電針百會(huì)、神庭穴對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及海馬區(qū)GAP-43蛋白表達(dá)的影響*

劉斐雯　俞坤強(qiáng)　彭洪衛(wèi)　柳維林　林如輝　陶　靜，2　陳立典，2，3△　（.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建福州35022；2.福建省康復(fù)技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建福州35022；3.國(guó)家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)康復(fù)研究中心，福建福州35022）

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電針百會(huì)、神庭穴對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及海馬區(qū)GAP-43蛋白表達(dá)的影響*

劉斐雯1俞坤強(qiáng)1彭洪衛(wèi)1柳維林1林如輝1陶靜1，2陳立典1，2，3△
（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建福州350122；2.福建省康復(fù)技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建福州350122；3.國(guó)家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)康復(fù)研究中心，福建福州350122）

【摘要】目的觀察電針百會(huì)穴、神庭穴對(duì)腦缺血再灌注（MCAO）大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響，并探討其可能的機(jī)制。方法45只雄性Sprague-Dawley大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組、模型組和電針組，各15只。模型組和電針組采用線栓法制備缺血2 h MCAO大鼠模型，電針組電針百會(huì)穴、神庭穴（1/20 Hz，每日30 min，7 d）。采用Longa評(píng)分檢測(cè)各組大鼠的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分，采用Morris水迷宮測(cè)試檢測(cè)學(xué)習(xí)記憶能力，采用TTC染色和小動(dòng)物磁共振檢測(cè)腦梗死體積，采用Western blotting法檢測(cè)缺血側(cè)海馬區(qū)GAP-43蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果模型組大鼠Longa評(píng)分在第5日、第7日明顯高于電針組（P＜0.05）。定向航行試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著時(shí)間推移，各組大鼠平均潛伏期均逐漸縮短，而電針組大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)明顯優(yōu)于模型組（P＜0.001）；空間探索實(shí)驗(yàn)顯示，電針組大鼠穿越原平臺(tái)次數(shù)明顯多于模型組（P＜0.05）。小動(dòng)物磁共振結(jié)果示假手術(shù)組結(jié)構(gòu)清晰，腦室走向正常。模型組右側(cè)結(jié)構(gòu)正常，左側(cè)大腦部分梗死、腫脹。電針組右側(cè)結(jié)構(gòu)正常，左側(cè)梗死、腫脹區(qū)域小于模型組，提示電針百會(huì)、神庭穴可以減小腦梗死體積。TTC染色結(jié)果，與模型組比較，電針組大鼠腦梗死體積占全腦體積的比例小于模型組，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。各組Western blotting結(jié)果示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠GAP-43蛋白表達(dá)增加，而電針組大鼠的GAP-43蛋白表達(dá)較模型組多（P＜0.05）。結(jié)論電針百會(huì)、神庭穴可以改善MCAO大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，其機(jī)制可能與減輕腦組織損傷并上調(diào)海馬區(qū)GAP-43蛋白表達(dá)，增強(qiáng)神經(jīng)元突觸可塑性有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】腦缺血再灌注電針學(xué)習(xí)記憶小動(dòng)物磁共振GAP-43

