牛蒡子萃取物對(duì)血瘀證動(dòng)物模型血液流變學(xué)的影響

朱　凱　楊永剛　李　輝　李軍鴿　李　娜　律廣富　劉　柳　楊　擎　王寶森　于智莘　邱智東

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林　長(zhǎng)春　130117)

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牛蒡子萃取物對(duì)血瘀證動(dòng)物模型血液流變學(xué)的影響

朱凱楊永剛李輝1李軍鴿李娜律廣富劉柳楊擎王寶森于智莘邱智東

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林長(zhǎng)春130117)

〔摘要〕目的探討牛蒡子萃取物對(duì)血瘀證動(dòng)物模型血液流變學(xué)的影響。方法Wistar大鼠60只，按體重隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、陽(yáng)性組、牛蒡子提取物高、中、低劑量組，每組10只，除假手術(shù)組外，每組分別給予相應(yīng)藥物7 d，末次給藥30 min后，各組動(dòng)物皮下注射鹽酸腎上腺素注射液，間隔6 h后同上述方法再注射一次，兩次注射鹽酸腎上腺素注射液之間將動(dòng)物置于2℃冰水浴中游泳5 min，制備血瘀動(dòng)物模型，假手術(shù)組不造模。檢測(cè)大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)、凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、纖維蛋白原(FIB)、血小板聚集率(PA)。結(jié)果與模型組比較，陽(yáng)性組、高、中劑量組的全血黏度有所降低(P<0.05)；陽(yáng)性組，高、中、低劑量組的PT、APTT升高，F(xiàn)IB含量有所降低(P<0.05)；陽(yáng)性組PA有顯著性降低(P<0.01)，高劑量與中劑量組有差異(P<0.05)，與低劑量組無(wú)差異。結(jié)論牛蒡子萃取物具有降低血瘀證大鼠全血黏度、改善血液流變學(xué)指標(biāo)的作用；牛蒡子萃取物能夠改善凝血功能，降低血小板聚集。

〔關(guān)鍵詞〕牛蒡子萃取物；血液流變學(xué)；血瘀證

血瘀證是指人體內(nèi)血行不暢、壅阻血脈、停積為瘀的證候。牛蒡子具有疏散風(fēng)熱透疹解毒、消腫利咽等功效，主治發(fā)熱咳嗽疹出不暢麻疹初起風(fēng)熱稍癢等證〔1〕；現(xiàn)代藥理研究證明其有抗腫瘤、抗病原微生物、抗菌、降血糖等作用〔2〕。牛蒡子超聲萃取物可以改善大鼠中動(dòng)脈缺血(MACO)模型動(dòng)物的神經(jīng)功能缺損評(píng)分，減輕MACO模型動(dòng)物腦水腫，減少腦梗死體積，對(duì)腦缺血?jiǎng)游镉幸欢ǖ纳窠?jīng)保護(hù)作用〔3〕。本文旨在探討牛蒡子萃取物對(duì)血瘀大鼠的保護(hù)作用。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)Wistar雄性大鼠，體重180～220 g，由吉林大學(xué)動(dòng)物中心提供〔SCXK-(吉)2013-0005〕。飼養(yǎng)條件：室溫20℃～25℃，濕度40%～50%，動(dòng)物自由進(jìn)食及飲水，自然晝夜節(jié)律。

1.2主要試劑凝血酶原時(shí)間(PT)測(cè)定試劑盒、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)測(cè)定試劑盒、纖維蛋白原(FIB)測(cè)定試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.3實(shí)驗(yàn)藥品及儀器

1.3.1藥品牛蒡子提取物(由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)研發(fā)中心藥理實(shí)驗(yàn)室提供)、銀杏葉分散片(深圳海王藥業(yè)有限公司)、水合氯醛(沈陽(yáng)市試劑三廠)、鹽酸腎上腺素注射液〔開(kāi)封制藥(集團(tuán))有限公司)〕、肝素(北京鼎國(guó)生物技術(shù)有限公司)、二磷酸腺苷(北京普利生公司)。

1.3.2儀器血凝儀(COATRON M4，賽默費(fèi)世爾儀器有限公司)、血小板聚集儀(LBY-NJ4，北京普利生儀器有限公司)、血流變儀(LBY-N6K，北京普利生儀器有限公司)、離心機(jī)(TG18K，長(zhǎng)沙東旺實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)。

1.4實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1分組及給藥Wistar大鼠60只，隨機(jī)分成假手術(shù)組、模型組、陽(yáng)性組、牛蒡子提取物高、中及低劑量組，每組10只。 假手術(shù)組與模型組給予蒸餾水；陽(yáng)性組給予銀杏葉分散片0.50 g/kg；牛蒡子提取物低劑量組給予牛蒡子提取物0.1 g/kg、中劑量組予0.2 g/kg、高劑量組予0.4 g/kg。連續(xù)7 d，1次/d。

造模：末次給藥30 min后，除假手術(shù)組外，各組動(dòng)物皮下注射鹽酸腎上腺素注射液(0.1%)0.2 ml/只共2次，2次之間間隔6 h。兩次注射之間置于2℃冰水浴中游泳5 min〔4〕。

