• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    胃腺癌中PYGOPUS2、基質(zhì)金屬蛋白酶-2和-14的表達(dá)及對(duì)預(yù)后的判斷價(jià)值

    2016-08-02 01:30:57劉愛(ài)東熊艷杰
    中國(guó)老年學(xué)雜志 2016年12期
    關(guān)鍵詞:進(jìn)展實(shí)驗(yàn)

    劉愛(ài)東 馬 征 熊艷杰 劉 揚(yáng)

    (華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院病理科,河北 唐山 063000)

    ?

    胃腺癌中PYGOPUS2、基質(zhì)金屬蛋白酶-2和-14的表達(dá)及對(duì)預(yù)后的判斷價(jià)值

    劉愛(ài)東馬征1熊艷杰劉揚(yáng)1

    (華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院病理科,河北唐山063000)

    〔摘要〕目的檢測(cè)胃腺癌中PYGOPUS2、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2和MMP-14的表達(dá)特點(diǎn),關(guān)注三者在不同臨床特征中的表達(dá)差別及相關(guān)性。方法以95例胃腺癌作為觀察組,以70例正常胃粘膜組織作為對(duì)照組,采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)二組中PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14的表達(dá),探討三者在不同臨床病理特征中表達(dá)的差別及相關(guān)性。結(jié)果觀察組中PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14表達(dá)的陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組,觀察組中PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14表達(dá)的陽(yáng)性率均與腫瘤體積、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤(rùn)和Ki67的表達(dá)密切相關(guān)。相關(guān)性分析顯示觀察組中PYGOPUS2和MMP-2、PYGOPUS2和MMP-14的表達(dá)均呈正相關(guān)性。生存分析顯示PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14的表達(dá)均與預(yù)后相關(guān)。結(jié)論胃腺癌組織中PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14高表達(dá),對(duì)腫瘤的進(jìn)展有促進(jìn)作用,術(shù)后聯(lián)合檢測(cè)PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14的表達(dá)對(duì)判斷胃腺癌的預(yù)后有一定關(guān)系。

    〔關(guān)鍵詞〕胃腺癌;PYGOPUS2、基質(zhì)金屬蛋白酶-2;基質(zhì)金屬蛋白酶-14;免疫組織化學(xué)技術(shù)

    轉(zhuǎn)移是腫瘤進(jìn)展的重要生物學(xué)行為,在轉(zhuǎn)移過(guò)程中細(xì)胞外基質(zhì)的降解有重要意義?;|(zhì)金屬蛋白酶家族(MMPs)與腫瘤進(jìn)展有關(guān),當(dāng)腫瘤惡變及處于進(jìn)展期時(shí),MMPs大量分泌,可以有效地降解細(xì)胞外基質(zhì),使腫瘤轉(zhuǎn)移的屏障打開(kāi),細(xì)胞的遷移程度增加〔1〕。MMP-2和MMP-14是家族中的重要成員,對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的溶解作用強(qiáng)〔2〕。有研究顯示MMP-14高表達(dá)時(shí)可以高效地促進(jìn)MMP-2分泌,加速基底膜的溶解作用〔3〕。PYGOPUS2蛋白是Wnt信號(hào)通路下游的新功能蛋白,主要通過(guò)結(jié)合游離β-catenin,使其大量聚集在胞質(zhì),并轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi),引起靶點(diǎn)的異?;罨?〕。近年研究認(rèn)為PYGOPUS2參與細(xì)胞的癌變和轉(zhuǎn)移過(guò)程〔5〕。本文關(guān)注胃腺癌中PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14的表達(dá)及臨床意義。

    1材料和方法

    1.1臨床資料收集2006年1~12月行胃腺癌根治手術(shù)后留取的蠟塊組織及患者的臨床資料作為觀察組,納入均符合世界衛(wèi)生組織(WHO)關(guān)于胃腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)。共觀察95例,男54例,女41例,年齡42~79〔平均(60.6±5.9)〕歲;高分化39例,中分化35例,低分化21例,患者手術(shù)前均未進(jìn)行放、化療。同時(shí)選取距腫瘤邊緣大于3 cm的切端正常的胃黏膜組織70例作為對(duì)照組,男39例,女31例,年齡43~76〔平均(59.5±5.8)〕歲。二組一般資料的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

