• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    15個(gè)白三葉品種的ISSR和ITS遺傳多樣性分析

    2016-07-16 01:31:34李金博高麗華周美亮李詩(shī)剛彭昭良吳燕民
    草業(yè)科學(xué) 2016年6期
    關(guān)鍵詞:白三葉遺傳多樣性

    李金博,高麗華,周美亮,李詩(shī)剛,彭昭良,吳燕民

    (1.蘭州大學(xué)草地農(nóng)業(yè)科技學(xué)院,甘肅 蘭州 730020; 2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所,北京 100081;3.深圳市鐵漢生態(tài)環(huán)境股份有限公司,廣東 深圳 523000)

    ?

    15個(gè)白三葉品種的ISSR和ITS遺傳多樣性分析

    李金博1,2,3,高麗華2,周美亮2,李詩(shī)剛3,彭昭良3,吳燕民2

    (1.蘭州大學(xué)草地農(nóng)業(yè)科技學(xué)院,甘肅 蘭州 730020; 2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所,北京 100081;3.深圳市鐵漢生態(tài)環(huán)境股份有限公司,廣東 深圳 523000)

    摘要:利用ISSR標(biāo)記和ITS序列分析在我國(guó)大面積推廣應(yīng)用的15個(gè)白三葉(Trifolium repens)品種的遺傳多樣性與地理來(lái)源關(guān)系,試圖為我國(guó)白三葉新品種的選育提供遺傳理論支持。結(jié)果表明,15個(gè)白三葉品種明顯分為兩大類,第Ⅰ類有10個(gè)白三葉品種,主要來(lái)源于丹麥、澳大利亞、新西蘭和荷蘭;第Ⅱ類有5個(gè)白三葉品種,主要來(lái)源于美國(guó)、中國(guó)和阿根廷。白三葉品種聚類具有一定的地域性分布規(guī)律,ISSR和ITS均能有效地對(duì)白三葉品種進(jìn)行遺傳多樣性分析,且ISSR可以更加細(xì)致地對(duì)其進(jìn)行分類。

    關(guān)鍵詞:白三葉;ISSR;ITS;遺傳多樣性

    白三葉(Trifoliumrepens)是豆科(Leguminosae)三葉草屬多年生草本植物,目前在溫帶、亞熱帶地區(qū)廣為種植[1-2]。白三葉具有莖葉豐富、草質(zhì)細(xì)軟、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高、適口性好和產(chǎn)量高的特點(diǎn),是優(yōu)良的豆科牧草,覆蓋的白三葉降解也可以提高果園土壤肥力[3]。同時(shí),白三葉作為園林地被植物具有觀賞價(jià)值高、再生能力強(qiáng)、栽植成本低等特點(diǎn),在園林綠化上應(yīng)用越來(lái)越多。白三葉在我國(guó)大體分布于22°-51° N,80°-130° E地區(qū),主要為四川、云南、貴州等省,在其它省(區(qū))也有分布[4-5]。白三葉是異花授粉、自交不親和植物,自然選擇及人工育種得到的品種均具有很強(qiáng)的基因雜合性[6],而白三葉的遺傳多樣性和多倍性也影響了白三葉的遺傳研究及新品種的培育[2]。

    ISSR(inter-simple sequence repeat)分子標(biāo)記是由Zietkiewicz等提出的一種新型分子標(biāo)記,是在SSR(simple sequence repeat)標(biāo)記基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種通過(guò)半隨機(jī)性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增的技術(shù),可用于檢測(cè)重復(fù)序列之間區(qū)域的DNA序列差異[7],已廣泛應(yīng)用于多種農(nóng)作物、果樹(shù)以及部分草資源的遺傳多樣性分析、品種鑒定等研究中[8]。利用ISSR分子標(biāo)記可以對(duì)白三葉進(jìn)行鑒定,明確其遺傳差異和親緣關(guān)系[9]。內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(internal transcribed spacer,ITS)位于18S和26S rRNA基因之間,被5.8S rRNA基因分為兩段(ITS1和ITS2)。ITS序列變異較快,可以提供豐富的變異位點(diǎn)和信息位點(diǎn),是許多植物類群系統(tǒng)分類與進(jìn)化分析的重要分子標(biāo)記[10]。

    近年來(lái),國(guó)內(nèi)外學(xué)者通過(guò)形態(tài)學(xué)分類、同工酶生化標(biāo)記、DNA分子標(biāo)記等對(duì)白三葉遺傳多樣性研究已經(jīng)有一定報(bào)道。如,利用形態(tài)學(xué)標(biāo)記和聚類分析方法探究白三葉的起源關(guān)系[11];利用過(guò)氧化物酶與酯酶同工酶檢測(cè)勒代諾白三葉和其它白三葉品種的同源性[12];利用RAPD分子標(biāo)記分析近緣雜交的白三葉的遺傳多樣性[13];利用AFLP對(duì)52個(gè)野生及栽培種白三葉種質(zhì)材料進(jìn)行聚類分析[14]。通過(guò)形態(tài)學(xué)指標(biāo)和聚類分析13份新疆野生白三葉的遺傳多樣性進(jìn)行分析[15]。國(guó)內(nèi)遺傳多樣性研究大多采用形態(tài)學(xué)指標(biāo)或者同工酶法等,研究對(duì)象也往往是收集的多個(gè)野生材料,而目前生產(chǎn)上常用的白三葉品種相關(guān)研究相對(duì)較少,急需科研工作者對(duì)其進(jìn)行研究,為我國(guó)白三葉的生產(chǎn)應(yīng)用及培育提供理論和實(shí)踐指導(dǎo)。鑒于此,本研究利用ISSR和ITS分子標(biāo)記相互驗(yàn)證,對(duì)目前在我國(guó)大面積推廣應(yīng)用的白三葉品種進(jìn)行遺傳多樣性分析,以期闡明白三葉遺傳多樣性與地理來(lái)源之間的關(guān)系,同時(shí)為我國(guó)白三葉新品種選育提供遺傳理論支持。

