壓升高超過視網(wǎng)膜和篩板的自身調(diào)節(jié)功能時(shí), 即引起視網(wǎng)膜血液循環(huán)障礙、CRA血流改變，導(dǎo)致視網(wǎng)膜、篩板、視神經(jīng)供血不足，損害視神經(jīng)和視野。那么急性高眼壓對(duì)眼組織的損傷, 實(shí)質(zhì)是缺血-再灌注的問題[3-4]。視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷后視網(wǎng)膜組織MDA含量明顯增高，SOD活性明顯降低[5]。MDA為機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的最終產(chǎn)物，SOD、GSH是生物體內(nèi)主要的氧自由基清除劑，視網(wǎng)膜缺血時(shí)脂質(zhì)過氧化活躍，MDA生成增多，SOD則因消耗而減少[6-7]。

作為地域性知名藥種，在當(dāng)?shù)鼐哂小吧袼帯敝Q的傳統(tǒng)蒙藥額爾頓-烏日勒(珍寶丸)是治療白脈病(類似于腦出血、腦血栓、神經(jīng)損傷、神經(jīng)根炎等腦神經(jīng)系統(tǒng)疾病)、黑脈病(類似于高血壓、高心病、冠心病等心血管疾病)和各種頑癥(疑難病)的常用蒙藥[8]。20世紀(jì)八、九十年代，學(xué)者們對(duì)額爾頓烏日勒進(jìn)行了初步的藥理學(xué)研究，認(rèn)為該藥具有擴(kuò)張毛細(xì)血管、改善微循環(huán)、抑制血小板聚集和抗血栓作用，以及保護(hù)神經(jīng)損傷等作用，據(jù)研究報(bào)道，額爾敦烏日勒還對(duì)氧自由基有很強(qiáng)的清除和抑制作用[9-10]。

本實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)蒙藥額爾頓-烏日勒改善CRA血流的功能，有效的提高兔眼視網(wǎng)膜組織中的SOD活性和降低MDA含量，對(duì)抗氧自由基介導(dǎo)的視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷中具有保護(hù)作用。模型組(眼內(nèi)壓升高法)的切變率比正常組明顯增高，血粘度增高，此時(shí)血流量減少而引起眼組織缺血、缺氧及代謝功能失調(diào)至視神經(jīng)的變性、萎縮等病變損害視神經(jīng)和視野。而珍寶丸組的全血切變率值與模型組比較明顯降低，血粘度降低。從而為臨床防止視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷相關(guān)性眼病及改善視網(wǎng)膜中動(dòng)脈血流藥物的篩選提供實(shí)驗(yàn)性依據(jù)。

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基金項(xiàng)目：蒙藥額爾頓-烏日勒對(duì)兔眼視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷后視網(wǎng)膜中動(dòng)脈血流變學(xué)和血流動(dòng)力學(xué)的影響及機(jī)制研究(81441108)。

【中圖分類號(hào)】R-332

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號(hào)】1007-8517(2016)12-0002-03

(收稿日期：2016.04.14)

Effect of Mongolian Medicine Eerdun wurile on the Hemarheology in Rabbits' Retinal Ischemia-Reperfusion Injury

BAI SiqinWurentuyaLI ChangshengWusarinaSulungaowa

Inner Mongolia Medical University, Hohhot 010110，China

Abstract:Objective To explore the hemarheology changes in rabbits’ retinal ischemia- repercussion Injury and the protective effect of Eerdun wurile．Methods 95rabbits were randomized into a normal control group，a chemist- repercussion model group，a Eerdun wurile group(Zhen-Bao Pills group) and a Proanthocyanidins group(PC group)．A method of elevating intraocular pressure of rabbits up to 50mm Hg for 2 hours was employed to make a retinal ischemia- reperfusion model.Except normal control group,the tissue malondialdehyde(MDA) content，the activity of superoxide dismutase(SOD) and hemarheology indicators were detected in the rabbits of each group,after Ischemia-reperfusion 1,6,12,24,48,72hour. Results Except plasma viscosity，in comparison of the model group with the normal control group,the differences in hemarheology were significant statistically(P<0.05).In comparison of theZhen-Bao Pills group,PC group with the model group,and Zhen-Bao Pills group with PC group, the differences in hemarheology were significant statistically(P<0.05).SOD:Concerning to SOD activity，the differences were significant statistically in comparison of the 24h、48h and 72h of model group with the normal control group(P<0.05)．The SOD activity of retinal tissue were increased obviously in comparison of the 24h、48h and 72h of Zhen-Bao Pills group,PC group with same time-point subgroups of the model group.MDA:Concerning to MDA content，the differences were significant statistically in comparison of the24h、48h and 72h with the 1h、6h、12h of the model groups，and the Zhen-Bao and PC group with the model group(P<0.05)．Conclusion Eerdun wurile can prevent from and treat the retinal ischemia reperfusion injury．

Key words:Eerdun wurile;Retinal;Ischemia-reperfusion;Hemarheology