病毒感染免疫檢驗(yàn)的研究進(jìn)展

萬來春

【摘 要】 病毒感染免疫檢驗(yàn)對(duì)疾病診斷、預(yù)防接種及治療、發(fā)病機(jī)制的判斷等具有非常重要的作用。由于免疫檢驗(yàn)不僅能夠明確待檢物病毒類型，且對(duì)特定抗體濃度也可進(jìn)行測定，因此它在病毒檢驗(yàn)中占據(jù)著非常重要的地位。本研究基于早期病毒檢驗(yàn)技術(shù)到新興病毒檢驗(yàn)技術(shù)的變更，對(duì)病毒感染免疫檢驗(yàn)的研究進(jìn)展進(jìn)行了分析，以期對(duì)病毒檢驗(yàn)技術(shù)的改進(jìn)有所幫助。

【關(guān)鍵詞】 病毒； 機(jī)制； 感染； 免疫檢驗(yàn)

[Abstract] Virus infection immunity test plays a very important role in disease diagnosis， vaccination and treatment， judgment of pathogenesis. Immune test can not only determine the virus type of analyte， and it can be used for the determination of specific antibody concentration， so it occupies a very important position in virus testing. This study is based on the change from early virus detection technology to new virus detection technology， analysis of the research progress of virus infection immunity test， in order to improve the virus detection technology.

[Key words] Virus； Mechanism； Infection； Immunity test

大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)，病毒感染是許多疾病的主要誘發(fā)因素[1-2]。由于病毒通常于人體細(xì)胞內(nèi)寄存、繁殖、變異，因此采用傳統(tǒng)檢驗(yàn)方法根本不能達(dá)到對(duì)病毒感染檢驗(yàn)與疾病診斷的基本要求。隨著醫(yī)療技術(shù)水平的提升，免疫檢驗(yàn)法的出現(xiàn)有效地彌補(bǔ)了傳統(tǒng)檢驗(yàn)方法的弊端。有研究發(fā)現(xiàn)，通過免疫檢驗(yàn)法對(duì)人體免疫細(xì)胞數(shù)量、抗體類型及濃度等進(jìn)行測定，可在較短時(shí)間內(nèi)明確病毒種類，對(duì)疾病診斷、免疫治療等極具意義[3]。

1 病毒損害機(jī)體的機(jī)制

病毒具有結(jié)構(gòu)簡單、體積微小等特點(diǎn)，可損壞人體宿主細(xì)胞功能，從而誘發(fā)免疫病理變化，主要表現(xiàn)在以下兩個(gè)方面：第一，免疫抑制。宿主細(xì)胞感染病毒后，會(huì)減少人體免疫分子的合成，損壞機(jī)體免疫應(yīng)答系統(tǒng)。第二，免疫損害。宿主細(xì)胞遭到病毒侵襲后，會(huì)誘發(fā)病理性免疫性應(yīng)答作用，導(dǎo)致人體非免疫組織與臟器系統(tǒng)損傷。

病毒感染引發(fā)免疫損害的作用機(jī)制與以下幾點(diǎn)密切相關(guān)，具體為：1）宿主細(xì)胞感染病毒后，會(huì)減少人體免疫分子的合成，損壞機(jī)體免疫應(yīng)答系統(tǒng)，從而對(duì)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抑制作用，引發(fā)宿主細(xì)胞感染。2）宿主細(xì)胞遭到病毒侵襲后，會(huì)誘發(fā)病理性免疫性應(yīng)答作用，導(dǎo)致人體非免疫組織與臟器系統(tǒng)損傷機(jī)體。3）蛋白質(zhì)表達(dá)主要由病毒合成，在細(xì)胞毒作用的介導(dǎo)下，可導(dǎo)致細(xì)胞損傷。4）特異性CTL可對(duì)此類膜抗原進(jìn)行識(shí)別，從而提升病毒殺傷力。5）基膜與血流速度較慢區(qū)域沉積有大量的病毒抗原及抗體，可對(duì)基膜及血流區(qū)域造成嚴(yán)重?fù)p害。6）補(bǔ)體被激活后，會(huì)引發(fā)一系列炎性反應(yīng)，使細(xì)胞受損。7）交叉免疫反應(yīng)造成的組織、器官損傷。

