天皰瘡患者抗橋粒芯糖蛋白與疾病相關(guān)性分析

柯　丹，杜　宇，鄧抒琴，蔡開顏，賀淑丹，王　希，李紅林，閆國富

(重慶市中醫(yī)院/重慶市第一人民醫(yī)院皮膚科　400011)

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天皰瘡患者抗橋粒芯糖蛋白與疾病相關(guān)性分析

柯丹，杜宇，鄧抒琴，蔡開顏，賀淑丹，王希，李紅林，閆國富

(重慶市中醫(yī)院/重慶市第一人民醫(yī)院皮膚科400011)

[摘要]目的探討酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)檢測血清橋粒芯糖蛋白(Dsg)1和Dsg3在天皰瘡診斷及治療中的應(yīng)用價值。方法選擇2014年1～12月在該科確診為天皰瘡的患者47例(觀察組)，同期排除天皰瘡的患者52例為對照組。間接免疫熒光法(IIF)檢測抗表皮棘細(xì)胞橋粒抗體，ELISA檢測Dsgl、Dsg3；分析其與天皰瘡病情的相關(guān)性。結(jié)果ELISA法的敏感性為95.74%，特異性為92.31%。IIF法敏感性為93.62%，特異性為86.54%。二者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。30例尋常型天皰瘡患者16例Dsg1、Dsg3均陽性，8例紅斑型和5例落葉型天皰瘡患者均只有Dsg1陽性，2例增殖型天皰瘡Dsg1、Dsg3均為陽性。尋常型和增殖型天皰瘡Dsg1、Dsg3滴度分別為130.85±86、112.30±85.05，疾病活動性評分(5.10±1.86)分，相關(guān)系數(shù)分別為r=0.476(P=0.008)、r=0.816(P=0.001)。落葉型和紅斑型天皰瘡Dsg1滴度142.59±78.52，疾病活動評分平均為(2.77±0.92)分，r=0.800，P=0.001。結(jié)論ELISA檢測Dsg1、Dsg3敏感性、特異性高，有助于天皰瘡的診斷及病情嚴(yán)重程度的評價。

[關(guān)鍵詞]天皰瘡；橋粒芯糖蛋白質(zhì)1；橋粒芯糖蛋白質(zhì)3；相關(guān)性分析

天皰瘡是一組由天皰瘡抗體介導(dǎo)的嚴(yán)重自身免疫性大皰性皮膚病，可累及全身皮膚及黏膜，嚴(yán)重者引起廣泛皮膚黏膜糜爛，甚至危及生命，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。其發(fā)病與患者體內(nèi)存在抗角質(zhì)形成細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)蛋白的致病性抗體引起角質(zhì)形成細(xì)胞間黏附喪失、形成水皰相關(guān)。橋粒芯糖蛋白 (desmoglein，Dsg)1和Dsg3 IgG抗體被證實(shí)是主要致病抗體[1]。酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)檢測天皰瘡患者血清中Dsg抗Dsgl和抗Dsg3抗體水平，是近年來新興的檢測方法，具有高度敏感性和特異性，并可用于病情的監(jiān)測[2-3]。作者回顧性分析本科2014年1～12月天皰瘡患者Dsg檢測情況，分析其與病情的相關(guān)性，探討其在診斷及治療中的應(yīng)用價值。