認(rèn)知障礙在腦卒中患者中發(fā)病率高達(dá)56.6%［1］，其中45.4%腦卒中后認(rèn)知障礙患者主要表現(xiàn)為學(xué)習(xí)記憶能力下降［2］，嚴(yán)重影響腦卒中患者的整體功能恢復(fù)和身心健康［3］。針刺百會(huì)、神庭穴可以改善腦卒中患者的學(xué)習(xí)記憶能力［4-5］，然其機(jī)制仍未完全闡明［6］。腦組織缺血缺氧損傷后學(xué)習(xí)記憶等功能的恢復(fù)，必須依賴(lài)突觸的結(jié)構(gòu)和功能的重塑［7］。海馬區(qū)GAP-43參與了神經(jīng)的生長(zhǎng)、發(fā)育、再生以及維持突觸功能和釋放遞質(zhì)過(guò)程，是神經(jīng)再塑與再生標(biāo)志物［8］。本實(shí)驗(yàn)制備大腦中動(dòng)脈閉塞局灶性腦缺血再灌注（MCAO）大鼠模型，觀察電針神庭、百會(huì)穴對(duì)MCAO大鼠學(xué)習(xí)記憶能力、腦梗死體積以及海馬區(qū)GAP-43蛋白表達(dá)的影響。現(xiàn)報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1動(dòng)物與分組45只清潔級(jí)、健康雄性、體質(zhì)量為（260±20）g的Sprague-Dawley大鼠，由福建中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供［合格證號(hào)SYXK（閩）2005-004］，每籠5只，進(jìn)行分籠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，采用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠進(jìn)行編號(hào)，分為假手術(shù)組、模型組、電針組，各15只，實(shí)驗(yàn)過(guò)程嚴(yán)格按照國(guó)際動(dòng)物保護(hù)和使用指南的規(guī)定進(jìn)行。

1.2實(shí)驗(yàn)試劑2，3，5-氯化三苯基四氮唑，美國(guó)Sigma-aldrich公司提供；PSD-95一抗、β-actin一抗、辣根過(guò)氧化物酶二抗，美國(guó)Cell Signaling Technology公司提供。

1.3實(shí)驗(yàn)儀器Morris水迷宮，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所生產(chǎn)；Image-lab圖像分析系統(tǒng)，美國(guó)Bio-rad laboratories公司生產(chǎn)。

1.4造模參照改良Longa方法［9］，制備左側(cè)大腦中動(dòng)脈閉塞的MCAO大鼠模型。術(shù)前所有實(shí)驗(yàn)大鼠禁食12 h。大鼠稱(chēng)重后，10%水合氯醛0.3 mL/100 g腹腔注射麻醉。常規(guī)去毛消毒，分離頸總動(dòng)脈，向上分離出頸內(nèi)動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈主干及分支。結(jié)扎頸總動(dòng)脈近心端及分叉處頸外動(dòng)脈，微動(dòng)脈夾夾閉頸內(nèi)動(dòng)脈。然后在頸總動(dòng)脈結(jié)扎處遠(yuǎn)端約3 mm處剪一小口，將備好的栓線插入頸內(nèi)動(dòng)脈，撤去頸內(nèi)動(dòng)脈血管夾，緩慢推動(dòng)栓線至大腦前動(dòng)脈近端，直至遇到少許阻力時(shí)停止，插入長(zhǎng)度18.0~22.0 mm。固定栓線，常規(guī)縫合傷口。2 h后將栓線退回至頸總動(dòng)脈分叉處，形成缺血再灌注模型。假手術(shù)組大鼠只進(jìn)行動(dòng)脈分離的操作，不進(jìn)行結(jié)扎和插線。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中注意大鼠保暖。大鼠蘇醒后按Longa評(píng)分判斷模型是否成功，評(píng)分1~3分的大鼠可以納入實(shí)驗(yàn)。

1.5干預(yù)方法電針組參考《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》取大鼠神庭和百會(huì)穴，使用華佗牌30號(hào)0.5寸毫針，接G6805電針儀，電壓峰值6 V，以針體輕輕抖動(dòng)為度，疏密波，頻率為1/20 Hz。每次治療時(shí)間為30 min，每日同一時(shí)間治療1次，共7 d。造模后第2日開(kāi)始治療，直至大鼠被處死。假手術(shù)組置于普通籠中飼養(yǎng)，予同等條件抓取。模型組造模后回籠飼養(yǎng)，予同等條件抓取。

