金英黃歸湯對(duì)LPS介導(dǎo)乳腺上皮細(xì)胞TLR4信號(hào)通路中相關(guān)因子的影響

李　欣，李中改，張小藝，周送桂，王玉坤，馮　將，易　瓊，王　魯*

(1.貴州大學(xué) 貴州省生化工程中心，貴陽(yáng) 550025；2.貴州大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴陽(yáng) 550025；3.貴州大學(xué) 藥學(xué)院，貴陽(yáng) 550025)

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金英黃歸湯對(duì)LPS介導(dǎo)乳腺上皮細(xì)胞TLR4信號(hào)通路中相關(guān)因子的影響

李欣1，2，李中改1，2，張小藝1，2，周送桂1，3，王玉坤1，2，馮將1，2，易瓊1，王魯1*

(1.貴州大學(xué) 貴州省生化工程中心，貴陽(yáng) 550025；2.貴州大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴陽(yáng) 550025；3.貴州大學(xué) 藥學(xué)院，貴陽(yáng) 550025)

摘要：為了評(píng)價(jià)金英黃歸湯抗LPS致炎的作用機(jī)制，作者采用ELISA法檢測(cè)金英黃歸湯對(duì)細(xì)胞分泌細(xì)胞因子TNF-α、IL-8的影響，采用qPCR法研究藥物對(duì)TLR4通路中IL-1受體相關(guān)激酶-1(IRAK-1)、腫瘤壞死因子受體6(TRAF-6)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子激活激酶(TAK-1)、NF-κB誘導(dǎo)激酶(NIK)、抑制性NF-κB(IκB) mRNA的轉(zhuǎn)錄影響。結(jié)果顯示，金英黃歸湯低劑量組(39.1 μg·mL-1)、中劑量組(391 μg·mL-1)、高劑量組(3 910 μg·mL-1)能顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)減少LPS介導(dǎo)的TNF-α和IL-8分泌；能顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)減少LPS介導(dǎo)的IRAK-1、TRAF-6、TAK-1、IκB、NIKmRNA的轉(zhuǎn)錄。結(jié)果提示，金英黃歸湯通過(guò)抑制小鼠MECs 的TLR4/NF-κB信號(hào)通路中IRAK-1/TRAF-6/TAK-1/NIK途徑的活化來(lái)控制炎性因子的釋放而發(fā)揮抗炎作用，而不是通過(guò)IRAK-1/TRAF-6/TAK-1/IκB途徑實(shí)現(xiàn)的，這可能是金英黃歸湯的抗炎機(jī)制。

關(guān)鍵詞：金英黃歸湯；LPS；乳腺上皮細(xì)胞；TLR4信號(hào)；mRNA轉(zhuǎn)錄

在免疫細(xì)胞研究中Toll樣受體(TLRs)能啟動(dòng)和調(diào)節(jié)機(jī)體炎癥和免疫反應(yīng)[1]，且TLR4是TLRs家族中研究最多的一種，它在脂多糖(LPS)介導(dǎo)的TLR4的途徑中有激活髓樣分化因子88(MyD88)、IL-1受體相關(guān)激酶-1(IRAK-1)、腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(TRAF-6)、NF-κB抑制酶(IκB) 或NF-κB誘導(dǎo)激酶(NIK)相關(guān)因子參與信號(hào)的傳導(dǎo)[2]，最終使NF-κB轉(zhuǎn)移至核內(nèi)啟動(dòng)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，細(xì)胞分泌前炎癥因子TNF-α、IL-1、IL-8、IL-6等。前期研究發(fā)現(xiàn)小鼠MECs細(xì)胞膜上存在TLR2和TLR4受體，TLR4是小鼠MECs上LPS介導(dǎo)細(xì)胞因子TNF-α、IL-8分泌的主要受體[3]。