    1.2免疫組化檢測(cè)PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14蛋白的表達(dá)PYGOPUS2蛋白的濃縮液購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司,MMP-2和MMP-14蛋白的濃縮液均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司??贵w按不同比例進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),選擇最佳配比濃度進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。采用免疫組織化學(xué)技術(shù)SP法檢測(cè)組織中PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14蛋白的表達(dá),嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)步驟,并均由同一技師操作,減少誤差,嚴(yán)格質(zhì)控。

    1.3PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14蛋白檢測(cè)結(jié)果的判定方法PYGOPUS2以細(xì)胞核中呈現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞,MMP-2和MMP-14以出細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)均勻棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞,每張切片選擇10個(gè)400倍的高倍視野,取其平均值作為樣本最終的陽(yáng)性表達(dá)率,以陽(yáng)性細(xì)胞≥25%定為陽(yáng)性,以陽(yáng)性細(xì)胞<25%定為陰性。計(jì)算組間陽(yáng)性率的差別。

    1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SAS6.12軟件行χ2檢驗(yàn)、相關(guān)分析和生存分析。

    2結(jié)果

    2.1兩組PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14蛋白表達(dá)陽(yáng)性率的比較PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14在觀察組中表達(dá)的陽(yáng)性率〔83.16%(79/95)、75.79%(72/95)、63.16%(60/95)〕明顯高于對(duì)照組〔24.29%(17/70)、21.43%(15/70)、15.71%(11/70)、χ2=57.412 4、47.782 1、37.006 2,均P<0.000 1〕,見(jiàn)圖1。

    2.2觀察組中不同臨床特征患者PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14蛋白表達(dá)陽(yáng)性率的比較觀察組中PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14的表達(dá)在不同腫瘤直徑、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤(rùn)、Ki67表達(dá)中的差異顯著(P<0.05)。見(jiàn)表1。

    2.3觀察組中PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14表達(dá)的相關(guān)性PYGOPUS2和MMP-2(r=0.45,P=0.019 0)、PYGOPUS2和MMP-14的表達(dá)(r=0.47,P=0.027 8)均呈正相關(guān)性。

    2.4觀察組中PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14表達(dá)的生存分析本組患者隨訪時(shí)間為7~60個(gè)月,平均24.9個(gè)月。經(jīng)檢驗(yàn),胃腺癌中PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14的表達(dá)均與患者預(yù)后相關(guān)(均P<0.05),即PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14高表達(dá)患者的預(yù)后差。

    圖1 胃腺癌PYGPODS2、MMP-2、MMP-14蛋白陽(yáng)性表達(dá)(DAB,×400)

    臨床特征nPYGOPUS2χ2值P值MMP-2χ2值P值MMP-14χ2值P值腫瘤直徑(cm)≤25038(76.00)3.86150.049433(66.00)5.51300.018927(50.00)7.85380.0051>24541(91.11)39(86.67)33(77.78)Ki67≤255542(76.36)4.30540.038036(65.45)7.60380.005829(52.73)6.10770.0135>254037(92.50)36(90.00)31(77.50)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)5743(75.44)6.06280.013839(68.42)4.21650.040030(52.63)6.78570.0092有3836(94.74)33(86.84)30(78.95)脈管浸潤(rùn)無(wú)6450(78.13)4.88800.027044(68.75)5.29670.021436(56.25)4.02220.0449有3129(93.55)28(90.32)24(77.42)分化程度高分化3928(71.79)6.09940.013522(56.41)13.54130.000212(30.77)29.8273<0.0001中+低分化5651(91.07)50(89.29)48(85.71)

