乙型肝炎肝硬化患者輔助性T淋巴細(xì)胞17和調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞及維甲酸相關(guān)核孤兒受體γt和叉狀頭/翅膀狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子3 mRNA表達(dá)水平的變化及其臨床意義研究

涂 琛，游 晶，劉懷鄂，陳紅英，洪 敏，劉子杰，婁 鳴

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·論著·

乙型肝炎肝硬化患者輔助性T淋巴細(xì)胞17和調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞及維甲酸相關(guān)核孤兒受體γt和叉狀頭/翅膀狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子3 mRNA表達(dá)水平的變化及其臨床意義研究

涂 琛，游 晶，劉懷鄂，陳紅英，洪 敏，劉子杰，婁 鳴

650032 云南省昆明市，昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院感染科(涂琛，游晶，劉懷鄂，陳紅英，婁鳴)，生物治療中心(洪敏)，檢驗(yàn)中心(劉子杰)

【摘要】目的通過(guò)對(duì)乙型肝炎肝硬化患者外周血輔助性T淋巴細(xì)胞17(Th17)、調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞(Treg)及其特異性轉(zhuǎn)錄因子維甲酸相關(guān)核孤兒受體γt(RORγt)和叉狀頭/翅膀狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子3(Foxp3) mRNA表達(dá)水平的檢測(cè)探討其臨床意義。方法選取2015年7—12月昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院診治的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者64例，其中慢性乙型肝炎(CHB)患者21例(CHB組)、代償期肝硬化(CLC)患者21例(CLC組)、失代償期肝硬化(DCLC)患者22例(DCLC組)。同期選取本院體檢健康者20例為對(duì)照組。收集研究對(duì)象一般資料〔性別、年齡及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總膽紅素(TBIL)〕；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)研究對(duì)象外周血Th17、Treg表達(dá)率，計(jì)算Th17/Treg比值；應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-qPCR)法測(cè)定外周血RORγt、Foxp3 mRNA表達(dá)水平。結(jié)果4組年齡、ALT、AST、TBIL比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CHB組、CLC組、DCLC組Th17、Treg表達(dá)率及Th17/Treg比值均高于對(duì)照組(P<0.05)；DCLC組Th17、Treg表達(dá)率及Th17/Treg比值均高于CHB組，Th17表達(dá)率及Th17/Treg比值均高于CLC組(P<0.05)。CHB組、CLC組、DCLC組RORγt mRNA及Foxp3 mRNA表達(dá)水平均高于對(duì)照組(P<0.05)；DCLC組RORγt mRNA及Foxp3 mRNA表達(dá)水平均高于CHB組、CLC組(P<0.05)。CHB組、CLC組、DCLC組外周血Th17表達(dá)率與RORγt mRNA表達(dá)水平均呈正相關(guān)(P<0.05)；CHB組、CLC組、DCLC組外周血Treg表達(dá)率與Foxp3 mRNA表達(dá)水平均呈正相關(guān)(P<0.05)；CHB組、CLC組、DCLC組外周血Th17表達(dá)率、RORγt mRNA表達(dá)水平與ALT呈正相關(guān)(P<0.05)；CHB組外周血Foxp3 mRNA表達(dá)水平與ALT呈正相關(guān)(P<0.05)；CHB組RORγt mRNA表達(dá)水平、Foxp3 mRNA表達(dá)水平與AST、TBIL呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論Th17、Treg及其特異性轉(zhuǎn)錄因子RORγt、Foxp3可能與乙型肝炎肝硬化患者的疾病進(jìn)展與肝功能有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】乙型肝炎；肝硬化；T淋巴細(xì)胞,輔助；T淋巴細(xì)胞,調(diào)節(jié)性；維甲酸相關(guān)核孤兒受體γt；叉狀頭/翅膀狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子3

涂琛，游晶，劉懷鄂，等.乙型肝炎肝硬化患者輔助性T淋巴細(xì)胞17和調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞及維甲酸相關(guān)核孤兒受體γt和叉狀頭/翅膀狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子3 mRNA表達(dá)水平的變化及其臨床意義研究[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2016，19(18)：2130-2134.[www.chinagp.net]