2 早期病毒免疫檢驗(yàn)方法

早期病毒免疫檢驗(yàn)方法主要包括ELISA、免疫熒光法、RIA、血細(xì)胞凝集法等，由于早期檢測技術(shù)水平有限，因此這些方法多操作繁瑣、特異性與敏感性較差、用時(shí)長、安全性低。

2.1 ELISA

該方法產(chǎn)生于酶聯(lián)吸附試驗(yàn)中，稱為酶聯(lián)免疫法。酶聯(lián)免疫法是一種結(jié)合了酶催化放大與免疫特異性的檢驗(yàn)技術(shù)，主要由捕獲法、競爭法、間接法及雙抗夾心法等構(gòu)成，其中在早期病毒免疫檢測中應(yīng)用最為頻繁的方法即為雙抗夾心法。大量研究證實(shí)，酶聯(lián)免疫法是用于檢驗(yàn)豬偽狂犬病、植物病毒、丙型肝炎病毒、藍(lán)舌病等病毒的標(biāo)準(zhǔn)方法[4-5]。

2.2 免疫熒光法

該方法是屬于一種免疫標(biāo)記檢驗(yàn)法，主要包括了熒光抗體、熒光抗原兩種技術(shù)。由于在免疫熒光試驗(yàn)中產(chǎn)生的熒光色素不僅可與抗體球蛋白相結(jié)合，還可與蛋白質(zhì)相結(jié)合，因此可用于對(duì)抗體、抗原的定位和檢測。免疫熒光法雖具有一定的靈敏性、特異性及高效性，但因其實(shí)驗(yàn)操作環(huán)節(jié)較多，過程繁瑣，因此檢驗(yàn)結(jié)果的客觀性有失偏頗。

2.3 RIA

RIA即為放射免疫技術(shù)，由二十世紀(jì) 60年代德國的一位科學(xué)家所發(fā)明，屬于一種體外微量檢驗(yàn)技術(shù)，主要通過聯(lián)合2種抗原（未經(jīng)同位素標(biāo)記、經(jīng)標(biāo)記），使其與抗體相結(jié)合并產(chǎn)生競爭抑制反應(yīng)，從而獲取試驗(yàn)結(jié)論。該方法具有操作簡便、特異性高、靈敏性強(qiáng)等特點(diǎn)，但由于其所產(chǎn)生的放射物質(zhì)不僅可對(duì)參與試驗(yàn)者的健康造成危害，還易受外界環(huán)境干擾而發(fā)生假陽性反應(yīng)，因此在病毒感染免疫檢驗(yàn)使用中受到了一些限制[6]。通常放射免疫技術(shù)多用于對(duì)乙型肝炎病毒的檢驗(yàn)分類。

2.4 血細(xì)胞凝集法

多項(xiàng)研究證實(shí)，部分病毒存在促進(jìn)紅細(xì)胞凝集的性能，而此種性能則被稱之為血凝[7]。血細(xì)胞凝集法就是基于此種特性所研制出的一種病毒檢驗(yàn)技術(shù)。對(duì)此種病毒檢驗(yàn)技術(shù)具有輔助作用的血凝抑制試驗(yàn)也是基于病毒促進(jìn)紅細(xì)胞凝集的能力可能被相應(yīng)抗體抑制的這種特性而研制出來。血細(xì)胞凝集法僅適用于對(duì)梅毒的確診[8]，因此多用于對(duì)梅毒螺旋體的檢測，但對(duì)梅毒療效的檢測卻并不適用。

2.5 中和試驗(yàn)法

該方法主要由固定血清-稀釋病毒法、固定病毒-血清稀釋法兩部分組成，可用于檢測病毒感染力。通過分析與血清結(jié)合后的病毒所剩余的感染力，來判斷免疫血清對(duì)病毒感染所產(chǎn)生的抑制能力。該方法在臨床上多用于對(duì)病毒抗原性與類型進(jìn)行鑒別。

2.6 免疫電泳法

該方法結(jié)合了抗原抗體帶電的作用原理，使帶電物體在電場的作用下進(jìn)行運(yùn)動(dòng)。試驗(yàn)者通過對(duì)該物質(zhì)的數(shù)量、運(yùn)動(dòng)的快慢等進(jìn)行觀察，來判斷病毒類型[9]。

2.7 其他檢驗(yàn)技術(shù)

