電針對急性心肌缺血損傷大鼠相關(guān)經(jīng)穴皮膚血流灌注量影響的后效應(yīng)研究

劉亞利,趙國楨,張平,嵇波,戴健,路雅雯,嚴(yán)明娜,王丹,郭孟瑋,毛穎秋,孫曉敏,白紅新,許詠思(.北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院,北京 0009;.首都醫(yī)科大學(xué),北京 00069)

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·動物實驗·

電針對急性心肌缺血損傷大鼠相關(guān)經(jīng)穴皮膚血流灌注量影響的后效應(yīng)研究

劉亞利1,趙國楨2,張平1,嵇波1,戴健1,路雅雯1,嚴(yán)明娜1,王丹1,郭孟瑋1,毛穎秋1,孫曉敏1,白紅新1,許詠思1
(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院,北京 100029;2.首都醫(yī)科大學(xué),北京 100069)

【摘要】目的通過觀察大鼠處于正常生理態(tài)、心肌缺血損傷病理態(tài)、低頻或高頻電針干預(yù)態(tài)時相關(guān)經(jīng)穴皮膚血流灌注量隨時間變化的情況,探尋不同頻率電針治療心肌缺血損傷后其相關(guān)經(jīng)穴反映的后效應(yīng)。方法將50只雄性Wistar大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表分為空白對照組、假手術(shù)組、模型組、經(jīng)穴低頻電針治療組(經(jīng)穴A組)、經(jīng)穴高頻電針治療組(經(jīng)穴B組)5組,每組10只。于第3次治療結(jié)束后即刻、30 min、60 min應(yīng)用激光散斑襯比成像技術(shù)觀測各組大鼠雙側(cè)內(nèi)關(guān)、郄門、天泉穴區(qū)和非經(jīng)非穴對照點的皮膚血流灌注量,并進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果與空白對照組比較,模型組內(nèi)關(guān)、郄門、天泉雙側(cè)穴區(qū)皮膚血流灌注量均顯著降低(P＜0.01,P＜0.05);低頻或高頻電針治療后,各穴區(qū)皮膚血流灌注量不同程度升高,其中經(jīng)穴A組內(nèi)關(guān)、郄門、天泉雙側(cè)穴區(qū)均以治療后即刻血流灌注量更接近空白對照組;經(jīng)穴B組左側(cè)3個穴位均以治療后30 min更接近空白對照組,而右側(cè)3個穴位均以治療后60 min更接近空白對照組。結(jié)論低頻電針在干預(yù)心肌缺血損傷時對穴區(qū)血流灌注量變化影響的即時效應(yīng)優(yōu)于高頻電針;高頻電針在干預(yù)心肌缺血損傷時對穴區(qū)血流灌注量變化影響的后效應(yīng)優(yōu)于低頻電針。

【關(guān)鍵詞】心肌缺血損傷;電針;皮膚血流灌注量;針灸后效應(yīng);大鼠

皮膚血流由微動脈和微靜脈流經(jīng)體表形成,皮膚血流灌注量(skin blood perfusion)的改變不僅反映局部狀態(tài),而且還反映全身生理病理變化[1]。近年有研究應(yīng)用激光散斑襯比成像技術(shù),發(fā)現(xiàn)人體正常狀態(tài)下經(jīng)穴和非穴對照點之間的血流存在顯著性差異[2]。我們前期研究發(fā)現(xiàn),內(nèi)臟處于不同狀態(tài)時在體表相關(guān)經(jīng)脈經(jīng)穴上皮膚血流灌注量會出現(xiàn)特征性變化。以往有研究發(fā)現(xiàn),針刺對疾病的治療具有時間效應(yīng),其中針灸后效應(yīng)是指停止針刺治療后仍然持續(xù)存在的針刺效應(yīng)[3],且這種效應(yīng)會隨時間延長而發(fā)生規(guī)律性變化[4-6]。有研究提出針刺相關(guān)經(jīng)穴對正常人腦功能網(wǎng)絡(luò)反應(yīng)會呈現(xiàn)出典型的時間序列,表現(xiàn)為一種遲發(fā)的、逐漸達(dá)到峰值并逐步回落的效應(yīng),并且對腦功能區(qū)的激活效應(yīng)甚至可以維持到針刺后的30 min[7-8],進(jìn)一步證明針刺對機(jī)體的調(diào)節(jié)具有后效應(yīng)。但是,針灸在調(diào)節(jié)內(nèi)臟生理病理變化后其相關(guān)經(jīng)穴上反映的后效應(yīng)情況的研究卻較少。因此,本實驗采用激光散斑襯比成像(laser speckle contrast imaging,LSCI)技術(shù),進(jìn)一步觀察大鼠處于正常生理態(tài)、心肌缺血損傷病理態(tài)、低頻或高頻電針干預(yù)態(tài)時相關(guān)經(jīng)穴內(nèi)關(guān)、郄門、天泉穴區(qū)皮膚血流灌注量隨時間的變化規(guī)律,旨在探尋針刺調(diào)治機(jī)體功能狀態(tài)時,其相關(guān)經(jīng)穴反映的后效應(yīng),為臨床應(yīng)用穴位診察機(jī)體功能狀態(tài)變化規(guī)律和針灸調(diào)治疾病規(guī)律提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1實驗動物

