多肽HM-3對(duì)人非小細(xì)胞肺癌裸鼠移植瘤抑制作用研究

程昊冉，王佳藝，吳小東，郝靜超，羅燕平，劉　晨，胡加亮，徐寒梅

(中國(guó)藥科大學(xué)，多肽藥物創(chuàng)制工程研究中心，江蘇 南京　210009)

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多肽HM-3對(duì)人非小細(xì)胞肺癌裸鼠移植瘤抑制作用研究

程昊冉，王佳藝，吳小東，郝靜超，羅燕平，劉晨，胡加亮，徐寒梅

(中國(guó)藥科大學(xué)，多肽藥物創(chuàng)制工程研究中心，江蘇 南京210009)

摘要：目的>檢測(cè)HM-3類不同血管生成抑制劑治療人非小細(xì)胞肺癌裸鼠移植瘤的藥效學(xué)，考察血管生成抑制劑與腫瘤微環(huán)境的相互作用，為臨床確定治療方案提供參考和依據(jù)。方法建立人非小細(xì)胞肺癌A549的裸鼠移植瘤模型，以多西他賽(10 mg·kg-1)為陽(yáng)性對(duì)照藥物，評(píng)價(jià)了在腫瘤體積≥300 mm3給予有效、過(guò)高劑量HM-3和貝伐單抗對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用。結(jié)果動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，腫瘤的體積≥300 mm3給藥，陽(yáng)性對(duì)照組多西他賽具有很好的抗腫瘤活性。G2多西他賽(10 mg·kg-1)組的瘤重抑瘤率為60.80%。G3 HM-3(3 mg·kg-1)組、G4 HM-3(48 mg·kg-1)組、G5 Avastin(5 mg·kg-1)組抑瘤效果不佳，瘤重抑瘤率分別為43.60%、-34.80%、44.40%。結(jié)論由于受腫瘤生長(zhǎng)階段、腫瘤微環(huán)境、作用靶點(diǎn)等影響，血管生成抑制劑HM-3有一定抑制腫瘤生長(zhǎng)的效果，但效果不佳。HM-3抑瘤效果在(0～6 mg·kg-1)范圍內(nèi)存在劑量依賴關(guān)系。而HM-3(48 mg·kg-1)過(guò)高劑量對(duì)人非小細(xì)胞肺癌A549裸鼠移植瘤無(wú)抑制作用，表現(xiàn)促進(jìn)作用。特殊量效關(guān)系提示臨床使用血管抑制劑時(shí)應(yīng)注意使用劑量。

關(guān)鍵詞：多肽HM-3；非小細(xì)胞性肺癌；貝伐單抗；血管生成抑制劑；裸鼠移植瘤模型；腫瘤微環(huán)境；多西他賽

肺癌是世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，且發(fā)病率和死亡率逐年增高。目前中國(guó)肺癌發(fā)病率也已躍居各種惡性腫瘤的首位[1]。非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)是肺癌最常見(jiàn)的組織類型，占全部肺癌的75%～80%，且5年生存率僅為15%[2-3]。雖然化療能顯著延長(zhǎng)患者生存時(shí)間，減輕患者癥狀，改善患者生存質(zhì)量，但化療藥物能夠引起嚴(yán)重的毒副反應(yīng)，且有效率僅為14%～40%。因此尋找一種新型的治療手段是目前研究NSCLC的熱點(diǎn)。