    1材料和方法

    1.1試驗(yàn)材料及DNA的提取

    本研究共選用常用白三葉品種15個(gè)(表1),均于2012年從種子公司購(gòu)買,全部種植在北京市順義區(qū)中國(guó)農(nóng)科院試驗(yàn)基地。試驗(yàn)地地處40°13′ N,116°38′ E,海拔35 m,年均降水量約625 mm。土壤為砂壤土,有機(jī)質(zhì)含量為1.35%,全氮含量為0.9%,速效磷含量26.16 mg·kg-1,速效鉀含量42.35 mg·kg-1,屬微堿性土壤,pH為8.3。播種3個(gè)月后對(duì)植株幼嫩葉片進(jìn)行取樣。

    DNA提取利用全式金試劑盒(Transgen, China),每個(gè)材料取15株幼嫩葉片混合取樣。PCR所需引物均由北京奧科鼎盛生物科技有限公司(AuGCT. Biotech Co., Ltd.)合成。

    1.2ISSR引物及擴(kuò)增

    根據(jù)哥倫比亞大學(xué)公布的ISSR序列合成100條ISSR引物。ISSR體系為25 μL,其中DNA(40 ng·μL-1)1 μL ,引物(5 mmol·L-1)1 μL,10×buffer 2.5 μL,MgCl2(25 mmol·L-1)2 μL,Taq DNA polymerase (1 U)1 μL,dNTP(10 mmol·L-1)2 μL和無(wú)核酸酶水15.5 μL。PCR程序?yàn)?94 ℃ 5 min;94 ℃變性30 s,退火溫度 55~59 ℃,1 min,72 ℃延伸90 s,35個(gè)循環(huán);72 ℃延伸5 min。擴(kuò)增后產(chǎn)物保存在4 ℃冰箱。

    電泳檢測(cè):1.5%的瓊脂糖凝膠,指示劑為北京原平皓公司生產(chǎn)的gelsafe(10 000×)。采用北京六一廠DYY-7C型電泳儀和DYC-34A型電泳槽在90 V的電壓下進(jìn)行1 h電泳,電泳液為TAE buffer,100 bp的DNA Marker。利用伯樂(lè)公司凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行紫外觀測(cè),記錄多態(tài)性條帶。

    1.3ITS引物及擴(kuò)增測(cè)序

    利用通用引物T4(GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG)和T5(TCCTCCGCTTATTGATATGC)進(jìn)行擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系為25 μL,DNA(40 ng·μL-1)1 μL,上下游引物各(5 mmol·L-1)1 μL,10× buffer 2.5 μL,MgCl2(25 mmol·L-1)2 μL,Taq DNA polymerase (1 U)1 μL,dNTP (10 mmol·L-1) 2 μL和無(wú)核酸酶水14.5 μL。PCR反應(yīng)程序:94 ℃預(yù)變性2 min;94 ℃變性30 s,52 ℃退火30 s,72 ℃延伸90 s,共35個(gè)循環(huán);最后72 ℃延伸10 min,產(chǎn)物于4 ℃保存。PCR產(chǎn)物檢測(cè):PCR產(chǎn)物5 μL用gelsafe染色,125 V的電壓下進(jìn)行25 min電泳,經(jīng)1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),用凝膠成像儀照相。

    測(cè)序:PCR產(chǎn)物經(jīng)純化試劑盒(全式金試劑盒,Transgen,China)純化后送由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院重大工程樓進(jìn)行正反向測(cè)序。

    表1 供試白三葉品種名稱及來(lái)源

    1.4數(shù)據(jù)分析

    ISSR分析根據(jù)條帶的有無(wú)分別標(biāo)記為1或0。材料間遺傳相似系數(shù)(GS)根據(jù)公式GS=2Nij(Ni+Nj)計(jì)算,其中:Nij為材料Ni和Nj共有的擴(kuò)增片段數(shù)目,Ni為材料i中出現(xiàn)的擴(kuò)增片段數(shù)目,Nj為材料j中出現(xiàn)的擴(kuò)增片段數(shù)目。將GS值按不加權(quán)成對(duì)群算術(shù)平均法(UPGMA)進(jìn)行遺傳相似性聚類。統(tǒng)計(jì)分析在NTSYS 2.1軟件下進(jìn)行。

    將所有測(cè)得的序列登錄到Genbank,獲取序列登錄號(hào)。ITS分析用DNAStar分析各序列同源性,用CLustalX 2.0完成DNA序列的完全對(duì)比,保存為.aln格式,然后運(yùn)用系統(tǒng)發(fā)育軟件MEGA 4.1軟件轉(zhuǎn)換成.meg格式,系統(tǒng)樹(shù)以苜蓿(Medicagosativa)(AF053142.1)為外群采用鄰接距離矩陣法(neighbor-joining)構(gòu)建,應(yīng)用自展法(bootstrap)進(jìn)行可信度檢測(cè),重復(fù)1 000次。

    此外,首創(chuàng)經(jīng)常項(xiàng)下人民幣與緬幣特許兌換業(yè)務(wù),兌換量已突破4億元人民幣;德宏、紅河、文山成功對(duì)外發(fā)布人民幣兌緬幣“瑞麗指數(shù)”、人民幣兌越南盾“YD指數(shù)”,匯率定價(jià)話語(yǔ)權(quán)有所增強(qiáng);銀行柜臺(tái)掛牌幣種已涵蓋周邊國(guó)家貨幣。截至6月,全省銀行累計(jì)辦理人民幣對(duì)泰銖、基普、越南盾柜臺(tái)兌換交易合計(jì)2.26億元人民幣。今年5月18日,富滇銀行磨憨支行與老中銀行磨丁分行分別將500萬(wàn)元人民幣通過(guò)中國(guó)磨憨口岸調(diào)入老撾、5億元老撾基普通過(guò)磨丁口岸調(diào)入中國(guó),標(biāo)志著中老雙邊首條本外幣現(xiàn)鈔陸路調(diào)運(yùn)通道正式建立。以銀行間市場(chǎng)區(qū)域交易為支撐、銀行柜臺(tái)交易為基礎(chǔ)、特許兌換為補(bǔ)充的全方位、多層次區(qū)域性貨幣交易“云南模式”已經(jīng)成型。