清潔級健康Wistar大鼠,雄性50只,7周齡,體重200～230 g,北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供,合格證號為SCXK(京)2012-0001,實驗前將動物飼養(yǎng)于室溫(24±1)℃,相對濕度(45±5)%的環(huán)境中,日光燈照射,12 h明暗交替,以清潔級大鼠飼料和自由飲水適應(yīng)性喂養(yǎng)72 h。本項研究的動物實驗過程均遵守美國國立衛(wèi)生院倡導(dǎo)的實驗動物關(guān)懷和使用指導(dǎo)原則(Guide for Care and Use of Laboratory Anamals,NIH)和以減少(Reduction)、替代(Replacement)和優(yōu)化(Refinement)為核心的動物實驗“3R”原則。

1.2主要試劑和儀器

20%烏拉坦(天津藥業(yè)焦作有限公司生產(chǎn),批號T20091109);注射用青霉素鈉(哈藥集團(tuán)制藥總廠生產(chǎn),批號CD1408008-1);二導(dǎo)HAN’s穴位刺激儀(LH202H,北京華衛(wèi)產(chǎn)業(yè)開發(fā)有限公司);華佗牌無菌針灸針(0.20 mm×13 mm,蘇州醫(yī)療用品廠有限公司);BL-420E﹢生物機(jī)能實驗系統(tǒng)(TM003-002,成都泰盟科技有限責(zé)任公司);動物呼吸機(jī)(HX-300S,成都泰盟軟件有限公司);醫(yī)用冷光源(LG100-2,上海安信光學(xué)儀器制造有限公司);恒溫恒濕實驗系統(tǒng)(SG-H1,南京盛光光電醫(yī)療儀器有限責(zé)任公司);激光散斑血流成像儀(PeriCam,PSI-NR瑞典帕瑞公司)。

1.3急性心肌缺血模型制備

根據(jù)以往研究者采用的大鼠冠狀動脈左前降支結(jié)扎制備的心肌缺血損傷模型并加以改良[9]。20%烏拉坦4.5 mL/kg腹腔注射麻醉,經(jīng)口腔氣管插管后,連接動物呼吸機(jī)(呼吸頻率80～90次/min,吸呼比1:1,潮氣量7 mL/kg),連接BL-420E﹢生物機(jī)能實驗系統(tǒng),大鼠左上肢、左下肢、右下肢,依次接黃色、黑色、紅色電極,持續(xù)監(jiān)控心電(大鼠心電圖的肢體Ⅱ?qū)?lián))。正中偏左側(cè)胸部備皮,常規(guī)碘伏消毒,在第4、5肋間沿胸骨左緣縱向剪開胸部皮膚約1.5 cm,剪開肌肉層,斷開第4、5胸肋連接處,放入開瞼器,暫時關(guān)閉呼吸機(jī)(以防傷及肺臟),迅速撐開開瞼器后(約1.5 cm×1.5 cm見方),再次打開呼吸機(jī)。在冷光源下,用眼科彎鑷撕破心包膜,在動脈圓錐和左心耳交界下約2 mm處,將左冠狀靜脈和左冠狀動脈一起結(jié)扎,進(jìn)針深度約1～1.5 mm,快速排出胸腔氣體和液體后,逐層縫合,傷口消毒,同時頸部皮下每天每次注射青霉素40萬U,以防感染。見圖1。模型評價,以結(jié)扎線上下心肌顏色發(fā)紺、發(fā)白,并出現(xiàn)心電圖J點抬高,初步證明造模成功。剔除結(jié)扎前心電圖不正常或中途死亡及造模不成功的大鼠。術(shù)后注意保暖,排痰以保持呼吸通暢。