1.6觀察指標(biāo)1）神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分：采用Longa進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分。0分：無(wú)神經(jīng)功能缺損體征。1分：不能完全伸展對(duì)側(cè)前爪。2分：向偏癱側(cè)轉(zhuǎn)圈。3分：行走時(shí)向偏癱側(cè)傾倒。4分：不能自發(fā)行走，意識(shí)喪失。Longa神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分從造模開(kāi)始，每天同一時(shí)間進(jìn)行1次評(píng)定并記錄。2）行為學(xué)檢測(cè)：Morris水迷宮測(cè)試進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè)，測(cè)試包括定位航行實(shí)驗(yàn)、空間探索實(shí)驗(yàn)兩個(gè)部分。Morris水迷宮是一個(gè)直徑為200 cm、高度為50 cm的圓形水池，水深30 cm，水溫（25±2）℃，池壁4個(gè)等距離點(diǎn)將水池分為4個(gè)象限，任選一個(gè)象限在其中央放置平臺(tái)，逃逸平臺(tái)直徑為6 cm，低于水面1~2 cm，四周的池壁表面光滑整潔，光線四周對(duì)稱(chēng)，水池周?chē)鷧⒄瘴飶膶?shí)驗(yàn)開(kāi)始到結(jié)束位置保持不變。于術(shù)后3 d開(kāi)始進(jìn)行Morris水迷宮測(cè)試直至處死。（1）定位航行實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將大鼠放置于水池中自由游泳2 min，使其充分適應(yīng)環(huán)境以及人的抓握等相關(guān)操作，將大鼠按順時(shí)針?lè)较蛞来斡傻?象限、第2象限、第3象限、第4象限入水點(diǎn)順序面向池壁放入水中。若大鼠在90 s內(nèi)找到平臺(tái)，并在平臺(tái)上停留的時(shí)間達(dá)到3 s以上，認(rèn)為大鼠找到平臺(tái)，此時(shí)由計(jì)算機(jī)記錄到的時(shí)間為逃避潛伏期；若大鼠在限定的時(shí)間內(nèi)未找到隱匿于水中的平臺(tái)，則將大鼠拖曳至平臺(tái)上，讓其在平臺(tái)上停留10 s，此時(shí)逃避潛伏期計(jì)為90 s。定位航行實(shí)驗(yàn)于術(shù)后3 d開(kāi)始，連續(xù)檢測(cè)4 d。（2）空間探索實(shí)驗(yàn)：術(shù)后第7日，撤去平臺(tái)后，任意選取一入水點(diǎn)將大鼠面向池壁放入水中，觀察并記錄90 s內(nèi)大鼠穿過(guò)放置原平臺(tái)區(qū)域的次數(shù)。3）磁共振掃描：術(shù)后第7日，在Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用德國(guó)bruker（布魯克）7.0 T小動(dòng)物磁共振儀進(jìn)行掃描。大鼠在用異氟烷完全麻醉后，采用仰臥位，并使其頭部固定于有機(jī)玻璃板架上，選用大鼠頭部線圈，開(kāi)始檢測(cè)前先行矢狀位定位掃描，再進(jìn)行T 2WI掃描，參數(shù)：采用TSE序列，TR 2738 ms，TE 33 ms，24層，矩陣30 mm×30 mm，RFOV60%，NSA為15，掃描時(shí)間為5 min 50 s。4）TTC染色：采用2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法檢測(cè)各組大鼠腦梗死體積。在大鼠斷頭取腦后，將取得的腦組織迅速置于-20℃冰箱冷凍15 min，至腦組織變硬，將腦組織從大腦半球額極到枕極做連續(xù)的冠狀位切片（每片厚度約2 mm，共切6片），將腦片放入1%TTC磷酸緩沖液（pH=7.4）后，置于37℃恒溫箱10～15 min，并用毛筆不時(shí)翻動(dòng)腦片，以使腦片均勻接觸到染色液，整個(gè)過(guò)程注意避光。TTC因與正常組織中的脫氫酶反應(yīng)而呈現(xiàn)紅色，而由于缺血組織內(nèi)脫氫酶活性下降，故不能與TTC反應(yīng)，使腦梗死組織呈蒼白色。利用Image-Pro Plus 6.0分析軟件對(duì)腦梗死面積以及大腦面積進(jìn)行計(jì)算，然后得出腦梗死體積百分比=（梗死面積和×2 mm）/（全腦面積和×2 mm）。5）Western blotting：取缺血側(cè)（左側(cè)）海馬組織置液氮罐中速凍后于-80℃冰箱保存。取海馬組織100 mg，加裂解緩沖液1 mL和苯甲基磺酰氟（PMSF）10 μL，充分研磨后離心，取上清。BCA蛋白濃度測(cè)定法測(cè)定蛋白濃度。樣品蛋白變性后，取樣品蛋白50 μg，12%SDS-PAGE電泳，轉(zhuǎn)移到PVDF膜，封閉液封閉2 h，分別用MMP-2、MMP-9（1∶500）、β-actin一抗（1∶1000）孵育，4℃過(guò)夜，用辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的二抗（1∶5000）室溫孵育1h。將PVDF膜放圖像掃描儀上，避光配置顯色液并覆蓋PVDF膜，Imagelab圖像分析系統(tǒng)分析。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，若符合正態(tài)分布，則進(jìn)行兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；若不符合正態(tài)分布，則進(jìn)行秩和檢驗(yàn)；多組計(jì)量資料符合正態(tài)分布，則進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA），若方差齊者用LSD法，若方差不齊則用Games-Howell法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　果

