1,25二羥維生素D3聯(lián)合脾氨肽口服凍干粉對(duì)哮喘CD4+CD25+T細(xì)胞、TGF-β1及VEGF影響研究

高志剛，袁永紅，詹建華，潘開(kāi)宇

(杭州市蕭山區(qū)第一人民醫(yī)院 兒科，浙江 杭州 311200)

1,25二羥維生素D3聯(lián)合脾氨肽口服凍干粉對(duì)哮喘CD4+CD25+T細(xì)胞、TGF-β1及VEGF影響研究

高志剛Δ，袁永紅，詹建華，潘開(kāi)宇

(杭州市蕭山區(qū)第一人民醫(yī)院 兒科，浙江 杭州 311200)

目的 探討1,25-二羥維生素D3聯(lián)合脾氨肽口服凍干粉對(duì)哮喘患者CD4+CD25+T細(xì)胞、TGF-β1及VEGF的影響。方法 收集56例支氣管哮喘患者，隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組各28例，分別給予相應(yīng)的藥物治療，治療結(jié)束后，對(duì)所有患者的靜脈血CD4+CD25+T細(xì)胞水平、血清TGF-β1、VEGF水平、ACT評(píng)分及肺功能情況進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果 治療后，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組患者靜脈血CD4+CD25+T細(xì)胞水平較高(P<0.05)；血清TGF-β1水平較高(P<0.05)；血清VEGF水平較低(P<0.05)；FEV1%、FEV1/ FVC值較高(P<0.05)；ACT評(píng)分較高(P<0.05)。結(jié)論 1,25-二羥維生素D3聯(lián)合脾氨肽口服凍干粉能夠顯著升高支氣管哮喘患者靜脈血CD4+CD25+T細(xì)胞水平及血清TGF-β1，降低血清VEGF水平，提高免疫力，改善肺功能和治療效果。

1,25二羥維生素D3；脾氨肽口服凍干粉；哮喘；CD4+CD25+T細(xì)胞；TGF-β1；VEGF

全世界約有3億哮喘患者[1]，發(fā)病率以每10年20%～50%的比率增長(zhǎng)，我國(guó)約有1000萬(wàn)～3000萬(wàn)哮喘患者[2]，患病率為0.31%～3.38%，并且有不斷增加的趨勢(shì)。現(xiàn)有對(duì)哮喘的治療臨床多用布地奈德吸入療法，雖然糖皮質(zhì)激素的作用比較明顯，但是其作用是非特異性的，長(zhǎng)期使用可以引起機(jī)體一系列的代謝及內(nèi)分泌的紊亂。隨著現(xiàn)代分子免疫學(xué)及遺傳學(xué)方面研究的進(jìn)展，人們認(rèn)為免疫因素在哮喘的發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮重要作[3]，治療上加用免疫調(diào)節(jié)相關(guān)藥物可以取得更好的療效。研究顯示，脾氨肽佐治哮喘能更有效地控制哮喘癥狀[4]。本研究探討1，25-(OH)2-VitD3聯(lián)合脾氨肽口服凍干粉對(duì)哮喘患兒的影響。

1 資料與方法

1.1.1 臨床資料：收集杭州市蕭山區(qū)第一人民醫(yī)院兒科2013年12月～2015年7月的確診為支氣管哮喘的患兒56例。將所有患者按照隨機(jī)數(shù)字表分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組各28例患者，實(shí)驗(yàn)組男性13例，女性15例，年齡5～10歲，平均年齡(7.14±0.91)歲，病程0.5～4.1年，平均病程(3.31±0.80)年；對(duì)照組男性14例，女性14例，年齡5～10歲，平均年齡(7.12±0.99)歲，病程0.6～4.2年，平均病程(3.20±0.78)年。2組患兒的年齡分布、性別組成、病程等一般臨床資料方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《兒童支氣管哮喘的診斷及治療》[5]的5～10歲兒童，存在咳嗽、喘息、呼吸困難等臨床表現(xiàn)，并經(jīng)X線等影像學(xué)檢查排除其他肺部感染及占位性病變。本研究獲得患者知情同意，且得到本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①近3個(gè)月內(nèi)合并感染性疾病，應(yīng)用任何類(lèi)型或劑量的抗生素、糖皮質(zhì)激素等治療的患兒；②合并先天性免疫功能缺陷或近期服用影響免疫功能的藥物的患兒；③存在心血管系統(tǒng)疾病或嚴(yán)重肝腎功能不全等基礎(chǔ)疾病的患兒。