圖1　模型制備及皮膚血流測量

1.4實驗分組

按照隨機(jī)數(shù)字表將50只大鼠分為空白對照組、假手術(shù)組、心肌缺血損傷組(簡稱模型組)、經(jīng)穴低頻電針治療組(簡稱經(jīng)穴A組)、經(jīng)穴高頻電針治療組(簡稱經(jīng)穴B組),每組10只。每組6只用于皮膚血流研究。

1.5各組處理方法

空白對照組:常規(guī)飼養(yǎng),除不手術(shù)、不電針外,抓取和固定時間同電針組,每天1次,共3 d。

假手術(shù)組:只在大鼠冠狀動脈左前降支結(jié)扎點穿線,不結(jié)扎,其余操作過程同模型組,并且抓取和固定條件同電針組。

模型組:結(jié)扎大鼠冠狀動脈左前降支,形成心肌缺血損傷改變,抓取和固定條件同電針組。

經(jīng)穴A組:造模成功后,用華佗牌0.20 mm×13 mm毫針直刺左側(cè)內(nèi)關(guān),深度約2 mm,在左側(cè)內(nèi)關(guān)穴外上方0.5 cm非穴處,皮下平刺1 mm,連接HANS/LH202型電針儀,負(fù)極接內(nèi)關(guān)穴針柄,正極接非穴針柄。電針頻率2 Hz,電流強(qiáng)度以大鼠前肢微微顫動為度(1 mA)。造模后,電針治療每天1次,每次20 min,共治療3 d。

經(jīng)穴B組:除電針頻率采用100 Hz外,其余各項均同經(jīng)穴A組。

1.6取穴

根據(jù)大鼠形態(tài)、解剖、生理特點,參照張露芬主編《實驗針灸學(xué)》穴位標(biāo)準(zhǔn)定位。內(nèi)關(guān)(心臟相關(guān)經(jīng)脈絡(luò)穴)穴位于前肢內(nèi)側(cè),距腕關(guān)節(jié)約3 mm左右的尺橈骨縫間;郄門(心臟相關(guān)經(jīng)脈郄穴)位于前肢內(nèi)側(cè),距腕關(guān)節(jié)約7 mm左右尺橈骨縫間;天泉(心臟相關(guān)經(jīng)脈穴位)腋前橫紋頭下約5 mm;非經(jīng)脈對照點為環(huán)跳穴外5 mm(后肢髖關(guān)節(jié)后上緣外0.5 cm)左右。

1.7經(jīng)穴和非經(jīng)非穴區(qū)域血流灌注量檢測方法

1.7.1儀器條件設(shè)置

工作環(huán)境溫度15～30℃,相對濕度10%～80%,大氣壓700～1600 mbar。設(shè)置采樣頻率5圖像/s,平均化記錄5,有效采樣頻率1圖像/s;監(jiān)測距離20～25 cm,每張圖像監(jiān)測范圍,腹面3 cm×14 cm,背面5 cm× 5 cm。

1.7.2檢測方法

大鼠在麻醉前24 h將待測部位脫毛,并用清水洗凈脫毛劑。測試前將大鼠麻醉,固定于臺架上,置于電熱板上保溫待測,調(diào)節(jié)室內(nèi)環(huán)境,保持溫度(23±1)℃,相對濕度(55±5)%,并且無日光直射及明顯空氣對流。測試時將激光散斑血流成像儀的掃描頭對準(zhǔn)測定部位,檢測經(jīng)穴和非經(jīng)非穴區(qū)域皮膚血流變化。盡量保持大鼠相對安靜,若大鼠因麻醉狀態(tài)不穩(wěn)而抽動,則在數(shù)據(jù)處理時避開該“運(yùn)動偽跡”部分,選擇感興趣時間段(TOI)。

1.7.3檢測部位

大鼠心包經(jīng)內(nèi)關(guān)、郄門、天泉穴區(qū)域和非經(jīng)非穴對照點(環(huán)跳穴外5 mm)。

1.7.4檢測時機(jī)

