一例奶牛蹄病的綜合診治

程子龍，劉　朋，劉思當(dāng)（山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東泰安　271000）

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一例奶牛蹄病的綜合診治

程子龍，劉朋，劉思當(dāng)
（山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東泰安271000）

摘要：2015年6-8月期間，山東某規(guī)模奶牛場180頭奶牛先后出現(xiàn)蹄子腫脹、潰爛，無法站立，采食飲水困難，腹瀉，逐漸消瘦等癥狀，死亡或淘汰80多頭，損失重大。通過細(xì)菌分離鑒定和16SrRNA基因同源性分析，分離出葡萄球菌。通過對死淘牛蹄部組織進(jìn)行病理組織學(xué)觀察，對牛舍環(huán)境、日糧搭配、飼養(yǎng)管理等進(jìn)行調(diào)查分析，最后確認(rèn)該病例為葡萄球菌感染引起的蹄葉炎。其誘因可能與牛舍環(huán)境、日糧搭配、飼養(yǎng)管理等因素相關(guān)。基于發(fā)病原因?qū)δ膛鲋贫ňC合防控措施，經(jīng)過一周左右的治療，病情得到控制。

關(guān)鍵詞：奶牛；蹄??；綜合診治；葡萄球菌

1　發(fā)病背景

2015年6—8月，山東省某規(guī)模奶牛場180頭奶牛出現(xiàn)嚴(yán)重的肢蹄病，開始時(shí)蹄冠部紅腫，患牛疼痛癥狀明顯，病蹄不敢負(fù)重。隨著病情發(fā)展，蹄子腫脹越來越重，甚至出現(xiàn)破潰，繼發(fā)細(xì)菌感染化膿。由于病牛無法站立，嚴(yán)重影響吃料和飲水，加上蹄部感染的細(xì)菌引起全身感染，重癥病牛出現(xiàn)腹瀉、脫水，甚至因敗血癥急性死亡，部分牛因無飼養(yǎng)價(jià)值而遭淘汰。

2　診斷方法

2.1病理學(xué)檢查

詳細(xì)觀察蹄部，取蹄部炎癥組織于10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟切片［1］，HE染色，光鏡下觀察。

2.2細(xì)菌分離培養(yǎng)

自患牛蹄部膿腫內(nèi)采集膿汁、破潰處化膿灶，在血瓊脂平板上用劃線分離培養(yǎng)法進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)［2］。劃線完畢后分別進(jìn)行有氧和無氧培養(yǎng)，24小時(shí)后觀察細(xì)菌生長情況，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程要求嚴(yán)格無菌操作。

2.3革蘭氏染色

用滅菌環(huán)分別挑取大小、形態(tài)、顏色不一樣的單個(gè)菌落，在滴有無菌璘酸緩沖鹽溶液（PBS）的載玻片上均勻涂布，自然晾干或者用酒精燈烤干；用革蘭氏染液染色，自然晾干后用油鏡觀察。

2.4藥物敏感試驗(yàn)

用圓紙片擴(kuò)散試驗(yàn)法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)［3］。分別將乳酸恩諾沙星、左氧氟沙星、氟苯尼考、硫酸新霉素、環(huán)丙沙星、林可霉素、頭孢噻呋鈉藥敏片均勻貼在涂有細(xì)菌的平板上，放置在37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24小時(shí)，觀察結(jié)果。根據(jù)藥物紙片周圍有無抑菌圈及其直徑大小，判斷該菌對各種藥物的敏感程度。

2.5分子生物學(xué)檢測

分別挑取大小、形態(tài)、顏色不一樣的單個(gè)菌落，混在LB液體培養(yǎng)基中，220 r/min、37℃搖菌12～16小時(shí)。用菌液作為模板，根據(jù)細(xì)菌16S rRNA基因設(shè)計(jì)通用引物，進(jìn)行RCR、16S rRNA序列測定，并對測序結(jié)果進(jìn)行BLAST比對分析［4-5］。2

.6 使用細(xì)菌鑒定藥敏儀鑒定細(xì)菌

利用德國西門子96-Plus全自動(dòng)細(xì)菌鑒定藥敏儀，對平板上長出的菌落進(jìn)行鑒定并做藥敏試驗(yàn)［6］。

3　結(jié)果

3.1蹄部病變

蹄部沖洗干凈以后可見趾間蜂窩織炎，球關(guān)節(jié)腫脹、化膿、破潰，破潰后形成腐肉樣疣狀物，切開后發(fā)現(xiàn)趾間皮膚增厚、發(fā)硬，關(guān)節(jié)腔內(nèi)有大量的黃色積液（圖1）。蹄部病理組織學(xué)觀察，主要表現(xiàn)化膿性炎癥病變。

圖1　蹄部病變

3.2革蘭氏染色結(jié)果

利用油鏡觀察，主要見革蘭氏染色陽性菌，呈球形，兩個(gè)或者四個(gè)甚至更多的細(xì)菌聚集成葡萄串狀，初步判定為葡萄球菌（圖2）。

3.3藥敏試驗(yàn)結(jié)果

圖2　油鏡下細(xì)菌形態(tài)

