鏈脲佐菌素誘導糖尿病大鼠尿AQP-2的改變及機制

胡曼麗杜 娟（ 長春醫(yī)學高等專科學校，吉林 長春 3003； 吉林省人民醫(yī)院內分泌科，吉林 長春 300）

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鏈脲佐菌素誘導糖尿病大鼠尿AQP-2的改變及機制

胡曼麗1杜 娟2
（1 長春醫(yī)學高等?？茖W校，吉林 長春 130031；2 吉林省人民醫(yī)院內分泌科，吉林 長春 130021）

【摘要】目的 檢測鏈脲佐菌素（STZ）誘導的糖尿?。―M）大鼠尿液中水通道蛋白-2（AQP-2）的變化。方法 將大鼠分為兩組，對照組（Con組）8只大鼠以及糖尿病組（DM組）10只大鼠，兩組均用STZ腹腔注射誘導成DM模型。在成模12周，用電子顯微鏡觀察腎臟形態(tài)變化，用免疫組織化學方法檢測DM大鼠腎臟髓質集合管AQP-2的表達，用ELISA方法檢測尿AQP-2。結果 ①12周DM組血糖較之前顯著提升（P＜0.01），尿量較Con組偏高（P＜0.01），體質量方面較Con組明顯偏低（P＜0.01）。②在電鏡下，腎臟髓質集合管細胞結構變化明顯。③糖尿病組大鼠腎臟髓質集合管AQP-2蛋白的表達增加。④DM組尿AQP-2排泄增加。結論 DM大鼠尿液AQP-2蛋白的表達增加，同時腎臟髓質AQP-2顯著增加。

【關鍵詞】鏈脲佐菌素（STZ）；糖尿病腎病

目前，糖尿病（DM）呈現(xiàn)出高發(fā)態(tài)勢，且病死率極高，嚴重危害患者正常生活。糖尿病腎?。―N）是造成患者死亡的主要原因，也是常見并發(fā)癥之一，嚴重時會導致患者出現(xiàn)繼發(fā)性腎臟病。糖尿病腎病具有起病隱匿、易被忽視等特點，給患者早期診斷帶來嚴重困擾。據(jù)相關資料顯示，水通道蛋白-2僅能在腎臟髓質中表達，同時受到加壓素（VP）調節(jié)［1］。本文旨在探討AQP-2在DN早期改變及其衰竭臨床治療中，地高辛臨床效果遠沒有丹參川芎嗪注射液療效好。在臨床中聯(lián)合丹參川芎嗪注射液使用可對心力衰竭臨床癥狀進行有力控制，可逐漸對慢性充血性心力衰竭進行改善，增強患者生存質量。

1.4 慢性肺心病臨床治療：慢性肺心病因長期處于二氧化碳富足、缺氧的情況中，造成紅細胞數(shù)量逐漸增加，免疫物質沉著，血管內皮細胞傷害、血小板及紅細胞聚集，最后造成血液流動活性減弱，與中醫(yī)“血瘀滯不行”理念中相同［2］。因此針對慢性肺心病患者動脈栓塞及滯血癥進行治療有重要含義。在臨床中對慢性肺心病患者使用丹參川芎嗪注射液，可有效改善患者動脈血氣，對心肌功能有良好的治療效果，而且不良反應相對偏少。

2 聯(lián)合丹參川芎嗪注射液用藥

2.1 耳源性眩暈臨床聯(lián)合654-2藥物治療：654-2聯(lián)合丹參川芎嗪注射液對耳源性眩暈進行治療，可顯著提升其痊愈率，進一步將療效時間縮短，治療禁忌為前列腺增生、心跳過速及青光眼等，患者如出現(xiàn)此類癥狀應禁用654-2聯(lián)合丹參川芎嗪注射液臨床療法。

2.2 老年慢性胃炎臨床聯(lián)合埃索美拉唑治療：在老年慢性胃炎臨床治療中埃索美拉唑聯(lián)合丹參川芎嗪注射液療法相比單純運用埃索美拉唑更具療效，因此兩種藥物聯(lián)合使用可顯著增加治療老年慢性胃炎的療效成功率，臨床應用效果值得認同，中醫(yī)藥材里的活血化瘀成分可為老年慢性胃炎的治療提供療效更加明顯的治療方法。

2.3 冠心病心絞痛臨床聯(lián)合奧扎格雷鈉治療：在冠心病心絞痛臨床治療中應用奧扎格雷鈉聯(lián)合丹參川芎嗪注射液療法，可將心肌梗死區(qū)域有效縮小及緩解患者病情，并且會起到保護心肌缺血防止再次損傷的效果，從多個方面對血液流動理念進行完善。