2.1各組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分比較見(jiàn)表1。模型組大鼠Longa評(píng)分在第5日、第7日明顯高于電針組（P＜0.05）。

2.2各組大鼠行為學(xué)結(jié)果比較見(jiàn)表2，表3。定向航行試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著時(shí)間推移，各組大鼠平均潛伏期均逐漸縮短，而電針組大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)明顯優(yōu)于模型組（P＜0.01）；空間探索實(shí)驗(yàn)顯示，電針組大鼠穿越原平臺(tái)次數(shù)明顯多于模型組（P＜0.05）。

2.3各組大鼠腦梗死體積比較1）小動(dòng)物磁共振比較：見(jiàn)圖1。假手術(shù)組結(jié)構(gòu)清晰，腦室走向正常。模型組右側(cè)結(jié)構(gòu)正常，左側(cè)大腦部分梗死、腫脹。電針組右側(cè)結(jié)構(gòu)正常，左側(cè)梗死、腫脹區(qū)域小于模型組，提示電針百會(huì)、神庭穴可以減小腦梗死體積（注：箭頭所指為梗死區(qū)）。2）TTC染色比較：見(jiàn)表4。與模型組比較，電針組大鼠腦梗死體積占全腦體積的比例小于模型組，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。

表1　各組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分比較（分，±s）

表1　各組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分比較（分，±s）

與模型組比較，△　P＜0.05。

組別　第5日第7日假手術(shù)組　00 第1日　第3日00模型組1.90±0.32 1.80±0.42 n 15 15　 2.4±0.52 2.10±0.57電針組15　 2.4±0.70 1.90±0.32 1.40±0.52△　1.20±0.42△

表2　各組大鼠逃避潛伏期結(jié)果比較（s，±s）

表2　各組大鼠逃避潛伏期結(jié)果比較（s，±s）

與假手術(shù)組比較，*P＜0.001；與模型組比較，△P＜0.001。

組別　第5日第6日假手術(shù)組16.76±2.42 12.41±3.46 第3日　第4日32.40±7.20 24.93±8.05模型組　67.82±4.63*　53.19±9.15*　 n 15 15 85.52±3.28*　75.30±7.45*　電針組15 50.48±6.15△　38.39±5.74△　26.33±8.05△　19.13±3.66△

表3　各組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)結(jié)果比較（次，±s）

表3　各組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)結(jié)果比較（次，±s）

與假手術(shù)組比較，*P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05。

組別　n　次數(shù)假手術(shù)組154.25±1.28模型組151.38±0.92*　電針組15　2.63±1.59△

圖1　各組大鼠小動(dòng)物核磁T2結(jié)構(gòu)

表4　兩組大鼠腦梗死體積比較（%，±s）

表4　兩組大鼠腦梗死體積比較（%，±s）

組別　n　梗死體積百分比模型組15　33.11±1.52電針組1517.76±2.08△

與模型組比較，△P＜0.001。

2.4各組大鼠Western blotting結(jié)果比較見(jiàn)圖2，表5。與假手術(shù)組比較，模型組大鼠GAP-43蛋白表達(dá)增加，而電針組大鼠的GAP-43蛋白表達(dá)較模型組多（P＜0.05）。