4.對于中等級的金融風(fēng)險，企業(yè)需要開展實時的動態(tài)監(jiān)控工作，而且需要有針對性地進(jìn)行防治，避免風(fēng)險出現(xiàn)升級的情況。

于第3次電針治療后即刻、30 min、60 min觀測空白對照組、假手術(shù)組、模型組、經(jīng)穴A組和經(jīng)穴B組的各檢測區(qū)域血流灌注量變化。

1.7.5數(shù)據(jù)處理

記錄各組檢測區(qū)域血流圖,用PIMSoft血流儀成像處理軟件進(jìn)行分析。打開各組各檢測區(qū)域血流圖像,定義上肢內(nèi)關(guān)、郄門、天泉和非穴點為感興趣區(qū)域(ROI),選擇測量穴區(qū)面積1～1.5 mm2內(nèi)平均血流灌注量(PU),為排除大鼠個體差異,以經(jīng)穴血流灌注量減去非穴點血流灌注量的差值作為各經(jīng)穴最終的血流灌注量[10]來進(jìn)行統(tǒng)計分析。見圖2。

圖2　相關(guān)經(jīng)穴皮膚血流成像圖

1.8統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。各組組間差異采用單因素方差分析,繼以LSD檢驗每兩組之間的差異,非正態(tài)分布采用非參數(shù)檢驗,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1心肌形態(tài)學(xué)的變化

空白對照組心肌細(xì)胞為排列緊密規(guī)則,胞質(zhì)、胞核顯示清晰,細(xì)胞膜完整,核居中,未見炎性細(xì)胞。與空白對照組比較,假手術(shù)組可見少量壞死的心肌細(xì)胞,心肌纖維波浪狀改變,并有散在的白細(xì)胞浸潤;模型組心肌細(xì)胞核碎裂、消失,胞質(zhì)均呈不規(guī)則粗顆粒狀,心肌纖維凝固性壞死、間質(zhì)水腫,有少量中性粒細(xì)胞浸潤。與模型組比較,經(jīng)穴A組心肌細(xì)胞排列恢復(fù)緊密化,核居中,在缺血壞死區(qū)內(nèi)開始出現(xiàn)增生的細(xì)胞,炎細(xì)胞浸潤明顯減少;經(jīng)穴B組在缺血壞死區(qū)內(nèi),增生的細(xì)胞逐漸成長梭形排列,并與周圍的心肌組織相延續(xù)。結(jié)果見圖3。

圖3　各組心肌細(xì)胞(×400)

2.2.1左側(cè)各組內(nèi)關(guān)穴區(qū)皮膚血流灌注量變化值

與空白對照組比較,假手術(shù)組與模型組穴區(qū)皮膚血流灌注量變化值均顯著降低(P＜0.05,P＜0.01);與模型組比較,低頻或高頻電針治療結(jié)束后即刻穴區(qū)皮膚血流灌注量變化值均顯著升高(P＜0.01),治療后30 min低頻或高頻電針穴區(qū)皮膚血流灌注量顯著升高(P＜0.01),治療后60 min低頻和高頻電針穴區(qū)皮膚血流灌注量顯著升高(P＜0.01)。比較不同時間點內(nèi)關(guān)穴皮膚血流灌注量,低頻電針治療后隨時間延長血流灌注量有升高趨勢但無統(tǒng)計學(xué)意義,其中以即刻的皮膚血流灌注量最接近正常;高頻電針治療后隨時間延長血流灌注量呈現(xiàn)先降低再升高的變化趨勢但無統(tǒng)計學(xué)意義,其中以治療后30 min穴區(qū)皮膚血流灌注量最接近正常水平。結(jié)果見表1。

2.2.2左側(cè)各組郄門穴區(qū)皮膚血流灌注量變化值

與空白對照組比較,模型組穴區(qū)皮膚血流灌注量顯著降低(P＜0.05);與模型組比較,低頻或高頻電針治療結(jié)束后即刻穴區(qū)皮膚血流灌注量均顯著升高(P＜0.05,P＜0.01),治療后30 min低頻或高頻電針組穴區(qū)皮膚血流灌注量均顯著升高(P＜0.01,P＜0.05),治療后60 min低頻或高頻電針穴區(qū)皮膚血流灌注量均顯著升高(P＜0.01)。比較不同時間點郄門穴皮膚血流灌注量,低頻電針治療后隨時間延長血流灌注量有升高趨勢但無統(tǒng)計學(xué)意義,其中以即刻的皮膚血流灌注量最接近正常;高頻電針治療后隨時間延長血流灌注量呈現(xiàn)先降低再升高的變化趨勢但無統(tǒng)計學(xué)意義,其中以治療后30 min穴區(qū)皮膚血流灌注量最接近正常水平。結(jié)果見表1。