HM-3是我們課題組自主設(shè)計(jì)合成的由18個(gè)氨基酸組成的新型高效血管生成抑制多肽，具有國(guó)家發(fā)明專利授權(quán)( 發(fā)明人: 徐寒梅，專利號(hào):CN1699408)。HM-3能夠阻斷整合素αvβ3的信號(hào)通路，抑制VEGF表達(dá)，抑制內(nèi)皮細(xì)胞遷移和新生血管生成，從而達(dá)到抑制腫瘤生長(zhǎng)的效果。以整合素為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物的研發(fā)已成為當(dāng)前腫瘤研究的熱點(diǎn)[4]。貝伐單抗(商品名Avastin)是美國(guó)Genentech開(kāi)發(fā)的VEGF-A的人源化鼠單克隆抗體，通過(guò)抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的生物學(xué)功能發(fā)揮作用[5]。2006年，貝伐單抗被FDA批準(zhǔn)與化藥聯(lián)合作為治療非鱗狀非小細(xì)胞肺癌的一線治療藥物[6]。多西他賽為半合成的紫杉醇類抗腫瘤藥物，具有周期特異性。多西他賽是FDA批準(zhǔn)的治療非小細(xì)胞肺癌的一線和二線標(biāo)準(zhǔn)治療藥物。前期研究證明，HM-3對(duì)新生血管生成的抑制作用在一定范圍內(nèi)存在劑量依賴關(guān)系。隨著藥物濃度的增大，藥效明顯增加，超過(guò)范圍量效關(guān)系不顯著[7]。本文研究了影響HM-3類血管抑制劑類藥物藥效的因素，為血管抑制劑應(yīng)用于臨床提供指導(dǎo)。

1材料與儀器

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞株

SPF級(jí)BALB/c裸小鼠，由常州卡文斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證許可證號(hào)：SCXK(蘇)2011-0003，合格證號(hào)：201400728。28～42 d日齡，體質(zhì)量18～20 g；♂，每組動(dòng)物數(shù)：每組6只，陰性對(duì)照組加倍。人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞由實(shí)驗(yàn)室保存，已在體外傳代3～15代。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均符合動(dòng)物倫理委員會(huì)標(biāo)準(zhǔn)。

1.2主要藥物與試劑

DMEM培養(yǎng)基(Life technologies公司)；胰蛋白酶(Biosharp公司)；胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司)；青霉素、鏈霉素(Generay Biotech公司)；HM-3(本課題組，批號(hào)：P140522)；多西他賽(江蘇恒瑞制藥有限公司，批號(hào)：13062812)；生理鹽水(山東魯抗辰欣藥業(yè)有限公司，批號(hào)：1207117102 )； 蘋(píng)果酸蘇尼替尼(大連美侖生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：50511)；貝伐單抗注射液(Roche Pharma，批號(hào)：H0129B07)。

2方法

2.1A549人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的培養(yǎng)

復(fù)蘇A549細(xì)胞，用含10% FBS的DMEM培養(yǎng)基， 置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，飽和濕度培養(yǎng)。2 d傳代1次。用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞呈貼壁生長(zhǎng)，剛復(fù)蘇的細(xì)胞生長(zhǎng)略受影響，傳代1～2次細(xì)胞狀態(tài)逐漸恢復(fù)正常。

2.2A549人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立

將非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞株進(jìn)行傳代培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，0.25%胰酶消化，含血清的培養(yǎng)基終止消化，機(jī)械吹打成單細(xì)胞懸液，離心，棄上清。用無(wú)血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)，將細(xì)胞懸液接種于右側(cè)腋窩皮下。接種量為每只裸鼠5×106個(gè)細(xì)胞，每只接種 0.1 mL。密切觀察裸鼠狀態(tài)，5～7 d左右裸鼠皮下可觸及出現(xiàn)白色結(jié)節(jié)，用游標(biāo)卡尺測(cè)量裸鼠移植瘤直徑，14～21 d后待移植瘤體積生長(zhǎng)至300 mm3左右時(shí)，挑選生長(zhǎng)狀態(tài)良好且腫瘤大小均一性較好的荷瘤裸鼠47只，隨機(jī)分成5組，實(shí)驗(yàn)組每組6只，陰性對(duì)照組11只。具體給藥方案如Tab 1。給藥期間，觀察并記錄裸鼠狀態(tài)，測(cè)量裸鼠體重，用游標(biāo)卡尺測(cè)量瘤體積大小，體重和瘤體積每隔1天測(cè)量1次。d 22時(shí)，用頸椎脫臼法處死裸鼠，剝離瘤塊，稱重并計(jì)算抑瘤率，并將瘤組織進(jìn)行免疫組化染色。