1資料與方法

1.1一般資料選擇本科2014年1～12月確診的天皰瘡患者47例(觀察組)，本院同期住院排除天皰瘡的患者52例(對照組)。天皰瘡診斷符合臨床表現(xiàn)及體格檢查[4]，經(jīng)組織病理結(jié)果、直接免疫熒光檢測確診，對照組為已明確排除天皰瘡的患者。觀察組：男24例，女23例；年齡24～84歲，平均(55.22±13.68)歲；病程15～120 d，平均33.20 d。對照組：男28例，女24例；年齡27～86歲，平均(56.50±15.56)歲；病程23～135 d，平均35.50 d；其中健康體檢者28例，類天皰瘡16例，藥疹3例，濕疹3例，獲得性大皰性表皮松解癥(EBA)1例，副腫瘤天皰瘡1例。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集及檢測方法留取血清標(biāo)本，分別對兩組患者采集5 mL靜脈血，離心分離并收集上層血清液，于-20 ℃低溫冰箱內(nèi)保存。按檢驗(yàn)程序分別對待查血清行ELISA檢測Dsg1、Dsg3及間接免疫熒光法(IIF)檢測抗表皮抗原抗體。ELISA試劑盒由Medical& Biological Laboratory Co．Ltd．提供，按照試劑盒說明進(jìn)行操作。IIF測定血清抗體采用抗表皮抗原抗體檢測試劑盒(金山化學(xué)試劑有限公司)，以人皮膚為底物，將血清樣本稀釋成1∶10，常規(guī)方法測定患者血清自身抗體及其滴度，以熒光素標(biāo)記羊抗人IgG為二抗，熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。每批設(shè)陽性抗血清對照和不加一抗的陰性對照。

1.2.2評價標(biāo)準(zhǔn)ELlSA檢測標(biāo)準(zhǔn)：Dsg1<14為陰性，>20為陽性;Dsg3<7為陰性，>20為陽性。病情評價標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)Ikeda天皰瘡嚴(yán)重程度指數(shù)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評分：皮損面積占體表面積百分?jǐn)?shù)，是否有尼氏征，每天新發(fā)水皰個數(shù)、是否存在口腔黏膜損害4個方面評價?？偡中∮?分為輕度、5～7分為中度、>7分為重度[5]。

2結(jié)果

2.1兩組患者敏感性、特異性評價觀察組患者中ELISA法檢測陽性者45例，陰性2例，敏感度為95.74%。對照組4例陽性，均為大皰性類天皰瘡患者；48例陰性，特異度為92.31%，診斷符合率：e=(45+48)/99=93.94%。觀察組IIF法陽性者44例，陰性3例，敏感性為93.62%；對照組7例陽性，45例陰性，特異度為86.54%，診斷符合率：e=(44+45)/99=88.90%。兩組患者兩種方法檢測比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.211，P>0.05)，見表1。

表1　　兩組患者ELISA、IIF法檢測天皰瘡抗體結(jié)果比較[n(%)]

2.2Dsg1、Dsg3在不同類型天皰瘡中陽性率比較45例ELISA法檢測陽性的天皰瘡患者中，尋常型天皰瘡30例，紅斑型天皰瘡8例，落葉型天皰瘡5例，增殖性天皰瘡2例。30例尋常型天皰瘡患者中16例 Dsg1、Dsg3同時為陽性，均有口腔黏膜損害，8例紅斑型天皰瘡和5例落葉型天皰瘡患者均只有Dsg1陽性，均無黏膜損害，2例增殖型天皰瘡Dsg1、Dsg3均為陽性，伴有口腔黏膜損害。

表2　　30例尋常型天皰瘡患者病情評分及Dsg1、Dsg3抗體滴度比較

a：P<0.05，與輕度比較；b：P<0.05，與中度比較。

2.3天皰瘡抗體滴度與病情活動的相關(guān)性47例天皰瘡患者中尋常型30例，其Dsg1平均抗體滴度為130.85±86.12，Dsg3平均抗體滴度為112.30±85.05，疾病活動評分平均為(5.10±1.86)分，Pearson雙變量相關(guān)性分析示天皰瘡疾病活動性評分與Dsg1、Dsg3水平呈正相關(guān)(r=0.476，P=0.008；r=0.816，P=0.001)，但與Dsg3相關(guān)性更強(qiáng)。5例落葉型和8例紅斑型天皰瘡病情評價均為輕度，Dsg1平均抗體滴度為 142.59±78.52，疾病活動評分平均為(2.77±0.92)分，Pearson雙變量相關(guān)性分析示二者呈正相關(guān)(r=0.800，P=0.001)。 30例尋常型天皰瘡患者按病情評價分為輕度12例，中度14例，重度4例，輕、中、重度患者病情評分及Dsg1、Dsg3平均滴度比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=4.29，P=0.02)，見表2。