    2結(jié)果與分析

    2.1利用ISSR引物對(duì)15個(gè)白三葉品種的擴(kuò)增結(jié)果

    利用兩個(gè)白三葉品種海法和胡以阿對(duì)100條ISSR引物進(jìn)行篩選,從中篩選出條帶清晰、重復(fù)性高、表達(dá)穩(wěn)定的5條ISSR引物,即810、816、822、826和836(表2)。

    利用所選的5條引物對(duì)15個(gè)白三葉品種進(jìn)行PCR正式擴(kuò)增,共得到DNA條帶41條,擴(kuò)增條帶變幅為7~10條,平均每個(gè)引物可以擴(kuò)增出8.2條(表2)。在41條帶中,多態(tài)性條帶為38條,擴(kuò)增多態(tài)性條帶變幅為6~9條,平均占比為92.68%,平均每個(gè)引物可以擴(kuò)增出多態(tài)性條帶7.6條。這說(shuō)明ISSR標(biāo)記能夠揭示出白三葉品種之間較高的多態(tài)性。

    基于遺傳相似系數(shù),對(duì)白三葉進(jìn)行UPGMA聚類分析,將15個(gè)白三葉品種聚為兩大類(圖1)。第Ⅰ類中,丹麥的百事和米爾卡親緣關(guān)系較近,且這兩個(gè)品種均為中葉型白三葉;與小葉型的瑞文德和大葉型的克朗德共同構(gòu)成了第1亞類;澳大利亞的荷蘭白和考拉親緣關(guān)系較近,新西蘭的胡以阿和鋪地關(guān)系較近,以上4個(gè)與澳大利亞的海發(fā)聚在一起為第2亞類,其中除鋪地為小葉型外,其它3個(gè)品種都為中葉型;而來(lái)自荷蘭的雷托單獨(dú)為第3亞類。說(shuō)明這些白三葉品種的親緣遠(yuǎn)近主要還是與地理區(qū)域及引種歷史相關(guān)。

    表2 ISSR引物序列和特異性條帶數(shù)目

    圖1 基于ISSR的15個(gè)白三葉品種聚類結(jié)果

    來(lái)自美國(guó)的瑞加與來(lái)自中國(guó)的鄂牧一號(hào)聚在一起后,再與來(lái)自美國(guó)的拉迪諾、路易斯安那,以及來(lái)自阿根廷的碧盛聚在一起形成第Ⅱ大類。而鄂牧一號(hào)是以瑞加為原始材料選育而來(lái),聚類分析也證明這兩個(gè)品種親緣關(guān)系較近。美國(guó)與阿根廷均處于美洲大陸,親緣關(guān)系相對(duì)較近。

    基于遺傳相似系數(shù),對(duì)15個(gè)白三葉品種進(jìn)行主成分分析,位置相靠近者遺傳距離較近(圖2)。結(jié)果表明,主成分分析結(jié)果和遺傳聚類結(jié)果類似,主成分分析結(jié)果更直觀表明了15個(gè)白三葉品種之間的遺傳關(guān)系。

    2.2利用ITS引物對(duì)15個(gè)白三葉品種的擴(kuò)增結(jié)果

    利用鄰接法(NJ)構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化發(fā)育樹(shù)(圖3),可以將15個(gè)白三葉品種和苜蓿明顯分為三大類。第Ⅰ類有10個(gè)白三葉品種,包含有來(lái)自丹麥的克朗德、米爾卡、百事和瑞文德,同時(shí)也包含了澳大利亞的荷蘭白、海法和考拉,以及新西蘭的胡以阿和鋪地,荷蘭的雷托,其中荷蘭白和考拉親緣關(guān)系較近;第Ⅱ類有5個(gè)白三葉品種,包含有美國(guó)的拉迪諾、路易斯安那和瑞加,同時(shí)也包含了中國(guó)的鄂牧一號(hào)和阿根廷的碧盛。苜蓿單獨(dú)聚為第Ⅲ類,說(shuō)明本研究結(jié)果可靠。ITS聚類分析結(jié)果與ISSR聚類分析結(jié)果類似。

    圖2 基于ISSR的15個(gè)白三葉品種主成分分析

    圖3 基于ITS序列的15個(gè)白三葉品種系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)

    3討論

    3.1ISSR分子標(biāo)記和ITS序列遺傳多樣性分析

    ISSR分子標(biāo)記與ITS均將15個(gè)白三葉品種分為兩大類,且每一類包含的白三葉品種相似,說(shuō)明本研究結(jié)果可靠。而ISSR分子標(biāo)記在分為兩大類的基礎(chǔ)上,又將第Ⅰ大類分為3個(gè)亞類,分類更為具體。由于ISSR是一個(gè)高度可變的DNA區(qū)域,可能產(chǎn)生更多的多態(tài)性條帶[16],而白三葉ITS序列變異小,造成了其品種間最小遺傳距離偏小,因此,可以驗(yàn)證ISSR遺傳分析結(jié)果的可靠性,ITS更適于研究科屬的區(qū)分。ISSR標(biāo)記能有效揭示核桃(Juglansregia)品種間的遺傳多樣性,為核桃品種資源的種質(zhì)鑒定和遺傳親本的選配提供了可靠的技術(shù)支撐和科學(xué)依據(jù)[17]。劉崢和張漢堯[18]利用ITS序列分析成功構(gòu)建了旋花科14個(gè)屬的的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。