2.3給藥方案

隨機(jī)分為G1陰性對(duì)照(生理鹽水)、G2多西他賽(10 mg·kg-1)、G3 HM-3有效劑量(3 mg·kg-1)組、G4 HM-3過(guò)高劑量(48 mg·kg-1)組、G5 Avastin(5 mg·kg-1)組。給藥方案如表所示(Tab 1)。

Tab 1　Dosage regimen

劑量設(shè)置：多西他賽(10 mg·kg-1)、貝伐單抗(5 mg·kg-1)劑量由臨床上藥物有效劑量通過(guò)人與小鼠劑量換算公式計(jì)算得來(lái)；HM-3為國(guó)家1.1類新藥，現(xiàn)已進(jìn)入一期臨床。前期本課題組已探索HM-3的敏感瘤株和藥物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的安全有效范圍，并探索了對(duì)超安全范圍的促生長(zhǎng)和促轉(zhuǎn)移劑量。因此確定HM-3有效劑量(3 mg·kg-1)及 HM-3過(guò)高劑量(48 mg·kg-1)為給藥組劑量[8]。

2.4腫瘤測(cè)量及療效評(píng)價(jià)方法

2.4.1腫瘤體積及體積相對(duì)抑制率腫瘤體積(tumor volume，TV)的計(jì)算公式為：TV=1/2×a×b2，其中a、b分別表示腫瘤的長(zhǎng)徑和短徑，即長(zhǎng)和寬。根據(jù)測(cè)量的結(jié)果計(jì)算出相對(duì)腫瘤體積(relative tumor volume，RTV)，計(jì)算公式為：RTV=Vt/V0。其中V0為分籠給藥時(shí)(即d0)測(cè)量所得腫瘤體積，Vt為每1次測(cè)量時(shí)的腫瘤體積?？鼓[瘤活性的評(píng)價(jià)指標(biāo)為相對(duì)腫瘤增殖率T/C/%，計(jì)算公式如下：T/C/%=TRTV/CRTV×100%，TRTV：治療組RTV；CRTV：陰性對(duì)照組RTV。根據(jù)《細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物非臨床評(píng)價(jià)的技術(shù)指導(dǎo)原則》，評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為T(mén)/C>40%為無(wú)效；T/C≤40%，并經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理與陰性對(duì)照組相比P<0.05為有效。

腫瘤體積抑制率/%=(陰性對(duì)照組平均體積-給藥組平均體積)/陰性對(duì)照組平均體積×100%。每2 d測(cè)一次腫瘤體積，根據(jù)體積抑制率可動(dòng)態(tài)觀察各給藥組的抑瘤效果。

2.4.2腫瘤瘤重及抑瘤率瘤重抑瘤率/%=(陰性對(duì)照組平均瘤重-給藥組平均瘤重) /陰性對(duì)照組平均瘤重×100%。給藥21 d后，治療完成后，裸鼠手術(shù)剖瘤，腫瘤稱重。計(jì)算瘤重抑瘤率。

2.4.3裸鼠體重和存活情況每2 d測(cè)1次裸鼠體重，詳細(xì)觀察并記錄裸鼠體重變化情況和生長(zhǎng)狀態(tài)，旨在檢測(cè)藥物的毒副作用。

2.5免疫組化檢測(cè)