    3討論

    胃腺癌臨床常見(jiàn),病變發(fā)展過(guò)程中多種基因和蛋白表達(dá)異常。PYGOPUS是在果蠅實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的蛋白,認(rèn)為是β-catenin蛋白下游的一個(gè)新功能蛋白,其突變導(dǎo)致了WNT信號(hào)的缺失。它有二個(gè)同源蛋白,分別是PYGOPUS1和PYGOPUS2〔6〕。PYGOPUS2基因位于1號(hào)染色體q21.3位置,其編碼的產(chǎn)物為含有233個(gè)氨基酸的蛋白,PYGOPUS2蛋白包括兩個(gè)獨(dú)特的保守區(qū)域,分別是N端同源序列和C端PHD鋅指結(jié)構(gòu)〔7〕。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)PYGOPUS2對(duì)組織發(fā)育、轉(zhuǎn)錄激活及染色質(zhì)重塑均有重要作用〔8,9〕。MMP-2和MMP-14是MMPS家族的重要成員,MMP-2也稱明膠酶A,可以與MMP-9協(xié)同參與作用〔10〕。MMP-14在發(fā)揮作用時(shí)能夠在細(xì)胞的表面對(duì)MMP-2等MMPs家族的成員進(jìn)行有效的活化,同時(shí)又反作用于MMP-14,使MMP-14表達(dá)明顯增高,形成環(huán)式循環(huán),進(jìn)而促進(jìn)腫瘤離開(kāi)原發(fā)部位發(fā)生轉(zhuǎn)移〔11,12〕。也有研究顯示MMP-14可以使腫瘤細(xì)胞間質(zhì)產(chǎn)生較多的MMPs原酶,不僅使其直接發(fā)揮作用,還可以誘導(dǎo)家族的其他成員發(fā)揮級(jí)聯(lián)反應(yīng)〔13,14〕,起到降解細(xì)胞外基質(zhì)的作用。

    本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14蛋白對(duì)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有明顯的促進(jìn)作用,即3種蛋白起到的作用與癌基因類似。陳玉英等〔15〕通過(guò)觀察PYGOPUS2對(duì)大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖的影響,認(rèn)為PYGOPUS2通過(guò)增高cyclinD1水平,促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期,加速細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞分化進(jìn)而有效的引起細(xì)胞的增殖過(guò)程而促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。MMP-2和MMP-14促腫瘤的過(guò)程可能與對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的影響有關(guān),主要表現(xiàn)為對(duì)腫瘤的進(jìn)展的促進(jìn)作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示PYGOPUS2/MMP-2/MMP-14可能具有正向協(xié)同效應(yīng),即三者共同促進(jìn)胃腺癌的進(jìn)展。PYGOPUS2調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)可以有效證明PYGOPUS2對(duì)腫瘤進(jìn)展的作用。PYGOPUS2大量分泌時(shí),可以加速細(xì)胞外基質(zhì)溶解作用,主要可以表現(xiàn)為以MMP-2和MMP-14為主的蛋白酶的分泌。此時(shí)細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的溶解作用增強(qiáng),腫瘤細(xì)胞易于通過(guò)屏障形成播散,進(jìn)而引起腫瘤浸潤(rùn)性生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。Yang等〔16〕通過(guò)觀察肺癌中Desmoplakin的作用,發(fā)現(xiàn)Desmoplakin 在通過(guò)Wnt/β-catenin信號(hào)傳導(dǎo)途徑作用過(guò)程中對(duì)MMP-14有一定的影響,分析認(rèn)為Wnt/β-catenin可能與MMPs有一定相關(guān)性。因此本實(shí)驗(yàn)觀察到的PYGOPUS2/MMP-2/MMP-14的相關(guān)性可能均是通過(guò)Wnt/β-catenin的作用調(diào)節(jié)的。但是由于PYGOPUS2與MMPs的協(xié)同作用并非PYGOPUS2作用的經(jīng)典通路,因此三者協(xié)同作用機(jī)制尚有待更多基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究及進(jìn)一步驗(yàn)證〔17,18〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14均與腫瘤的體積、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤(rùn)、分化程度和Ki67的表達(dá)密切相關(guān),由于以上因素均與腫瘤的預(yù)后相關(guān),因此檢測(cè)三者可能對(duì)判斷預(yù)后有重要價(jià)值,而生存分析直接證實(shí)了此結(jié)論,即三者高表達(dá)的胃腺癌患者預(yù)后差。

    總之,胃腺癌組織中PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14高表達(dá),對(duì)腫瘤的進(jìn)展有促進(jìn)作用,術(shù)后聯(lián)合檢測(cè)PYGOPUS2、MMP-2和MMP-14的表達(dá)對(duì)判斷胃腺癌的預(yù)后有一定價(jià)值。

    4參考文獻(xiàn)

    1劉愛(ài)東,李青,要瑞莉,等.MMP-14 mRNA在胃腺癌中的表達(dá)及意義〔J〕.重慶醫(yī)學(xué),2012;41(5):439-41.

    2Hernandez-Perez M,El-hajahmad M,Massaro J,etal.Expression of gelatinases (MMP-2,MMP-9) and gelatinase activator (MMP-14) in actinic keratosis and in in situ and invasive squamous cell carcinoma〔J〕.Am J Dermatopathol,2012;34(7):723-8.