    3.2白三葉品種遺傳聚類與地理距離的相關(guān)及引種歷史相關(guān)分析

    ISSR和ITS聚類分析表明,選擇的白三葉品種具有一定的地域性分布規(guī)律,并與引種歷史具有較強(qiáng)的關(guān)聯(lián)性。據(jù)記載,白三葉的種植歷史悠久,16世紀(jì)后期,荷蘭開(kāi)始用種子種植。17世紀(jì)傳入英國(guó),隨后傳入美國(guó)、新西蘭等國(guó)[19]。來(lái)自丹麥、澳大利亞、新西蘭和荷蘭的白三葉品種聚在一起,澳大利亞和新西蘭都屬于大洋洲,由于地理關(guān)系聚在一起,而后再與新西蘭和丹麥聚在一起。而美國(guó)、阿根廷和中國(guó)的聚為一類,推測(cè)是由于育種學(xué)家在育種過(guò)程中首先選擇當(dāng)?shù)鼗蛘呦嘟貐^(qū)引進(jìn)的白三葉種質(zhì)材料進(jìn)行白三葉新品種的選育,但同時(shí)美國(guó)的瑞加和中國(guó)的鄂牧一號(hào)聚在一起,則是由于鄂牧一號(hào)是在瑞加的基礎(chǔ)上進(jìn)行綜合選育的,而且鄂牧一號(hào)在國(guó)內(nèi)推廣面積不大,變異較小,還和原種保持著一定的親緣關(guān)系。由于供試白三葉品種有限,可以推測(cè),隨著選擇白三葉品種的增多,將會(huì)有不同地區(qū)的白三葉因不同地區(qū)原種的選擇而聚在一起。研究表明,利用形態(tài)特征、SRAP、同工酶、ISSR進(jìn)行遺傳多樣性分析能夠?qū)⒋蟛糠值乩韰^(qū)域臨近的種質(zhì)材料聚在一起[19-21]。

    在ISSR分類中,首先是根據(jù)地理位置將白三葉品種聚為一類,小葉型的瑞文德和大葉型的克朗德單獨(dú)與中葉型白三葉百事和米爾卡共同構(gòu)成了第1亞類,說(shuō)明親緣關(guān)系與葉形大小相關(guān)性不是很強(qiáng)。

    本研究表明,白三葉品種的遺傳關(guān)系與地理分布具有較大的相關(guān)性,同時(shí)也與白三葉引種歷史具有較強(qiáng)的相關(guān)性,尤其栽培品種間的平均相似系數(shù)相對(duì)較大[22],在新品種選育過(guò)程中首先要考慮品種來(lái)源,其次考慮白三葉的葉形等相關(guān)形態(tài)性狀,對(duì)目標(biāo)性狀進(jìn)行選擇育種。而同時(shí)ISSR和ITS均能有效地對(duì)白三葉品種遺傳多樣性進(jìn)行分析,且ISSR可以更加細(xì)致地對(duì)其進(jìn)行分類,以后可以在更多白三葉的相關(guān)研究中加以應(yīng)用。

    參考文獻(xiàn)References:

    [1]鮑健寅,李維俊,馮蕊華,尹少華,李俊龍.抗旱耐熱白三葉新品種選育初報(bào).草地學(xué)報(bào),1997,6(1):15-19.

    Bao J Y,Li W J,Feng R H,Yin S H,Li J L.A preliminary of report on breeding of a new variety of white clover with drought and heat resistance.Acta Agrectir Sinica,1997,6(1):15-19(in Chinese)

    [2]Sachiko N I,Hiroshi H,Shusei S,Hideki H,Kenji O,Kenta S,Shigemi S,Akiko W,Tsuyuko W,Yoshie K,Hisano T,Tsunakazu F,Manabu Y,Mistuyo K,Satoshi T.Comparative genetic mapping and discovery of linkage disequilibrium across linkage groups in white clover(TrifoliumrepensL.).G3·Genes Genomes Genetics,2012,2(5):607-617.

    [3] 寇建村,楊文權(quán),李金龍,李淵,趙紅陽(yáng),韓明玉.白三葉覆蓋厚度對(duì)蘋果園壟溝中土壤肥力的影響.草業(yè)科學(xué),2015,32(12):1933-1939.

    Kou J C,Yang W Q,Li J L,Li Y,Zhao H Y,Han M Y.Effects of covering white clover with different thickness in apple orchard on furrow soil fertility.Pratacultural Science,2015,32(12):1933-1939.(in Chinese)

    [4] 貴州野生白三葉草資源調(diào)查組.貴州野生白三葉草資源調(diào)查總結(jié).四川草原,1982,1(2):24-31,57.

    [5]李金博,李詩(shī)剛,徐義炎,吳燕民.白三葉草基因工程及逆境生理研究進(jìn)展.草業(yè)科學(xué),2013,30(11):1842-1851.

    Li J B,Li S G,Xu Y Y,Wu Y M.Research progress of genetic engineering and stress physiology in white clover.Pratacultural Science,2013,30(11):1842-1851.(in Chinese)

    [6]Badr A,El-Shazly H H,Mekki L.Genetic diversity in white clover and its progenitors as revealed by DNA fingerprinting.Biologia Plantarum,2012,56(2):283-291.

    [7] Zietkiewicz E,RafaIski A,Labuda D.Genome fingerprinting by simple sequence repeat(SSR)-anchored polymerase chain reaction amplification.Genomics,1994,20(2):176-183.

    [8] 錢韋,葛頌,洪德元.采用RAPD和ISSR標(biāo)記探討中國(guó)疣粒野生稻的遺傳多樣性.植物學(xué)報(bào),2000,42(7):741-750.

    Qian W,Ge S,Hong D Y.Assessment of genetic variation ofOryzagranulatedetected by RAPDs and ISSRs.Acta Botanica Sinica,2000,42(7):741-750.(in Chinese)

    [9] 周延清,景建洲,李振勇,張寶華,賈靜芬.利用RAPD和ISSR分子標(biāo)記分析地黃種質(zhì)遺傳多樣性.遺傳,2004,26(6):922-928.

    Zhou Y Q,Jing J Z,Li Z Y,Zhang B H,Jia J F.Assessment of genetic diversity ofRehmanniaglutiuosagermplasm dectected by RAPDs and ISSRs.Hereditas,2004,26(6):922-928.(in Chinese)

    [10] 李洪芹,馬昌豪,彭艷麗.山東玫瑰花核糖體rDNA ITS序列分析初步探究.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2015,34(2):104-107.