近年來(lái)有大量研究報(bào)道中藥復(fù)方、中藥提取物及中藥有效成分對(duì)TLR4/NF-κB信號(hào)通路具有調(diào)節(jié)作用，并用以探討中藥對(duì)相關(guān)疾病治療的分子基礎(chǔ)[4-6]。前期研究發(fā)現(xiàn)金英黃歸湯具有良好的抗炎作用[7]，對(duì)金黃色葡萄球菌所致乳房炎家兔血清及乳汁中IL-6和TNF-α的分泌也有顯著的抑制作用[8]。在此基礎(chǔ)上，本試驗(yàn)以LPS刺激小鼠MECs，研究金英黃歸湯對(duì)TLR4/NF-κB信號(hào)通路的IRAK-1、TRAF-6、TAK-1、IκB、NIKmRNA轉(zhuǎn)錄的影響，旨在研究金英黃歸湯的抗炎機(jī)制。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)3月齡的妊娠中期昆明小白鼠，體重35 g±5 g，購(gòu)自解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(渝) 2012-0003]，在貴州大學(xué)貴州省生化工程中心SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室[動(dòng)物許可證號(hào)：SYXK(黔) 2013-0001]飼養(yǎng)。

1.2主要藥物

金英黃歸湯中金銀花、蒲公英、連翹、大黃、黃芪、當(dāng)歸、瓜萎、芙蓉花8味中藥，購(gòu)于貴陽(yáng)市同濟(jì)堂藥店(中藥GMP認(rèn)證號(hào)：黔J0190)，按文獻(xiàn)[8]制備成生藥濃度為1 g·mL-1，0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌。4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3主要試劑

DMEM/F12培養(yǎng)基、胎牛血清，Thermo scientific公司；小鼠表皮生長(zhǎng)因子，SAB公司；胰島素、霍亂毒素CT、L-谷氨酰胺、LPS，Sigma公司；Ⅰ型膠原酶和Ⅱ型膠原酶，Solarbio公司；Trypsin-EDTA，Invitrogen公司；Mouse TNF-α and IL-8 ELISA試劑盒，IBL公司。TIANScript cDNA第一鏈合成試劑盒，北京TIANGEN生物技術(shù)有限公司；動(dòng)物組織/細(xì)胞RNA提取試劑盒，2×EsTaq MasterMix，北京康為世紀(jì)生物科技有限公司；Power SYBR Green PCR Master Mix，AB公司；注射用青霉素鈉和硫酸鏈霉素，華北制藥股份有限公司；氫化可的松，天津藥業(yè)焦作有限公司；無(wú)水乙醇、氯仿、甲醛、異丙醇，均為國(guó)產(chǎn)化學(xué)純?cè)噭?/p>

1.4主要實(shí)驗(yàn)儀器

ThermoFisher 8000儲(chǔ)水型CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱，Thermo公司；MultiskanGo型全波段酶標(biāo)儀，Thermo公司；qTOWER實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR儀，德國(guó)jena公司；T100 Thermal Cycler溫度梯度PCR儀，GelDoc XR+凝膠成像系統(tǒng)，BIO-RAD公司。

1.5金英黃歸湯對(duì)LPS介導(dǎo)小鼠MECs分泌IL-8和TNF-α的影響

參照文獻(xiàn)方法[3]制備小鼠MECs，將500 μL 5×104·mL-1的細(xì)胞懸液加入24孔板中，在37 ℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，及時(shí)換液，當(dāng)MECs生長(zhǎng)融合成單層細(xì)胞時(shí)，隨機(jī)分為5組：空白對(duì)照組、LPS刺激組、金英黃歸湯低劑量組、金英黃歸湯中劑量組、金英黃歸湯高劑量組。各組分別以下列方法干預(yù)：空白對(duì)照組：只加MECs培養(yǎng)液500 μL。LPS刺激組：含有10 μg·mL-1LPS(終質(zhì)量濃度)MECs培養(yǎng)液500 μL。金英黃歸湯低劑量組：加入含有10 μg·mL-1LPS+39.1 μg·mL-1(終質(zhì)量濃度)金英黃歸湯的MECs培養(yǎng)液500 μL。金英黃歸湯中劑量組：加入含有10 μg·mL-1LPS+391 μg·mL-1(終質(zhì)量濃度)金英黃歸湯的MECs培養(yǎng)液500 μL，金英黃歸湯高劑量組：加入含有10 μg·mL-1LPS+3 910 μg·mL-1(終質(zhì)量濃度)金英黃歸湯的MECs培養(yǎng)液500 μL。在37 ℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后收集細(xì)胞。取每孔上清液，按照ELISA試劑盒說(shuō)明書方法分別測(cè)定其IL-8和TNF-α的分泌量。