2.2.3左側(cè)各組天泉穴區(qū)皮膚血流灌注量變化值

與空白對照組比較,模型組大鼠穴區(qū)皮膚血流灌注量顯著降低(P＜0.01);與模型組比較,低頻或高頻電針治療結(jié)束后即刻穴區(qū)皮膚血流灌注量均顯著升高(P＜0.01);治療后30 min時低頻或高頻電針穴區(qū)皮膚血流灌注量均顯著升高(P＜0.01);治療后60 min時,低頻和高頻電針穴區(qū)皮膚血流灌注量均顯著升高(P＜0.01)。比較不同時間點天泉穴皮膚血流灌注量,低頻電針治療后隨時間延長血流灌注量有升高趨勢但無統(tǒng)計學(xué)意義,其中以即刻的皮膚血流灌注量最接近正常;高頻電針治療后隨時間延長血流灌注量呈現(xiàn)先降低再升高的變化趨勢但無統(tǒng)計學(xué)意義,其中以治療后30 min穴區(qū)皮膚血流灌注量最接近正常水平。結(jié)果見表1。

表1　各組大鼠左側(cè)相關(guān)經(jīng)穴不同時間點皮膚血流灌注量變化

表1　各組大鼠左側(cè)相關(guān)經(jīng)穴不同時間點皮膚血流灌注量變化　

注:與空白對照組比較1)P＜0.05,2)P＜0.01;與模型組比較3)P＜0.05,4)P ＜0.01

組別　n　　內(nèi)關(guān)　　郄門　　天泉空白對照組　6　38.99±6.57　65.48±7.96　47.85±4.08假手術(shù)組　6　27.59±7.881)61.03±15.78　27.54±12.22模型組　6　1.71±4.652)21.75±7.641)　7.68±3.602)經(jīng)穴A組即刻　6　42.55±3.154)74.13±9.123)58.37±8.154)經(jīng)穴A組30 min　6　47.64±6.824)81.27±9.834)71.03±10.434)經(jīng)穴A組60 min　6　51.24±4.534)91.84±11.374)90.19±5.194)經(jīng)穴B組即刻　6　68.36±9.604)92.43±20.704)70.16±5.934)經(jīng)穴B組30 min　6　48.47±6.354)72.02±16.373)53.54±14.194)經(jīng)穴B組60 min　6　55.04±9.044)78.06±23.204)56.10±8.934)

2.3心肌不同狀態(tài)時右側(cè)不同經(jīng)穴區(qū)域皮膚血流灌注量變化值的時間效應(yīng)

2.3.1右側(cè)各組內(nèi)關(guān)穴區(qū)皮膚血流灌注量變化值

與空白對照組比較,模型組穴區(qū)皮膚血流灌注量顯著降低(P＜0.01);與模型組比較,低頻或高頻電針治療結(jié)束后即刻穴區(qū)皮膚血流灌注量顯著升高(P＜0.01);治療后30 min低頻或高頻電針穴區(qū)皮膚血流灌注量均顯著升高(P＜0.05,P＜0.01);治療后60 min低頻和高頻電針穴區(qū)皮膚血流灌注量顯著升高(P＜0.01)。比較不同時間點內(nèi)關(guān)穴皮膚血流灌注量,低頻電針治療后隨時間延長血流灌注量呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢,但無統(tǒng)計學(xué)意義,其中以即刻的皮膚血流灌注量最接近正常值;高頻電針治療后隨時間延長血流灌注量呈現(xiàn)先升高再降低的變化趨勢但無統(tǒng)計學(xué)意義,其中以治療后60 min穴區(qū)皮膚血流灌注量最接近正常。結(jié)果見表2。