    3Mohammad MA,Zeeneldin AA,Abd Elmageed ZY,etal.Clinical relevance of cyclooxygenase-2 and matrix metalloproteinases (MMP-2 and MT1-MMP) in human breast cancer tissue〔J〕.Mol Cell Biochem,2012;366(1-2):269-75.

    4De D,Chen A,Wu Z,etal.Overexpression of Pygopus2 protects HeLa cells from vinblastine-induced apoptosis〔J〕.Biol Chem,2009;390(2):157-65.

    5Andrews PG,Lake BB,Popadiuk C,etal.Requirement of Pygopus 2 in breast cancer〔J〕.Int J Oncol,2007;30(2):357-63.

    6王海東,杜天明,項(xiàng)永生,等.Wnt信號(hào)調(diào)控因子Pygo2在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及意義〔J〕.中華神經(jīng)外科疾病研究雜志,2010;9(6):513-5.

    7袁圓陽(yáng),駱啟聰,李超,等.Pygo2轉(zhuǎn)基因小鼠模型的建立及表型的初步分析〔J〕.廈門(mén)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2010;49(2):266-9.

    8Pez F,Lopez A,Kim M,etal.Wnt signaling and hepatocarcinogenesis:molecular targets for the development of innovative anticancer drugs〔J〕.J Hepatol,2013;59(5):1107-17.

    9Popadiuk CM,Xiong J,Wells MG,etal.Antisense suppression of pygopus2 results in growth arrest of epithelial ovarian cancer〔J〕.Clin Cancer Res,2006;12(7 Pt 1):2216-23.

    10Xu YY,Bao YY,Zhou SH,etal.Effect on the expression of MMP-2,MT-MMP in laryngeal carcinoma Hep-2 cell line by antisense glucose transporter-1〔J〕.Arch Med Res,2012;43(5):395-401.

    11Bodnar M,Szylberg L,Kazmierczak W,etal.Differentiated expression of membrane type metalloproteinases (MMP-14,MMP-15) and pro-MMP2 in laryngeal squamous cell carcinoma.A novel mechanism〔J〕.J Oral Pathol Med,2013;42(3):267-74.

    12McLaughlin SL,Ice RJ,Rajulapati A,etal.NEDD9 depletion leads to MMP14 inactivation by TIMP2 and prevents invasion and metastasis〔J〕.Mol Cancer Res,2014;12(1):69-81.

    13Chen TY,Li YC,Liu YF,etal.Role of MMP14 gene polymorphisms in susceptibility and pathological development to hepatocellular carcinoma〔J〕.Ann Surg Oncol,2011;18(8):2348-56.

    14Faber A,Sauter A,Hoedt S,etal.Alteration of MMP-2 and -14 expression by imatinib in HPV-positive and -negative squamous cell carcinoma〔J〕.Oncol Rep,2012;28(1):172-8.

    15陳玉英,王海東,王占祥,等.Pygo2過(guò)表達(dá)促進(jìn)大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖〔J〕.中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2012;41(5):413-5.

    16Yang L,Chen Y,Cui T,etal.Desmoplakin acts as a tumor suppressor by inhibition of the Wnt/β-catenin signaling pathway in human lung cancer〔J〕.Carcinogenesis,2012;33(10):1863-70.

    17黃才權(quán),陳玉英,王占祥.Pygopus蛋白及其與腫瘤相關(guān)研究進(jìn)展〔J〕.實(shí)用腫瘤雜志,2011;26(6):651-3.

    18王海東,陳玉英,王占祥,等.Pygo2在腦膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞的表達(dá)及臨床意義〔J〕.中國(guó)腫瘤臨床,2011;38(2):75-7.

    〔2014-12-08修回〕

    (編輯趙慧玲/曹夢(mèng)園)

    〔中圖分類號(hào)〕R735.1

    〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

    〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)12-2955-03;

    doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2016.12.062

    1唐山職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)校區(qū)