給藥完成后，脫椎處死裸鼠，剖瘤。每組取2～3個(gè)樣本，所有瘤組織均經(jīng)中性甲醛固定、脫水、常規(guī)石蠟包埋組織、切片、pH 6.0檸檬酸抗原修復(fù)緩沖液高溫抗原修復(fù)、BSA封閉，一抗(CD31)4 ℃過(guò)夜，二抗37 ℃孵育、DAB顯色、蘇木精復(fù)染細(xì)胞核、常規(guī)梯度乙醇脫水，最后中性樹(shù)膠脫水封片。顯微鏡鏡檢觀察腫瘤組織中微血管密度(MVD)。微血管密度的計(jì)數(shù)：腫瘤組織中的微血管定位在血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色，陽(yáng)性定位在血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，根據(jù)Weidner法[9]進(jìn)行MVD計(jì)數(shù)，首先在低倍鏡(×100)下觀察整張切片，選3個(gè)微血管數(shù)最多的區(qū)域即“熱點(diǎn)”，腫瘤內(nèi)硬化區(qū)及腫瘤交界處軟組織內(nèi)的微血管不計(jì)數(shù)對(duì)象，在每個(gè)區(qū)域中計(jì)數(shù)一個(gè)高倍鏡(×40)下的微血管數(shù)，取其平均值作為此樣本的MVD值。任何一個(gè)被染為棕黃色的陽(yáng)性內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞簇與相鄰的血管、腫瘤細(xì)胞或其他結(jié)締組織界限分開(kāi)清楚，都被認(rèn)為是一個(gè)能夠計(jì)數(shù)的微血管，管腔大于8個(gè)細(xì)胞或帶有較厚肌層的血管不計(jì)數(shù)[10]。

2.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3結(jié)果

3.1腫瘤體積及體積相對(duì)抑制率

根據(jù)腫瘤體積變化情況看(Fig 1)，治療后7 d各組腫瘤體積開(kāi)始不同程度的增長(zhǎng)。腫瘤體積變化及體積抑制率見(jiàn)Fig 1A、1B，22 d剖瘤時(shí)所測(cè)的體積中，G1陰性組腫瘤體積為(2858.4±294.3) mm3； G2(多西他賽10 mg·kg-1)、G3(HM-3 3 mg·kg-1)、G4(HM-3 48 mg·kg-1)、G5(Avastin 5 mg·kg-1)的腫瘤體積分別為(1123.5 ±109.7)mm3、(1595.1±200.8)mm3、(3774.1±283.9)mm3、(1907.6±317.7)mm3。與陰性組相比，G2、G4組腫瘤體積差異有顯著性(P<0.01)；根據(jù)Fig 1B中的腫瘤體積動(dòng)態(tài)抑制率變化看，G2組在7～21 d期間的抑瘤率比較明顯，在給藥后期尤其明顯。

Fig 1A　Tumor volume

G1:normal saline;G2:Docetaxel(10 mg·kg-1);G3:HM-3(3 mg·kg-1);G4:HM-3(48 mg·kg-1);G5:Avastin(5 mg·kg-1);**P<0.01vscontrol

Fig 1B　Inhibition rate on d 21 according to tumor volume

G1:Normal saline;G2:Docetaxel(10 mg·kg-1);G3:HM-3(3 mg·kg-1;G4:HM-3(48 mg·kg-1;G5:Avastin(5 mg·kg-1)

根據(jù)(Fig 2)的腫瘤體積相對(duì)增殖率變化看，G2(多西他賽10 mg·kg-1)組在7～21 d期間的T/C(%)值下降明顯，在給藥后期尤其明顯。T/C(%)值為37.24%。T/C(%)≤40%，并經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理與陰性對(duì)照組相比P<0.05。

3.2腫瘤瘤重及抑瘤率

G1陰性組瘤重為(2.50±0.12) g，多西他賽(10 mg·kg-1)組瘤重為(0.98±0.14)g，明顯小于陰性組(P<0.01)。據(jù)瘤重計(jì)算出的抑瘤率見(jiàn)Tab 2，其中G2多西他賽(10 mg·kg-1)組的抑瘤率是60.80%，G3 HM-3(有效劑量)3 mg·kg-1和G4 HM-3(過(guò)高劑量)48 mg·kg-1抑瘤率分別是43.60%和-34.80%。 貝伐單抗(5 mg·kg-1)組的抑瘤率是44.40%。

Fig 2　Relative cell proliferation rate T/C(%)