2.3.2右側(cè)各組郄門穴區(qū)皮膚血流灌注量變化值

與空白對照組比較,模型組穴區(qū)皮膚血流灌注量顯著降低(P＜0.05);與模型組比較,低頻或高頻電針治療后即刻穴區(qū)皮膚血流灌注量均顯著升高(P＜0.05, P＜0.01);治療后30 min低頻或高頻電針穴區(qū)皮膚血流灌注量均顯著升高(P＜0.01);治療后60 min低頻和高頻電針穴區(qū)皮膚血流灌注量均顯著升高(P＜0.05)。比較不同時間點郄門穴皮膚血流灌注量,低頻電針治療后隨時間延長血流灌注量呈現(xiàn)先升高再降低的趨勢,但無統(tǒng)計學(xué)意義,其中以即刻的皮膚血流灌注量最接近正常;高頻電針治療后隨時間延長血流灌注量呈現(xiàn)先升高再降低的變化趨勢,與30 min時比較,60 min時穴區(qū)皮膚血流灌注量顯著降低(P＜0.05),以治療后60 min穴區(qū)皮膚血流灌注量最接近正常。結(jié)果見表2。

表2　各組大鼠右側(cè)相關(guān)經(jīng)穴不同時間點皮膚血流灌注量變化

表2　各組大鼠右側(cè)相關(guān)經(jīng)穴不同時間點皮膚血流灌注量變化　

注:與空白對照組比較1)P＜0.05,2)P＜0.01;與模型組比較3)P＜0.05,4)P ＜0.01;與經(jīng)穴B組30 min比較5)P＜0.05

組別　n內(nèi)關(guān)　　郄門　　天泉空白對照組　644.20±6.99　63.26±4.40　56.25±8.63假手術(shù)組　624.97±9.83　60.13±18.68　30.03±11.361)模型組　6﹣0.20±3.322)　23.46±8.041)　8.49±4.932)經(jīng)穴A組即刻　6　40.77±5.064)　64.13±5.743)　65.96±6.814)經(jīng)穴A組30 min 6　23.95±9.333)　88.20±12.794)80.11±8.904)經(jīng)穴A組60 min 6　39.27±4.504)　58.91±11.403)70.29±4.804)經(jīng)穴B組即刻　6　59.15±7.974)　90.98±10.924)67.87±10.564)經(jīng)穴B組30 min 6　59.89±8.254)109.98±14.394)63.64±5.774)經(jīng)穴B組60 min 6　48.15±10.384)68.99±18.803)5)51.47±5.004)

2.3.3右側(cè)各組天泉穴區(qū)皮膚血流灌注量變化值

與空白對照組比較,假手術(shù)組與模型組穴區(qū)皮膚血流灌注量均顯著降低(P＜0.05,P＜0.01);與模型組比較,低頻或高頻電針治療結(jié)束后即刻穴區(qū)皮膚血流灌注量均顯著升高(P＜0.01),治療后30 min低頻或高頻電針穴區(qū)皮膚血流灌注量均顯著升高(P＜0.01),治療后60 min低頻或高頻電針穴區(qū)皮膚血流灌注量顯著升高(P＜0.01)。比較不同時間點天泉穴皮膚血流灌注量,低頻電針治療后隨時間延長血流灌注量呈現(xiàn)先升高再降低的趨勢但無統(tǒng)計學(xué)意義,其中以即刻的皮膚血流灌注量最接近正常;高頻電針治療后隨時間延長血流灌注量呈現(xiàn)降低的趨勢但無統(tǒng)計學(xué)意義,其中以治療后60 min穴區(qū)皮膚血流灌注量最接近正常。結(jié)果見表2。

3　討論

內(nèi)臟器官生理或病理變化在體表經(jīng)脈穴位上的反映一直是針灸領(lǐng)域的研究熱點,人們采用生物物理或生物化學(xué)的方法從某個角度或一定程度上證明了其相關(guān)性或規(guī)律性。激光散斑襯比成像技術(shù)是利用激光照射到被測組織上,依據(jù)組織血管中紅細(xì)胞運(yùn)動產(chǎn)生的后向動態(tài)散斑對比度值,以獲取血流灌注量信息[11],具有非接觸、無創(chuàng)傷和快速成像等優(yōu)點,非常適用于皮膚微循環(huán)的測量[12],近年來該項技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于經(jīng)穴血流灌注量的觀測。本研究采用該技術(shù)觀測了心肌處于不同狀態(tài)時相關(guān)經(jīng)穴穴區(qū)血流灌注量變化的后效應(yīng)特征。