    第一作者:劉愛(ài)東(1975-),男,碩士,副主任醫(yī)師,副教授,主要從事腫瘤分子病理學(xué)研究。

    猜你喜歡
    進(jìn)展實(shí)驗(yàn)
    記一次有趣的實(shí)驗(yàn)
    微型實(shí)驗(yàn)里看“燃燒”
    Micro-SPECT/CT應(yīng)用進(jìn)展
    扁平苔蘚的診斷與治療進(jìn)展
    仿生學(xué)應(yīng)用進(jìn)展與展望
    科技傳播(2019年22期)2020-01-14 03:06:40
    做個(gè)怪怪長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)
    NO與NO2相互轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)的改進(jìn)
    實(shí)踐十號(hào)上的19項(xiàng)實(shí)驗(yàn)
    太空探索(2016年5期)2016-07-12 15:17:55
    寄生胎的診治進(jìn)展
    我國(guó)土壤污染防治進(jìn)展
    河南科技(2014年22期)2014-02-27 14:18:22
    日韩 亚洲 欧美在线| 少妇精品久久久久久久| 干丝袜人妻中文字幕| 精品一区二区三区视频在线| 国产中年淑女户外野战色| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 成年女人在线观看亚洲视频| 九草在线视频观看| 成年av动漫网址| 又大又黄又爽视频免费| 丝瓜视频免费看黄片| 国产精品无大码| 老熟女久久久| 99热网站在线观看| 欧美另类一区| 一二三四中文在线观看免费高清| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 一级毛片 在线播放| 一级a做视频免费观看| 国产综合精华液| 99久久综合免费| 黄色视频在线播放观看不卡| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 亚洲精品第二区| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 亚洲精品成人av观看孕妇| 久久影院123| 国产成人免费观看mmmm| 免费观看在线日韩| 亚洲不卡免费看| 亚洲精品第二区| 亚洲国产欧美在线一区| 国产熟女欧美一区二区| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 国产一区二区在线观看日韩| 日韩一区二区视频免费看| 精品视频人人做人人爽| 青春草视频在线免费观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| h日本视频在线播放| 边亲边吃奶的免费视频| 色吧在线观看| 国产av国产精品国产| 亚洲av成人精品一二三区| 亚洲自偷自拍三级| 国产爱豆传媒在线观看| 久久99精品国语久久久| 国产精品无大码| 如何舔出高潮| 久久久久久久精品精品| 免费大片18禁| 日韩大片免费观看网站| 国产v大片淫在线免费观看| 在现免费观看毛片| 国产精品久久久久久久电影| 亚洲成人中文字幕在线播放| 久久久精品94久久精品| 国产精品偷伦视频观看了| 夜夜爽夜夜爽视频| 国产一区二区三区综合在线观看 | 亚洲精品国产成人久久av| 最近最新中文字幕免费大全7| 日韩av不卡免费在线播放| 精品亚洲成a人片在线观看 | 午夜精品国产一区二区电影| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲av二区三区四区| 最黄视频免费看| 免费少妇av软件| 夜夜爽夜夜爽视频| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| av不卡在线播放| 亚洲自偷自拍三级| 亚洲精品视频女| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 日本一二三区视频观看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 啦啦啦在线观看免费高清www| 免费av不卡在线播放| 麻豆成人av视频| 亚洲欧美成人精品一区二区| 国产91av在线免费观看| 日本爱情动作片www.在线观看| 欧美三级亚洲精品| 午夜免费鲁丝| 欧美最新免费一区二区三区| 欧美精品国产亚洲| 亚洲久久久国产精品| 国产亚洲最大av| 少妇人妻一区二区三区视频| 男女无遮挡免费网站观看| 97在线人人人人妻| 十八禁网站网址无遮挡 | 日韩人妻高清精品专区| 一本色道久久久久久精品综合| 涩涩av久久男人的天堂| 99久久精品国产国产毛片| 美女视频免费永久观看网站| 欧美丝袜亚洲另类| 亚洲av男天堂| 成人黄色视频免费在线看| 欧美日韩精品成人综合77777| 亚洲av日韩在线播放| 国产成人a区在线观看| av女优亚洲男人天堂| 精品熟女少妇av免费看| 成人亚洲欧美一区二区av| 美女高潮的动态| 丰满迷人的少妇在线观看| 少妇精品久久久久久久| 国产一级毛片在线| 亚洲色图综合在线观看| 3wmmmm亚洲av在线观看| 精品一区二区免费观看| 免费少妇av软件| av卡一久久| 偷拍熟女少妇极品色| 久久久成人免费电影| 亚洲欧美日韩东京热| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲人成网站在线播| 99视频精品全部免费 在线| 成年女人在线观看亚洲视频| 国产 一区 欧美 日韩| 国产精品久久久久久久久免| 一区二区三区免费毛片| 国产在线一区二区三区精| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 超碰97精品在线观看| 精品少妇久久久久久888优播| 国产av码专区亚洲av| 国产成人a区在线观看| 国产视频首页在线观看| 亚洲精品日本国产第一区| 天天躁日日操中文字幕| 免费观看性生交大片5| 