1.6金英黃歸湯對(duì)LPS介導(dǎo)小鼠MECs中IRAK-1、TRAF-6、TAK-1、NIK、IκBmRNA轉(zhuǎn)錄的影響

按上述方法制備細(xì)胞及給藥，在37 ℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后收集細(xì)胞。使用動(dòng)物組織/細(xì)胞RNA提取試劑盒提取各組細(xì)胞的RNA，并檢測(cè)其純度與濃度，檢測(cè)合格后，盡快用TIANScript cDNA第一鏈合成試劑盒將提取的RNA逆轉(zhuǎn)錄，并于-80 ℃保存?zhèn)溆?。IRAK-1、TRAF-6、TAK-1、NIK、IκB基因序列從GenBank獲得，使用Primer 5.0設(shè)計(jì)引物(表1)，由上海生工合成。以GAPDH為內(nèi)參基因，采用梯度PCR技術(shù)檢測(cè)各基因的最佳退火溫度(表1)。

10 μL反應(yīng)體系中，加入5 μL SYBR Green，2 μL模板cDNA，0.8 μL引物，用無(wú)RNase的水補(bǔ)充體積至10 μL。然后進(jìn)行PCR反應(yīng)和熒光測(cè)定。熒光定量RT-PCR反應(yīng)程序：95 ℃預(yù)熱5 min；95 ℃變性30 s，退火溫度(表1)30 s，72 ℃延伸30 s，自變性開始三步為一個(gè)循環(huán)，共設(shè)40個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸2 min，使產(chǎn)物延伸完全。反應(yīng)結(jié)束后自50 ℃至95 ℃繪制熔解曲線。測(cè)定結(jié)果用2-ΔΔCt的方法計(jì)算得到各組mRNA的轉(zhuǎn)錄量。

表1　qPCR 的引物序列及退火溫度

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2結(jié)果

2.1金英黃歸湯對(duì)LPS介導(dǎo)小鼠MECs分泌IL-8和TNF-α的影響

試驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白組相比，LPS刺激組的IL-8分泌量極顯著升高(P<0.01)，金英黃歸湯低、中、高劑量組IL-8的分泌量差異不顯著(P>0.05)；與LPS刺激組比較，金英黃歸湯低、中、高劑量組IL-8的分泌量分別顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)降低，且細(xì)胞分泌IL-8的分泌量與中藥濃度呈一定的量效關(guān)系，隨著中藥濃度的增加而減少，并回到空白組水平，結(jié)果見圖1。

**.與空白組相比，P<0.01； #，##.與LPS組相比，P<0.05，P<0.01。下同**.Compared with control，P<0.01; #，##. Compared with LPS，P<0.05，P<0.01.The same as below圖1　金英黃歸湯對(duì)MECs分泌IL-8的影響Fig.1　Influence of JYT on IL-8 of MECs culture supernatants

試驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白組相比，LPS刺激組TNF-α的分泌量顯著升高(P<0.05)，金英黃歸湯低、中、高劑量組TNF-α的分泌量差異不顯著(P>0.05)；與LPS刺激組比較，金英黃歸湯低、中、高劑量組TNF-α的分泌量則分別極顯著(P<0.01)或顯著(P<0.05)降低，且也回到空白組水平，結(jié)果見圖2。

圖2　金英黃歸湯對(duì)MECs分泌TNF-α的影響Fig.2　Influence of JYT on TNF-α of MECs culture supernatants