3.1大鼠處于心肌缺血損傷狀態(tài)時相關(guān)經(jīng)穴血流灌注量變化

皮膚血流灌注量變化與心肌功能密切相關(guān),血容量下降可能引起皮膚血流灌注量的減少[13-14]。同時,皮膚血流灌注量變化又由交感神經(jīng)調(diào)控,尤以交感縮血管神經(jīng)支配最豐富[15-17]。Kuroko Y等[18]研究發(fā)現(xiàn)急性心肌缺血常伴隨著心肌內(nèi)大量NA釋放,交感神經(jīng)興奮性增強(qiáng);并且Charkoudian N等[19]研究發(fā)現(xiàn),皮膚血管舒縮反應(yīng)由交感神經(jīng)的分支來支配,交感神經(jīng)興奮后釋放NA、神經(jīng)肽Y等遞質(zhì)來減少皮膚血流灌注量。本研究中模型組心肌細(xì)胞核碎裂、消失,胞質(zhì)均呈不規(guī)則粗顆粒狀,心肌纖維凝固性壞死、間質(zhì)水腫,證明心肌處于缺血損傷狀態(tài)。心肌處于缺血損傷態(tài)時,交感神經(jīng)興奮性增強(qiáng),血管收縮,穴區(qū)皮膚血流灌注量下降;同時心肌缺血損傷模型制備中,大鼠血容量減少,皮膚血流灌注量亦減少。從實驗結(jié)果中可看出,心臟相關(guān)經(jīng)脈左側(cè)或右側(cè)心包經(jīng)經(jīng)脈線上內(nèi)關(guān)、郄門、天泉穴區(qū)皮膚血流灌注量均有降低,并以天泉和內(nèi)關(guān)穴區(qū)降低最明顯。說明心肌缺血損傷大鼠的外周支配血管的交感神經(jīng)可能還處于興奮狀態(tài),外周微血管收縮,血流灌注量降低。

3.2低頻電針干預(yù)態(tài)時相關(guān)經(jīng)穴血流灌注量變化的后效應(yīng)

有研究發(fā)現(xiàn)低頻電針(1～5 Hz)刺激可以顯著抑制交感神經(jīng)興奮以調(diào)節(jié)心功能的改變[20]。本研究中低頻電針干預(yù)后即刻內(nèi)關(guān)、郄門、天泉穴區(qū)血流灌注量均顯著升高,說明低頻電針治療后即刻可以顯著抑制交感神經(jīng)興奮,舒張血管,從而升高相關(guān)經(jīng)穴皮膚血流灌注量;同時發(fā)現(xiàn)低頻電針干預(yù)后即刻經(jīng)穴血流灌注量較干預(yù)后30 min或60 min更接近正常水平,表明低頻電針起效較快,即刻效應(yīng)較好。這與康建華[21]研究認(rèn)為2 Hz電針加快排尿速度的即刻效應(yīng)優(yōu)于100 Hz電針的結(jié)果相一致。

3.3高頻電針干預(yù)態(tài)時相關(guān)經(jīng)穴血流灌注量變化的后效應(yīng)

有研究表明100 Hz高頻電針刺激對機(jī)體的影響不同于2 Hz低頻電針,從興奮的神經(jīng)纖維類型到引起中樞組織釋放的神經(jīng)肽類物質(zhì)均有差別[22]。本研究結(jié)合不同頻率電針效應(yīng)特點和針刺效應(yīng)的時效規(guī)律擬以針刺后即刻、30 min、60 min作為觀察時間點,探尋這種依賴于時間模式的響應(yīng)區(qū)域的皮膚血流灌注量與不同電針頻率之間的關(guān)系。高頻電針干預(yù)后,各相關(guān)經(jīng)穴表現(xiàn)出左側(cè)以30 min時皮膚血流灌注量最接近空白對照組,右側(cè)以60 min時皮膚血流灌注量最接近空白對照組。說明高頻電針后相關(guān)經(jīng)穴皮膚血流灌注量的變化不同于低頻電針效應(yīng),高頻電針對心肌缺血損傷的調(diào)控表現(xiàn)出一種遲發(fā)的效應(yīng),高頻電針調(diào)控下心肌缺血損傷大鼠右側(cè)相關(guān)經(jīng)脈穴位血流灌注量的影響潛伏期較左側(cè)長,這可能與針刺左側(cè)穴位有關(guān)。