午夜视频国产福利| 99国产精品免费福利视频| 亚洲天堂av无毛| 老熟女久久久| 国产在线一区二区三区精| 搡老乐熟女国产| 久久久精品94久久精品| 久久ye,这里只有精品| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 久久精品国产a三级三级三级| 久久久色成人| 大香蕉97超碰在线| 一级毛片我不卡| 国产精品久久久久久av不卡| 天天躁日日操中文字幕| 国精品久久久久久国模美| 91久久精品国产一区二区成人| 亚洲第一区二区三区不卡| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲av免费高清在线观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 女的被弄到高潮叫床怎么办| av在线app专区| 精品一区二区三卡| 亚洲,欧美,日韩| 国产精品一二三区在线看| 少妇熟女欧美另类| av卡一久久| a 毛片基地| 韩国av在线不卡| 精品久久久久久久久av| 黄片无遮挡物在线观看| 国产成人91sexporn| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 成人国产av品久久久| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 联通29元200g的流量卡| 国产精品久久久久久久久免| 99热这里只有精品一区| a级毛色黄片| 亚洲av不卡在线观看| 熟妇人妻不卡中文字幕| 欧美高清性xxxxhd video| 亚洲三级黄色毛片| 欧美高清成人免费视频www| 国产成人freesex在线| 女性生殖器流出的白浆| 免费高清在线观看视频在线观看| 视频中文字幕在线观看| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 岛国毛片在线播放| 草草在线视频免费看| av在线播放精品| 大香蕉97超碰在线| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 日韩人妻高清精品专区| 男女国产视频网站| 精品人妻熟女av久视频| 国产免费又黄又爽又色| 大香蕉久久网| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 777米奇影视久久| 七月丁香在线播放| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 超碰97精品在线观看| 亚洲成人手机| 欧美日韩视频精品一区| 身体一侧抽搐| 国产精品国产三级专区第一集| 99热网站在线观看| 亚洲综合色惰| 国产视频首页在线观看| 国产在视频线精品| 国产人妻一区二区三区在| 国产亚洲精品久久久com| 春色校园在线视频观看| 精品人妻熟女av久视频| 日韩视频在线欧美| 22中文网久久字幕| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 91精品国产国语对白视频| 久久精品国产亚洲av天美| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 黄片无遮挡物在线观看| 国产精品一区二区性色av| 99久久中文字幕三级久久日本| 欧美另类一区| 婷婷色综合www| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 日本午夜av视频| 国产成人91sexporn| 亚洲欧美清纯卡通| 韩国高清视频一区二区三区| 另类亚洲欧美激情| 亚洲熟女精品中文字幕| 亚洲国产欧美人成| 毛片一级片免费看久久久久| 午夜免费鲁丝| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 日韩大片免费观看网站| a 毛片基地| videossex国产| 成年免费大片在线观看| 不卡视频在线观看欧美| 99热国产这里只有精品6| av卡一久久| 久久韩国三级中文字幕| 国产一区亚洲一区在线观看| 男女国产视频网站| 久久99热6这里只有精品| 国产在线免费精品| 丰满人妻一区二区三区视频av| 丰满人妻一区二区三区视频av| 日韩免费高清中文字幕av| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产亚洲一区二区精品| 一级二级三级毛片免费看| 国产精品一二三区在线看| 国产午夜精品一二区理论片| 国产av码专区亚洲av| 最黄视频免费看| 亚洲精品乱久久久久久| 久久久久性生活片| 国产精品一区www在线观看| 久热久热在线精品观看| 免费观看在线日韩| 一级毛片 在线播放| freevideosex欧美| 麻豆乱淫一区二区| 免费黄网站久久成人精品| 久久人妻熟女aⅴ| 中文欧美无线码| 国产精品人妻久久久影院| 激情 狠狠 欧美| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 亚洲美女搞黄在线观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产亚洲欧美精品永久| 免费黄色在线免费观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 久久久亚洲精品成人影院| 在线观看国产h片| 国产成人精品久久久久久| 蜜桃在线观看..