鹿瓜多肽注射液對(duì)家兔長(zhǎng)節(jié)段單椎體壓縮性骨折VEGF及PMMA顆粒誘導(dǎo)骨溶解的影響*

馮艷琴　江雪蓮　王文杰　張　毅　郭曉玲　王　璇　穆敬平（湖北省十堰市太和醫(yī)院湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院，湖北十堰442000）

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鹿瓜多肽注射液對(duì)家兔長(zhǎng)節(jié)段單椎體壓縮性骨折VEGF及PMMA顆粒誘導(dǎo)骨溶解的影響*

馮艷琴江雪蓮?fù)跷慕軓堃愎鶗粤嵬蹊戮雌健?br/>（湖北省十堰市太和醫(yī)院湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院，湖北十堰442000）

【摘要】目的觀察鹿瓜多肽注射液對(duì)家兔長(zhǎng)節(jié)段單椎體壓縮性骨折合并骨溶解治療過(guò)程中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）表達(dá)及PMMA顆粒誘導(dǎo)骨溶解抑制作用的影響。方法健康兔50只，將其中40只隨機(jī)分為模型對(duì)照組、鹿瓜多肽A、B、C組，采用手術(shù)方法建立家兔長(zhǎng)節(jié)段單椎體壓縮性骨折基礎(chǔ)上于骨折周圍組織注入PMMA顆粒以造成骨折合并骨溶解動(dòng)物模型，另10只不做造模型處理設(shè)為空白對(duì)照組。術(shù)后10 d鹿瓜多肽A、B、C 3組于骨折局部肌肉注射鹿瓜多肽注射液治療4周，空白對(duì)照組及模型對(duì)照組肌肉注射等體積0.9%氯化鈉注射液。兔疫組化染色及圖像分析法測(cè)定兔L1節(jié)骨折椎體VEGF及VEGF mRNA陽(yáng)性表達(dá)，ELISA法檢測(cè)血清PGE2、IL-1及IL-8水平，影像學(xué)檢測(cè)骨折椎體骨密度，HE染色病理檢測(cè)兔L1骨折椎體骨溶解病理改變情況。結(jié)果鹿瓜多肽B、C組在治療4周后，其VEGF、VEGFmRNA在兔L1節(jié)骨折椎體中的陽(yáng)性表達(dá)及骨密度均明顯增強(qiáng)，PGE2、IL-1、IL-8水平及病檢兔L1節(jié)骨折椎體骨溶解明顯降低，與本組治療前及模型對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。鹿瓜多肽A組無(wú)明顯變化，B、C組兩組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論鹿瓜多肽注射液可促進(jìn)兔長(zhǎng)節(jié)段單椎體壓縮性骨折合并骨溶解愈合過(guò)程中VEGF及VEGFmRNA陽(yáng)性表達(dá)，增加L1節(jié)骨折椎體局部組織血液供應(yīng)，促使L1節(jié)骨折椎體周圍組織血管內(nèi)皮新生，降低PGE2、IL-1及IL-8水平以減輕炎癥反應(yīng)，調(diào)節(jié)兔L1節(jié)骨折椎體組織細(xì)胞代謝及平衡，抑制骨溶解而增加骨密度，對(duì)骨折椎體骨痂形成及維持成骨及破骨過(guò)程的平衡穩(wěn)定具有明顯的促進(jìn)作用。

【關(guān)鍵詞】長(zhǎng)節(jié)段單椎體壓縮性骨折鹿瓜多肽注射液兔L1節(jié)骨折椎體血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子骨溶解