3　討　論

圖2　各組大鼠海馬GAP-43蛋白表達(dá)結(jié)果

表5　各組大鼠海馬GAP-43蛋白表達(dá)結(jié)果比較（%，±s）

表5　各組大鼠海馬GAP-43蛋白表達(dá)結(jié)果比較（%，±s）

與模型組比較，△P＜0.05。

組別　n　GAP-43/β-Actin假手術(shù)組15　55.31±11.19模型組15　77.26±12.61電針組15　98.67±21.48△

缺血性腦卒中發(fā)生后，由于腦組織缺血缺氧進(jìn)而發(fā)生一系列復(fù)雜的病理改變，導(dǎo)致大腦神經(jīng)元破壞和死亡［10］，最終而出現(xiàn)學(xué)習(xí)記憶減退等功能障礙。針刺可以改善腦缺血后的氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、能量代謝障礙所致的病理?yè)p傷［11］，有助于促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶能力等高級(jí)腦功能恢復(fù)。督脈為陽(yáng)脈之海，其行貫脊、入絡(luò)腦，與腦聯(lián)系十分密切。百會(huì)、神庭穴皆是督脈經(jīng)穴，具有醒腦開(kāi)竅、寧神益智等作用，可主治腦卒中后認(rèn)知障礙等腦部疾患，這一結(jié)論在研究團(tuán)隊(duì)前期臨床研究中已經(jīng)得到證實(shí)［12-14］。

細(xì)胞水平上突觸的強(qiáng)度的變化，被認(rèn)為是學(xué)習(xí)記憶的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)［15-16］，而腦缺血缺氧后大腦學(xué)習(xí)記憶等神經(jīng)功能的恢復(fù)，取決于大腦的突觸可塑性，依賴(lài)突觸的結(jié)構(gòu)和功能的重塑［17］。GAP-43是一種胞膜磷酸蛋白質(zhì)，同時(shí)也是一種神經(jīng)特異性蛋白質(zhì)，廣泛存在于各種神經(jīng)組織中，尤其在軸突末端以及突觸前膜的含量極高，在突觸發(fā)育和神經(jīng)細(xì)胞再生過(guò)程中扮演重要的角色［18］。生理情況下，在成熟的神經(jīng)元中，由于軸突的生長(zhǎng)處于一種抑制狀態(tài)，所以神經(jīng)元中的GAP-43的含量很低。當(dāng)軸突受到損傷后，軸突的生長(zhǎng)和重建可被重新誘導(dǎo)，而GAP-43在其中有著重要的作用［19］。GAP-43可以使F-肌動(dòng)蛋白聚集，將生長(zhǎng)錐附著、固定，從而使細(xì)胞變形，與此同時(shí)還可以促進(jìn)單胺遞質(zhì)釋放與維持長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)效應(yīng)，從而在引導(dǎo)軸突生長(zhǎng)以及調(diào)節(jié)軸突形成新的聯(lián)系上起關(guān)鍵作用［20-21］。因此，GAP-43蛋白參與了腦卒中后突觸結(jié)構(gòu)和功能重塑的過(guò)程，從而影響了大腦高級(jí)功能恢復(fù)的過(guò)程［22］。

本實(shí)驗(yàn)中，筆者觀察到電針組大鼠的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分低于模型組，且電針組大鼠的腦梗死體積小于模型組，說(shuō)明電針百會(huì)、神庭穴可以改善MCAO大鼠病理?yè)p傷，促進(jìn)神經(jīng)功能的恢復(fù)。研究中行為學(xué)的結(jié)果還顯示，電針組大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)優(yōu)于模型組，表明電針可以改善MCAO大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能，且同模型組相比，電針組大鼠左側(cè)海馬區(qū)GAP-43的含量明顯升高。綜上所述，電針百會(huì)、神庭穴可以提高M(jìn)CAO大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，且這種治療作用可能與上調(diào)GAP-43蛋白表達(dá)，增強(qiáng)突觸可塑性相關(guān)。

參考文獻(xiàn)

［1］曲艷吉，卓琳，詹思延.中國(guó)腦卒中后認(rèn)知障礙流行病學(xué)特征的系統(tǒng)評(píng)價(jià)［J］.中華老年心腦血管病雜志，2013，14（12）：1294-1301.

