基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1和趨化因子受體4在翼狀胬肉中表達(dá)及與增殖指數(shù)的關(guān)系

張雷鳴　邢立臣　豐亞麗

(齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院眼科，黑龍江　齊齊哈爾　161000)

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基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1和趨化因子受體4在翼狀胬肉中表達(dá)及與增殖指數(shù)的關(guān)系

張雷鳴邢立臣豐亞麗

(齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院眼科，黑龍江齊齊哈爾161000)

〔摘要〕目的觀察翼狀胬肉術(shù)后組織中基質(zhì)細(xì)胞衍生因子(SDF)-1、趨化因子受體(CXCR)4和Ki67的表達(dá)及其意義。方法45例翼狀胬肉術(shù)后組織作為實(shí)驗(yàn)組，正常結(jié)膜組織20例作為對(duì)照組。應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)兩組SDF-1、CXCR4和Ki67的表達(dá)。結(jié)果兩組中SDF-1、CXCR4及Ki67的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)組中SDF-1、CXCR4和Ki67的陽性率與是否為復(fù)發(fā)病例相關(guān)，而與性別、年齡均無相關(guān)性。實(shí)驗(yàn)組中SDF-1與Ki67值、CXCR4與Ki67值均呈正相關(guān)。結(jié)論翼狀胬肉術(shù)后組織中SDF-1、CXCR4高表達(dá)對(duì)病變形成有促進(jìn)作用，二者均可能與對(duì)Ki67標(biāo)記的增殖有一定影響。

〔關(guān)鍵詞〕翼狀胬肉；基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1；趨化因子受體4；Ki67

翼狀胬肉常見于中老年人，其主要誘因是環(huán)境因素，如長(zhǎng)期受風(fēng)沙、煙塵、熱、花粉等過度刺激等，此時(shí)使角膜緣上皮屏障破壞，引起機(jī)體免疫因素和相關(guān)蛋白調(diào)節(jié)的異常，促進(jìn)成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)化〔1,2〕?；|(zhì)細(xì)胞衍生因子(SDF)-1是骨髓基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的趨化因子受體(CXCR)類趨化蛋白，也是已知的唯一能與CXCR4結(jié)合并能將其激活的天然趨化因子〔3,4〕。在腫瘤中SDF-1的表達(dá)研究較多，其對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖及細(xì)胞遷移均有一定作用〔5〕。本研究觀察翼狀胬肉中SDF-1、CXCR4的表達(dá)特征，探討二者與Ki67增殖指數(shù)的關(guān)系。

1資料與方法

1.1臨床資料2012年8月至2015年6月我院行翼狀胬肉手術(shù)的45例患者作為實(shí)驗(yàn)組。其中原發(fā)35例，復(fù)發(fā)10例；男26例，女19例；年齡33～74例，平均56歲；病程1～12年。20例正常結(jié)膜組織標(biāo)本作為對(duì)照組，其中男11例，女9例；年齡36～68例，平均50歲。兩組常規(guī)資料無明顯差異。

1.2SDF-1、CXCR4和Ki67的檢測(cè)方法兩組術(shù)后標(biāo)本均采用甲醛固定，然后以石蠟包埋處理，切片厚度為4 μm。應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)SDF-1、CXCR4和Ki67的表達(dá)，應(yīng)用二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色。操作均由同一技師操作完成。

1.3SDF-1、CXCR4和Ki67的判定SDF-1、CXCR4陽性均定位于細(xì)胞質(zhì)，呈黃色細(xì)顆粒狀，Ki67陽性定位于細(xì)胞核，呈黃色細(xì)顆粒狀。分別按著色強(qiáng)度和著色細(xì)胞數(shù)賦分。著色強(qiáng)度：無差色為0分、淡黃色為1分、棕黃色為2分，棕褐色為3分；著色細(xì)胞百分比：≤5%為0分，6%～25% 1分，26%～50% 2分，51%～75% 3分，≥76% 4分。兩者積分相乘，以<4分為陰性，以≥4分為陽性〔6〕。切片均選擇染色明顯的區(qū)域，計(jì)數(shù)3個(gè)高倍視野區(qū)域(400倍)，取其平均值作為最終的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SAS6.12統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和線性相關(guān)性分析。

2結(jié)果

2.1兩組SDF-1、CXCR4和Ki67陽性率的比較兩組SDF-1、CXCR4和Ki67的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

表1　兩組SDF-1、CXCR4和Ki67的比較〔n(%)〕

2.2實(shí)驗(yàn)組SDF-1、CXCR4和Ki67在不同臨床特征中表達(dá)的比較實(shí)驗(yàn)組SDF-1、CXCR4和Ki67的陽性率與是否為復(fù)發(fā)病例相關(guān)，而與性別、年齡均無相關(guān)性。見表2。