所分離細(xì)菌主要對喹諾酮類藥物敏感，對左氧氟沙星、恩諾沙星均為高敏，對氟苯尼考中敏，對青霉素、頭孢噻呋鈉、磺胺藥不敏感。

3.4分子生物學(xué)檢測結(jié)果

對細(xì)菌PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序分析，與登錄號(hào)為KP279982.1的人葡萄球菌人亞種同源性為99%，為人葡萄球菌人亞種；另一株與登錄號(hào)為KJ783397.1、KJ783395.1、KJ783392.1、KJ783387.1的產(chǎn)色葡萄球菌同源性為98%，為產(chǎn)色葡萄球菌。

3.5細(xì)菌鑒定儀鑒定結(jié)果

細(xì)菌鑒定結(jié)果顯示有多種生物型葡萄球菌，包括松鼠葡萄球菌、表皮葡萄球菌、木糖葡萄球菌、人葡萄球菌人亞種、溶血性葡萄球菌等不同血清型。

4　防治情況

通過細(xì)菌分離鑒定，從患病牛蹄部化膿部位分離到的多種葡萄球菌，導(dǎo)致奶牛蹄部出現(xiàn)紅腫甚至化膿，引起嚴(yán)重的肢蹄病。另外其它一些因素也是本病的誘因，比如，日糧搭配不當(dāng)，精料飼喂過多，牛運(yùn)動(dòng)場泥濘潮濕，飼料中內(nèi)毒素、致炎因子含量過高等。除此之外，護(hù)蹄不當(dāng)、其他疾病等也可誘發(fā)該病。因此，應(yīng)綜合考慮以上幾個(gè)方面的因素，采取控制細(xì)菌感染、調(diào)整日糧結(jié)構(gòu)、改善養(yǎng)殖環(huán)境、消除誘發(fā)因素等綜合防控措施，實(shí)施治療。

4.1全身用藥

飼料中添加硫酸新霉素、包被維生素C、包被恩諾沙星，減少消化道內(nèi)細(xì)菌內(nèi)毒素、組織胺等致炎因子的產(chǎn)生。其具有抗氧化、減少自由基、減輕炎癥反應(yīng)等功效［7］。配合肌肉注射左氧氟沙星針劑，對病重的牛輸液。

4.2局部治療

定期對全群牛蹄部用4%硫酸銅溶液進(jìn)行藥浴；對已經(jīng)發(fā)病的牛局部用普魯卡因青霉素封閉治療。用0.1%高錳酸鉀或10%硫酸銅溶液沖洗蹄部［8］，涂以10%碘酊和魚石脂，打上繃帶，2～3天換藥一次。

4.3改善飼養(yǎng)環(huán)境

保證牛舍清潔干燥，及時(shí)清除糞尿，定期消毒；運(yùn)動(dòng)場注意排水、平整，保持清潔干燥，清除石塊。

4.4調(diào)整飼草飼料

合理調(diào)整日糧結(jié)構(gòu)，控制奶牛日糧精粗比例，防止精料過多或日糧搭配不合理；控制日糧中鈣磷比例，保證日糧中礦物質(zhì)及微量元素的足量供給。另外，飼喂優(yōu)質(zhì)的飼草飼料，避免飼草飼料中存在內(nèi)毒素和致炎因子。

通過實(shí)施上述綜合防控措施，1周后未淘汰的病牛絕大多數(shù)治愈，牛群中未再有新病例出現(xiàn)，病情得以控制。

參考文獻(xiàn)：

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［5］楊霞，陳陸，王川慶. 16S rRNA基因序列分析技術(shù)在細(xì)菌分類中應(yīng)用的研究進(jìn)展［J］.西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2008（2）：55-60.

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［8］肖紅衛(wèi)，李曉鋒，劉西梅，等.牛蹄病綜合防治措施［J］.湖北畜牧獸醫(yī)，2007（12）：30-31.

（責(zé)任編輯：杜憲）

Comprehensive Diagnosis and Treatment of a Case of Dairy Cow Hoof Disease

Cheng Zilong，Liu Peng，Liu Sidang
（College of Animal Science and Technology，Shandong Agriculture University，Tai’an，Shandong 271000）

Abstract：From June to August in 2015，180 cows of a large-scaled dairy cow farm in Shandong Province showed hoof swell，fester and couldn't stand up to obtain food and water. Huge economic loss was caused by eliminating 80 of them. They were diagnosed as laminitis caused by staphylococcus via bacterial isolation and identification，16S rRNA homology analysis，histopathological observation of hoof tissue，research and analysis of the environment of cowshed，diets，feeding and management. The incentives may be the environment of cowshed，the collocation of diets，feeding and management. With a weekly treatment and comprehensive prevention measures，the condition of the disease was under control.

Key words：dairy cow；hoof disease；comprehensive diagnosis and treatment；staphylococcus

中圖分類號(hào)：S851.34

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1005-944X-06-0080-03

DOI：10.3969/j.issn.1005-944X.2016.06.023