2.4 糖尿病四周神經病變臨床聯(lián)合甲鈷胺治療：在糖尿病四周神經病變臨床中應用甲鈷胺聯(lián)合丹參川芎嗪注射液治療法4周之后，患者疼痛感及肢體麻木等癥狀得到顯著改善，在臨床實踐中有92.4%的總有效率，明顯比單純使用甲鈷胺療效高，數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05）。在對神經進行生理檢查時，應用甲鈷胺聯(lián)合丹參川芎嗪注射液療法效果比單純使用甲鈷胺療效高。

2.5 重度一氧化碳中毒遲發(fā)型腦病臨床聯(lián)合大黃治療：在重度一氧化碳中毒遲發(fā)型腦病臨床治療中，大黃聯(lián)合丹參川芎嗪注射液可有效減少因一氧化碳中毒產生的遲發(fā)型腦病，并且能對遲發(fā)型腦病臨床癥狀進行明顯改善。

3 不良反應

丹參川芎嗪注射液屬于中醫(yī)臨床藥劑，其產生不良反應主要和患者機體差別、不同藥材產地、生產工藝、藥劑成分復雜等因素有關［3］，因此在臨床上應用丹參川芎嗪注射液，藥劑師應著重注意如下幾方面。丹參川芎嗪注射液不良反應通常為產生皮疹。偶爾會造成休克及低血糖，多發(fā)于老年患者，通常對皮膚及神經系統(tǒng)造成影響，之后為心血管系統(tǒng)、全身及局部危害、消化系統(tǒng)等，在靜脈滴注時產生的不良反應概率最高；而且部分患者會出現(xiàn)頭暈、氣短、血壓增加、心悸等現(xiàn)象；因此在臨床中要加強對藥物的監(jiān)管，對患者肝臟功能足夠了解之后，再對其用藥，并對藥物滴速進行控制，使患者有效緩解不良反應。

綜上所述，在腦血管疾病臨床治療中丹參川芎嗪注射液有優(yōu)越性的臨床療效，不良反應小，藥源廣泛，且可按照川芎藥物構造簡單極易改造的優(yōu)勢，研發(fā)出療效顯著、針對性高的丹參川芎嗪注射液，為現(xiàn)代中醫(yī)臨床治療做出卓越貢獻。當前，丹參川芎嗪注射液在中醫(yī)臨床中的應用十分廣泛，并取得了中醫(yī)醫(yī)師普遍認可。但是作為中醫(yī)注射藥劑，丹參川芎嗪注射液還需在臨床中得到更深層次研究。

參考文獻

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表1 DM組與Con組大鼠12周理化指標的比較

1 實驗方法

1.1 DM大鼠模型的建立：選擇18只健康Wistar大鼠，體質量最輕160 g，最重200 g。對其進行適應性飼養(yǎng)1周后，分為正常對照組以及實驗組，其中，對照組大鼠共8只，實驗組大鼠共10只。對DM組大鼠采取禁食不禁水措施，時間為16 h，用枸櫞酸鈉稀釋STZ，并且進行單次腹腔注射（以45 mg/kg體質量為標準），與此同時，Con組大鼠進行腹腔注射0.1 mol/L檸檬酸鈉緩沖液（注射要求等體積）。3 d后，對大鼠空腹血糖和尿糖含量進行相關檢測，造模成功的標準如下：大鼠體內血糖不低于16.67 mmol/L，同時尿糖（3+）以上。

1.2 留取標本：在實驗結束時，將兩組大鼠均置于代謝籠中，同時禁食24 h，允許大鼠正常自由飲水，最后收集大鼠在24 h內的所有尿液，并取5 mL尿液用來檢測AQP-2。乙醚吸入麻醉生效后，取大鼠腎臟，用冰袋進行短期冷卻，待切除大鼠腎臟髓質后，將其快速放入戊二醛中保存，用來作為電鏡標本，與此同時，將大鼠腎臟的其他部位均放入中性福爾馬林中保存，用來作為光鏡標本。

1.3 觀察指標的測定：①樂康全血糖儀測定大鼠血糖含量；②尿糖試紙半定量測定大鼠尿糖含量；③尿AQP-2濃度用ELISA法測定；④在透射電鏡下觀察常規(guī)制備電鏡標本；⑤免疫組化染色均按常規(guī)步驟進行，DAB顯色，試劑盒（鄭州安賽生物科技有限公司）。

1.4 統(tǒng)計學處理：用SPSS18.0進行統(tǒng)計分析，各組數(shù)據(jù)采用（x-±s）表示，組間數(shù)據(jù)比較采用t檢驗，P＜0.05具有統(tǒng)計學差異。