1.2 方法

1.2.1 治療方法：所有患者均嚴(yán)格按照全球哮喘防治創(chuàng)議(GINA方案)治療。對(duì)照組患者給予1，25-二羥維生素D3 800 IU/d口服。實(shí)驗(yàn)組患者在對(duì)照組基礎(chǔ)上給予脾氨肽口服凍干粉(商品名：復(fù)可托，浙江豐安生物制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H1097021)4 mg，1次/天睡前涼開(kāi)水沖服。1個(gè)月為1個(gè)周期，2組患者均治療2個(gè)周期。

1.2.2 血液指標(biāo)檢測(cè)：酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測(cè)血清轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)水平，試劑盒購(gòu)買(mǎi)于羅氏診斷產(chǎn)品上海有限公司；雙抗體蛋白夾心法檢測(cè)CD4+CD25+T細(xì)胞水平，試劑盒購(gòu)買(mǎi)于羅氏診斷產(chǎn)品上海有限公司。DG5033A全自動(dòng)酶標(biāo)儀(華東電子)。

1.2.3 肺功能及ACT評(píng)分檢測(cè)：采用HI-101肺功能檢測(cè)儀(北京裕天醫(yī)療技術(shù))，分別于治療前后對(duì)患者第1秒用力呼氣容積占預(yù)計(jì)值百分比( FEV1% )以及FEV1/ FVC值；根據(jù)哮喘控制測(cè)試(ACT評(píng)分)表[6]，在治療前后對(duì)患者進(jìn)行評(píng)分，來(lái)評(píng)估對(duì)哮喘病情的控制情況：未控制：≤19分，部分控制：20～24分，控制良好：≥25分。

2 結(jié)果

2.1 治療前后2組患者血CD4+CD25+T細(xì)胞及TGF-β1水平比較 治療后2組患者ACT、血CD4+CD25+T細(xì)胞水平及TGF-β1水平均明顯改善，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組患者ACT、血CD4+CD25+T細(xì)胞水平及TGF-β1水平較高(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 治療前后2組患者ACT 、CD4+CD25+T、TGF-β1水平比較

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對(duì)照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.2 治療前后2組患者血清VEGF水平比較 治療后2組患者的血清VEGF水平均明顯下降，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組患者血清VEGF水平明顯降低(P<0.05)。見(jiàn)表2。

組別 例數(shù)時(shí)間VEGF(pg/mL) 對(duì)照組28治療前261 54±30 95治療后175 34±20 17?實(shí)驗(yàn)組28治療前253 44±32 54治療后102 43±12 33?#

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對(duì)照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.3 治療前后2組患者的FEV1%、FEV1/ FVC值比較 治療后2組患者的肺功能均明顯改善，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組患者的FEV1%、FEV1/ FVC值明顯升高(P<0.05)。見(jiàn)表3。

組別 例數(shù)時(shí)間FEV1%FEV1/FVC(%)對(duì)照組28治療前64 71±7 2952 84±6 32治療后77 54±11 02?65 56±8 36?實(shí)驗(yàn)組28治療前64 36±7 3752 58±6 85治療后89 74±10 28?#72 15±9 47?#

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對(duì)照組治療后比較，compared with control group post-treatment