2.2金英黃歸湯對(duì)LPS導(dǎo)致小鼠MECs中IRAK-1 mRNA轉(zhuǎn)錄的影響

與空白組相比，LPS刺激組IRAK-1 mRNA轉(zhuǎn)錄量極顯著上升(P<0.01)，金英黃歸湯低劑量組的轉(zhuǎn)錄量也顯著上升(P<0.05)，但金英黃歸湯中、高劑量組的轉(zhuǎn)錄量下降，且差異不顯著(P>0.05)；與LPS刺激組相比，金英黃歸湯各劑量組均極顯著下調(diào)IRAK-1的轉(zhuǎn)錄(P<0.01)，IRAK-1 mRNA的轉(zhuǎn)錄量與中藥濃度呈一定的量效關(guān)系，隨著中藥濃度的增加而減少，且回到空白組水平，結(jié)果見圖3。

圖3　金英黃歸湯對(duì)MECs IRAK-1 mRNA轉(zhuǎn)錄的影響Fig.3　Influence of JYT on IRAK-1 mRNA expression in MECs

2.3金英黃歸湯對(duì)LPS導(dǎo)致小鼠MECs中TRAF-6 mRNA轉(zhuǎn)錄的影響

圖4　金英黃歸湯對(duì)MECs TRAF-6 mRNA轉(zhuǎn)錄的影響Fig.4　Influence of JYT on TRAF-6 mRNA expression in MECs

與空白組相比，LPS刺激組TRAF-6 mRNA轉(zhuǎn)錄量極顯著上升(P<0.01)，金英黃歸湯低濃度組的轉(zhuǎn)錄量也極顯著上升(P<0.01)，但金英黃歸湯中、高濃度組的轉(zhuǎn)錄量差異不顯著(P>0.05)；與LPS刺激組相比，金英黃歸湯各劑量組均極顯著下調(diào)TRAF-6的轉(zhuǎn)錄(P<0.01)，TRAF-6 mRNA的轉(zhuǎn)錄量與中藥濃度呈一定的量效關(guān)系，隨著中藥濃度的增加而減少，且回到空白組水平，結(jié)果見圖4。

2.4金英黃歸湯對(duì)LPS導(dǎo)致小鼠MECs中TAK-1 mRNA轉(zhuǎn)錄的影響

與空白組相比，LPS刺激組TAK-1 mRNA轉(zhuǎn)錄量極顯著上升(P<0.01)，金英黃歸湯低劑量組的轉(zhuǎn)錄量差異不顯著(P>0.05)，但金英黃歸湯中、高濃度組的轉(zhuǎn)錄量極顯著下調(diào)(P<0.01)；與LPS刺激組相比，金英黃歸湯各劑量組均極顯著的下調(diào)TAK-1的轉(zhuǎn)錄(P<0.01)，TAK-1 mRNA的轉(zhuǎn)錄量與中藥濃度呈一定的量效關(guān)系，結(jié)果見圖5。

圖5　金英黃歸湯對(duì)MECs TAK-1 mRNA轉(zhuǎn)錄的影響Fig.5　Influence of JYT on TAK-1 mRNA expression in MECs

2.5金英黃歸湯對(duì)LPS導(dǎo)致小鼠MECs中NIKmRNA轉(zhuǎn)錄的影響

與空白組相比，LPS刺激組NIKmRNA轉(zhuǎn)錄量極顯著上升(P<0.01)，金英黃歸湯低劑量組的轉(zhuǎn)錄量也極顯著上升(P<0.01)，但金英黃歸湯中、高濃度組的轉(zhuǎn)錄量顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)下調(diào)；與LPS刺激組相比，金英黃歸湯低濃度組則極顯著上調(diào)NIK的轉(zhuǎn)錄(P<0.01)，而中、高濃度組均極顯著下調(diào)NIK的轉(zhuǎn)錄(P<0.01)。NIKmRNA的轉(zhuǎn)錄量與中藥濃度呈一定的量效關(guān)系，結(jié)果見圖6。

圖6　金英黃歸湯對(duì)MECs NIK mRNA轉(zhuǎn)錄的影響Fig.6　Influence of JYT on NIK mRNA expression in MECs