長(zhǎng)節(jié)段單椎體壓縮性骨折（LSVCF）在人工關(guān)節(jié)置換術(shù)或者內(nèi)固定治療時(shí)常并發(fā)無(wú)菌性炎癥并導(dǎo)致關(guān)節(jié)松動(dòng)，并間接造成骨折部位骨溶解，而骨溶解是關(guān)節(jié)磨損微粒無(wú)菌性炎癥主要誘因［1］。在骨科手術(shù)中主要的磨損微粒有骨水泥顆粒-PMMA、聚乙烯顆粒-UHMPE及鈦合金微粒等，特別是PMMA這類磨損顆?？擅黠@刺激骨折周圍組織，造成大量炎性細(xì)胞聚集，這些炎性細(xì)胞可分泌大量的炎癥因子如PGE2、白介素-1（IL-1）及白介素-8（IL-8）等，并進(jìn)一步刺激活化破骨細(xì)胞而導(dǎo)致骨質(zhì)的吸收［2］。由于骨折椎體成骨細(xì)胞分化能力下降，破骨細(xì)胞骨吸收能力升高等多種因素協(xié)同作用，骨生成與骨吸收的動(dòng)態(tài)平衡失衡，進(jìn)而促進(jìn)骨折椎體周圍骨溶解［3］。本研究通過(guò)建立家兔長(zhǎng)節(jié)段單椎體壓縮性骨折L1節(jié)骨折椎體合并骨溶解（體內(nèi)注射PMMA顆粒造成L1節(jié)骨折椎體骨溶解動(dòng)物模型）模型，觀察鹿瓜多肽注射液在PMMA顆粒誘導(dǎo)長(zhǎng)節(jié)段單椎體壓縮性L1節(jié)骨折椎體骨溶解及破骨細(xì)胞形成及功能中的相互作用，旨在挖掘祖國(guó)中醫(yī)藥治療長(zhǎng)節(jié)段單椎體壓縮性骨折合并骨溶解的優(yōu)勢(shì)，為臨床治療骨折提供安全可靠的藥物?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)健康家兔50只，兔齡180 d，體質(zhì)量1.6～2.0 kg，隨機(jī)數(shù)字表編號(hào)隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、鹿瓜多肽A組、鹿瓜多肽B組，鹿瓜多肽C組，每組10只。動(dòng)物飼養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)要求：應(yīng)保證動(dòng)物福利，盡量減少動(dòng)物用量，手術(shù)麻醉動(dòng)物時(shí)注意保溫，本實(shí)驗(yàn)研究動(dòng)物處置方法符合動(dòng)物倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)［4］。動(dòng)物房溫度18～25℃，濕度在50%～75%之間，每2小時(shí)交替光照。動(dòng)物應(yīng)分籠飼養(yǎng)，喂普通成型飼料并自由飲水，術(shù)后每日觀察動(dòng)物進(jìn)食及飲水量，稱質(zhì)量，及時(shí)清理動(dòng)物糞便。

1.2儀器及藥品SP-Max 3500FL型多功能熒光酶標(biāo)儀（廠家：上海冉超光電科技有限公司。型號(hào)：SPMax 3500FL型）；PMMA顆粒（I-海倍爾康生物醫(yī)學(xué)科技有限公司，規(guī)格：R=0.2～0.5 μm）；兔血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）共調(diào)節(jié)趨化因子1（VCC1）ELISA試劑盒及兔mRNA提取試劑及反轉(zhuǎn)錄試劑（廠家：上海酶聯(lián)生物科技有限公司。產(chǎn)品貨號(hào)分別為：mi028454、 mi028457）。鹿瓜多肽注射液（廠家：哈爾濱譽(yù)衡藥業(yè)股份有限公司。批號(hào)：字H23020001）；