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在未行抗病毒治療的慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者中，肝硬化(LC)5年累計(jì)發(fā)生率為8%～20%，代償期肝硬化(compensated liver cirrhosis，CLC)患者中，失代償期肝硬化(decompensated liver cirrhosis，DCLC)5年累計(jì)發(fā)病率約20%，DCLC患者的5年生存率為14%～35%，而LC患者中，肝癌(HCC)每年發(fā)病率為2%～5%[1]。乙型肝炎病毒(HBV)感染的預(yù)后與機(jī)體免疫系統(tǒng)的狀況密切相關(guān)[2]。近年來(lái),輔助性T淋巴細(xì)胞17(Th17)/調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞(Treg)平衡在CHB患者中的研究越來(lái)越多，而對(duì)其在乙型肝炎LC中的研究卻較少，本研究通過(guò)對(duì)乙型肝炎LC患者外周血Th17和Treg及其特異性轉(zhuǎn)錄因子維甲酸相關(guān)核孤兒受體γt(RORγt)和叉狀頭/翅膀狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子3(Foxp3)的檢測(cè)來(lái)探討Th17、Treg、RORγt和Foxp3在LC患者中的變化及其臨床意義。

1對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象選取2015年7—12月昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院診治的慢性HBV感染者64例，其中CHB患者21例(CHB組)、CLC患者21例(CLC組)、DCLC患者22例(DCLC組)。同期選取本院體檢健康者20例為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)患者在入組前半年未接受過(guò)抗病毒治療；(2)患者均符合2015年修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》[2]和2014年制定的《乙型肝炎病毒相關(guān)性肝硬化的臨床診斷、評(píng)估和抗病毒治療的綜合管理》[3]的診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)其他病毒性肝炎患者；(2)酒精性肝病、自身免疫性肝病、原發(fā)性HCC等其他肝臟疾病患者；(3)其他嚴(yán)重的全身性疾病患者。本研究通過(guò)本院倫理委員會(huì)同意，研究對(duì)象均知情同意。

1.2方法

1.2.1一般資料收集記錄研究對(duì)象性別、年齡及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總膽紅素(TBIL)(采用日立公司的全自動(dòng)生化分析儀)。

1.2.2流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血Th17、Treg表達(dá)率及Th17/Treg比值取研究對(duì)象新鮮抗凝血300 μl,加入10% 1640培養(yǎng)基900 μl，再向上述混合液中加入2 μl白細(xì)胞刺激劑，混勻后放入37 ℃ 5%CO2溫箱培育過(guò)夜，次日取出混合液以3 000 r/min離心7 min(離心半徑10.5 cm)，棄上清液后加入Fix perm室溫避光保存40 min，以3 500 r/min離心6 min(離心半徑10.5 cm)棄上清液后反復(fù)多次加入perm wash并以3 500 r/min離心6 min(離心半徑10.5 cm)，棄上清液后使細(xì)胞充分破膜、固定、染色，再加入CD8FITC、CD3APC-H7、Foxp3PE和IL-17A等熒光抗體室溫避光40 min，后進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)染色，最后加入適量磷酸鹽緩沖液(PBS)混勻，用FACSDiva Version 6.1.3流式細(xì)胞儀檢測(cè)分析Th17、Treg表達(dá)率，計(jì)算Th17/Treg比值。1.2.3實(shí)時(shí)熒光定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-qPCR)法測(cè)定外周血RORγt、Foxp3 mRNA表達(dá)水平取外周抗凝血400 μl，加入1 200 μl紅細(xì)胞裂解液混勻,4 ℃下以450 r/min離心10 min(離心半徑10.5 cm)，提取外周血單個(gè)核細(xì)胞，用Trizol法從外周血單個(gè)核細(xì)胞中提取總RNA，在分光光度儀上測(cè)定RNA濃度及260、280 nm處吸光度值(A值)，以A值在1.8～2.0范圍內(nèi)為純度可。嚴(yán)格按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒(TaKaRa公司)操作說(shuō)明書(shū)將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，再將4 μl的cDNA與SYBR Green PCR master mix混合，最后總體積為50 μl，并用TL988 RT-PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，PCR循環(huán)條件為：95 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃變性5 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸31 s，共40個(gè)循環(huán)；最后72 ℃延伸7 min。采用2-ΔΔCT計(jì)算外周血RORγt、Foxp3 mRNA表達(dá)水平。