1.4.2指標(biāo)動(dòng)物于第8日全部腹腔注射3%水合氯醛(1 ml/100 g體重)麻醉，腹主動(dòng)脈取血，肝素抗凝，取3 ml全血以血流變儀測(cè)定血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)；剩余全血于4℃ 3 000 r/min離心15 min，分離血漿，以全自動(dòng)凝血儀測(cè)定PT、APTT、FIB含量；計(jì)算血小板聚集率(PA)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用SPSS16.0軟件進(jìn)行方差檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1全血黏度測(cè)定結(jié)果與假手術(shù)組比較，模型組高、中、低切全血黏度有所升高(P<0.05)；與模型組比較，陽(yáng)性組、牛蒡子提取物高、中劑量組的全血黏度有所降低(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1　牛蒡子提取物對(duì)血瘀證大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的影響

與假手術(shù)組比較：1)P<0.05；與模型組比較：2)P<0.05；下表同

2.2凝血指標(biāo)測(cè)定結(jié)果與假手術(shù)組比較，模型組大鼠PT、APTT降低，F(xiàn)IB含量有所增高(P<0.05)；與模型組比較，陽(yáng)性組，高、中、低劑量組的PT、APTT升高，F(xiàn)IB含量有所降低(P<0.05)，見(jiàn)表2。

2.3血漿PA測(cè)定結(jié)果與假手術(shù)組〔(40.6±3.21)%〕比較，模型組PA〔(57.8±4.11)%〕有所增高(P<0.05)。與模型組比較組，陽(yáng)性組PA〔(42.2±6.46)%〕顯著性降低(P<0.01)。高劑量組〔(45.7±5.10)%〕與中劑量組〔(48.3±3.07)%〕與模型組比較有差異(P<0.05)。模型組與低劑量組〔(54.8±5.37)%〕比較無(wú)差異。

表2　牛蒡子提取物對(duì)血瘀癥大鼠凝血功能的影響

3討論

血瘀證可見(jiàn)于多種疾病，也可見(jiàn)于疾病的不同發(fā)展階段〔4〕。它主要由于人體瘀血內(nèi)阻、血行不暢導(dǎo)致的整體反應(yīng)狀態(tài)，如氣虛血瘀、熱郁血瘀、痰凝血瘀等〔5，6〕。因此，本研究從氣虛瘀證入手，辨析與提取氣虛、血瘀等證候要素，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)和方法，采用兩次皮下注射鹽酸腎上腺素、間隔內(nèi)對(duì)大鼠進(jìn)行冰浴游泳模擬血瘀證。

牛蒡子味苦、辛，性寒、歸肺胃二經(jīng)，歷代古籍都有收錄，是臨床上常用的中草藥，其主要的功效有消腫利咽，透疹解毒，疏散風(fēng)熱，主治熱毒疼腫，疹出不暢，痄腮，麻疹初起等〔2〕；藥理研究發(fā)現(xiàn)牛蒡子還具有抗腫瘤、抗病原微生物、抗菌等藥理作用作用〔7〕。本研究結(jié)果提示，牛蒡子萃取物具有降低血瘀證大鼠全血黏度，改善血液流變學(xué)指標(biāo)的作用；牛蒡子萃取物能夠改善凝血功能，降低血小板聚集。本研究為牛蒡子萃取物治療血瘀證的有效性提供了可靠的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并為牛蒡子的合理利用與開(kāi)發(fā)提供了新的思路，為今后安全合理的利用牛蒡子奠定了基礎(chǔ)。

4參考文獻(xiàn)

1Han ZW，Wang MZ，Wang LY，etal.Chemical analysis of burdock root constituents〔J〕.Asian J Chem，2013;25(5)：2573-80.

2尹丹丹.牛蒡子提取物的抗氧化活性研究〔J〕.西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào),2011;39(4)：201-5.

3隋欣，邱智東，李輝，等.牛蒡子萃取物對(duì)大鼠局灶性腦缺血損傷的保護(hù)作用〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2015;35(11)：2929-30.

4趙玲，魏海峰，李雅莉,等.從血液流變學(xué)的改變分析腎上腺素致血瘀證大鼠模型的建立〔J〕.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2010;8(2)：188-90.

5趙輝，王鍵，李凈，等.多因素復(fù)合制作氣虛血瘀證腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ腕w會(huì)〔J〕.河南中醫(yī)，2001;21(4)：18-20.

6陳會(huì)敏.牛蒡子對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠降血脂效應(yīng)及其機(jī)理研究〔J〕.中華中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2010;28(3)：626-7.

7Wang CH，Chung FY，Tsai TR，etal.Development of great burdock essence compounds〔J〕.Genomic Med Biomark Health Sci，2012;4(1)：45-7.

〔2015-09-21修回〕

(編輯李相軍)

基金項(xiàng)目：吉林省教育廳資助項(xiàng)目〔吉教科合字(2014)第98號(hào)〕

通訊作者：于智莘(1977-)，女，副教授，主要從事中藥藥劑學(xué)研究。

〔中圖分類(lèi)號(hào)〕R749

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)12-2854-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.12.012

1吉林省前衛(wèi)醫(yī)院

邱智東(1965-)，男，教授，主要從事中藥藥劑學(xué)研究及新藥研發(fā)研究。

第一作者：朱凱(1980-)，男，副教授，主要從事生物活性分子研究。