1.3造模參照文獻(xiàn)［5］，家兔經(jīng)腹腔注射10%水合氯醛麻醉（0.3 g/kg），腹部向下臥位固定于兔手術(shù)臺(tái)，用醫(yī)用棉花蘸取硫化鈉溶液（80%）涂抹在兔手術(shù)區(qū)遞去兔毛，碘伏消毒完畢后于靠近家兔左側(cè)脊柱旁椎體L1～L3水平處縱行切開(kāi)皮膚，分離皮下組織、深筋膜及脊間肌肉和韌帶，暴露腹膜后間隙。再鈍性分離椎前肌肉及韌帶，在靠近L1～L2椎間盤處用鋼絲剪從椎體側(cè)前方剪斷L1椎體前緣，用2.5 mm的鉆頭在L1椎體中部一側(cè)平行鉆兩個(gè)孔對(duì)穿椎體，孔間距為10 mm，人為造成L1椎體中部平面皮質(zhì)損傷，動(dòng)物蘇醒后自由覓食運(yùn)動(dòng)及體質(zhì)量相當(dāng)于加載的后應(yīng)力，此應(yīng)力可集中在L1椎體平面造成動(dòng)物長(zhǎng)節(jié)段單椎體壓縮性骨折病變［6］。然后取100 mL PMMA顆粒（30 g/L）懸液注射在L1椎體周圍處，1號(hào)線間斷縫合深筋膜、皮下組織，關(guān)閉綜合皮膚，再次消毒處理。術(shù)后注意預(yù)防感染，可肌肉注射慶大霉素4萬(wàn)u（8萬(wàn)u/支，每日1次，注射7 d），動(dòng)物交替光照促使動(dòng)物運(yùn)動(dòng)及進(jìn)食可以加劇長(zhǎng)節(jié)段單椎體壓縮性骨折病變模型效果，術(shù)后可得長(zhǎng)節(jié)段單椎體壓縮性骨折合并骨溶解動(dòng)物模型，本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统晒β蕿?00%?？瞻讓?duì)照組僅腹腔注射麻醉及手術(shù)區(qū)硫化鈉溶液遞毛，本組不開(kāi)胸手術(shù)作為空白對(duì)照。

1.4給藥在椎體壓縮骨折合并骨溶解術(shù)后10 d，鹿瓜多肽A組在L1節(jié)骨折椎體局部肌肉注射鹿瓜多肽注射液0.5 mL/（kg·d）、鹿瓜多肽B組注射2 mL/（kg·d），鹿瓜多肽C組注射4 mL/（kg·d），空白對(duì)照組及模型對(duì)照組注射等量0.9%氯化鈉注射液，5組動(dòng)物均連續(xù)注射治療4周。

1.5檢測(cè)指標(biāo)及方法1）參照文獻(xiàn)［7］，造模型成功并于治療4周后取家兔耳緣靜脈血暫存，ELISA分析PGE2、IL-1及IL-8水平。方法：造模型成功并治療4周后取家兔耳緣靜脈血靜置60 min，3000 r/min離心20 min，取上清液加入EP管，在-20℃低溫冰箱保存待查。檢測(cè)時(shí)加樣板每孔分別加入樣品、樣品稀釋液、標(biāo)準(zhǔn)品各100 μL，37℃溫育30 min后加入酶標(biāo)偶合液、底物、終止液50 μL等，450 nm波長(zhǎng)讀取其OD值即可。L1節(jié)骨折椎體檢測(cè)項(xiàng)目：取家兔L1節(jié)骨折椎體，采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定不同組家兔VEGF、蛋白表達(dá)的光密度（OD）值。取材及檢測(cè)方法：5組家兔均于治療4周后處死并迅速分離出L1節(jié)骨折椎體后濾紙吸干，并分別編號(hào)置于-30℃冰凍待查。檢測(cè)時(shí)將標(biāo)本研磨，5000轉(zhuǎn)離心20 min，取上清液（待測(cè)樣本），將標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本加入到預(yù)先包被的VEGF單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中，37℃溫育30 min，洗滌后再加入酶標(biāo)工作液，再于37℃下溫育30 min后洗滌除去未結(jié)合的成分，依次加入底物A、B，底物在辣根過(guò)氧化物酶催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品VEGF濃度呈正比，用SP-Max 3500 FL型多功能熒光酶標(biāo)儀于450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定VEGF的OD值。VEGF-mRNA的測(cè)定方法參照文獻(xiàn)［8］，5組家兔L1節(jié)骨折椎體標(biāo)本進(jìn)行RNA提取，采用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）測(cè)定其VEGF-mRNA表達(dá)水平。2）兔L1骨折椎體HE染色病理檢測(cè)方法：參照Warashina等［9］實(shí)驗(yàn)步驟，治療4周后取兔L1骨折椎體，固定，脫鈣、脫水、石蠟包埋，石蠟切片4.5m，分別進(jìn)行HE染色檢測(cè)兔L1骨折椎體骨溶解病理改變情況。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。計(jì)量資料以（±s）表示，兩組間的均數(shù)檢驗(yàn)采用多因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以率表示，組間構(gòu)成比差異檢驗(yàn)采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　果