G1: Normal saline;G2: Docetaxel (10 mg·kg-1);G3:HM-3(3 mg·kg-1;G4:HM-3(48 mg·kg-1)*P<0.05vscontrol

Fig 3　Therapeutic effects of antiangiogenic agents on mice

G1: Normal saline;G2:Docetaxel(10 mg·kg-1);G3:HM-3(3 mg·kg-1);G4:HM-3(48 mg·kg-1;G5:Avastin(5 mg·kg-1)

Fig 4　Weight of mice

G1: Normal saline;G2:Docetaxel(10 mg·kg-1);G3:HM-3(3 mg·kg-1);G4:HM-3(48 mg·kg-1;G5:Avastin(5 mg·kg-1);**P<0.01vscontrol

3.3裸鼠體重變化及存活情況

體重情況(Fig 4)，陽(yáng)性組多西他賽組給藥后，裸鼠體重有大幅度下降，與陰性組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。表明化藥多西他賽毒副作用明顯；多肽HM-3(有效劑量)組、HM-3(過(guò)高劑量)組、Avastin組的裸鼠體重與陰性組的相比，無(wú)明顯影響。說(shuō)明多肽HM-3和Avastin的毒性較低。從動(dòng)物存活情況看，各組動(dòng)物全部存活。

Tab 2　Tumor weight and inhibition rate

*P<0.05，**P<0.01vsControl group

3.4免疫組化染色

如Tab 3、Fig 5所示，陰性組MVD為(29.43±5.42)，HM-3(3 mg·kg-1)和HM-3(48 mg·kg-1)MVD分別為(25.16±3.22)和(34.26±2.46)，與陰性組對(duì)比，差異具有顯著性，證明HM-3在有效劑量下對(duì)腫瘤新生血管有抑制作用。過(guò)高劑量HM-3組微血管密度高于陰性組，證明過(guò)高劑量HM-3無(wú)抑制血管作用。多西他賽(10 mg·kg-1)組MVD為(20.33±3.13)。

4討論

1971年，F(xiàn)olkman等首先提出腫瘤生長(zhǎng)與血管新生密切相關(guān)的概念。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤血管新生對(duì)其生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移有重要意義，并且大部分腫瘤預(yù)后與血管新生有關(guān)[11]。血管生成抑制劑類藥物與傳統(tǒng)化療藥物相比，具有毒副作用低、高效、抗腫瘤譜廣、靶向性強(qiáng)和不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)。通過(guò)抑制腫瘤血管新生的形成，并且切斷腫瘤血供而使腫瘤組織因缺氧而被破壞，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，血管生成抑制劑類藥物在多學(xué)科治療NSCLC領(lǐng)域具有廣闊的前景。HM-3是具有整合素親和性的一種新型高效血管生成抑制多肽，本課題組探索了其與傳統(tǒng)化藥聯(lián)用的抗腫瘤藥效活性，試驗(yàn)建立多種癌癥的裸鼠移植瘤模型，根據(jù)臨床前抗腫瘤藥效學(xué)方法評(píng)價(jià)聯(lián)合用藥的抑瘤作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與單獨(dú)用藥相比，聯(lián)合用藥組的抑瘤效果更好。實(shí)驗(yàn)證明，HM-3與化藥聯(lián)合用藥后，不但能增加療效，同時(shí)也能減少化藥的使用劑量，從而減少毒副作用[12]。