2結(jié)果

2.14組一般資料比較4組性別比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。4組年齡、ALT、AST、TBIL比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表1)。

表1　4組一般資料比較

注：a為χ2值，b為F值，c為H值；CHB=慢性乙型肝炎，CLC=代償期肝硬化，DCLC=失代償期肝硬化，ALT=丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，AST=天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，TBIL=總膽紅素

2.24組外周血Th17、Treg表達(dá)率及Th17/Treg比值比較4組外周血Th17、Treg表達(dá)率及Th17/Treg比值比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CHB組、CLC組、DCLC組Th17、Treg表達(dá)率及Th17/Treg比值均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；DCLC組Th17、Treg表達(dá)率及Th17/Treg比值均高于CHB組，Th17表達(dá)率及Th17/Treg比值均高于CLC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表2)。

2.34組外周血RORγt mRNA和Foxp3 mRNA表達(dá)水平比較4組外周血RORγt mRNA和Foxp3 mRNA表達(dá)水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CHB組、CLC組、DCLC組RORγt mRNA及Foxp3 mRNA表達(dá)水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；DCLC組RORγt mRNA及Foxp3 mRNA表達(dá)水平均高于CHB組、CLC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表3)。

Table 2Comparison of the expression rates of Th17 and Treg and Th17/Treg among the 4 groups

組別例數(shù)Th17表達(dá)率(%)Treg表達(dá)率(%)Th17/Treg比值對(duì)照組202.3±1.11.6±0.81.5±0.4CHB組214.9±1.8a2.6±0.9a1.9±0.6aCLC組215.9±1.8a2.8±0.9a2.2±0.5aDCLC組227.9±2.3abc3.3±1.0ab2.5±0.7abcF值26.0879.45510.466P值<0.001<0.001<0.001

注：Th17=輔助性T淋巴細(xì)胞17，Treg=調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞；與對(duì)照組比較，aP<0.05；與CHB組比較，bP<0.05；與CLC組比較，cP<0.05

Table 3Comparison of the expressions of RORγt mRNA and Foxp3 mRNA among the 4 groups

組別例數(shù)RORγtmRNAFoxp3mRNA對(duì)照組201.8±1.10.9±0.9CHB組213.6±2.4a2.2±1.6aCLC組214.2±2.7a2.4±1.4aDCLC組226.0±2.7abc3.3±1.2abcF值8.4758.625P值<0.001<0.001

注：RORγt=維甲酸相關(guān)核孤兒受體γt,Foxp3=叉狀頭/翅膀狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子3；與對(duì)照組比較，aP<0.05；與CHB組比較，bP<0.05；與CLC組比較，cP<0.05

