MicroRNA、TIF1γ和乙肝病毒-DNA在乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)中的作用

臧　唯　崔大偉

(吉林市中心醫(yī)院基本外科診治中心肝膽外科，吉林　吉林　132001)

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MicroRNA、TIF1γ和乙肝病毒-DNA在乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)中的作用

臧唯崔大偉

(吉林市中心醫(yī)院基本外科診治中心肝膽外科，吉林吉林132001)

〔摘要〕目的探討乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌(HCC)復(fù)發(fā)患者中MicroRNA、TIF1γ和乙肝病毒(HBV)-DNA的影響。方法采用 PCR 技術(shù)檢測(cè)HCC肝臟組織、血液樣本中MicroRNA、TIF1γ和HBV-DNA的表達(dá)；72例均為復(fù)發(fā)HCC患者為實(shí)驗(yàn)組(其中40例為復(fù)發(fā)不能夠接受手術(shù)組，32例為HCC復(fù)發(fā)行二次或多次手術(shù)治療)，72例非復(fù)發(fā)HCC人群為對(duì)照組，觀察對(duì)比MicroRNA、TIF1γ和HBV-DNA的變化。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組肝臟組織、血液樣本中MicroRNA、TIF1γ呈低表達(dá)，HBV-DNA水平明顯升高(P<0.01)，對(duì)照組變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，但與實(shí)驗(yàn)組比較有明顯差異(P<0.05)，實(shí)驗(yàn)組術(shù)后下降明顯(P<0.05)。結(jié)論HCC患者中MicroRNA、TIF1γ的低表達(dá)和HBV-DNA陽(yáng)性高表達(dá)是影響HCC復(fù)發(fā)的因素，并影響HCC患者的預(yù)后。

〔關(guān)鍵詞〕乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌；MicroRNA；TIF1γ；HBV-DNA

我國(guó)乙肝相關(guān)性肝癌(HCC)發(fā)生率較高。已知乙肝病毒(HBV)-DNA陽(yáng)性在HCC復(fù)發(fā)中有重要的意義，MicroRNA、TIF1γ在腫瘤免疫中的作用功能雖然已有了許多的研究〔1〕，但三者的相互聯(lián)系在HCC中的表達(dá)和作用機(jī)制尚不明確。本研究旨在探討三者的關(guān)系及其對(duì)HCC復(fù)發(fā)的影響。

1資料與方法

1.1對(duì)象我院2010年1月至2015年12月收治的72例HCC患者為實(shí)驗(yàn)組，男31例，女41例；平均年齡65.5歲。其中32例為HCC復(fù)發(fā)行二次或多次手術(shù)治療，40例為復(fù)發(fā)不能夠接受手術(shù)組。HBV-DNA陽(yáng)性非HCC患者為對(duì)照組。

1.2檢測(cè)項(xiàng)目及方法利用realtime PCR檢測(cè)肝臟組織細(xì)胞、血漿中MicroRNA的表達(dá)程度；HBV-DNA測(cè)定采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)，操作步驟和結(jié)果判斷按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行，測(cè)定采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)；TIF1γ 利用PCR檢測(cè)(PCR產(chǎn)物連接入線(xiàn)性化表達(dá)載體，反應(yīng)條件為25℃ 30 min，42℃15 min。

實(shí)驗(yàn)儀器主要使用2720 thermal cycler PCR儀,ABI3730型positive clone測(cè)序儀，穩(wěn)壓DNA電泳儀，凝膠成像儀等；TIF1γ(16G9)：轉(zhuǎn)錄中介因子TIF1γ抗體為上海創(chuàng)高，適應(yīng)物種為鼠和人。檢測(cè)MicroRNA組織血液中的表達(dá)、TIF1γ質(zhì)粒表達(dá)檢測(cè)和HBV-DNA水平陽(yáng)性率，分析術(shù)前與術(shù)后的改變情況。全組均為影像學(xué)及手術(shù)病理已明確的HCC病例。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理利用SPSS16.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1HCC患者復(fù)發(fā)非手術(shù)組與復(fù)發(fā)手術(shù)組的均衡性比較見(jiàn)表1。兩組MicroRNA、TIF1γ、HBV-DNA的變化及平均年齡無(wú)顯著差異(P>0.05)。對(duì)照組為非HCC不進(jìn)行比較。