    Li H Q,Ma C H,Peng Y L.The pre-explore of rDNA ITS sequence of Flos Rosae Rugosae in Shandong Province.Journal of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,2015,34(2):104-107.(in Chinese)

    [11] Jahufer M Z Z,Cooper M,Harch B D.Pattern analysis of the diversity of morphological plant attributes and herbage yield in a world collection of white clover(TrifoliumrepensL.) germplasm characterised in a summer moisture stress environment of Australia.Genetic Resources and Crop Evolution,1997,44(4):289-300.

    [12] 帥素容,張新全,毛凱,蒲朝龍.勒代諾白三葉與六個(gè)白三葉品種的同工酶比較研究.中國(guó)草地,1998,1(2):55-58.

    Shuai S R,Zhang X Q,Mao K,Pu C L.Study on the isozymes of ladinoTrifoliumrepensLinnaeus and other sixT.repens.Grassland of China,1998,1(2):55-58.(in Chinese)

    [13]Joyce T A,Abberton M T,Miehaelson-Yeates T P T,Forster J W.Relationships between genetic distance measured by RAPD-PCR and heterosis in inbred lines of white clover(TrifoliumrepensL.).Euphytica,1999,107(3):159-165.

    [14] K?lliker R,Jones E S,Jahufer M Z Z,Forster J W.Bulked AFLP analysis for the assessment of genetic diversity in white clover(TrifoliumrepensL.).Euphytica,2001,121(3):305-315.

    [15]王玉祥,張博.新疆野生白三葉表型性狀變異研究.草地學(xué)報(bào),2012,20(6):1163-1168.

    Wang Y X,Zhang B.Phenotypic variation ofTrifoliumrepensin Xinjiang.Acta Agrectir Sinica,2012,20(6):1163-1168.(in Chinese)

    [16]賈媛,李忠海,黎繼烈,朱曉媛,譚云.ISSR指紋圖譜技術(shù)在種質(zhì)資源研究上的應(yīng)用.河北農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,17(5):63-68.

    Jia Y,Li Z H,Li J L,Zhu X Y,Tan Y.The application of ISSR fingerprinting technology in germplasm resource research.Journal of Hebei Agricultural Sciences,2013,17(5):63-68.(in Chinese)

    [17]李國(guó)田,張美勇,相昆,徐穎,沈廣寧,薛培生,楊軍.基于標(biāo)記的個(gè)核桃品種遺傳多樣性分析及分子身份構(gòu)建.核農(nóng)學(xué)報(bào),2015,29(10):1884-1892.Li G T,Zhang M Y,Xiang K,Xu Y,Shen G N,Xue P S,Yang J.Analysis of genetic diversity and establishment of molecular ID for 16 walnut varieties based on ISSR markers.Journal of Nuclear Agricultural Sciences,2015,29(10):1884-1892.(in Chinese)

    [18]劉崢,張漢堯.旋花科植物序列分析.西部林業(yè)科學(xué),2012,41(4):70-74.

    Liu Z,Zhang H Y.ITS sequence analysis of convolvulaceae plants.Journal of West China Forestry Science,2012,41(4):70-74.(in Chinese)

    [19] 切彩.11 份白三葉材料形態(tài)特征及其同工酶和種子貯藏蛋白遺傳多樣性研究.烏魯木齊:新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文,2009.

    Qie C.Study on morphological characteristics,genetic diversity on isozyme and seed protein of 11 white clover.Master Thesis.Urumqi:Xinjiang Agricultural University,2009.(in Chinese)

    [20]孫宇龍,侯北偉,耿麗霞,牛志韜,嚴(yán)文津,薛慶云,丁小余.基于標(biāo)記的白芨遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)評(píng)價(jià).藥學(xué)學(xué)報(bào),2016,51(1):147-152.

    Sun Y L,Hou B W,Geng L X,Niu Z T,Yan W J,Xue Q Y,Ding X Y.Evaluation of genetic diversity and population structure ofBletillastriatabased on SRAP markers.Acta Pharmaceutica Sinica,2016,51(1):147-152.(in Chinese)

    [21]何俊,周康,張莉,何勝江.白三葉草種質(zhì)資源同工酶的遺傳多樣性分析.貴州農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,38(3):22-24.

    He J,Zhou K,Zhang L,He S J.Genetic diversity ofTrifoliumrepensgermplasm resources based on isozyme analysis.Guizhou Agricultural Sciences,2010,38(3):22-24.(in Chinese)

    [22] 陳立強(qiáng),師尚禮.42份紫花苜蓿種質(zhì)資源遺傳多樣性的SSR分析.草業(yè)科學(xué),2015,32(3):372-381.

    Chen L Q,Shi S L.Genetic diversity of 42 alfalfa accessions revealed by SSR markers.Pratacultural Science,2015,32(3):372-381.(in Chinese)

    (責(zé)任編輯武艷培)

    ISSR and ITS analysis on genetic diversity of 15 white clover cultivars

    Li Jin-bo1,2,3, Gao Li-hua2, Zhou Mei-liang2, Li Shi-gang3, Peng Zhao-liang3, Wu Yan-min2

    (1.College of Pastoral Agriculture Science and Technology, Lanzhou University, Lanzhou 730020, China;2.Biotechnology Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China;3.Shenzhen Tech and Landscape Co.,Ltd., Shenzhen 518034, China)

    Abstract:The relationship of genetic diversity with geographical origin between 15 white clover cultivars on the popularization and application of the large area in China, which provides genetic theory support the white clover breeding. The results showed that 15 white clover cultivars were divided into two categories, the class Ⅰ has 10 cultivars of white clover, mainly comes from Denmark, Australia, New Zealand and the Netherlands; There are five white clover cultivars in the class Ⅱ, mainly comes from USA, China and Argentina. White clover cultivars clustering has certain regional distribution, the genetic diversity of white clover cultivars could be studied by using ISSR and ITS analyzing , and ISSR can be more detailed on the classification.

    Key words:white clover; ISSR; ITS; genetic diversity

    DOI:10.11829/j.issn.1001-0629.2016-0093李金博,高麗華,周美亮,李詩(shī)剛,彭昭良,吳燕民.15個(gè)白三葉品種的ISSR和ITS遺傳多樣性分析.草業(yè)科學(xué),2016,33(6):1147-1153.