3討論

天皰瘡作為一組累及皮膚和黏膜的自身免疫性大皰性皮膚病，其病因及發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，使其診斷和治療非常困難，目前常用的檢測手段皮膚病理檢查、直接免疫熒光檢查是診斷天皰瘡的金標(biāo)準(zhǔn)，但操作復(fù)雜，難以監(jiān)測病情變化，IIF檢測患者血清中總的抗角質(zhì)形成細(xì)胞表面的IgG抗體，抗體水平與疾病的嚴(yán)重程度及病情活動性相關(guān)，常用于病情的檢測[6-7]。但該方法主觀性在抗體效價確定中占較大比重，加之底物的不同也對檢測結(jié)果有影響，而且受某些非特異性抗體的影響可能出現(xiàn)假陽性。有研究證實(shí)，Dsgl和Dsg3是天皰瘡的主要致病抗原[8]，ELISA檢測Dsgl和Dsg3是近年來采用的檢測方法，其敏感性、特異性均較高。本研究中ELISA法檢測Dsgl和Dsg3其敏感性為95.74%，特異度為92.31%，均高于IIF法，與既往的研究相似[9-10]。

臨床上天皰瘡分為尋常型、紅斑型、落葉型和增殖型，尋常型和增殖型天皰瘡發(fā)生在表皮深層，皮損廣泛，可伴有口腔黏膜的損害，有的僅有口腔黏膜的損害，而紅斑型和落葉型天皰瘡發(fā)生在表皮的淺層，一般無黏膜的損害，對于其臨床表現(xiàn)的多樣性目前有多種假說，最得到公認(rèn)的是Dsg補(bǔ)償假說[11]，該假說認(rèn)為由于Dsg1、Dsg3在皮膚和黏膜分布的不同，二者共表達(dá)于同一細(xì)胞時，它們將相互補(bǔ)償對方的功能不足，從而造成了天皰瘡臨床表現(xiàn)的多樣性。IIF檢測的是患者血清中總的循環(huán)抗體，包括抗棘細(xì)胞間橋?？贵w和抗基底膜帶抗體，但并不能明確究竟是哪一種致病性靶抗原引起水皰，難以進(jìn)行疾病的分型。而ELISA檢測Dsgl、Dsg3有助于區(qū)分天皰瘡的不同類型，本研究中30例尋常型天皰瘡患者中Dsgl、Dsg3同時陽性的患者有16例，均伴有口腔黏膜的損害，落葉型和紅斑型天皰瘡患者只有Dsgl陽性，均無黏膜的損害，推測與Dsg1、Dsg3在黏膜均是全層表達(dá)，但以Dsg3為主，所以抗Dsg3存在時Dsg3低表達(dá)，Dsgl不足以補(bǔ)償Dsg3而出現(xiàn)黏膜糜爛相關(guān)。臨床上尋常型和增殖型天皰瘡水皰較深，而落葉型、紅斑型水皰較表淺也與Dsgl、Dsg3的分布有關(guān)， 因此對于臨床上難以診斷的不典型皰病患者，這些靶抗原的檢測不僅能幫助臨床進(jìn)行診斷和鑒別診斷，還能進(jìn)行疾病的臨床分型。