2.1各組HE染色病理檢測(cè)情況模型對(duì)照組在治療4周后，L1骨折椎體骨吸收明顯增加，骨小梁結(jié)構(gòu)紊亂，骨破壞溶解面積增多，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。鹿瓜多肽B、C兩組在4周治療后，L1骨折椎體骨吸收明顯減少，骨破壞溶解面積降低，與本組治療前及模型對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。鹿瓜多肽A組治療前后差別不大（P＞0.05）。鹿瓜多肽B、C組兩組間比較差別不大（P＞0.05）。

2.2各組治療前后VEGF、VEGF mRNA表達(dá)比較見(jiàn)表1?？瞻讓?duì)照組兔VEGF、VEGF mRNA在L1節(jié)骨折椎體上有一定的表達(dá)，但治療前后無(wú)明顯變化（P＞0.05）。模型對(duì)照組VEGF、VEGF mRNA表達(dá)在L1節(jié)骨折椎體表達(dá)明顯增強(qiáng)，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示L1節(jié)骨折椎體損傷可刺激機(jī)體增強(qiáng)VEGF分泌。鹿瓜多肽B組及鹿瓜多肽C組在4周治療后VEGF、VEGF mRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)，與本組治療前及模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。鹿瓜多肽A組治療前后差別不大（P＞0.05）。鹿瓜多肽B、C組兩組間比較差別不大（P＞0.05）。

2.3各組治療前后PGE2及骨密度比較見(jiàn)表2。空白對(duì)照組PGE2及骨密度治療前后保持在正常水平，且治療前后無(wú)明顯變化（P>0.05）。模型對(duì)照組PGE2明顯升高，骨密度在造模后明顯降低，骨膜溶解，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。鹿瓜多肽B組、鹿瓜多肽C治療4周后，PGE2降低程度較大，骨膜溶解好轉(zhuǎn)，骨密度明顯升高，與本組治療前及模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；鹿瓜多肽A組治療前后差別不大（P>0.05）。鹿瓜多肽B、C組兩組間比較差別不大（P>0.05）。

表1　各組治療前后VEGF、VEGF mRNA表達(dá)比較（分，±s）

表1　各組治療前后VEGF、VEGF mRNA表達(dá)比較（分，±s）

與本組治療前比較，*　P＜0.05；與空白對(duì)照組比較，▲　P＜0.05；與模型對(duì)照組比較，△　P＜0.05。下同。

VEGF（pg/mL）VEGF mRNA治療前　治療4周　治療前　治療4周空白對(duì)照組10　 20.50±2.91 24.24±3.24　 0.14±0.03 0.15±0.04組別　n模型對(duì)照組10鹿瓜多肽A組10 50.47±5.11 52.61±5.29▲　48.51±4.72 53.94±6.37▲　0.57±0.13 0.59±0.14▲　0.59±0.08 0.63±0.18▲　鹿瓜多肽B組10　 49.57±5.41 83.37±7.83*▲△　0.56±0.09 1.14±0.21*▲△　鹿瓜多肽C組10　 50.52±5.87 86.37±8.82*▲△　0.58±0.10 1.15±0.23*▲△