4　結(jié)論

不同頻率電針內(nèi)關(guān)穴對心肌缺血損傷大鼠相關(guān)經(jīng)穴皮膚血流灌注量的調(diào)控存在一定的時間規(guī)律變化特征。在心肌缺血損傷狀態(tài)下,大鼠心包經(jīng)經(jīng)脈線上內(nèi)關(guān)、郄門和天泉穴區(qū)皮膚血流灌注量普遍降低;低頻電針治療后,各穴區(qū)雙側(cè)均以即刻皮膚血流灌注量最接近正常值;高頻電針治療后,各穴位左側(cè)以30 min時皮膚血流灌注量最接近正常值,右側(cè)以60 min時皮膚血流灌注量最接近正常值。綜上,低頻電針或高頻電針治療后,大鼠心包經(jīng)經(jīng)脈線上穴區(qū)皮膚血流灌注量均升高,低頻電針對經(jīng)穴皮膚血流灌注量的影響起效快,即刻效應(yīng)優(yōu)于高頻電針;高頻電針對經(jīng)穴皮膚血流灌注量的影響起效慢,針灸后效應(yīng)優(yōu)于低頻電針。

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【中圖分類號】R2-03

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

DOI:10.13460/j.issn.1005-0957.2016.06.0732

文章編號:1005-0957(2016)06-0732-06

收稿日期2015-12-20

基金項目:國家自然科學(xué)基金面上項目(81373558)

作者簡介:劉亞利(1989-),女,2013級碩士生,Email:846960157@ qq.com

通信作者:嵇波(1965-),女,教授,博士,博士生導(dǎo)師,研究方向為針灸作用規(guī)律與機(jī)理研究,Email:jibo678@263.net

Study of the Post Effect of Electroacupuncture on Blood Flow in the Skins of Related Meridian Points in Rats with Acute Ischemic Myocardial Injury

LIU Ya-li1,ZHAO Guo-zhen2,ZHANG Ping1,JI Bo1,DAI Jian1,LU Ya-wen1,YAN Ming-na1,WANG Dan1,GUO Meng-wei1,MAO Ying-qiu1,SUN Xiao-min1,BAI Hong-xin1,XU Yong-si1.
1.Beijing University of Traditional Chinese Medicine School of Acupuncture and Massotherapy,Beijing 100029,China;2.Capital Medical University,Beijing 100069,China

[Abstract]ObjectiveTo observe over-time changes in rat blood flow in the skins of related meridian points during physiological status,the pathological state of ischemic myocardial injury and low or high frequency electroacupuncture intervention and explore the post effect of different frequency electroacupuncture on related meridian points after treating ischemic myocardial injury. MethodFifty male Wister rats were randomized into five groups:blank control,sham operation,model,low frequency electroacupuncture(meridian point A)and high frequency electroacupuncture(meridian point B),10 rats each.Blood flow in the skins of bilateral points Neiguan(PC6),Ximen(PC4)and Tianquan(PC2),and non-meridian and non-acupoint control points was measured by laser speckle contrast imaging in every group immediately and at 30 and 60 min after the end of three treatments. Statistical analysis was made.ResultBlood flow in the skins of bilateral points Neiguan,Ximen and Tianquan was significantly lower in the blank control group than in the model group(P＜0.01,P＜0.05).Blood flow in the skin of every acupoint increased in varing degrees after low or high frequency electroacupuncture treatment.Blood flow in bilateral points Neiguan,Ximen and Tianquan regions in meridian point group A was closer to that in the blank control group immediately after treatment.Blood flow in three left-side and three right-side acupoint regions in meridian point group B was closer to that in the blank control group at 30 and 60 min,respectively,after treatment.ConclusionThe immediate effect of low frequency electroacupuncture on blood flow in acupoint regions is better than high frequency electroacupuncture during intervention in ischemic myocardial injury.The post effect of high frequency electroacupuncture on blood flow in acupoint regions is better than low frequency electroacupuncture during intervention in ischemic myocardial injury.

[Key words]Ischemic myocardial injury;Electroacupuncture;Dermal blood flow;Acupuncture post effect;Rats