產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶及碳青霉烯酶的腸桿菌科細(xì)菌檢測(cè)及耐藥性分析

翟麗慧　朱 靜　王海濱（解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100048）

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產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶及碳青霉烯酶的腸桿菌科細(xì)菌檢測(cè)及耐藥性分析

翟麗慧朱 靜王海濱
（解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100048）

【摘要】目的：了解腸桿菌科細(xì)菌中產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶（ESBLs）及碳青霉烯酶菌株的檢出率，通過(guò)藥物敏感試驗(yàn)分析常見(jiàn)腸桿菌科細(xì)菌的耐藥情況。方法：用ESBLs表型確證試驗(yàn)檢測(cè)腸桿菌科細(xì)菌產(chǎn)ESBLs的情況，用改良Hodge試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)菌產(chǎn)碳青霉烯酶的情況。比較產(chǎn)ESBLs和非產(chǎn)ESBLs菌株對(duì)抗生素的耐藥率。結(jié)果：2014年1—12月我院微生物室分離的889株大腸桿菌中產(chǎn)ESBLs 486株，陽(yáng)性率54.7%；521株肺炎克雷伯菌中產(chǎn)ESBLs 162株，陽(yáng)性率31.1%。產(chǎn)ESBLs的大腸桿菌對(duì)氨芐西林、頭孢曲松等第三代頭孢菌素的耐藥率高達(dá)90%以上，對(duì)氨曲南的耐藥率為68.3%；產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌對(duì)氨芐西林、頭孢曲松等第三代頭孢菌素的耐藥率達(dá)86%以上，氨曲南的耐藥率為55.6%。147株耐碳青霉烯類(lèi)抗生素腸桿菌科菌株產(chǎn)碳青霉烯酶132株，陽(yáng)性率為89.8%，其中104株（78.8%）為肺炎克雷伯菌。結(jié)論：產(chǎn)ESBLs和碳青霉烯酶是我院常見(jiàn)腸桿菌科細(xì)菌耐藥原因之一，在常規(guī)病原學(xué)檢測(cè)工作中應(yīng)加強(qiáng)產(chǎn)酶菌株的檢測(cè)，為臨床合理用藥提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞超廣譜β內(nèi)酰胺酶碳青霉烯酶耐藥腸肝菌科

由于β內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素的廣泛應(yīng)用，耐藥菌株越來(lái)越多，使臨床治療變得棘手。超廣譜β內(nèi)酰胺酶（ESBLs）的產(chǎn)生導(dǎo)致細(xì)菌對(duì)第三代頭孢菌素和氨曲南等抗生素耐藥。質(zhì)粒介導(dǎo)的碳青霉烯酶使腸桿菌科細(xì)菌對(duì)碳青酶烯類(lèi)抗生素耐藥情況日趨嚴(yán)重。本研究通過(guò)對(duì)2014年1—12月我院細(xì)菌室分離出的腸桿菌科細(xì)菌產(chǎn)酶情況及耐藥率進(jìn)行分析，以期更好地指導(dǎo)臨床合理用藥。

1　材料與方法

1.1材 料

1.1.1菌株 腸桿菌科細(xì)菌（排除同一患者多個(gè)標(biāo)本）共1 441株，其中大腸埃希菌889株、肺炎克雷伯菌521株、陰溝腸桿菌6株、黏質(zhì)沙雷菌25株。

1.1.2試劑及儀器 哥倫比亞血平板、中國(guó)藍(lán)培養(yǎng)基、MH培養(yǎng)基 （Oxoid）；E-test條（生物梅里埃）；MEM紙片（Oxoid）。藥敏卡：VITEK 2。儀器：VITEK 2-Compact。

1.2方 法

1.2.1ESBL表型確證實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ESBLsVITEK 2 AST-GN13_compact2配0.5麥?zhǔn)蠞岫鹊木鷳乙?，VITEK 2 AST-GN13卡檢測(cè)。

1.2.2改良hodge試驗(yàn)檢測(cè)碳青霉烯酶用生理鹽水配制0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)的對(duì)碳青酶烯類(lèi)抗生素敏感的大腸埃希菌菌懸液，1∶10稀釋后均勻涂布MH平板，貼美羅培南紙片于平板中央，挑取耐藥菌株沿紙片邊緣向外劃直線(xiàn)，37 ℃孵育，24 h觀察結(jié)果。抑菌圈與試驗(yàn)菌株交叉處有增強(qiáng)增長(zhǎng)現(xiàn)象即為陽(yáng)性結(jié)果。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)均采用Whonet 5.6軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2　結(jié) 果

2.1大腸桿菌和肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs陽(yáng)性率889株大腸埃希菌中產(chǎn)ESBLs 486株，陽(yáng)性率54.7%；521株肺炎克雷伯菌中產(chǎn)ESBLs 162株，陽(yáng)性率31.1%。

2.2產(chǎn)ESBLs和非產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌耐藥情況對(duì)比產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌和產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌對(duì)氨芐西林、第一代頭孢菌素頭孢唑啉、第三代頭孢菌素頭孢曲松和氨曲南以及慶大霉素的耐藥率明顯高于非產(chǎn)ESBLs大腸桿菌和非產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌。見(jiàn)表1、表2。2.3碳青霉烯類(lèi)抗生素耐藥率1 441株腸桿菌科細(xì)菌對(duì)厄他培南耐藥率12.9%，對(duì)亞胺培南耐藥率10.9%，對(duì)美羅培南耐藥率4.6% 。

表1 產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌與非產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌對(duì)不同抗生素的耐藥率（%）