2.4相關(guān)性分析CHB組、CLC組、DCLC組外周血Th17表達(dá)率與RORγt mRNA表達(dá)水平均呈正相關(guān)(P<0.05)；而對(duì)照組外周血Th17表達(dá)率與RORγt mRNA表達(dá)水平無(wú)直線相關(guān)關(guān)系(P>0.05)。CHB組、CLC組、DCLC組外周血Treg表達(dá)率與Foxp3 mRNA表達(dá)水平均呈正相關(guān)(P<0.05)；而對(duì)照組外周血Treg表達(dá)率與Foxp3 mRNA表達(dá)水平無(wú)直線相關(guān)關(guān)系(P>0.05)。CHB組、CLC組、DCLC組外周血Th17表達(dá)率、RORγt mRNA表達(dá)水平與ALT呈正相關(guān)(P<0.05)；CHB組外周血Foxp3 mRNA表達(dá)水平與ALT呈正相關(guān)(P<0.05)；對(duì)照組外周血Th17、Treg表達(dá)率、RORγt mRNA表達(dá)水平、Foxp3 mRNA表達(dá)水平與ALT無(wú)直線相關(guān)關(guān)系(P>0.05)；CHB組Treg表達(dá)率、CLC組Treg表達(dá)率及Foxp3 mRNA表達(dá)水平、DCLC組Treg表達(dá)率及Foxp3 mRNA表達(dá)水平與ALT無(wú)直線相關(guān)關(guān)系(P>0.05)。CHB組RORγt mRNA表達(dá)水平、Foxp3 mRNA表達(dá)水平與AST、TBIL呈正相關(guān)(P<0.05)；CHB組Th17表達(dá)率、Treg表達(dá)率與AST、TBIL無(wú)直線相關(guān)關(guān)系(P>0.05)；對(duì)照組、CLC組、DCLC組Th17表達(dá)率、Treg表達(dá)率、RORγt mRNA表達(dá)水平、Foxp3 mRNA表達(dá)水平與AST、TBIL均無(wú)直線相關(guān)關(guān)系(P>0.05，見(jiàn)表4)。

表4　4組各指標(biāo)相關(guān)性分析

注：a為P<0.05，-表示未做相關(guān)性分析

3討論

慢性HBV感染可以引起自身免疫反應(yīng)直接損傷肝細(xì)胞，也可通過(guò)細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)引起肝損傷。越來(lái)越多的證據(jù)表明，免疫介導(dǎo)的肝損傷在慢性HBV感染中發(fā)揮著重要作用，如Yang等[4]的研究提示，CHB和HBV相關(guān)的慢加急性肝衰竭患者(ACHBLF)的Th17表達(dá)率均高于乙型肝炎病毒攜帶者(AsC)和正常對(duì)照組，并隨著AsC、CHB到ACHBLF的免疫炎癥加重而逐漸增加。Feng等[5]的研究發(fā)現(xiàn)，在HBV感染患者中Th17、Treg表達(dá)率均高于對(duì)照組，但Th17/Treg比值卻明顯升高，并且還發(fā)現(xiàn)Th17、Treg表達(dá)率與肝功能呈正相關(guān)。Yu等[6]研究提示，與對(duì)照組相比，Treg表達(dá)率在CHB組明顯增加，在LC組輕度增加，而Th17表達(dá)率在兩組均顯著增加；還發(fā)現(xiàn)在LC患者中，尤其是死亡患者中，Th17/Treg比值顯著升高，并與肝功能分級(jí)和終末期肝臟疾病評(píng)分模型呈正相關(guān)。Zhai等[7]在關(guān)于肝衰竭患者的研究中也發(fā)現(xiàn)，死亡患者的Th17/Treg比值高于生存患者。

本研究發(fā)現(xiàn)，4組年齡有明顯差異，考慮與入組患者疾病程度有關(guān)，符合CHB向LC發(fā)展情況。本研究還發(fā)現(xiàn)，CHB組、CLC組、DCLC組Th17、Treg表達(dá)率及Th17/Treg比值均高于對(duì)照組，DCLC組Th17、Treg表達(dá)率及Th17/Treg比值均高于CHB組，Th17表達(dá)率及Th17/Treg比值均高于CLC組；且CHB組、CLC組、DCLC組Th17表達(dá)率與ALT均呈正相關(guān)，與Feng等[5]的研究一致。Chen等[8]也發(fā)現(xiàn)，LC組Th17、Treg表達(dá)率均高于CHB組，以上結(jié)果表明Th17和Treg參與了HBV感染后肝臟炎性反應(yīng)和肝細(xì)胞免疫清除的過(guò)程，Th17可能還與肝臟纖維化進(jìn)程和肝損傷嚴(yán)重程度有關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)，CHB組與CLC組Th17表達(dá)率、Treg表達(dá)率、Th17/Treg比值無(wú)明顯差異，與李晨等[9]的研究結(jié)果不太一致，可能與CHB患者大多數(shù)處于肝臟炎性活動(dòng)期有關(guān)。而本研究中DCLC組Th17表達(dá)率、Th17/Treg比值較CHB組、CLC組升高提示Th17對(duì)終末期肝臟疾病的肝損傷程度是一個(gè)潛在標(biāo)記，高Th17/Treg比值可能對(duì)病情及預(yù)后有較好預(yù)測(cè)價(jià)值。