    *收稿日期:2016-02-29接受日期:2016-03-31

    基金項(xiàng)目:國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(31572457);鐵漢生態(tài)研究院建設(shè)(2014B090903015);鐵漢生態(tài)院士工作站建設(shè)(2015B090904008)

    通信作者:吳燕民(1955-),男,陜西子長(zhǎng)人,研究員,博士,研究方向?yàn)橹参锓肿由飳W(xué)與基因工程。E-mail:wuym65@sina.com

    中圖分類號(hào):S541+.203;Q943

    文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

    文章編號(hào):1001-0629(2016)6-1147-07*

    Corresponding author:Wu Yan-minE-mail:wuym65@sina.com

    Li J B,Gao L H,Zhou M L,Li S G,Peng Z L,Wu Y M.ISSR and ITS analysis on genetic diversity of 15 white clover cultivars.Pratacultural Science,2016,33(6):1147-1153.

    第一作者:李金博(1985-),男,河南宜陽(yáng)人,在讀博士生,研究方向?yàn)椴輼I(yè)科學(xué)。 E-mail:jinbo406@126.com

    猜你喜歡
    白三葉遺傳多樣性
    三葉草屬2 種草坪草出苗和幼苗生長(zhǎng)階段的種內(nèi)與種間關(guān)系
    淺析白三葉的蟲(chóng)害防治
    茄子種質(zhì)資源農(nóng)藝性狀遺傳多樣性分析
    淺析田間水稻紋枯病抗性鑒定體系的確立與完善
    西藏野核桃的表型特征及其保育措施
    水稻紋枯病抗性鑒定體系的確立與遺傳多樣性研究
    楊梅種質(zhì)資源遺傳多樣性研究進(jìn)展
    山西大豆自然群體遺傳多樣性的研究
    雞眼草水浸提液對(duì)4種草坪草的化感作用
    白三葉基因工程及逆境生理研究進(jìn)展
    国产激情偷乱视频一区二区| 国产亚洲欧美在线一区二区| 国产亚洲精品久久久com| 欧美一级毛片孕妇| 国产伦在线观看视频一区| 国产精品亚洲一级av第二区| 亚洲国产看品久久| 丰满的人妻完整版| 成人午夜高清在线视频| 欧美丝袜亚洲另类 | 成人国产一区最新在线观看| 哪里可以看免费的av片| 一本久久中文字幕| 久久午夜综合久久蜜桃| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 午夜影院日韩av| 99精品欧美一区二区三区四区| 国产高清有码在线观看视频| 免费看日本二区| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 久久人人精品亚洲av| 变态另类丝袜制服| 黄片大片在线免费观看| 九色国产91popny在线| 又黄又爽又免费观看的视频| 国产一区二区在线观看日韩 | 99久久无色码亚洲精品果冻| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲色图av天堂| 亚洲成人精品中文字幕电影| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 久久久精品欧美日韩精品| 日韩高清综合在线| 制服人妻中文乱码| 全区人妻精品视频| 国产91精品成人一区二区三区| 亚洲av熟女| 国产69精品久久久久777片 | 久久久久九九精品影院| 国产高清三级在线| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 欧美黑人欧美精品刺激| 麻豆国产av国片精品| 国产 一区 欧美 日韩| 国产毛片a区久久久久| 久久国产乱子伦精品免费另类| 欧美性猛交黑人性爽| 国产淫片久久久久久久久 | 免费观看的影片在线观看| 国产成人啪精品午夜网站| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国产一区二区在线av高清观看| 两性夫妻黄色片| 亚洲第一电影网av| 全区人妻精品视频| 长腿黑丝高跟| 国产美女午夜福利| netflix在线观看网站| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 亚洲人成电影免费在线| 中文字幕av在线有码专区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 欧美一区二区国产精品久久精品| 亚洲成a人片在线一区二区| 中文字幕av在线有码专区| 999久久久国产精品视频| 99热只有精品国产| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产黄色小视频在线观看| 三级毛片av免费| 美女被艹到高潮喷水动态| 老汉色∧v一级毛片| 88av欧美| 无人区码免费观看不卡| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 老司机在亚洲福利影院| 美女黄网站色视频| 成人性生交大片免费视频hd| 国内精品久久久久精免费| 欧美日韩黄片免| 深夜精品福利| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 97碰自拍视频| 免费观看人在逋| 欧美丝袜亚洲另类 | 欧美成人一区二区免费高清观看 | 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产美女午夜福利| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 在线播放国产精品三级| 国产99白浆流出| 久久久成人免费电影| 亚洲五月天丁香| 亚洲男人的天堂狠狠| 激情在线观看视频在线高清| 丰满人妻一区二区三区视频av | 欧美色视频一区免费| 看免费av毛片| 午夜福利18| 免费观看人在逋| 亚洲欧美精品综合久久99| 超碰成人久久| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 最近最新中文字幕大全免费视频| 午夜久久久久精精品| 亚洲中文字幕日韩| 国产精品av视频在线免费观看| 亚洲av美国av| 成人精品一区二区免费| 日韩欧美在线乱码| 中文亚洲av片在线观看爽| 中文亚洲av片在线观看爽| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产黄片美女视频| 亚洲色图av天堂| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲最大成人中文| 人人妻人人看人人澡| 超碰成人久久| 一个人看视频在线观看www免费 | 精品久久久久久久久久免费视频| 午夜久久久久精精品| 亚洲五月婷婷丁香| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲欧美激情综合另类| 日韩国内少妇激情av| 一区福利在线观看| 麻豆成人午夜福利视频| 成人永久免费在线观看视频| 午夜免费观看网址| 久久久久性生活片| 国产精品99久久99久久久不卡| 香蕉av资源在线| 久久九九热精品免费| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲真实伦在线观看| 男女之事视频高清在线观看| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产午夜福利久久久久久| 国产三级黄色录像| 人妻久久中文字幕网| av天堂中文字幕网| a级毛片a级免费在线| 色视频www国产| 又黄又爽又免费观看的视频| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国内精品久久久久久久电影| 女同久久另类99精品国产91| 19禁男女啪啪无遮挡网站| e午夜精品久久久久久久| 国产精品国产高清国产av| 亚洲精品一区av在线观看| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 99精品在免费线老司机午夜| 欧美精品啪啪一区二区三区| 精品电影一区二区在线| 