表1　復(fù)發(fā)非手術(shù)組、復(fù)發(fā)手術(shù)組的均衡性檢驗(yàn)±s)

2.2MicroRNA表達(dá)水平、TIF1γ質(zhì)粒表達(dá)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組MicroRNA、TIF1γ低表達(dá)水平差異顯著(P<0.05)。復(fù)發(fā)非手術(shù)組與復(fù)發(fā)手術(shù)組相比，MicroRNA、TIF1γ高表達(dá)水平無(wú)顯著差異(P>0.05)，MicroRNA、TIF1γ低表達(dá)水平差異顯著(P<0.05，P<0.001)。見(jiàn)表2。

2.3HBV-DNA水平陽(yáng)性率術(shù)前、術(shù)后不同時(shí)間對(duì)照組與復(fù)發(fā)手術(shù)組HBV-DNA陽(yáng)性率比較差異顯著，且實(shí)驗(yàn)組術(shù)后下降明顯(P<0.01)，見(jiàn)表3。

表2　MicroRNA、TIF1γ表達(dá)水平檢測(cè)檢測(cè)結(jié)果

與復(fù)發(fā)手術(shù)組比較:1)P<0.05，2)P<0.001；與對(duì)照組相比:3)P<0.05

表3　復(fù)發(fā)手術(shù)組與對(duì)照組手術(shù)前后陽(yáng)性率比較(%)

3討論

MicroRNA、TIF1γ的異常水平表達(dá)是影響HCC復(fù)發(fā)的因素，有數(shù)據(jù)充分證明MicroRNA不但在其他直腸腫瘤中表達(dá)水平低〔2〕，而且在HCC中呈現(xiàn)低水平表達(dá)，顯示MicroRNA可能是一種HCC的抑制因子。在HCC肝細(xì)胞中，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)-β1通路橋架的功能是繁瑣的，有實(shí)驗(yàn)已證實(shí)TGF-β1通路在HCC中的激活是普遍的，且證明TIF1γ可調(diào)控TGF-p/Smad激活的通路功能〔3，4〕。實(shí)驗(yàn)證明肝臟癌細(xì)胞通過(guò)低水平表達(dá)的TGF-β1來(lái)增強(qiáng)其對(duì)TGF-β1促癌效應(yīng)的敏感性從而使腫瘤復(fù)發(fā)侵襲〔5〕。而HBV-DNA在HCC復(fù)發(fā)中擔(dān)任主要角色，多項(xiàng)研究已證實(shí)，HBV- DNA陽(yáng)性高表達(dá)與HCC的復(fù)發(fā)病死率相關(guān)，且具有顯著的量效關(guān)系〔6，7〕，手術(shù)后HBV- DNA的高量效是影響術(shù)后HCC復(fù)發(fā)的主要因素。

HCC復(fù)發(fā)時(shí)MicroRNA、TGF-β1的水平與機(jī)體免疫功能以及信號(hào)通路的功能機(jī)制尚未完全闡明，但通過(guò)免疫指標(biāo)的測(cè)定，已證實(shí)MicroRNA、TGF-β1存在于復(fù)發(fā)型HCC中〔8〕。MicroRNA、TGF-β1作為一種媒介參與了HCC的復(fù)發(fā)。

本文結(jié)果顯示，MicroRNA、TIF1γ 低水平表達(dá) HBV-DNA的高度復(fù)制增加腫瘤對(duì)機(jī)體的復(fù)發(fā)侵犯率，嚴(yán)重影響HCC的預(yù)后。因此，對(duì)于HCC復(fù)發(fā)的患者，以上3種因子對(duì)評(píng)價(jià)HCC早期的診斷及治療具有重要的意義。

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〔2016-03-17修回〕

(編輯曲莉/滕欣航)

基金項(xiàng)目：吉林省衛(wèi)生計(jì)生委科研課題(2014Q002)

〔中圖分類(lèi)號(hào)〕R604

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)12-2937-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.12.054

第一作者：臧唯(1981-)，男，主治醫(yī)師，主要從事肝膽外科腫瘤診治研究。