2.6金英黃歸湯對(duì)LPS導(dǎo)致小鼠MECs中IκBmRNA轉(zhuǎn)錄的影響

與空白組相比，LPS刺激組、金英黃歸湯各濃度組IκBmRNA轉(zhuǎn)錄呈極顯著下調(diào)(P<0.01)，與LPS刺激組相比，金英黃歸湯各濃度組均顯著或極顯著的下調(diào)IκB的轉(zhuǎn)錄(P<0.05，P<0.01)。結(jié)果詳見圖7。

3討論

MECs在病原微生物侵入乳腺時(shí)，能分泌細(xì)胞調(diào)節(jié)因子，如IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α[9-10]，這些活性成分對(duì)乳腺炎的發(fā)生與病程發(fā)展起重要作用，它們能趨化中性粒細(xì)胞進(jìn)入乳腺感染區(qū)，抵抗病原菌的感染[11]，這對(duì)疾病的控制是有利的，但細(xì)胞受致炎因子刺激，機(jī)體過(guò)度活化后影響了其正常的功能，從這角度來(lái)說(shuō)對(duì)機(jī)體是不利的，所以減少致炎因子所致細(xì)胞因子分泌更具有科學(xué)意義。本試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了LPS可以導(dǎo)致小鼠MECs分泌IL-8和TNF-α[3]，更重要的是發(fā)現(xiàn)適宜濃度的金英黃歸湯可抑制LPS所致小鼠MECs分泌IL-8和/或TNF-α，這為金英黃歸湯對(duì)抗LPS的生物活性提供了數(shù)據(jù)，為進(jìn)一步研究金英黃歸湯在LPS導(dǎo)致信號(hào)通路的研究打下基礎(chǔ)。

LPS是TLR4的天然配體，在免疫細(xì)胞上的TLR4接受LPS刺激后，將信號(hào)轉(zhuǎn)到細(xì)胞內(nèi)，可激活MyD88依賴和非依賴的TLR4信號(hào)通路[2]，MyD88依賴途徑是MyD88和MyD88樣接頭蛋白(MAL)聚集到TLR4形成受體復(fù)合體。IRAK-1和IRAK-4與該受體復(fù)合物結(jié)合后，引起IRAK-1的磷酸化，使其從受體復(fù)合體上解離，并結(jié)合活化TAK-1結(jié)合蛋白1(TAB1)和TAB2以及TRAF-6并使其活化?；罨腡RAF-6激活NF-κB轉(zhuǎn)移至核內(nèi)啟動(dòng)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄最終細(xì)胞分泌前炎癥因子TNF-α、IL-1、IL-8、IL-6等。前期研究發(fā)現(xiàn)金英黃歸湯能降低LPS刺激小鼠MECs后TLR4、MyD88的mRNA的轉(zhuǎn)錄[12]。為了進(jìn)一步研究金英黃歸湯對(duì)TLR4信號(hào)通路中從MyD88之后起至NF-κB段相關(guān)因子的影響，設(shè)計(jì)了本試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果顯示，LPS刺激小鼠MECs后，IRAK-1、TRAF-6、TAK-1、NIK都極顯著的升高，IκB極顯著的降低，說(shuō)明小鼠MECs的TLR4信號(hào)傳導(dǎo)與免疫細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)途徑是一致的，這為TLR4信號(hào)通路的研究增加了MECs的研究數(shù)據(jù)。結(jié)果還顯示，金英黃歸湯能降低LPS刺激小鼠MECs后IRAK-1、TRAF-6、TAK-1、NIK的mRNA的轉(zhuǎn)錄，這說(shuō)明金英黃歸湯抑制LPS所致小鼠MECs分泌IL-8和/或TNF-α的機(jī)制之一可能是抑制TLR4信號(hào)通路中IRAK-1、TRAF-6、TAK-1、NIK的轉(zhuǎn)錄。