表2　各組治療前后PGE2及骨密度比較（±s）

表2　各組治療前后PGE2及骨密度比較（±s）

組別　n PGE2（pg/mL）　骨密度（g/cm2　）治療前　治療4周　治療前　治療4周空白對(duì)照組10 1.15±0.12 1.10±0.11　 1.83±0.10 1.84±0.11模型對(duì)照組10鹿瓜多肽A組10 2.17±0.19 2.29±0.27▲　2.09±0.17 1.92±0.19▲　0.89±0.07 0.73±0.06▲　0.88±0.07 0.91±0.15▲　鹿瓜多肽B組10　 2.10±0.18 0.95±0.08*▲△　0.87±0.06 1.77±0.17*▲△　鹿瓜多肽C組10　 2.15±0.20 0.89±0.07*▲△　0.85±0.05 1.79±0.18*▲△

2.4各組治療前后IL-1、IL-8水平比較見(jiàn)表3?？瞻讓?duì)照組兔IL-1、IL-8治療前后無(wú)明顯變化（P > 0.05）。模型對(duì)照組IL-1、IL-8明顯增強(qiáng)，與空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示損傷可刺激機(jī)體增強(qiáng)IL-1、IL-8分泌。鹿瓜多肽B組及鹿瓜多肽C組在4周治療后IL-1、IL-8明顯降低，與本組治療前及模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。鹿瓜多肽A組治療前后無(wú)明顯變化（P>0.05）。鹿瓜多肽B、C組兩組間比較差別不大（P>0.05）。

表3　各組治療前后IL-1及IL-8水平比較（pg/mL，±s）

表3　各組治療前后IL-1及IL-8水平比較（pg/mL，±s）

IL-1IL-6治療前　治療4周　治療前　治療4周空白對(duì)照組10　 21.84±2.20 20.87±2.22　 32.28±3.30 33.02±3.17組別　n模型對(duì)照組10鹿瓜多肽A組10 31.06±3.12 39.89±3.11▲　32.08±3.19 35.92±3.79▲　40.21±3.59 50.38±4.83▲　41.49±3.63 42.34±3.45▲　鹿瓜多肽B組10　 31.03±3.16 24.79±2.27*▲△　40.89±3.57 30.97±3.41*▲△　鹿瓜多肽C組10　 33.07±3.17 21.83±2.12*▲△　41.84±3.56 29.91±3.04*▲△

3　討　論

鹿瓜多肽注射液是從鹿科動(dòng)物梅花鹿的骨骼和葫蘆科植物甜瓜的干燥成熟種子中提取的多肽注射液類生物活性因子合成的一種復(fù)方滅菌注射液，富含骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（FGF）等多種骨誘導(dǎo)多肽類因子，其甜瓜籽提取物中有多種游離氨基酸和有機(jī)鈣、磷。鹿瓜多肽注射液中含有的骨誘導(dǎo)多肽類生物因子可調(diào)節(jié)骨代謝，刺激成骨細(xì)胞增殖，促進(jìn)新骨形成，能有效刺激軟骨和成骨細(xì)胞的分化及增長(zhǎng)、促進(jìn)骨痂形成及骨折修復(fù)愈合［10］。鹿瓜多肽注射液中的甜瓜籽提取物還可降低骨折局部毛細(xì)血管通透性，減少炎性浸潤(rùn)及滲出，調(diào)節(jié)鈣磷代謝，增加骨鈣沉積；防止骨質(zhì)疏松以及抗炎鎮(zhèn)痛抗風(fēng)濕等作用［11］。長(zhǎng)節(jié)段單椎體壓縮性骨折以腰椎L1~L5多見(jiàn)，以50歲以上的絕經(jīng)老年婦女好發(fā)，出現(xiàn)骨折多因脊柱椎體骨質(zhì)疏松，脊柱椎體終板損傷，椎間盤退行性變，流行病學(xué)調(diào)查顯示其發(fā)生率達(dá)26%以上［12］。

