角質(zhì)細(xì)胞生長因子促進表皮細(xì)胞遷移研究

楊云

（定西市人民醫(yī)院，甘肅 定西 743000）

角質(zhì)細(xì)胞生長因子促進表皮細(xì)胞遷移研究

楊云

（定西市人民醫(yī)院，甘肅 定西 743000）

目的 了解角質(zhì)細(xì)胞生長因子（KGF）對人表皮細(xì)胞遷移的影響。方法 在試驗組培養(yǎng)基中加入KGF，于48、96、144 h后觀察表皮細(xì)胞的遷移距離，并與對照組比較。結(jié)果 KGF可有效促進表皮細(xì)胞遷移。144 h后，試驗組細(xì)胞遷移的距離幾乎是對照組的2倍。結(jié)論 KGF是一種特異性較強、能夠促使上皮細(xì)胞遷移的生長因子，應(yīng)對其做進一步研究。

角質(zhì)細(xì)胞生長因子；表皮細(xì)胞；損傷修復(fù)；劃痕試驗

角質(zhì)細(xì)胞生長因子（Keratinocyte Growth Factor，KGF）是一種特異性的高效促上皮細(xì)胞增殖的生長因子，在損傷修復(fù)過程中發(fā)揮重要作用[1，2]。KGF最初發(fā)現(xiàn)于人胚胎肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)中[3]，雖然不是由上皮組織產(chǎn)生，但屬于FGF家族成員（也稱之為FGF-7）[4]。本試驗利用劃痕創(chuàng)傷觀察KGF對人皮膚細(xì)胞的促遷移能力，為臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料收集與分離

取1例病人手術(shù)中切除的皮膚組織9塊，重復(fù)試驗3次。經(jīng)PBS（磷酸緩沖鹽溶液）沖洗后置入Dispase酶中，4℃過夜；收集皮片，置0.25%胰酶與0.02%EDTA（1∶1）混合液中，37℃，10～15 min，經(jīng)吹打、過濾后收集單細(xì)胞懸液加入SKF上皮細(xì)胞培養(yǎng)液，以10×104/ml的密度接種于培養(yǎng)瓶中。當(dāng)細(xì)胞鋪滿80%時，用0.25%胰酶消化后接種傳代，取2~3代細(xì)胞進行試驗研究。

1.2細(xì)胞培養(yǎng)與觀測

在6孔板中接種表皮細(xì)胞，待細(xì)胞鋪滿后，制備80%μm寬的劃痕并標(biāo)記，作為細(xì)胞遷移的基點。用PBS洗細(xì)胞3次，去除劃下的細(xì)胞，加入培養(yǎng)基，試驗組培養(yǎng)基中加入15.0 ng/ml的KGF，對照組不添加。置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)，于48、96、144 h觀察，取10個遷移最遠(yuǎn)的不同點測量距離，以平均值作為表皮細(xì)胞的遷移距離。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理

試驗結(jié)果以SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，采用獨立樣本t檢驗。P<0.05表示有顯著性差異。

2結(jié)果與分析

2.1細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果

原代培養(yǎng)皮膚表皮細(xì)胞，3~5 d可見細(xì)胞貼壁生長。細(xì)胞展開后為多角形，呈典型的鋪路石樣，具有明顯的上皮細(xì)胞培養(yǎng)特征（見圖1）。

圖1　體外培養(yǎng)的人表皮細(xì)胞

2.2劃痕試驗結(jié)果

24 h后，細(xì)胞可見明顯遷移；48 h后試驗組遷移距離較對照組遠(yuǎn)，試驗組為（29.20±0.02）μm，對照組為（21.70±0.03）μm；96 h后試驗組為（50.10±0.01）μm，對照組為（37.50±0.04）μm，有顯著性差異；144 h后試驗組劃痕基本覆蓋，而對照組仍可見明顯的細(xì)胞空白區(qū)（見圖2、3）。

與對照組相比，KGF促表皮細(xì)胞遷移能力隨著時間的延長逐漸明顯。96 h后兩組間出現(xiàn)顯著性差異，144 h后試驗組細(xì)胞遷移的距離幾乎是對照組的2倍。

圖2　KGF對人皮膚表皮遷移的影響

圖3　KGF促進人皮膚表皮細(xì)胞遷移效應(yīng)

3結(jié)論

劃痕試驗是體外試驗中最常用的檢測創(chuàng)傷愈合的模型，其有效模擬了創(chuàng)傷愈合初期由細(xì)胞伸展、增殖、遷移覆蓋創(chuàng)面的過程[5]。本試驗中，我們選擇此模型用以觀察KGF對表皮細(xì)胞遷移的影響。

Nguyen等[6]曾就KGF對乳腺癌細(xì)胞的增殖和遷移作用進行了觀察，發(fā)現(xiàn)KGF可明顯促進乳腺癌細(xì)胞遷移、增殖，并呈濃度依賴性。本次試驗我們借鑒其他試驗中所采用的KGF濃度來刺激人表皮細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，KGF可有效促進表皮細(xì)胞遷移。作用144 h后，試驗組細(xì)胞遷移距離幾乎是對照組的2倍，這與Marti等[7]在小鼠創(chuàng)傷模型中觀察到的結(jié)果一致。已有研究表明，KGF是一種特異性的高效促上皮細(xì)胞增殖的生長因子，可以促進有絲分裂，這與c-myc、c-fos c以及核苷酸合成的調(diào)節(jié)酶的表達(dá)有關(guān)[8]。所以，試驗組劃痕愈合時間明顯短于對照組，可能與KGF促進表皮細(xì)胞的增殖能力有一定關(guān)系，但對于KGF如何促進細(xì)胞遷移，目前還不明確，其機理有待進一步研究。

本試驗利用體外表皮創(chuàng)傷模型觀察KGF對人表皮細(xì)胞的促遷移能力，進一步證實和肯定其在皮膚創(chuàng)傷愈合方面的巨大潛能，為臨床應(yīng)用奠定了良好基礎(chǔ)。

[1]Braun S，Krampert M，Bodó E，et al.Keratinocyte growth factor protects epidermis and hair foll icles from cell death induced by UV irradiation，chemotherapeutic or cytotoxic agents[J].J Cell Sci，2006，119（23）：4841-4849.

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G424.31

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1671-1246（2016）13-0098-03