NF-κB激活的經(jīng)典途徑是抑制IκB而實(shí)現(xiàn)，NF-κB激活的非經(jīng)典途徑通過(guò)NIK實(shí)現(xiàn)的[13]。試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了LPS能導(dǎo)致小鼠MECs的IκB的mRNA轉(zhuǎn)錄極顯著下降，NIK的mRNA轉(zhuǎn)錄極顯著上升，這可推斷LPS是通過(guò)IκB途徑和或NIK途徑活化NF-κB。試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)金英黃歸湯能顯著促進(jìn)LPS介導(dǎo)小鼠MECs的IκB的mRNA轉(zhuǎn)錄下降，極顯著抑制的NIKmRNA轉(zhuǎn)錄上升，我們推測(cè)金英黃歸湯可能是從NIK途徑而不是從IκB途徑減少NF-κB活化，最終降低細(xì)胞分泌細(xì)胞因子。NF-κB是核轉(zhuǎn)錄因子，由于影響其活性及活化有多條途徑，金英黃歸湯對(duì)NF-κB活性及活化如何有待進(jìn)一步深入研究。

4結(jié)論

MECs在病原微生物侵入乳腺時(shí)，能分泌細(xì)胞調(diào)節(jié)因子，如IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α，這對(duì)乳腺炎的發(fā)生與病程發(fā)展起重要作用，中藥復(fù)方金英黃歸湯可抑制LPS所致小鼠MECs分泌IL-8和/或TNF-α，其機(jī)制是抑制LPS介導(dǎo)的TLR4信號(hào)通路中IRAK-1、TRAF-6、TAK-1、NIK的mRNA轉(zhuǎn)錄。并可能從NIK途徑而不是從IκB途徑減少NF-κB活化，最終降低細(xì)胞分泌細(xì)胞因子。

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(編輯白永平)

Effects of Jin-Ying-Tang on Correlated Molecules of Toll-like Receptor 4 Signaling of LPS-Induced Mouse Mammary Epithelial Cellsinvitro

LI Xin1，2，LI Zhong-gai1，2，ZHANG Xiao-yi1，2，ZHOU Song-gui1，3，WANG Yu-kun1，2，F(xiàn)ENG Jiang1，2，YI Qiong1，WANG Lu1*

(1.BiochemistryEngineeringCenterofGuizhouProvince，GuizhouUniversity，Guiyang550025，China；2.CollegeofAnimalScience，GuizhouUniversity，Guiyang550025，China；3.CollegeofPharmacy，GuizhouUniversity，Guiyang550025，China)

Abstract:The study was conducted to investigate the effects of Jin-Ying-Tang (JYT) on correlated molecules of TLR4/NF-κB signaling of LPS-stimulated mouse mammary epithelial cells(MECs)invitroand explore its underlying molecular mechanisms.ELISA was performed to detect changes of the content of IL-8 and TNF-α in the culture supernatants.The mRNA transcription of TLR4-NF-κB signaling molecules such as IL-1 receptor-associated kinase-1(IRAK-1)，tumour necrosis factor receptor associated factor 6(TRAF-6)，Transforming Growth Factor activated kinase 1(TAK-1)，NF-κB inducing kinase(NIK)，Inhibitor of κB(IκB) were determined by qRT-PCR.The results showed that JYT could significantly decrease the expression of IL-8 and TNF-α in LPS-stimulated MECs(P<0.05，P<0.01)；what’s more，JYT could down-regulate the expression ofIRAK-1，TRAF-6，TAK-1，IκB，NIKmRNA activated by LPS(P<0.05，P<0.01).It is concluded that JYT attenuates LPS-induced inflammatory response in MECs by inhibiting the activitation of IRAK-1/TRAF-6/TAK-1/NIK pathway，but not of IRAK-1/TRAF-6/TAK-1/IκB pathway.

Key words:Jin-Ying-Tang；LPS；mammary epithelial cells；TLR4/NF-κB signaling；mRNA expression

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2016.03.026

收稿日期：2015-08-12

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31260618；31470128)；北京農(nóng)學(xué)院獸醫(yī)學(xué)(中醫(yī)藥)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放課題

作者簡(jiǎn)介：李欣(1991-)，男，吉林通化人，碩士生，主要從事中藥藥理學(xué)研究，E-mail：690079602@qq.com *通信作者：王魯(1970-)，教授，博士，主要從事中獸醫(yī)學(xué)及中藥藥理學(xué)研究，E-mail：wanglu7007@163.com

中圖分類號(hào)：S853.9

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào):0366-6964(2016)03-0609-06