本研究結(jié)果示，模型對(duì)照組兔在造模成功后，其VEGF、VEGF mRNA陽(yáng)性表達(dá)均有不同程度提高，說(shuō)明椎體長(zhǎng)節(jié)段單椎體壓縮性骨折創(chuàng)傷可在一定程度上刺激機(jī)體VEGF的及VEGF mRNA表達(dá)水平。其PGE2、IL-1及IL-8均明顯增高，說(shuō)明椎體長(zhǎng)節(jié)段單椎體壓縮性骨折時(shí)植入PMMA這類磨損顆粒可明顯刺激骨折周圍組織，造成大量炎性細(xì)胞聚集，這些炎性細(xì)胞可分泌大量的炎癥因子如PGE2、IL-l及IL-8等，并進(jìn)一步刺激活化破骨細(xì)胞而導(dǎo)致骨吸收。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)VEGF具有增加微、小靜脈血管的通透性、促使血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂增殖及誘導(dǎo)血管再生等作用［13］。VEG其結(jié)構(gòu)和功能與原發(fā)現(xiàn)的血管通透性因子（VPF）一致，故稱為VEGF/VPF［14］，它是一種高度特異性的促血管生長(zhǎng)因子［15］，可促進(jìn)多種血管活性物質(zhì)合成、血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖遷移及再生，參與骨折部位動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)形成的調(diào)節(jié)［16］，故VEGF在臨床上常作為血管內(nèi)皮功能的重要指標(biāo)之一。本研究中，在肌肉注射鹿瓜多肽注射液治療4周后，鹿瓜多肽B、C組VEGF及mRNA陽(yáng)性表達(dá)較模型對(duì)照組進(jìn)一步明顯增強(qiáng)，提示鹿瓜多肽注射液具有促進(jìn)椎體損傷時(shí)VEGF的分秘的作用，這與彭昊等［17］研究鹿瓜多肽注射液誘導(dǎo)缺骨折愈合過(guò)程中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)，促進(jìn)骨折局部組織血管再生，促進(jìn)受損血管內(nèi)皮修復(fù)的功能一致。鹿瓜多肽中甜瓜籽提取物能降低骨折局部毛細(xì)血管通透性，減少炎性因子IL-l、IL-8、PGE2等浸潤(rùn)及滲出，恢復(fù)局部血運(yùn)，抑制機(jī)體PGE2的合成與釋放而達(dá)到止痛作用。在促進(jìn)骨折早期愈合過(guò)程中，甜瓜籽提取物與BMPs、FGF等骨誘導(dǎo)多肽生物因子可促進(jìn)骨原性生長(zhǎng)因子合成，為骨細(xì)胞合成BMPs、FGF等骨源性生物因子提供原料，具有明顯的協(xié)同作用［18］，可促進(jìn)骨源性生物因子的合成及鈣磷代謝，維持骨容量，增加骨鈣含量，增強(qiáng)骨密度。同時(shí)，鹿瓜多肽B、C兩組靜脈血PGE2、IL-1及IL-8水平明顯降低，這是由于椎體長(zhǎng)節(jié)段單椎體壓縮性骨折時(shí)植入PMMA這類磨損顆粒后可刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生多種炎性因子，如IL-l、IL-8及PGE2等，IL-l、IL-8及PGE2等炎性因子在誘導(dǎo)細(xì)胞增殖形成及骨吸收等方面起著明顯的誘導(dǎo)作用［19］。破骨細(xì)胞是造成骨吸收溶解的重要細(xì)胞，PMMA磨損顆粒促使破骨細(xì)胞的分化與增殖，直接產(chǎn)生大量促炎性遞質(zhì)和蛋白水解酶類，尤其是IL-l、IL-8、PGE2等，使破骨細(xì)胞前體細(xì)胞向破骨細(xì)胞的分化增值，并最終導(dǎo)致植入PMMA磨損顆粒骨折椎體溶解。在經(jīng)過(guò)鹿瓜多肽治療4周后，鹿瓜多肽B、C兩組靜脈血PGE2、IL-1及IL-8水平明顯降低，提示鹿瓜多肽注射液可能阻止PMMA磨損顆粒造成的炎性浸潤(rùn)，抑制PMMA這類磨損顆粒刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，降低炎性因子多種炎性因子IL-l、IL-8、PGE2等的分泌與合成，進(jìn)而抑制破骨細(xì)胞的分化與增殖，減少骨吸收及溶解。