2.3實(shí)驗(yàn)組中SDF-1、CXCR4和Ki67相關(guān)分析實(shí)驗(yàn)組中SDF-1與Ki67值(r=0.41，P=0.043 0)、CXCR4與Ki67值(r=0.43，P=0.042 7)之間均呈正相關(guān)性。

表2　實(shí)驗(yàn)組中SDF-1、CXCR4和Ki67在不同臨床特征中表達(dá)的比較〔n(%)〕

3討論

翼狀胬肉目前其病因及發(fā)病機(jī)制有多種，其中包括紫外線照射的毒性作用、光毒性、細(xì)胞因子代謝的失平衡等。也有學(xué)者提出了翼狀胬肉發(fā)病的兩階段學(xué)說，第1個(gè)階段：角膜緣干細(xì)胞受到破壞，使角膜結(jié)膜功能發(fā)生障礙；第2個(gè)階段：細(xì)胞增生活躍，同時(shí)引起炎癥、血管化和結(jié)締組織的重新塑形，使角膜結(jié)膜化，進(jìn)而引起翼狀胬肉的形成〔7〕。也有學(xué)者提出病變形成時(shí)細(xì)胞可以出現(xiàn)異?；钴S的增殖〔8〕。SDF-1是趨化因子CXC家族成員之一，由68個(gè)氨基酸組成〔9〕。CXCR4是SDF-1的特異性受體，是高度保守的7次跨膜G蛋白耦聯(lián)受體〔10〕。SDF-1與CXCR4有高度的親和力。當(dāng)二者結(jié)合后，形成SDF-1/CXCR4生物軸，同時(shí)啟動(dòng)細(xì)胞間信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用，并引發(fā)一系列生物學(xué)功能〔11〕。有學(xué)者認(rèn)為SDF-1/CXCR4結(jié)合后可以改變G蛋白耦聯(lián)結(jié)構(gòu)，并激活激酶B，使促凋亡蛋白(BAD)發(fā)生磷酸化，抑制其活性，進(jìn)而抑制細(xì)胞凋亡〔12〕。研究認(rèn)為SDF-1/CXCR4可以激活PI3K/Akt和MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，上調(diào)抗凋亡基因BCL-2的表達(dá)，抑制細(xì)胞凋亡〔13〕。

本研究提示SDF-1、CXCR4高表達(dá)是促進(jìn)翼狀胬肉形成的重要因素，同時(shí)SDF-1、CXCR4均可以促進(jìn)Ki67標(biāo)記的細(xì)胞增殖過程，使病變組織增生能力增強(qiáng)。SDF-1、CXCR4和Ki67三者高表達(dá)時(shí)病變呈活躍狀態(tài)，且易于復(fù)發(fā)〔14,15〕。角膜緣干細(xì)胞位于基底部，其具有較多的蛋白酶，增生能力強(qiáng)，細(xì)胞周期長(zhǎng)，呈向心性運(yùn)動(dòng)，此種特征對(duì)修復(fù)受損傷的角膜表面細(xì)胞有重要作用，同時(shí)阻止新生血管的侵入及假性胬肉的形成〔16〕。當(dāng)外界損傷刺激時(shí)，可以引起炎性細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞間黏附分子(ICAM)-1等細(xì)胞因子的分泌，通過作用于Bcl-2使結(jié)膜上皮基底細(xì)胞的正常凋亡受到抑制，此時(shí)細(xì)胞增生活躍。此種增生也有觀點(diǎn)認(rèn)為與腫瘤性增生相似，即相關(guān)因子抑制細(xì)胞凋亡引起的細(xì)胞堆積。同樣失控性增生與凋亡異常的共同作用在病變發(fā)生發(fā)展中也有重要作用〔7〕。SDF-1/CXCR4在多種作用通路中均可以引起凋亡的抑制，對(duì)凋亡的抑制作用直接與翼狀胬肉細(xì)胞的繁殖相關(guān)〔17,18〕。本實(shí)驗(yàn)未觀察到性別和年齡因素與翼狀胬肉的關(guān)系，因此性別和年齡不是病變的影響因素，但是臨床中也發(fā)現(xiàn)翼狀胬肉的發(fā)病人群主要是中老年人群，因此患者年齡及病變的持續(xù)刺激時(shí)間也是臨床不能忽略的因素。綜上，翼狀胬肉術(shù)后組織中SDF-1、CXCR4高表達(dá)對(duì)病變形成有促進(jìn)作用，二者均可能與對(duì)Ki67標(biāo)記的增殖有一定影響。

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〔2014-12-18修回〕

(編輯苑云杰)

〔中圖分類號(hào)〕R777.33

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)12-2998-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.12.083

第一作者：張雷鳴(1980-)，男，主治醫(yī)師，主要從事眼科疾病研究。