本課題組前期進(jìn)行了人非小細(xì)胞肺癌A549裸鼠移植瘤體積<100 mm3時(shí)，給予HM-3類型不同血管生成抑制劑類藥物的藥效學(xué)研究。藥效學(xué)結(jié)果顯示，陽(yáng)性對(duì)照多西他賽組對(duì)人非小細(xì)胞肺癌A549裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的抑制率為83.63%，多肽HM-3有效劑量組 (3 mg·kg-1)的抑制率為71.62%，Avastin組的抑制率為76.05%。HM-3過(guò)高劑量組(48 mg·kg-1) 時(shí)，對(duì)人非小細(xì)胞肺癌A549裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)無(wú)抑制作用，甚至出現(xiàn)促進(jìn)作用。說(shuō)明腫瘤初期階段給予HM-3類血管生成抑制劑類藥物抑瘤效果良好[13]。本試驗(yàn)探討了人非小細(xì)胞肺癌A549裸鼠移植瘤體積≥300 mm3時(shí)，HM-3類血管生成抑制劑類藥物的藥效學(xué)研究。結(jié)果顯示，陽(yáng)性對(duì)照多西他賽組有很好的抗腫瘤活性，與陰性組比較，差異具有顯著性(P<0.01)。整合素阻斷劑HM-3有效劑量(3 mg·kg-1)組和單抗Avastin(5 mg·kg-1)組，由于給藥時(shí)腫瘤體積較大，血管生成抑制劑類藥物抑瘤效果不明顯，HM-3過(guò)高劑量(48 mg·kg-1)甚至促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。說(shuō)明在給予HM-3類血管生成抑制劑類藥物治療時(shí)，最佳的介入治療時(shí)期和合理給藥劑量很重要。

Tab 3　Microvessel density(CD31)

Microvessel density(CD31),G1:Normal saline;G2:Docetaxel(10 mg·kg-1);G3:HM-3(3 mg·kg-1);G4:HM-3(48 mg·kg-1);G5:Avastin(5 mg·kg-1).*P<0.05,**P<0.01vsG1

Fig 5　Microvasculature of each histological grade by CD 31 immunostaining(×200)

G1:Normal saline;G2:Docetaxel(10 mg·kg-1);G3:HM-3(3 mg·kg-1);G4:HM-3(48 mg·kg-1);G5:Avastin(5 mg·kg-1)

綜合分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，Avastin體現(xiàn)出了一定的抑瘤效果，這與藥物介入的階段有關(guān)。前期實(shí)驗(yàn)表明，在腫瘤體積小于100 mm3時(shí)給藥，Avastin的抑瘤效果較好。Avastin在腫瘤體積大于300 mm3時(shí)給藥，此時(shí)腫瘤內(nèi)部生長(zhǎng)緩慢，只有腫瘤外部血管豐富，還繼續(xù)生長(zhǎng)，所以Avastin只能有效抑制腫瘤外部的生長(zhǎng)，不能體現(xiàn)出較高的抑瘤效果。多肽HM-3作為整合素阻斷劑類抗腫瘤多肽，前期研究結(jié)果顯示，HM-3抑瘤效果在(0～6 mg·kg-1)范圍內(nèi)存在劑量依賴關(guān)系。而HM-3(48 mg·kg-1)過(guò)高劑量對(duì)人非小細(xì)胞肺癌A549裸鼠移植瘤無(wú)抑制作用，甚至出現(xiàn)促進(jìn)作用，這也與免疫組化結(jié)果相吻合(Fig 5)。HM-3特殊的量效關(guān)系與其作用機(jī)制是相關(guān)的，HM-3是多靶點(diǎn)的分子，可作用于整合素的信號(hào)通路，對(duì)VEGF信號(hào)通路也有影響。動(dòng)物體內(nèi)的各種信號(hào)通路是處于一個(gè)平衡狀態(tài)下的，當(dāng)有效劑量藥物介入動(dòng)物體內(nèi)時(shí)，可改變動(dòng)物體內(nèi)的平衡狀態(tài)；當(dāng)藥物濃度過(guò)高時(shí)，動(dòng)物體內(nèi)會(huì)出現(xiàn)調(diào)節(jié)機(jī)制，“補(bǔ)償”藥物的作用結(jié)果，甚至?xí)霈F(xiàn)相反的作用，因此HM-3的抑瘤效果不呈現(xiàn)劑量依賴性。本研究的結(jié)果表明，HM-3類血管抑制劑與化藥比較作用機(jī)制不相同，單獨(dú)使用或與化藥聯(lián)合使用都可減少化藥的毒副作用。另外使用血管生成抑制劑類藥物抗腫瘤時(shí)，還要受到動(dòng)物品系、瘤株、腫瘤體積和介入時(shí)間等多種因素影響，尤其是劑量與藥效的關(guān)系有時(shí)不呈線性關(guān)系，因此臨床上使用這些藥物時(shí)，必須確定上述影響因素，才能保證安全用藥。