| 久久国产精品大桥未久av | 22中文网久久字幕| 超碰av人人做人人爽久久| av线在线观看网站| 我的老师免费观看完整版| 人妻夜夜爽99麻豆av| 国产在线免费精品| 99热网站在线观看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 九九在线视频观看精品| 插阴视频在线观看视频| 男女国产视频网站| 日本免费在线观看一区| 特大巨黑吊av在线直播| 欧美激情国产日韩精品一区| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 亚洲电影在线观看av| 成人黄色视频免费在线看| 超碰av人人做人人爽久久| 久久久久久久久久久丰满| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | 欧美极品一区二区三区四区| 五月天丁香电影| 亚洲色图综合在线观看| 免费黄频网站在线观看国产| 久久99精品国语久久久| 99精国产麻豆久久婷婷| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 熟女电影av网| 网址你懂的国产日韩在线| 三级国产精品片| 在线观看人妻少妇| 五月伊人婷婷丁香| 九草在线视频观看| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产v大片淫在线免费观看| 国产又色又爽无遮挡免| 日韩在线高清观看一区二区三区| 深夜a级毛片| 老司机影院毛片| 爱豆传媒免费全集在线观看| 欧美 日韩 精品 国产| 亚洲不卡免费看| 国产极品天堂在线| 观看av在线不卡| 国产精品一区二区性色av| 老司机影院毛片| 亚洲,欧美,日韩| 搡女人真爽免费视频火全软件| 少妇人妻精品综合一区二区| 日韩一本色道免费dvd| 久久97久久精品| 欧美日本视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国产深夜福利视频在线观看| 国产爱豆传媒在线观看| 舔av片在线| 国产高清有码在线观看视频| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产有黄有色有爽视频| 免费大片18禁| 婷婷色av中文字幕| 全区人妻精品视频| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产精品爽爽va在线观看网站| 美女视频免费永久观看网站| av天堂中文字幕网| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产91av在线免费观看| 午夜日本视频在线| 婷婷色综合www| 亚洲性久久影院| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 十八禁网站网址无遮挡 | 久久久成人免费电影| 啦啦啦啦在线视频资源| 国产成人一区二区在线| 激情 狠狠 欧美| 亚洲国产色片| 久久久久久久国产电影| 3wmmmm亚洲av在线观看| 欧美日韩精品成人综合77777| 五月玫瑰六月丁香| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲欧美成人精品一区二区| 免费少妇av软件| 国产精品国产三级国产专区5o| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国产高清不卡午夜福利| 国产精品一及| 美女视频免费永久观看网站| 国产精品一区二区性色av| 欧美精品国产亚洲| 高清欧美精品videossex| 婷婷色综合大香蕉| 亚洲精品视频女| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 亚洲av不卡在线观看| 国产成人freesex在线| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 只有这里有精品99| 国产黄色免费在线视频| 久久精品国产自在天天线| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产免费视频播放在线视频| 成人无遮挡网站| 色5月婷婷丁香| 亚洲自偷自拍三级| 日韩电影二区| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| 草草在线视频免费看| 国产成人aa在线观看| 国产av精品麻豆| 天堂8中文在线网| 国产成人午夜福利电影在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 日韩精品有码人妻一区| 久热久热在线精品观看| 少妇被粗大猛烈的视频| av免费观看日本| 亚洲国产色片| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 最新中文字幕久久久久| 亚洲人成网站在线播| 婷婷色麻豆天堂久久| 国内精品宾馆在线| 日韩国内少妇激情av| 丰满乱子伦码专区| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲精品色激情综合| a 毛片基地| 国产爱豆传媒在线观看| 国产精品一区二区在线不卡| 干丝袜人妻中文字幕| 成人亚洲欧美一区二区av| 一级毛片久久久久久久久女| 如何舔出高潮| 韩国高清视频一区二区三区| 久久午夜福利片| 麻豆成人av视频| 亚洲精品一二三| 99热国产这里只有精品6| 激情五月婷婷亚洲| 午夜激情福利司机影院| 婷婷色av中文字幕| 国产一区有黄有色的免费视频| 中文在线观看免费www的网站| 国产黄片美女视频| 亚洲怡红院男人天堂| 各种免费的搞黄视频| 久久久久网色| 久久这里有精品视频免费| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 26uuu在线亚洲综合色| 我要看日韩黄色一级片| 男人添女人高潮全过程视频| 免费观看av网站的网址| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 精品熟女少妇av免费看| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产亚洲精品久久久com| 午夜激情福利司机影院| 乱码一卡2卡4卡精品| 人人妻人人看人人澡| 国产成人免费观看mmmm| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 欧美+日韩+精品| 性高湖久久久久久久久免费观看| 国国产精品蜜臀av免费| 97在线人人人人妻| 欧美人与善性xxx| 精品国产乱码久久久久久小说| 欧美成人a在线观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 