樹突細胞因子誘導的殺傷細胞治療老年中晚期食道癌的效果及對外周血淋巴細胞亞群的影響

周　寧　曲顏麗　唐　勇

(新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院消化科，新疆　烏魯木齊　830000)

樹突細胞因子誘導的殺傷細胞治療老年中晚期食道癌的效果及對外周血淋巴細胞亞群的影響

周寧曲顏麗唐勇

(新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院消化科，新疆烏魯木齊830000)

〔摘要〕目的探討樹突細胞因子誘導的殺傷細胞(DC-CIK)治療老年中晚期食道癌的效果及對外周血淋巴細胞亞群的影響。方法隨機抽取該院收治的老年中晚期食道癌患者8例，分別采集患者外周血單個核細胞，在體外誘導產(chǎn)生DC細胞和CIK細胞，分3次回輸給對應的患者，觀察治療效果，分別在第1次回輸1 w前以及每次回輸結(jié)束后1個月采集患者的外周血，用流式細胞儀檢測患者淋巴細胞亞群的變化狀況。結(jié)果經(jīng)過治療，有4例完全緩解，3例部分緩解，1例出現(xiàn)輕微體溫升高；同時各患者外周血淋巴細胞亞群各指標均明顯好轉(zhuǎn)，以CD3+CD4+CD25+、Th1和Th2變化最為顯著。結(jié)論采用DC-CIK細胞方法治療老年中晚期食道癌效果顯著，可有效改善患者免疫抑制狀態(tài)，提高機體免疫效應，同時淋巴細胞亞群中各指標明顯好轉(zhuǎn)，無嚴重不良反應。

〔關鍵詞〕樹突細胞因子誘導的殺傷細胞； 中晚期食道癌；淋巴細胞亞群

目前治療食道癌的方法成效并不顯著，藥物對腫瘤細胞和正常細胞的分辨能力差，容易產(chǎn)生各種不良反應，而且腫瘤細胞極易產(chǎn)生毒性，損害機體的免疫功能。最大程度保存患者免疫細胞的活性是治療老年中晚期食道癌的核心。過繼細胞治療中晚期食道癌中最具代表性的就是樹突細胞(DC)、細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK)。有研究〔1〕指出應用DC或者CIK治療老年食道癌能起到免疫性和非免疫性雙重抵抗腫瘤細胞的功效。本研究旨在探究DC-CIK細胞治療老年中晚期食道癌的效果及對外周血淋巴細胞亞群的影響。

1對象與方法

1.1一般資料選取新疆腫瘤醫(yī)院消化內(nèi)科收治的老年中晚期食道癌患者8例，男5例，女3例，年齡64～75 歲，TNM分期：Ⅲ期3例，Ⅳ期5例。納入標準：①所有經(jīng)電子胃鏡檢查活檢明確病理組織學診斷確切，食道鋇餐、淺表淋巴結(jié)彩超及胸部CT等檢查診斷為中晚期食道癌；②治療前1個月內(nèi)未行放化療及免疫治療；③患者年齡≥60歲，預計生存期>5個月；④無嚴重的細菌、病毒感染；⑤患者本人和家屬均知情同意；⑥KPS評分〔2〕≥60分。排除標準：①正在接受放療、化療或其他全身性抗腫瘤治療方式者；②同時有其他惡性腫瘤或傳染性疾病者；③經(jīng)過手術(shù)，傷口并未完全愈合者；④對生物制品過敏者；⑤實驗指標異常者。

1.2方法

1.2.1儀器與試劑倒置顯微鏡(日本Olympus公司)；流式細胞儀(型號為FACS Vantage SE，美國Thermo公司)；生物安全柜和細胞培養(yǎng)箱(美國BD公司)；GT-T551(日本Takara公司)；臨床使用標準rGM-CSF、LTS1077、和rIL-4(天津灝洋生物制品有限公司)；淋巴細胞分離液(杭州四季青生物工程材料有限公司)；人血清蛋白(美國Qiagen公司)。

1.2.2DC和CIK細胞分離及培養(yǎng)方法①利用細胞分離機在無菌的環(huán)境下取患者全血50～60 ml，加入淋巴細胞分離液來制備單個核細胞；②在37℃恒溫條件下，CO2含量為5%左右培養(yǎng)箱中培養(yǎng)單個核細胞大約3 h，收集培養(yǎng)箱中的懸浮細胞，準備培養(yǎng)CIK細胞；③取貼壁細胞加入白細胞介素(IL)-4 500 U/ml、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)1 000 U/ml，放在37℃恒溫以及飽和濕度條件下，CO2含量約5%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 d，更換培養(yǎng)液，加入腫瘤壞死因子(TNF)-α 100 ng/ml培養(yǎng)3 d〔3〕，懸浮的成熟DC細胞備用；④將步驟②中收集到的懸浮細胞按照1×106/ml的密度種在培養(yǎng)瓶中，加入IL-4 2 500 U/ml、干擾素(IFN)-γ 100 ng/ml，24 h后加入Anti-CD3 單抗50 ng/ml〔4〕，在第11天收集成熟的CIK細胞備用。

1.2.3DC-CIK治療方法所有患者均在采集細胞后的第7、9、11、13天分6次予1 ml DC細胞液進行相應注射，分別為雙側(cè)鎖骨下、雙側(cè)腋下以及雙側(cè)腹股溝區(qū)，每位患者注射的總DC細胞數(shù)為3×107～10×107，在采集細胞后的第11、13天靜脈回輸2×109～15×109的CIK細胞。

