液相串聯(lián)質(zhì)諾法測(cè)定四環(huán)素類藥物殘留方法的改進(jìn)

徐向陽(yáng)

摘要：本研究進(jìn)行了液相串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定四環(huán)素類藥物殘留方法的改進(jìn)，通過前處理，液相條件的優(yōu)化，為批量檢測(cè)畜產(chǎn)品中四環(huán)素類藥物殘留提供一種快速有效的方法。

關(guān)鍵詞：畜產(chǎn)品；四環(huán)素；殘留；質(zhì)譜

四環(huán)素類抗生素是一種廣譜抗生素，主要通過抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)合成達(dá)到抗菌效果，在化學(xué)結(jié)構(gòu)上都屬于氫化并四苯環(huán)衍生物，故稱四環(huán)素類，代表物有四環(huán)素、土霉素、金霉素、強(qiáng)力霉素等。對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、陰性菌、立克次體、支原體、衣原體都有很好的抑制作用。由于價(jià)格低廉，使用方便，效果良好，四環(huán)素類被作為藥物添加劑廣泛應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖業(yè)。但是四環(huán)素類容易誘導(dǎo)耐藥菌株，且會(huì)在畜產(chǎn)品中殘留。本文研究在GBT21317-2007和農(nóng)業(yè)部1025號(hào)公告-12-2008基礎(chǔ)上，優(yōu)化了前處理方法，液相方法。經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證，改進(jìn)后的方法，簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，適合批量檢測(cè)四環(huán)素類藥物殘留的需要。

1.前處理方法

1.1提取

1）雞肉、豬肉，稱取2±0.02g勻質(zhì)樣品，置于50mL離心管內(nèi)，加8mLMcllvaine-Na2EDTA，渦旋混勻，中速振蕩10min，14000r/min離心5min，轉(zhuǎn)移上清液于另一50mL離心管內(nèi)。重復(fù)提取一次，合并提取液，混勻，并14000r/min離心10min，去上清液8mL待凈化。

2）雞蛋，稱取2±0.02g勻質(zhì)樣品，置于50mL離心管內(nèi)，加9mLMcllvaine-Na2EDTA，渦旋混勻，中速振蕩10min，14000r/min離心5min，轉(zhuǎn)移上清液于另一50mL離心管內(nèi)。重復(fù)提取一次，合并提取液，混勻，并14000r/min離心10min，去上清液10mL待凈化

1.2凈化

HLB固相萃取柱依次用甲醇3mL、水3mL活化。取備用液過柱，并依次用3mL水、3mL5%甲醇淋洗，擠干，棄去。用5mL甲醇洗脫并收集，55C°下氮?dú)獯蹈?，?mL30%甲醇復(fù)溶、過濾。吸取過濾液0.2mL，加30%甲醇0.8mL，混勻后上機(jī)。

2.儀器條件

2.1色譜條件

色譜柱：WatersAcquityBEHC18（2.1mm×50mm，1.7um）柱溫：30℃，流動(dòng)相：A：乙腈；B：0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫（梯度洗脫程序見表1）進(jìn)樣量：2uL

2.2質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧ESI；掃描方式：正離子掃描；采集模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM；毛細(xì)管電壓：3.3kV；錐孔電壓：25.00V；離子源溫度：150℃；霧化溫度：500℃；定性、定量離子對(duì)及對(duì)應(yīng)的錐孔電壓和碰撞電壓（見表2）。

3.結(jié)果

回收率及精密度取空白豬肉試樣，進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn)，測(cè)得回收率81.3%～102.6%，精密度0.5%～5.8%，數(shù)據(jù)（見表3）。

4.分析

國(guó)標(biāo)方法中前處理和梯度洗脫程序冗長(zhǎng)，本研究通過減少稱樣量，相對(duì)增加Mellvaine-Na2EDTA提取液用量，利用高速渦旋和14000轉(zhuǎn)速的高速冷凍離心，加快了前處理速度，前處理步驟得到簡(jiǎn)化。優(yōu)化了梯度洗脫程序，洗脫效率得到極大提高，也得到了較好的質(zhì)譜離子化效率。該方法既提高了檢測(cè)效率，也保證了檢測(cè)的可靠性。（編輯：趙曉松）