国产精品一及| 国模一区二区三区四区视频 | 久久精品综合一区二区三区| 校园春色视频在线观看| 日本免费一区二区三区高清不卡| cao死你这个sao货| 怎么达到女性高潮| 日韩欧美国产一区二区入口| 中国美女看黄片| 怎么达到女性高潮| avwww免费| 毛片女人毛片| 在线播放国产精品三级| 精品人妻1区二区| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 日本一本二区三区精品| 亚洲国产精品sss在线观看| 在线观看午夜福利视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 在线观看日韩欧美| 免费av不卡在线播放| 亚洲熟妇熟女久久| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 午夜福利在线观看吧| 国产激情欧美一区二区| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 五月玫瑰六月丁香| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 麻豆av在线久日| 亚洲黑人精品在线| 综合色av麻豆| 国产黄色小视频在线观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 老司机福利观看| 国产1区2区3区精品| 欧美激情久久久久久爽电影| 成年女人看的毛片在线观看| 午夜影院日韩av| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 桃红色精品国产亚洲av| 久久伊人香网站| 国产毛片a区久久久久| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 亚洲av美国av| 午夜福利免费观看在线| 少妇的丰满在线观看| 亚洲av五月六月丁香网| 国产精品久久久人人做人人爽| 俺也久久电影网| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 日韩中文字幕欧美一区二区| 97超视频在线观看视频| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产激情欧美一区二区| 亚洲精品在线美女| 久久亚洲真实| 国产一区二区在线观看日韩 | 久久精品人妻少妇| 国产91精品成人一区二区三区| 成在线人永久免费视频| 日本一本二区三区精品| 一a级毛片在线观看| 成年人黄色毛片网站| 亚洲中文日韩欧美视频| 日韩欧美三级三区| 特大巨黑吊av在线直播| 午夜免费成人在线视频| 中国美女看黄片| 日韩欧美在线乱码| 亚洲av成人av| 国产精品 欧美亚洲| 波多野结衣高清无吗| 两个人视频免费观看高清| 精品一区二区三区av网在线观看| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 久久性视频一级片| 一本精品99久久精品77| 99精品久久久久人妻精品| 亚洲第一电影网av| 午夜两性在线视频| 国产精品,欧美在线| 丝袜人妻中文字幕| 制服人妻中文乱码| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 首页视频小说图片口味搜索| 国产精品99久久久久久久久| 好男人电影高清在线观看| 亚洲中文av在线| 国产成人av教育| 国产成人精品久久二区二区免费| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 亚洲中文av在线| 很黄的视频免费| 欧美日韩国产亚洲二区| 亚洲美女黄片视频| 成人午夜高清在线视频| 欧美中文综合在线视频| 一二三四在线观看免费中文在| 精品国产美女av久久久久小说| 这个男人来自地球电影免费观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 午夜视频精品福利| 久久精品综合一区二区三区| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产伦在线观看视频一区| 国产真人三级小视频在线观看| 久久久久久久精品吃奶| 99久久成人亚洲精品观看| 欧美日韩黄片免| 久久久国产精品麻豆| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产精品久久视频播放| 亚洲在线观看片| 欧美一区二区精品小视频在线| 亚洲av电影在线进入| 国产精品亚洲av一区麻豆| 岛国在线观看网站| 欧美午夜高清在线| 久久性视频一级片| 看片在线看免费视频| 亚洲美女黄片视频| 男女视频在线观看网站免费| 久久久久精品国产欧美久久久| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 丰满人妻一区二区三区视频av | 免费搜索国产男女视频| 国产综合懂色| 日韩人妻高清精品专区| 一夜夜www| av黄色大香蕉| 亚洲成人久久性| 在线观看美女被高潮喷水网站 | avwww免费| 久久午夜亚洲精品久久| 91在线观看av| 午夜a级毛片| 精品欧美国产一区二区三| 可以在线观看毛片的网站| 神马国产精品三级电影在线观看| 国产高清有码在线观看视频| 欧美大码av| 此物有八面人人有两片| 狠狠狠狠99中文字幕| 真实男女啪啪啪动态图| 嫩草影视91久久| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 久久草成人影院| 国产亚洲av高清不卡| 色综合站精品国产| 成熟少妇高潮喷水视频| 精品国产亚洲在线| 一个人免费在线观看的高清视频| 人妻久久中文字幕网| 国产99白浆流出| 亚洲九九香蕉| 黄色丝袜av网址大全| 又粗又爽又猛毛片免费看| 最近最新中文字幕大全免费视频| 两个人看的免费小视频| www.自偷自拍.com| 两个人视频免费观看高清| 国产在线精品亚洲第一网站| av中文乱码字幕在线| 中亚洲国语对白在线视频| 国产成人av激情在线播放| 男女午夜视频在线观看| 在线观看午夜福利视频| 亚洲国产欧美网| 国产主播在线观看一区二区| 欧美日韩一级在线毛片| 国产成+人综合+亚洲专区| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 成人午夜高清在线视频| 欧美黑人巨大hd| 成人18禁在线播放| 在线a可以看的网站| 欧美性猛交黑人性爽| 很黄的视频免费| 国产伦一二天堂av在线观看| 美女免费视频网站| 色综合站精品国产| 国产精品久久电影中文字幕| 小说图片视频综合网站| 丰满的人妻完整版| 高清毛片免费观看视频网站| 精品国产乱子伦一区二区三区| av福利片在线观看| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 日韩欧美 国产精品| 哪里可以看免费的av片| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产精品99久久99久久久不卡| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 俄罗斯特黄特色一大片| 制服人妻中文乱码| 两个人的视频大全免费| 国产精品日韩av在线免费观看| aaaaa片日本免费| 日韩国内少妇激情av| 国产91精品成人一区二区三区| 99在线视频只有这里精品首页| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 日韩成人在线观看一区二区三区| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 免费在线观看成人毛片| 国产亚洲精品av在线| 村上凉子中文字幕在线| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 久久精品91无色码中文字幕| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产又色又爽无遮挡免费看| 久99久视频精品免费| 亚洲国产欧美网| 色吧在线观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 在线观看66精品国产| 亚洲av成人av| 国产久久久一区二区三区| 国产一级毛片七仙女欲春2| 欧美一区二区国产精品久久精品| 老司机午夜福利在线观看视频| 麻豆成人av在线观看| 