(致謝：本實(shí)驗(yàn)在中國(guó)藥科大學(xué)多肽藥物創(chuàng)制工程研究中心完成。感謝導(dǎo)師徐寒梅教授為本實(shí)驗(yàn)提供充足的資金支持和整體的思路指導(dǎo)；感謝胡加亮老師的精心指導(dǎo)；感謝趙長(zhǎng)宏、何俊勁、郝靜超、王佳藝、吳曉東同學(xué)的盡心協(xié)助。)

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Antitumor effects of peptide HM-3 against non-small cell lung cancer xenografts in nude mice

CHENG Hao-Ran, WANG Jia-Yi, WU Xiao-Dong,HAO Jing-Chao, LUO Yan-Ping, LIU Chen, HU Jia-Liang, XU Han-mei

(TheEngineeringResearchCenterofPeptideDrugDiscoveryandDevelopment,ChinaPharmaceuticalUniversity,Nanjing210009,China)

Abstract:AimsTo evaluate the pharmacodynamic efficacy of different types of antiangiogenic agents as HM-3 on a non-small cell lung cancer xenografts tumor model . To explore the interaction between the antiangiogenic agents and the tumor microenvironment, and to offer suggestions for clinical therapy. MethodsThe non-small cell lung carcinoma xenograft model was established in Balb/c nude mice. The model mice were treated with Docetaxel(10 mg·kg-1) as the positive control. The mice were parallelly treated with, HM-3 at the doses of 3 mg·kg-1and 48 mg·kg-1and, Avastin(5 mg·kg-1). The parameters include tumor volume, tumor weight and immunohistochemical analysis.ResultAnimal experiments showed that docetaxel had good anti-tumor activity. Tumor growth inhibition by tumor weight of G2 docetaxel(10 mg·kg-1) group was 60.80%. Tumor growth inhibition by tumor weight of G3 HM-3(3 mg·kg-1) group, G4 HM-3(48 mg·kg-1) group , G4 Avastin(5 mg·kg-1) group, were 43.60%, -34.80%, 44.40%, respectively.ConclusionThe antigiogenic effect is affected by tumor growth stage, tumor microenvironment and their working mechanisms. Angiogenesis inhibitors HM-3 has a certain effect of inhibiting tumor growth, but to little avail. HM-3 shows on inhibitory effect in a dose-dependent manner at the doses of 0～6 mg·kg-1. HM-3 at a high dose of 48 mg·kg-1has no inhibitory but promoting effects on human non-small cell lung carcinoma A549 xenografts in nude mice . Special dose-effect relationship indicates that dosage should be paid attention to in the clinical use of blood vessel inhibitors.

Key words:peptide HM-3; non-small cell lung cancer; Avastin; angiogenesis inhibitor; xenografts in nude mice; tumor microenvironment; docetaxel

收稿日期:2016-02-23,修回日期:2016-03-10

基金項(xiàng)目：國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)資助項(xiàng)目(No.SQ2011SF11B02030)

作者簡(jiǎn)介：程昊冉(1990-)，女，碩士生，研究方向：腫瘤藥理學(xué)，E-mail：hrcheng1887@163.com；

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2016.06.014

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1001-1978(2016)06-0806-06

中國(guó)圖書(shū)分類號(hào)：R-332；R364.3；R734.205.3；R977.6； R979.1

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-5-25 15:39網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160525.1539.028.html

徐寒梅(1966-)，女，博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：抗腫瘤新藥研究開(kāi)發(fā)，通訊作者，E-mail：13913925346@126.com