青春草视频在线免费观看| 大话2 男鬼变身卡| 在线观看免费日韩欧美大片 | 国产毛片在线视频| 国产精品一区二区在线不卡| 午夜视频国产福利| 国产黄频视频在线观看| 亚洲成人手机| 久久久久久久久久久免费av| 久久 成人 亚洲| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲国产av新网站| 国产男女内射视频| 嫩草影院新地址| 青春草国产在线视频| 99国产精品免费福利视频| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 一个人看的www免费观看视频| 七月丁香在线播放| 亚洲精品国产av成人精品| 中文字幕久久专区| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产在线男女| 日本午夜av视频| 亚洲av成人精品一二三区| 国产亚洲91精品色在线| 最近的中文字幕免费完整| 亚洲人成网站在线播| 麻豆乱淫一区二区| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 在线免费观看不下载黄p国产| 国产高清三级在线| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲精品日韩av片在线观看| 一级毛片电影观看| 国模一区二区三区四区视频| 国产在视频线精品| 国产在线一区二区三区精| 日韩视频在线欧美| 亚洲真实伦在线观看| 免费高清在线观看视频在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| 性高湖久久久久久久久免费观看| 26uuu在线亚洲综合色| 最近手机中文字幕大全| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 欧美丝袜亚洲另类| 美女cb高潮喷水在线观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 国产 一区精品| 亚洲精品自拍成人| 久久久久久久久大av| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 精品熟女少妇av免费看| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲人成网站高清观看| 成年女人在线观看亚洲视频| 91久久精品国产一区二区三区| 一级毛片电影观看| 在线观看一区二区三区| 精品人妻视频免费看| 国产av精品麻豆| 中文欧美无线码| 美女视频免费永久观看网站| 三级国产精品片| 老司机影院毛片| av又黄又爽大尺度在线免费看| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 久久久久久久大尺度免费视频| 18+在线观看网站| 亚洲av成人精品一二三区| 丝袜脚勾引网站| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产精品无大码| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲av在线观看美女高潮| 欧美日韩亚洲高清精品| 中文字幕久久专区| 日韩精品有码人妻一区| 婷婷色综合www| a级一级毛片免费在线观看| 国产精品女同一区二区软件| 新久久久久国产一级毛片| 日韩一本色道免费dvd| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲av成人精品一区久久| 国产黄色免费在线视频| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 欧美97在线视频| 永久免费av网站大全| 黄色怎么调成土黄色| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 久久国产乱子免费精品| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产乱人偷精品视频| 人体艺术视频欧美日本| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 乱系列少妇在线播放| 高清午夜精品一区二区三区| 午夜激情久久久久久久| 日本黄色片子视频| 伦理电影大哥的女人| 我的老师免费观看完整版| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 韩国av在线不卡| 国产高清不卡午夜福利| 欧美另类一区| 国产乱人偷精品视频| 最近最新中文字幕大全电影3| 午夜福利在线在线| 十分钟在线观看高清视频www | 爱豆传媒免费全集在线观看| 欧美性感艳星| 国产乱人偷精品视频| 全区人妻精品视频| 久久久久人妻精品一区果冻| 免费黄频网站在线观看国产| 久久热精品热| 亚洲精品国产av成人精品| 一个人看视频在线观看www免费| 亚洲国产欧美在线一区| 51国产日韩欧美| 亚洲欧美日韩东京热| 久久久久久久久大av| 成年免费大片在线观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| h日本视频在线播放| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 午夜激情福利司机影院| 久久毛片免费看一区二区三区| 免费观看在线日韩| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产黄片美女视频| 亚洲av免费高清在线观看| 色网站视频免费| 简卡轻食公司| 国产有黄有色有爽视频| 国产精品久久久久久av不卡| 国模一区二区三区四区视频| 国产免费又黄又爽又色| 日本av免费视频播放| 国产男女内射视频| 在线免费十八禁| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国精品久久久久久国模美| 麻豆成人av视频| 丰满迷人的少妇在线观看|