RORγt是促進(jìn)Th17分化的最特異性轉(zhuǎn)錄因子[10]，而Foxp3是Treg特異性轉(zhuǎn)錄因子[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，CHB組、CLC組、DCLC組RORγt mRNA及Foxp3 mRNA表達(dá)水平均高于對(duì)照組，DCLC組RORγt mRNA及Foxp3 mRNA表達(dá)水平均高于CHB組、CLC組，且CHB組、CLC組、DCLC組Th17表達(dá)率與RORγt mRNA表達(dá)水平、Treg表達(dá)率與Foxp3 mRNA表達(dá)水平、RORγt mRNA表達(dá)水平與ALT均呈正相關(guān)；提示RORγt mRNA與Th17，F(xiàn)oxp3 mRNA與Treg在HBV感染進(jìn)程中變化比較一致，RORγt和Foxp3可能在HBV感染后調(diào)控Th17與Treg的分化，從而引起肝臟炎癥和疾病進(jìn)程。Zhang等[12]研究發(fā)現(xiàn)，隨著肝臟炎性活動(dòng)度的增加，肝組織內(nèi)IL-17、RORγt mRNA表達(dá)水平均呈上升趨勢(shì)，并且肝組織炎性活動(dòng)度與肝臟內(nèi)RORγt mRNA表達(dá)水平和血清IL-17表達(dá)水平均呈正相關(guān)。高夕雷等[13]研究發(fā)現(xiàn)，CHB患者Foxp3 mRNA的表達(dá)水平高于對(duì)照組，且與HBV-DNA滴度呈正相關(guān)。RORγt和Foxp3分別是Th17和Treg細(xì)胞的特異性標(biāo)志物，在很大程度上控制Th17和Treg細(xì)胞功能的表達(dá)，考慮其通過(guò)誘導(dǎo)Th17和Treg細(xì)胞生成和分化而在HBV感染后不同階段進(jìn)行調(diào)控并發(fā)揮作用。

綜上所述，CLC、DCLC和CHB患者外周血Th17和Treg表達(dá)率及其特異性轉(zhuǎn)錄因子RORγt和Foxp3的mRNA表達(dá)水平均比對(duì)照組高，同時(shí)3組HBV感染相關(guān)LC和CHB患者外周血Th17表達(dá)率和RORγt mRNA表達(dá)水平均與ALT水平呈正相關(guān)，在Th17表達(dá)率高于Treg表達(dá)率時(shí)，Th17/Treg平衡被打破，肝臟組織以促進(jìn)炎癥發(fā)展的Th17為主，從而加重肝臟損傷，但同時(shí)反饋性地引起Treg表達(dá)率增高，抑制過(guò)強(qiáng)的炎性反應(yīng)，有利于阻止病情急劇發(fā)展，而高Th17表達(dá)率及Th17/Treg比值可能提示病情進(jìn)展快、預(yù)后差，說(shuō)明Th17、Treg及其特異性轉(zhuǎn)錄因子RORγt、Foxp3可能與乙型肝炎LC患者的疾病進(jìn)展和肝功能狀態(tài)有關(guān)。

本試驗(yàn)在以往研究基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探索乙型肝炎LC患者不同疾病階段Th17/Treg平衡情況及其特異性轉(zhuǎn)錄因子RORγt、Foxp3 mRNA表達(dá)水平的變化，并結(jié)合肝功能探討Th17/Treg失衡的原因以及其在乙型肝炎LC患者疾病進(jìn)展中的免疫學(xué)機(jī)制，為乙型肝炎LC患者的診治和病情的預(yù)測(cè)提供新思路，進(jìn)一步預(yù)防LC向晚期及HCC發(fā)展。但本研究樣本量較小，Th17/Treg失衡對(duì)肝臟損傷情況與其他研究結(jié)果不完全一致，還有待于更多研究加以證實(shí)。