1.3檢測指標分別在細胞回輸治療前1 w和治療后1個月抽取患者外周血2 ml(需要進行抗凝處理)，采用流式細胞檢測儀測定淋巴細胞的免疫功能指標： CD3+CD4+CD25+、Th1和Th2的動態(tài)變化。同時對本組患者治療后出現(xiàn)的異常體征如惡心、嘔吐、體溫升高、頭暈目眩等進行分析。

1.4療效評定標準兩組患者治療1個月后行CT掃描診斷，評估疾病狀態(tài)和治療效果；3個月后再一次進行評估，之后每3個月復查一次。在此過程中，如果患者出現(xiàn)異常反應，隨時復查。按照腫瘤療效評價標準〔5〕分為：完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、 病情穩(wěn)定(SD)、 病情進展(PD)。

1.5統(tǒng)計學分析采用SPSS18.0軟件進行χ2、t檢驗。

2結(jié)果

2.1療效評價本組患者DC-CIK細胞的治療效果(CR 4例、PR 31例、SD 0例，PD 1例)明顯優(yōu)于傳統(tǒng)治療效果(CR 1例、PR 1例、SD 2例、PD 4例；χ2=38.56,2.486,4.861,3.568；均P<0.05)。

2.2治療前后淋巴細胞亞群指標變化情況外周血淋巴細胞亞群各指標治療前和治療3個療程后變化顯著(P<0.05)。見表1。

2.3不良反應8例患者經(jīng)過DC-CIK治療后，1例患者出現(xiàn)體溫升高現(xiàn)象，經(jīng)物理降溫，短時間內(nèi)體溫恢復正常，無其他嚴重不良反應發(fā)生。

表1　外周血淋巴細胞亞群各指標變化±s)

3討論

食道癌起病隱匿，多數(shù)患者就診時已是中晚期。盡管治療食道癌的方式不斷改進，但是食道癌患者5～10年存活率仍在25%以下，通過手術(shù)治療后的復發(fā)率高達約65%。有資料稱〔6〕，DC療法是目前一種很有前途的惡性腫瘤治療手段。有文獻報道〔7〕，使用DC疫苗治療12例胃腸道惡性腫瘤患者后，患者病情均有明顯的好轉(zhuǎn)。還有研究表明〔8〕，DC細胞是已知的功能最強大的抗原遞呈細胞，能分泌出很多種細胞因子，誘導T細胞產(chǎn)生毒性，增強B細胞的增殖活性，激活淋巴細胞的免疫應答系統(tǒng)功能，對腫瘤免疫發(fā)揮至關重要的作用。

CIK細胞是在體外經(jīng)過多種培養(yǎng)細胞因子激活后所獲得的對腫瘤細胞具有巨大殺傷力的T細胞，具有非主要組織相容性復合體(MHC)限制性、高效、廣譜殺死腫瘤細胞活性的免疫作用，它的主要作用機制是殺傷腫瘤細胞的同時增強淋巴細胞增殖、激活淋巴細胞免疫功能等。在惡性腫瘤的臨床研究中發(fā)現(xiàn)，CIK細胞可以較好地控制疾病的發(fā)展和癌細胞的轉(zhuǎn)移。理論上，DC細胞聯(lián)合CIK細胞可以產(chǎn)生非特異性免疫和特異性免疫的雙重抵抗腫瘤細胞作用。本研究結(jié)果表明， DC-CIK細胞聯(lián)合治療中晚期食道癌效果顯著，無明顯不良反應，淋巴細胞亞群各指標也有明顯好轉(zhuǎn)，其中以CD3+CD4+CD25+、Th1和Th2變化最為顯著，可以適當推廣。文中不足之處在于樣本選取稍少，而且DC和CIK細胞培養(yǎng)過程中，受到很多限制。

4參考文獻

1蔡艷榮.DC-CIK聯(lián)合化療在晚期腎癌患者中的綜合應用價值〔J〕.實用癌癥雜志,2015；30(4):559-62.

2譚潔,王彬,何志潔,等.自體DC-CIK細胞治療晚期腎細胞癌的療效〔J〕.中國腫瘤生物治療雜志,2013；20(6):711-6.

3殷先堯,鄭美娟,徐元宏.T細胞亞群與慢性丙型肝炎病毒相關性分析〔J〕.安徽醫(yī)科大學學報,2014；49(3)：327-30.

4張國慶，焦順昌，溫新宇，等.大腸癌患者與正常健康人淋巴細胞表型差異分析〔J〕.細胞與分子免疫學雜志，2012；28(7)：735-7.

5何立香,蔣思卿,彭大為.DC-CIK治療惡性腫瘤的研究進展〔J〕.醫(yī)學綜述,2013；19(1):59-62.

6羅芳,石君.術(shù)后輔助化療聯(lián)合免疫治療對結(jié)腸癌患者外周血T淋巴細胞亞群數(shù)量的影響〔J〕.臨床合理用藥雜志,2015；8(2C):111-2.

7張國慶，趙宏，溫新宇，等.大腸癌患者化療前后淋巴細胞亞群變化〔J〕.中國醫(yī)學科學院學報,2013；35(2):155-60.

8楊蕾,莊蕓,錢錫峰,等.老年免疫性血小板減少癥患者外周血T淋巴細胞亞群檢測及其臨床意義〔J〕.臨床血液學雜志,2015；(3):384-8，391.

〔2015-10-15修回〕

(編輯滕欣航)

基金項目：新疆醫(yī)科大學科研創(chuàng)新基金資助項目(No.XJC201384)；新疆維吾爾自治區(qū)自然科學基金(No.2013211A067)

通訊作者：唐勇(1968-)，男，碩士，主任醫(yī)師，主要從事腫瘤內(nèi)科治療研究。

〔中圖分類號〕R614

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)11-2692-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.11.056

第一作者：周寧(1980-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事腫瘤內(nèi)科治療研究。