表2 產(chǎn)ESBL肺炎克雷伯菌和非產(chǎn)ESBL肺炎克雷伯菌耐藥率（%）

2.4耐碳青酶烯類(lèi)抗生素常見(jiàn)腸桿菌科菌株產(chǎn)碳青酶烯酶陽(yáng)性率147株耐碳青酶烯類(lèi)抗生素腸桿菌科細(xì)菌產(chǎn)碳青霉烯酶陽(yáng)性菌株132株，陽(yáng)性率為89.8%,132株產(chǎn)碳青霉烯酶陽(yáng)性菌中有104株（78.8%）為肺炎克雷伯菌。

3　討 論

ESBLs是細(xì)菌質(zhì)粒中TEM-1、TEM-2、SHV-1等位點(diǎn)基因發(fā)生突變而形成的新酶蛋白，通常替換的氨基酸有1~4個(gè)，它是質(zhì)粒上編碼ESBLs的耐藥表達(dá)，能使含氧亞氨基側(cè)鏈的第三代頭孢菌素和單環(huán)β內(nèi)酰胺類(lèi)抗菌藥物失活[1-2]。ESBLs主要由腸桿菌科細(xì)菌產(chǎn)生，以肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌常見(jiàn)，產(chǎn)ESBLs菌株不僅對(duì)某些第三代頭孢菌素和氨曲南耐藥，而且對(duì)氨基糖苷類(lèi)、喹諾酮類(lèi)抗生素呈交叉耐藥[3]。ESBLs由質(zhì)粒介導(dǎo)，可以通過(guò)接合、轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)化等形式使耐藥基因在細(xì)菌中擴(kuò)散[4]，因此準(zhǔn)確檢測(cè)產(chǎn)ESBLs細(xì)菌、正確使用抗生素有助于控制耐藥菌的廣泛播散與暴發(fā)流行。

我院臨床分離的腸桿菌科細(xì)菌有大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、陰溝腸桿菌、黏質(zhì)沙雷菌等，以大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌最為常見(jiàn)。大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs陽(yáng)性率較高，分別達(dá)到54.7%和31.1%。產(chǎn)ESBLs的菌株對(duì)氨芐西林、頭孢曲松等第三代頭孢菌素和氨曲南的耐藥率明顯高于非產(chǎn)ESBL菌株。

碳青霉烯酶由質(zhì)粒介導(dǎo)，能夠水解碳青霉烯類(lèi)、青霉素類(lèi)、頭孢菌素類(lèi)和氨曲南等多種抗生素[5]。本組資料顯示碳青霉烯類(lèi)抗生素耐藥菌株89.8%產(chǎn)碳青霉烯酶，其中肺炎克雷伯菌產(chǎn)碳青霉烯酶陽(yáng)性檢出率最高。

綜上所述，產(chǎn)ESBLs和碳青霉烯酶是我院常見(jiàn)腸桿菌科細(xì)菌耐藥的原因之一。兩種耐藥機(jī)制如果同時(shí)存在，會(huì)使臨床治療更為棘手。非產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌對(duì)頭孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦的耐藥率較產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌高，推測(cè)可能存在其他耐藥機(jī)制。碳青霉烯類(lèi)抗生素耐藥菌株除產(chǎn)碳青霉烯酶還可產(chǎn)其他類(lèi)酶，如頭孢菌素酶等[6-7]。臨床治療中可根據(jù)細(xì)菌的耐藥性分析選擇敏感抗生素，并在長(zhǎng)期使用抗生素的過(guò)程中及時(shí)檢測(cè)耐藥性以減少耐藥菌株的產(chǎn)生。

參考文獻(xiàn)

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Detection and drug resistance analysis of the enterobacteriaceae bacteria producing extended spectrum β-lactamase and carbapenemase

Zhai Lihui, Zhu Jing, Wang Haibin. Clinical Laboratory, First Hospital Affiliated to the Chinese PLA General Hospital, Beijing 100048, China
Corresponding author: Wang Haibin(E-mail: 1197131586@qq.com)

AbstractObjective: To detect the bacterial strains producing extended spectrum β-lactamase (ESBLs) and carbapenemase, and analyze the resistance of the strains by drug sensitivity test. Methods: Confirmatory tests with ESBL phenotype was performed to confirm the ESBLs production, and modified Hodge test was executed to detect the carbapenemase products of bacteria. Results: From January to December 2014, a total of 889 strains of Escherichia coli were isolated in the First Affiliated Hospital of the Chinese PLA General Hospital, of which 486 strains produced ESBLs, the positive rate was 54.7%; while 162 of 521 strains of Klebsiella pneumoniae (31.1%) produced ESBLs. The resistant rate of E. coli prouducing ESBLs was as high as more than 90% to the third generation cephalosporins as like ampicillin and ceftriaxone, and was 68.3% to aztreonam. The resistant rate of Klebsiella pneumoniae prouducing ESBLs was as high as more than 86% to the third generation cephalosporins as like ampicillin and ceftriaxone, and was 55.6% to aztreonam. In 147 strains of Enterobacteriaceae bacteria resisting to the antibiotic of carbapenemase, 132 strains proudced carbapenemase, the positive rate was 89.8%, among them 104 strains(78.8%) were klebsiella pneumoniae. Conclusions: Production of ESBLs and carbapenemase was the major mechanism making the Enterobacteriaceae bacteria form resistance. So the detection of enzyme producing strain should be emphasized in the conventional pathogenic detection to provide the basis for rationally clinical drug use.

Key words:Extended spectrum β-lactamase;Carbapenemase;Drug resistance;Enterobacteriaceae

DOI:10. 3969/j. issn. 1672-8521. 2016. 01. 007

通訊作者：王海濱，副主任技師（E-mail: 1197131586@qq.com）

收稿日期：（2015-06-25）