除了ELISA、免疫熒光法、RIA、血細(xì)胞凝集法、中和試驗(yàn)法及免疫電泳法之外，還有對(duì)流電泳法、沉淀法等也可用于測定病毒感染，但這些檢驗(yàn)技術(shù)程序復(fù)雜或結(jié)果客觀性差等原因，在臨床上應(yīng)用較少。

3 新興病毒感染免疫檢驗(yàn)方法

隨著臨床檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展，發(fā)光免疫鑒定技術(shù)、膠體金技術(shù)等新興病毒檢驗(yàn)方法的出現(xiàn)及應(yīng)用，使得臨床病毒感染免疫檢驗(yàn)結(jié)果更為精準(zhǔn)。與早期病毒感染免疫檢測方法相比，新興病毒檢測方法具有操作簡便、高特異性與靈敏性、用時(shí)短、安全性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，更能滿足臨床檢驗(yàn)的需求。

3.1 發(fā)光免疫鑒定

該技術(shù)是結(jié)合了發(fā)光系統(tǒng)與免疫反應(yīng)用于進(jìn)行抗原、抗體檢驗(yàn)的新型技術(shù)，具有高特異性、高敏感性等優(yōu)點(diǎn)。和熒光免疫法不同的是，該方法結(jié)合了發(fā)光劑與發(fā)光系統(tǒng)，應(yīng)用的標(biāo)記物為發(fā)光劑，且常于安全環(huán)境下進(jìn)行病毒感染免疫檢驗(yàn)，所以該技術(shù)具有高穩(wěn)定性、無毒無害性的特點(diǎn)。發(fā)光免疫鑒定技術(shù)用于檢測病毒時(shí)，耗時(shí)非常短，可快速檢驗(yàn)病毒類型，明確疾病診斷，是用于臨床檢驗(yàn)的優(yōu)質(zhì)技術(shù)，具有非常好的發(fā)展前景[10]。

3.2 膠體金技術(shù)

該技術(shù)的示蹤物質(zhì)為膠體金，是用于對(duì)抗體、抗原進(jìn)行標(biāo)記、檢驗(yàn)的新型技術(shù)，不僅安全、操便，且具有良好的敏感性與特異性。當(dāng)前，在臨床中多用于檢測血清內(nèi)的甲胎蛋白、艾滋病病毒。

3.3 重組免疫試驗(yàn)

重組免疫試驗(yàn)主要通過使抗原以橫線條式吸附于含有硝酸纖維素膜的膜條上，并于長條凹槽反應(yīng)盤內(nèi)和標(biāo)本抗體反應(yīng)、洗滌，加入底物顯色，觀察條帶可發(fā)現(xiàn)血清內(nèi)存在的特異性抗體，從而對(duì)抗體效價(jià)進(jìn)行估計(jì)的一種檢驗(yàn)技術(shù)。該方法非常適用于對(duì)復(fù)雜病原體抗體的檢驗(yàn)。

筆者結(jié)合臨證分析發(fā)現(xiàn)，重組免疫試驗(yàn)可用于檢測丙肝抗體、艾滋病病毒抗體。有研究表明，該方法還可用于對(duì)動(dòng)物口蹄疫病毒的檢測[11]。

4 結(jié)語

以往臨床多用傳統(tǒng)檢驗(yàn)技術(shù)進(jìn)行病毒感染免疫檢驗(yàn)，由于其特異性與靈敏性較弱，因此缺乏一個(gè)相對(duì)客觀的檢驗(yàn)結(jié)果。隨著科技的進(jìn)步，為臨床病毒感染檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展帶來了新的契機(jī)，越來越多的新興技術(shù)逐漸將傳統(tǒng)技術(shù)所取代。由于新興的病毒感染免疫檢驗(yàn)技術(shù)具有高效、簡便、安全、靈敏等特點(diǎn)，因此得到了廣大試驗(yàn)人員的肯定，但不可忽略的是，仍有各種問題存在于整個(gè)檢驗(yàn)過程中，這主要由參與者本身的差異性與生物學(xué)差異性所致。此外，一些技術(shù)上的誤差、標(biāo)本選取時(shí)間、操作方法不當(dāng)?shù)纫矔?huì)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。因此，我們應(yīng)嚴(yán)格控制病毒感染免疫檢驗(yàn)過程與各種因素，以取得一個(gè)客觀的檢驗(yàn)結(jié)果。

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