在线免费观看的www视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 一区福利在线观看| 成年人黄色毛片网站| 国产熟女xx| 国内揄拍国产精品人妻在线| 日本一二三区视频观看| 色综合婷婷激情| 一a级毛片在线观看| 两性夫妻黄色片| 欧美高清成人免费视频www| www日本黄色视频网| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国内精品一区二区在线观看| 久久天堂一区二区三区四区| 熟女人妻精品中文字幕| 搞女人的毛片| 黄片小视频在线播放| 婷婷丁香在线五月| 亚洲中文字幕日韩| 露出奶头的视频| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 757午夜福利合集在线观看| 久久久国产精品麻豆| 日韩欧美在线二视频| 久久人人精品亚洲av| 成人无遮挡网站| 精品国产乱子伦一区二区三区| 国产精品影院久久| 香蕉国产在线看| 中文资源天堂在线| 长腿黑丝高跟| 精品日产1卡2卡| 国产男靠女视频免费网站| 久久精品91无色码中文字幕| 国产精品电影一区二区三区| 精品国产美女av久久久久小说| 亚洲成人久久爱视频| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 不卡一级毛片| 国产精品爽爽va在线观看网站| 欧美成人免费av一区二区三区| 18禁观看日本| 嫁个100分男人电影在线观看| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 舔av片在线| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲美女视频黄频| 亚洲国产色片| 国产精品亚洲美女久久久| 国产三级黄色录像| 亚洲av电影在线进入| 日韩欧美在线二视频| 免费在线观看影片大全网站| 国产精品九九99| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 免费看十八禁软件| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产精品免费一区二区三区在线| 人妻久久中文字幕网| 欧美日韩精品网址| 免费看美女性在线毛片视频| 欧美大码av| 成人三级黄色视频| 日本一二三区视频观看| 亚洲国产精品合色在线| 成人特级av手机在线观看| svipshipincom国产片| 搡老岳熟女国产| 精品无人区乱码1区二区| 日韩欧美国产一区二区入口| 成人亚洲精品av一区二区| 啦啦啦免费观看视频1| 久久草成人影院| 久久久成人免费电影| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲精品色激情综合| 99热这里只有是精品50| 午夜免费观看网址| 国产激情偷乱视频一区二区| 一个人免费在线观看的高清视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 啪啪无遮挡十八禁网站| 一个人看的www免费观看视频| 青草久久国产| 日韩欧美 国产精品| 成人鲁丝片一二三区免费| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产 一区 欧美 日韩| 在线免费观看的www视频| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产精品九九99| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产91精品成人一区二区三区| 国产 一区 欧美 日韩| 露出奶头的视频| 亚洲欧美日韩东京热| 国产高清有码在线观看视频| 欧美高清成人免费视频www| 国产成人精品无人区| 久久精品国产综合久久久| 久久亚洲真实| 黄色成人免费大全| 最近最新中文字幕大全免费视频| 黄色日韩在线| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲专区中文字幕在线| 精品一区二区三区四区五区乱码| 午夜a级毛片| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产一区二区激情短视频| 欧美高清成人免费视频www| 中文字幕熟女人妻在线| h日本视频在线播放| www.www免费av| 好男人电影高清在线观看| 久久久久性生活片| 他把我摸到了高潮在线观看| 亚洲av成人精品一区久久| 草草在线视频免费看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 久久精品综合一区二区三区| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 日韩高清综合在线| 婷婷精品国产亚洲av在线| 性欧美人与动物交配| 色吧在线观看| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 国产乱人伦免费视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲精品一区av在线观看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 亚洲,欧美精品.| 精品久久久久久久久久免费视频| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲av五月六月丁香网| 午夜免费激情av| 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲精品456在线播放app | 久久午夜亚洲精品久久| 成人av一区二区三区在线看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 日韩大尺度精品在线看网址| 久久久久久大精品| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 两个人视频免费观看高清| 12—13女人毛片做爰片一| 三级毛片av免费| 国产精品久久久久久精品电影| 两个人看的免费小视频| 51午夜福利影视在线观看| 在线观看66精品国产| 在线看三级毛片| 99re在线观看精品视频| 国产 一区 欧美 日韩| 九九久久精品国产亚洲av麻豆 | 欧美日本视频| 成在线人永久免费视频| 亚洲电影在线观看av| 可以在线观看的亚洲视频| 国产高清激情床上av| 最新美女视频免费是黄的| 精品国产乱码久久久久久男人| 老司机在亚洲福利影院| 热99re8久久精品国产| av国产免费在线观看| 亚洲 欧美一区二区三区| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 九九在线视频观看精品| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 人妻夜夜爽99麻豆av| 校园春色视频在线观看| 露出奶头的视频| 亚洲熟女毛片儿| 成人av在线播放网站| 亚洲美女视频黄频| 国产亚洲精品av在线| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 久久精品人妻少妇| 国产综合懂色| 亚洲无线在线观看| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产淫片久久久久久久久 | 亚洲天堂国产精品一区在线| 精品国产乱码久久久久久男人| 亚洲欧美日韩东京热| 在线观看午夜福利视频| 午夜福利18| 久久久久精品国产欧美久久久| 俄罗斯特黄特色一大片| 精品福利观看| 三级毛片av免费| 国产爱豆传媒在线观看| 国产激情久久老熟女| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| www日本在线高清视频| 热99re8久久精品国产| 亚洲国产看品久久| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲精品一区av在线观看| 午夜精品一区二区三区免费看| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲国产高清在线一区二区三| x7x7x7水蜜桃| 亚洲18禁久久av| 国产精品亚洲美女久久久| av女优亚洲男人天堂 | 欧美成狂野欧美在线观看| 99re在线观看精品视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 |