3 討論

支氣管哮喘的發(fā)生與遺傳因素、性別、肥胖、種族、變應(yīng)原暴露、呼吸道感染、空氣污染、社會(huì)環(huán)境等因素有關(guān)，其中環(huán)境因素是哮喘發(fā)生發(fā)展的重要原因[7]，其發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，免疫相關(guān)機(jī)制是目前研究的熱點(diǎn)。研究認(rèn)為[8]，哮喘患者在受到過(guò)敏原刺激后，B7和CD28細(xì)胞結(jié)合，激活T淋巴細(xì)胞細(xì)胞，產(chǎn)生氣道免疫炎癥反應(yīng)；外周血中存在組成性的不依賴(lài)抗原刺激的Th1異常表達(dá)，Th1/Th2合成分泌失衡，機(jī)體免疫功能受損，刺激炎癥相關(guān)細(xì)胞因子的產(chǎn)生，是哮喘發(fā)病的基礎(chǔ)；氣道炎癥反應(yīng)反復(fù)、慢性發(fā)作，刺激細(xì)胞外基質(zhì)聚集、新生血管生成、平滑肌細(xì)胞增殖，并最終形成氣道重塑，導(dǎo)致氣道阻塞和非特異性氣道高反應(yīng)。脾氨肽口服凍干粉是一種免疫體調(diào)節(jié)劑，含有多種免疫調(diào)節(jié)因子和氨基酸，用于免疫缺陷、免疫功能低下、自身免疫功能紊亂等疾病的治療，已有研究顯示[9]，對(duì)小兒哮喘具有較好的療效，并能調(diào)節(jié)患兒免疫功能平衡,其能夠通過(guò)免疫信息傳遞、淋巴細(xì)胞活化及受體調(diào)節(jié)等3個(gè)環(huán)節(jié)來(lái)發(fā)揮作用；通過(guò)加強(qiáng)T淋巴細(xì)胞的殺傷效應(yīng)、協(xié)同效應(yīng)、增強(qiáng)效應(yīng)和復(fù)制效應(yīng)，來(lái)提高機(jī)體的免疫功能，從而發(fā)揮排斥抗原性改變的自身細(xì)胞及抗細(xì)菌、霉菌和病毒性細(xì)胞內(nèi)感染的作用。1，25-(OH)2-VitD3是維生素D3的活性形式，維生素D具有免疫調(diào)節(jié)作用，能夠降低細(xì)胞通透性，減少過(guò)敏物質(zhì)透過(guò)損傷氣道上皮細(xì)胞，對(duì)哮喘患者氣道起到保護(hù)作用。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組患者靜脈血CD4+CD25+T細(xì)胞水平及TGF-β1與對(duì)照組比較明顯升高(P<0.05)，證實(shí)了1，25-(OH)2-VitD3聯(lián)合脾氨肽口服凍干粉能夠改善患者的免疫功能。CD4+CD25+T細(xì)胞分為效應(yīng)性T細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞兩種，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是具有免疫調(diào)節(jié)及免疫耐受介導(dǎo)作用的調(diào)節(jié)細(xì)胞，由胸腺合成分泌，具有免疫抑制和免疫無(wú)能性功能。CD4+CD25+T調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與哮喘的發(fā)生關(guān)系密切。TGF-β1具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的作用，能夠促進(jìn)損傷氣道的修復(fù)，抑制炎癥細(xì)胞表達(dá)，減輕氣道炎癥，還對(duì)Th2具有促進(jìn)和抑制雙重作用，具有免疫調(diào)節(jié)功能。

本研究結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組患者血清VEGF水平與對(duì)照組比較明顯降低(P<0.05)，表明1，25-(OH)2-VitD3聯(lián)合脾氨肽口服凍干粉能夠防止哮喘患者的氣道重構(gòu)。氣道重構(gòu)是指哮喘患者的氣道、平滑肌不可逆性的增厚，是氣道功能減退的基礎(chǔ)。VEGF屬于血小板生長(zhǎng)因子家族，能夠促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)，促進(jìn)新生血管形成，對(duì)上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)也有促進(jìn)作用。在支氣管哮喘發(fā)生過(guò)程中，VEGF能夠刺激嗜酸性粒細(xì)胞活化、趨化以及新生血管形成來(lái)增強(qiáng)氣道炎癥反應(yīng)，同時(shí)使呼吸道粘膜血管化、通透性增加，加速血管重構(gòu)過(guò)程。FEV1%降低與呼氣性的呼吸困難有關(guān)，是反映兒童支氣管哮喘嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)[11]，實(shí)驗(yàn)組患者的FEV1%、FEV1/ FVC是氣道阻塞的肺量測(cè)定，比值越小，提示肺功能越差。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較明顯升高(P<0.05)，表明1，25-(OH)2-VitD3聯(lián)合脾氨肽口服凍干粉能夠提高哮喘患者的肺功能。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)56例支氣管哮喘患者進(jìn)行分析，1，25-二羥維生素D3聯(lián)合脾氨肽口服凍干粉能夠顯著升高支氣管哮喘患者靜脈血CD4+CD25+T細(xì)胞水平及血清TGF-β1，降低血清VEGF水平，提高免疫力。

[1] 王星， 蘇長(zhǎng)海， 蘇伊新. 影響慢性阻塞性肺疾病和哮喘患者吸入劑使用因素的研究[J]. 中國(guó)醫(yī)院用藥評(píng)價(jià)與分析， 2015，15(2)：275-277.