作者貢獻(xiàn)：涂琛負(fù)責(zé)試驗(yàn)實(shí)施和論文撰寫(xiě)；游晶負(fù)責(zé)研究設(shè)計(jì)和實(shí)施；陳紅英、洪敏、劉子杰、婁鳴負(fù)責(zé)試驗(yàn)實(shí)施、資料收集；劉懷鄂負(fù)責(zé)質(zhì)量控制與論文結(jié)構(gòu)完善及論文修改。

本文無(wú)利益沖突。

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(本文編輯：李婷婷)

Changes of Th17 and Treg and the Expressions of RORγt and Foxp3 mRNA in Patients With HBV Related Liver Cirrhosis and the Clinical Significance

TUChen,YOUJing,LIUHuai-e,etal.

DepartmentofInfectiousDisease,theFirstAffiliatedHospitalofKunmingMedicalUniversity,Kunming650032,China

【Abstract】ObjectiveTo analyze the changes of peripheral Th17 and Treg and the expressions of RORγt and Foxp3 mRNA in patients with HBV related liver cirrhosis and explore the clinical significance.MethodsWe enrolled 64 patients with chronic HBV in fection who received treatment in the First Affiliated Hospital of Kunming Medical University from July to December in 2015.Among them,21 patients with chronic hepatitis B were assigned into CHB group,21 patients at compensated liver cirrhosis were assigned into CLC group,and 22 patients at decompensated liver cirrhosis were assigned into DCLC group.20 healthy people who received physical examination in the hospital in the same period were enrolled as control group.The general data(gender,age,ALT,AST and TBIL) were collected；expression rates of Th17 and Treg in the peripheral blood of the subjects were detected using flow cytometry,and the ratio of Th17/Treg was calculated.RT-qPCR method was applied to determine the expressions of RORγt and Foxp3 mRNA of peripheral blood.ResultsThe four groups were significantly different in age,ALT,AST and TBIL(P<0.05).CHB group,CLC group and DCLC group were higher than control group in the expression rates of Th17 and Treg and Th17/Treg(P<0.05)；DCLC group was higher than CHB group in the expression rates of Th17 and Treg and Th17/Treg,and was higher than CLC group in the expression rate of Th17 and Th17/Treg(P<0.05).CHB group,CLC group and DCLC group were higher than control group in the expressions of RORγt mRNA and Foxp3 mRNA(P<0.05);DCLC group was higher than CHB and CLC group in the expressions of RORγt mRNA and Foxp3 mRNA(P<0.05).For CHB group,CLC group and DCLC group,the expression rate of Th17 was positively correlated with the expression of RORγt mRNA(P<0.05)；for CHB group,CLC group and DCLC group,the expression rate of Treg was positively correlated with the expression of Foxp3 mRNA(P<0.05);for CHB group,CLC group and DCLC group,the expression rate of Th17 and the expression of RORγt mRNA was positively correlated with ALT(P<0.05)；for CHB group,the expression of Foxp3 mRNA was positively correlated with ALT(P<0.05)；for CHB group,the expressions of RORγt mRNA and Foxp3 mRNA were positively correlated with AST and TBIL(P<0.05).ConclusionTh17 and Treg cells and their specific transcription factors RORγt and Foxp3 may be related with the progress of HBV-related liver cirrhosis and liver function.

【Key words】Hepatitis B；Liver cirrhosis；T-lymphocytes,helper；T-lymphocytes,regulatory；RORγt；Foxp3

基金項(xiàng)目：云南省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2011WS0053；2011FZ121；2012WS0028)；云南省教育廳基金項(xiàng)目(2013J053)

通信作者：游晶，650032 云南省昆明市，昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院感染科；E-mail:jingyoukm@126.com

【中圖分類號(hào)】R 512.62 R 575.2

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi：10.3969/j.issn.1007-9572.2016.18.004

(收稿日期：2015-12-22；修回日期：2016-04-26)

·專題研究·