但是目前天皰瘡治療的最大問題是判斷疾病的活動程度及預(yù)后，為確定治療方案提供參考依據(jù)，多數(shù)的研究認(rèn)為血清中抗Dsg1、Dsg3滴度與疾病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)性[12-13]，并隨疾病的控制其滴度也隨之下降，當(dāng)病情活動時，其可再次升高。但也有研究者認(rèn)為抗體滴度和疾病活動性及病情相關(guān)性不大，依據(jù)是有的穩(wěn)定期患者血清中抗體滴度也較高[14]。本研究中，尋常型天皰瘡患者病情越嚴(yán)重其Dsgl、Dsg3越高，病情活動評分與Dsgl、Dsg3均明顯正相關(guān)，且與Dsg3的相關(guān)性更大，也說明Dsg3是尋常型天皰瘡更特異的指標(biāo)；而落葉型和紅斑型天皰瘡患者病情嚴(yán)重程度與Dsgl呈正相關(guān)，Dsg1是紅斑型天皰瘡的特異性的指標(biāo)。但因?yàn)槭腔仡櫺匝芯?，缺乏長期隨訪資料，對其是否能隨病情波動而變化缺乏數(shù)據(jù)。馮素英等[15]隨訪天皰瘡患者2年后發(fā)現(xiàn)，疾病的活動度和Dsg指數(shù)相關(guān)，但在短期部分患者可表現(xiàn)不明顯，在疾病剛控制時只表現(xiàn)為下降的趨勢。在疾病復(fù)發(fā)時，Dsg指數(shù)升高。提示在今后的診療工作中，應(yīng)對Dsgl抗體和Dsg3指數(shù)進(jìn)行多點(diǎn)檢測，即使病情緩解也應(yīng)長期隨訪，對于判斷疾病是

否得到持續(xù)控制及確定維持治療方案等有很好的指導(dǎo)意義。

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Analysis on relationship between serum anti-desmoglein antibodies and disease in patients with pemphigus

KeDan,DuYu,DengShuqing,CaiKaiyan,HeShudan,WangXi,LiHonglin,YanGuofu

(DepartmentofDermatology,ChongqingMunicipalHospitalofTraditionalChineseMedicine/ChongqingMunicipalFirstPeople'sHospital,Chongqing400011,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the application value of ELISA for detecting the serum anti desmoglein (Dsg) 1 and Dsg 3 in the diagnosis and treatment of pemphigus.MethodsForty-seven patients with pemphigus in our hospital from January to December 2014 were selected as the observation group and contemporaneous 52 patients with excluding pemphigus were selected as the control group.The Dsg antibodies were detected by using indirect immunofluorescence method and Dsg1 and Dsg3 were determined by ELISA;their correlation with pemphigus characteristics was analyzed.ResultsThe sensitivity and specificity of ELISA for detecting anti-Dsg antibodies were 95.74% and 92.31%respectively,while which of IIF were 93.62% and 86.54% respectively,showing no statistically significant difference between the two test methods (P>0.05).In 30 cases of pemphigus vulgaris,16 cases (16/30) were positive Dsg1 and Dsg 3,8 cases of pemphigus erythematosus and 5 cases pemphigus foliaceus were positive Dsg1 only,and 2 cases of pemphigus vegetans were both positive Dsgl and Dsg3.The Dsgl and Dsg3 titers of pemphigus vulgaris and pemphigus vegetans were 130.85±86 and 112.30±85.05，respectively,and the disease activity score was (5.10±1.86) points,the correlation coefficient(r)=0.476(P=0.008),r=0.816(P=0.001),respectively.The Dsgl titer of pemphigus erythematosus and pemphigus foliaceus were 142.59±78.52,and the disease activity score was (2.77±0.92) points(r=0.800,P=0.001).ConclusionELISA for detecting Dsg1 and Dsg3 has high sensitivity and specificity,and is conducive to the diagnosis of pemphigus and evaluation of disease severity.

[Key words]pemphigus;desmoglein 1;desmoglein 3;correlation analysis

doi:論著·臨床研究10.3969/j.issn.1671-8348.2016.18.015

作者簡介：柯丹(1974-)，副主任醫(yī)師，碩士研究生，主要從事自身免疫性皮膚病及變態(tài)反應(yīng)性皮膚病的研究。

[中圖分類號]R758.66

[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A

[文章編號]1671-8348(2016)18-2498-02

(收稿日期：2015-11-29修回日期：2016-03-14)