［2］胡昔權(quán)，竇祖林，萬(wàn)桂芳，等.腦卒中患者認(rèn)知功能障礙的發(fā)生率及其影響因素的探討［J］.中華物理醫(yī)學(xué)與康復(fù)雜志，2003，25（4）：219-222.

［3］Park JH，Kim BJ，Bae H，et al. Impact of post-stroke cognitive impairment with no dementia on health -related quality of life［J］. Journal of Stroke，2013，15（1）：49-56.

［4］馮曉東，劉嬌，陳立典.電針對(duì)局灶性腦缺血大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響及其機(jī)制①［J］.中國(guó)康復(fù)理論與實(shí)踐，2013，19（3）：227-230.

［5］林浴坤，陶靜，陳斌，等.電針對(duì)局灶性腦缺血再灌注損傷大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響［J］.中國(guó)康復(fù)理論與實(shí)踐，2014，20（9）：831-834.

［6］Leung MC，Yip KK，Ho YS，et al. Mechanisms underlying the effect of acupuncture on cognitive improvement：a systematic review of animal studies［J］. J Neuroimmune Pharmacol，2014，9（4）：492-507.

［7］Zhao S，Zhao M，Xiao T，et al. Constraint-induced movement therapy overcomes the intrinsic axonal growth-inhibitory signals in stroke rats［J］. Stroke，2013，44（6）：1698-1705.

［8］孟明，張春梅，趙旭偉，等.阿司匹林聯(lián)合阿托伐他汀對(duì)腦卒中大鼠腦組織神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響及治療老年急性缺血性腦卒中的療效［J］.中國(guó)老年學(xué)雜志，2015，35（10）：2641-2644.

［9］Tao J，Chen B，Gao Y，et al. Electroacupuncture enhances hippocampal NSCs proliferation in cerebral ischemia-reperfusion injured rats via activation of notch signaling pathway［J］. International Journal of Neuroscience，2014，124（3）：204-212.

［10］Jin R，Song Z，Yu S，et al. Phosphatidylinositol -3 -kinase gamma plays a central role in blood-brain barrier dysfunction in acute experimental stroke［J］. Stroke，2011，42（7）：2033-2044.

［11］Leung MCP，Yip KK，Ho YS，et al. Mechanisms underlying the effect of acupuncture on cognitive improvement：a systematic review of animal studies［J］. Journal of NeuroImmune Pharmacology，2014，9（4）：492-507.

［12］劉嬌，馮曉東.電針百會(huì)、神庭穴配合康復(fù)訓(xùn)練治療腦卒中后認(rèn)知障礙臨床研究［J］.中醫(yī)學(xué)報(bào)，2013，28（4）：608-610.

［13］江一靜.電針百會(huì)、神庭對(duì)腦卒中后認(rèn)知功能障礙的影響［D］.福州：福建中醫(yī)藥大學(xué)，2011.

［14］Liu F，Li ZM，Jiang YJ，et al. A meta-analysis of acupuncture use in the treatment of cognitive impairment after stroke［J］. J Altern Complement Med，2014，20（7）：535-544.

［15］Kasai H，F(xiàn)ukuda M，Watanabe S，et al. Structural dynamics of dendritic spines in memory and cognition［J］. Trends in Neurosciences，2010，33（3）：121-129.

［16］Gazzaniga.認(rèn)知神經(jīng)科學(xué)：關(guān)于心智的生物學(xué)［M］.北京：中國(guó)輕工業(yè)出版社，2011：310-312.