綜上所述，鹿瓜多肽注射液可促進(jìn)兔長(zhǎng)節(jié)段單椎體壓縮性骨折合并骨溶解愈合過(guò)程中VEGF及VEGF mRNA陽(yáng)性表達(dá)，增加L1節(jié)骨折椎體局部組織血液供應(yīng)，促使L1節(jié)骨折椎體周圍組織血管內(nèi)皮新生，降低PGE2、IL-1及IL-8水平以減輕炎癥反應(yīng)，調(diào)節(jié)兔L1節(jié)骨折椎體組織細(xì)胞代謝及平衡，抑制骨溶解而增加骨密度，對(duì)骨折椎體骨痂形成及維持成骨及破骨過(guò)程的平衡穩(wěn)定具有明顯的促進(jìn)作用。

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The Effects of Cervus and Cucumis Polypeptide Injection on VEGF and PMMA Particles Induced Osteol-ysis of Long segmental Single Vertebral Compression Fractures

FENG Yanqin，JIANG Xuelian，WANG Wenjie，et al.
Taihe Hospital of Shiyan，Hubei，Shiyan 442000，China.

【Abstract】Objective：To observe the effects of cervus and cucumis polypeptide injection on VEGF and PMMA particles induced osteolysis of long segmental single vertebral compression fractures. Methods：Among 50 healthy rabbits，40 were randomly divided into the model control group，and cervus and cucumis polypeptide A，B，C group. The surgical method was used to make animal model of long segmental single vertebral compression fractures with osteolysis，and the surrounding tissue was injected with PMMA particles. The rest 10 rabbits were designed as the blank control group. 4 weeks after operation，group A，B，and C took the local muscle injection，and the control group were treated with the same volume of physiological saline. The rabbit plague immunohistochemical staining and image analysis method was used to determine VEGF and VEGFmRNA expression of the rabbit L1 vertebral fractures；ELISA was used to detect levels of serum PGE2，IL-1 and IL-8 and image was used to detect fracture vertebral bone mineral density and HE staining pathological detection of rabbit L1 vertebral osteolysis pathological changes. Results：4 weeks after treatment，in group B and C，the VEGF and VEGF mRNA in rabbit L1 fracture vertebral positive expression and bone density were significantly enhanced，and PGE2，IL-1，IL-8L1 level and pathological examination of rabbit L1 section fracture vertebral osteolysis was significantly reduced. Compared with the treatment group and the model control group，the difference was statistically significant（P＜0.05）. There was no significant change in group A. C and B groups were compared，without statistical significance （P＞0.05）. Conclusion：Cervus and cucumis polypeptide injection can promote the positive expression of EGFand VEGFmRNA in the agglutination of long segmental single vertebral compression fracture associated with osteolysis in rabbit，increase blood supply of L1 vertebral fracture local tissue，promote L1 joint fracture and vertebral surrounding tissue vascular endothelial newborn，reduce the level of PGE2，IL-1 and IL-8 to reduce inflammatory reaction，regulate L1 joint fracture and vertebral body tissue metabolism and balance，inhibit osteolysis to increase bone density，with a promoting effect on vertebral fracture callus formation，maintaining the balance and the stability of the bone forming and breaking process.

【Key words】Long segmental single vertebral compression fractures；Cervus and cucumis polypeptide injection；Rabbit L1 vertebral fractures；Vascular endothelial growth factor；Bone mineral density；Osteolysis

中圖分類號(hào)：R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1004-745X（2016）02-0208-05

doi：10.3969/j.issn.1004-745X.2016.02.007

*基金項(xiàng)目：湖北省科技廳項(xiàng)目（2013cfc037）

通信作者△（電子郵箱：951777718@qq.com）

收稿日期（2015-08-21）