[2] 鄭鳳霞. 吸入型糖皮質(zhì)激素在支氣管哮喘中的臨床應(yīng)用及研究近況[J]. 中華肺部疾病雜志：電子版， 2013，4(6)：82-84.

[3] 王學(xué)亮， 周傳麟， 卞明菊. 金水寶膠囊對(duì)支氣管哮喘患者幾種免疫細(xì)胞因子的影響[J]. 中華肺部疾病雜志 (電子版)， 2015， 8(2)： 59-60.

[4] 畢文淼， 何志紅， 金穎， 等. 脾氨肽佐治支氣管哮喘對(duì)白細(xì)胞介素及肺功能的影響[J]. 臨床誤診誤治， 2015， 28(7)： 106-108.

[5] 陳育智. 兒童支氣管哮喘的診斷及治療[M]. 人民衛(wèi)生出版社， 2010.

[6] 金玲玲， 林慧， 戴元榮. 呼氣峰流量日變異率及哮喘控制測(cè)試評(píng)分在哮喘病情監(jiān)測(cè)中的作用[J]. 溫州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)， 2015， 45(8)： 579-582.

[7] 招軒娜， 吳斌. 支氣管哮喘發(fā)病危險(xiǎn)因素的研究進(jìn)展[J]. 廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)， 2014， 32(5)： 703-705.

[8] 施筠， 王鳳鳴， 駱亞麗， 等. 塵螨變應(yīng)性哮喘患兒外周血輔助性 T 淋巴細(xì)胞和調(diào)節(jié)性 T 淋巴細(xì)胞的表達(dá)及其臨床意義[J]. 中華實(shí)用兒科臨床雜志， 2013， 28(21)： 1619-1621.

[9] 梁美靜.脾氨肽口服凍干粉治療小兒支氣管哮喘的療效及對(duì)患兒免疫功能的影響觀察[J].臨床合理用藥雜志，2013，6(2)：70-71.

[10] 郭瑜修， 覃大烈， 李俊. 血清白細(xì)胞介素-33 與兒童支氣管哮喘的相關(guān)性分析[J]. 浙江臨床醫(yī)學(xué)， 2015， 17(9)： 1564-1565.

(編校：譚玲)

Effect of 1,25-(OH)2-VitD3 combined with spleen ammonia peptide oral freeze dry powder on CD4+CD25+T cells, TGF-β1 and VEGF in patients with asthma

GAO Zhi-gangΔ, YUAN Yong-hong, ZHAN Jian-hua, PAN Kai-yu

(Department of Pediatrics, The First People’s Hospital of Xiaoshan District of Hangzhou City, Hangzhou 311200, China)

ObjectiveTo analysis the effect of 1,25-(OH)2-VitD3 combined with spleen ammonia peptide oral freeze dry powder on CD4+CD25+T cells, TGF- β1 and VEGF in patients with asthma.Methods56 patients who were diagnosed with bronchial asthma were randomly divided into experiment group and control group, 28 cases in each group. Patients were given the appropriate drug treatment, after the treatment,the venous blood level of CD4+CD25+T cells, the serum levels of TGF-β1 and VEGF, the ACT score and pulmonary function were detected in all patients.ResultsAfter treatment, compared with control group,the venous blood level of CD4+CD25+T cells was higher in the experiment group(P<0.05);the serum TGF-β1 level was higher(P<0.05);the serum VEGF level was lower(P<0.05); the FEV1% and FEV1/ FVC were higher(P<0.05); the ACT score was higher(P<0.05).ConclusionThe 1,25-(OH)2-VitD3 combined with spleen ammonia peptide oral freeze dry powder can improve significantly the venous blood level of CD4+CD25+T cells and the serum TGF-β1 level, reduce serum VEGF level in patients with bronchial asthma, improve immunity, ameliorate lung function and treatment effect.

1,25-(OH)2-VitD3; spleen ammonia peptide oral freeze dry powder; asthma; CD4+CD25Tcells; TGF- β1; VEGF

高志剛，通信作者，男，本科，主治醫(yī)生，研究方向：小兒呼吸，E-mail：gaozhiganghz15@163.com。

R914

A

1005-1678(2016)02-0094-03