［17］樊留博，章霞，盧戰(zhàn)，等.電針聯(lián)合強(qiáng)制性運(yùn)動(dòng)對(duì)腦缺血大鼠神經(jīng)功能及GAP-43表達(dá)的影響［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2015，34（1）：162-165.

［18］Donnelly CJ，Park M，Spillane M，et al. Axonally synthesized beta-actin and GAP-43 proteins support distinct modes of axonalgrowth［J］.Journalof Neuroscience，2013，33（13）：5878.

［19］Liu Z，Chopp M，Ding X，et al. Axonal Remodeling of the corticospinal tract in the spinal cord contributes to voluntary motor recovery after stroke in adult mice［J］. Stroke，2013，44（7）：1951-1956.

［20］張鵬飛，徐成成，李文磊，等.電針對(duì)局灶性腦缺血大鼠10號(hào)染色體同源丟失性磷酸酶張力蛋白和神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43表達(dá)的影響［J］.中國(guó)康復(fù)理論與實(shí)踐，2015，21（1）：35-38.

［21］Becker T，Lieberoth BC，Becker CG，et al. Differences in the regenerative response of neuronal cell populations and indications for plasticity in intraspinal neurons after spinal cord transection in adult zebrafish［J］. Molecular and Cellular Neuroscience，2005，30（2）：265-278.

［22］Cheng MY，Wang EH，Woodson WJ，et al. Optogenetic neuronal stimulation promotes functional recovery after stroke［J］. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2014，111（35）：12913-12918.

Effect of Electro-acupuncture on Learning and Memory Ability and GAP-43 Expression in Rats with Cerebral Ischemia-reperfusion Injury

LIU Feiwen，YU Kunqiang，PENG Hongwei，et al.
College of Reha-bilitation Medicine of Fujian University of Traditional Chinese Medicine，F(xiàn)ujian，F(xiàn)uzhou 350122，China.

【Abstract】Objective：To observe the effect of electro-acupuncture（EA）at Baihui（DU20）and Shenting（DU24）on learning and memory ability of rats after cerebral ischemia-reperfusion injury and explore the potential mechanism through GAP-43 expression. Methods：45 male Sprague-Dawley rats were randomly divided into the sham group（n=8），the model group（n=8）and EA group（n=8，EA at Baihui and Shenting，1/20 Hz，30 min/ day，7 days）. The sham group and the model group were modeled with MCAO for 2 h and reperfusion. The animals′learning and memory ability was tested by Morris water maze；the cerebral infarction volume was measured by TTC staining and magnetic resonance；the damage and edema of neuron were detected with hematoxylin-eosin staining；the protein expression of GAP-43 was detected by Western blotting，and neurological deficit score was evaluated with Longa. Results：Longa of the modeled group was higher than the EA group on the 5thand 7thday（P＜0.05）. The place navigation showed that the escape latency of all group was shorter，and the EA group was shorter than the modeled group. The spatial probe showed that the EA group was more than the modeled group in the times of arriving platform（P＜0.05）. The animal magnetic resonance showed that there was no damage in ventriclein sham group. There were some infarction organizations in the left hemisphere in the modeled group. TTC staining shows that the damaged area of the EA group was smaller than the modeled group（P＜0.001）. Western blotting showed that the expression of GAP-43 in model group increased compared with sham group，while the expression of GAP-43 in EA group increased more than model group（P＜0.05）.. Conclusion：EA can improve learning and memory ability of rats with cerebral ischemia-reperfusion injury，which may be related with reducing the damage and edema of neuron，and inhibiting the expression of GAP-43 in hippocampus.

【Key words】Cerebral Ischemia-reperfusion；Electro-acupuncture；Learning and memory；Small animals magnetic resonance；GAP-43

中圖分類(lèi)號(hào)：R245.9+7

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1004-745X（2016）02-0189-05

doi：10.3969/j.issn.1004-745X.2016.02.001

*基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（No.81373778）；福建省康復(fù)技術(shù)協(xié)同創(chuàng)新中心資助項(xiàng)目（No.X2012004-協(xié)同）

通信作者△（電子郵箱：cld＠fit.com.edu.cn）

收稿日期（2015-09-30）