2 結 果

2.1 DM組與Con組大鼠12周理化指標的比較：12周DM組血糖較之前顯著提升（P＜0.01），尿量較Con組偏高（P＜0.01），體質量方面較Con組明顯偏低（P＜0.01），DM組尿AQP-2高于Con組（P＜0.05），見表1。

2.2 電鏡下大鼠腎臟髓質觀察情況：對照組大鼠腎臟集合管是正常上皮細胞結構。糖尿病組大鼠腎臟集合管暗細胞較正常之前出現(xiàn)顯著變化，細胞核出現(xiàn)固縮現(xiàn)象，同時胞質內溶酶體含量較之前顯著增加，除此之外，頂小管與頂小泡也較之前有所增多，線粒體也呈現(xiàn)出固縮狀態(tài)，有極少數(shù)細胞頂部胞膜還出現(xiàn)局部破損現(xiàn)象。集合管亮細胞細胞核呈現(xiàn)不規(guī)則排列，核內異染色質凝聚在其邊緣，細胞器有所減少，還有大量糖原出現(xiàn)在胞質中。

2.3 免疫組化染色情況：對照組大鼠腎臟髓質近皮質端，有被染成棕黃色的集合管管腔內壁細胞，細胞膜和細胞質是其著色最多的結構。

3 討 論

本文選用STZ腹腔注射誘導成DM模型。STZ在大鼠體內經過部分反應會產生如下物質：過氧化物、羥基等，此類物質會給動物胰島B細胞降血糖功能帶來一定損害，導致動物血糖升高，從而造成糖尿病，不利于健康生長。本文最終研究數(shù)據(jù)顯示，DM組大鼠體內血糖含量均不低于16.67 mmol/L，且尿糖（3+），除此之外，大鼠體內尿量較之前也明顯增加，不僅如此，大鼠體質量較之前也顯著降低，這些指標變化情形完全與DM相關臨床特點相一致。

本文主要用透射電子顯微鏡對DM大鼠腎臟髓質結構進行一系列觀察，最終結果表明，糖尿病組大鼠腎臟集合管暗細胞較正常之前出現(xiàn)顯著變化，細胞核出現(xiàn)固縮現(xiàn)象，同時胞質內溶酶體含量較之前顯著增加，除此之外，頂小管與頂小泡也較之前有所增多，線粒體也呈現(xiàn)出固縮狀態(tài)，有極少數(shù)細胞頂部胞膜還出現(xiàn)局部破損現(xiàn)象。集合管亮細胞細胞核呈現(xiàn)不規(guī)則排列，核內異染色質凝聚在其邊緣，細胞器有所減少，還有大量糖原出現(xiàn)在胞質中。在遠端小管管腔內的脫落細胞實質上就是蛋白質（大鼠尿液中檢測到的），該結果表明，DM大鼠在12周時，從微觀形態(tài)方面表明腎臟已出現(xiàn)改變。

免疫組織化學染色的相關結果表明，AQP-2可以在大鼠腎臟集合管內有效表達，與已往報道一致［2］。大鼠腎臟AQP-2沿集合管內壁上皮細胞分布的棕黃色顆粒在顏色及厚度方面，與對照組相比，糖尿病組顏色加深且濃厚，具有更廣泛的分布，說明DM大鼠腎臟AQP-2在蛋白質水平上表達增強。據(jù)相關研究表明，DM大鼠腎臟集合管亮細胞中AQP-2表達有所增加，而且會向管腔膜移動［3-6］。

當糖尿病組大鼠腎臟髓質AQP-2出現(xiàn)過高表達時，會有少數(shù)AQP-2蛋白隨大鼠尿液排出體外［7］，而本研究也顯示，DM大鼠尿AQP-2明顯高于Con組。

綜上所述，水通道蛋白-2僅能在腎臟髓質中表達，同時也會受到加壓素（VP）調節(jié)。本文主要用STZ腹腔注射誘導成DM模型，在成模12周用電子顯微鏡觀察了腎臟組織結構，用免疫組織化學方法，檢測了大鼠腎臟髓質集合管AQP-2的表達，檢測到AQP-2在尿中排泄增加，同時發(fā)現(xiàn)DM大鼠AQP-2的表達明顯比Con組增加，并伴有腎臟形態(tài)的早期改變。尿液檢查無創(chuàng)傷而易于被患者接受，故AQP-2能否作為糖尿病腎病診斷的標志物，將在后繼實驗中進一步探討。

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中圖分類號：R587.2

文獻標識碼：B

文章編號：1671-8194（2016）17-0036-02