右歸飲治療大鼠膝關(guān)節(jié)全層軟骨缺損的研究*

應(yīng)　俊　羅　程　張?jiān)蟆〗鸺t婷，2　肖魯偉，2　童培建，2，3△?。?浙江中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，浙江杭州30053；2.浙江省中醫(yī)骨傷研究所，浙江杭州30053；3.浙江省中醫(yī)院，浙江杭州30053）

?

右歸飲治療大鼠膝關(guān)節(jié)全層軟骨缺損的研究*

應(yīng)俊1羅程1張?jiān)?金紅婷1，2肖魯偉1，2童培建1，2，3△
（1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，浙江杭州310053；2.浙江省中醫(yī)骨傷研究所，浙江杭州310053；3.浙江省中醫(yī)院，浙江杭州310053）

【摘要】目的觀察右歸飲治療SD大鼠膝關(guān)節(jié)全層軟骨缺損的療效，探討其藥物作用機(jī)制。方法取28只SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組、右歸飲組；采用手術(shù)方法對(duì)大鼠膝關(guān)節(jié)股骨髁間軟骨用電鉆鉆孔進(jìn)行全層軟骨缺損造模。右歸飲組術(shù)后每日給予右歸飲灌胃，連續(xù)8周；模型組術(shù)后每日給予等量0.9%氯化鈉注射液灌胃。各組動(dòng)物在術(shù)后第4周、第8周分批處死，收集并作相關(guān)檢測(cè)。結(jié)果形態(tài)學(xué)觀察顯示第4周到第8周模型組軟骨缺損處白色纖維增生填充更加明顯，表面粗糙加重。右歸飲組軟骨缺損處類透明軟骨修復(fù)明顯，表面光滑較平整。組織學(xué)觀察顯示第4周、第8周模型組軟骨缺損處修復(fù)差，纖維增生明顯，表面粗糙不整，軟骨組織成分少。右歸飲組軟骨缺損處軟骨組織修復(fù)較好，關(guān)節(jié)面清晰完整，軟骨組織成分充足，第8周軟骨缺損處修復(fù)好于第4周；Mankin評(píng)分顯示第4周、第8周右歸飲組軟骨缺損修復(fù)情況好于同期模型組（P＜0.05）；Ⅱ型膠原免疫組化結(jié)果顯示，第4周、第8周右歸飲組修復(fù)組織中軟骨主要成分Ⅱ型膠原纖維蛋白陽(yáng)性，同期模型組均為陰性。結(jié)論右歸飲對(duì)關(guān)節(jié)全層軟骨缺損具有良好的修復(fù)治療作用，為臨床治療關(guān)節(jié)全層軟骨缺損提供新的治療思路。

【關(guān)鍵詞】右歸飲關(guān)節(jié)軟骨缺損軟骨下鉆孔

關(guān)節(jié)軟骨是一種特異性的結(jié)締組織，由細(xì)胞、水分和基質(zhì)組成。它的主要功能是保護(hù)軟骨下骨吸收的影響，以及骨關(guān)節(jié)間的連接結(jié)構(gòu)，主要成分是細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）及其所包圍的軟骨細(xì)胞。細(xì)胞外基質(zhì)主要是由Ⅱ型膠原纖維、蛋白多糖和水組成［1］。在不同年齡段，骨關(guān)節(jié)病、外傷等均可能發(fā)生，造成軟骨破壞、軟骨損傷及多種臨床表現(xiàn)［2］。由于關(guān)節(jié)軟骨缺乏神經(jīng)、血管、淋巴分布及其系統(tǒng)性調(diào)節(jié)，軟骨缺損后，特別是全層軟骨缺損，由于其自身特點(diǎn)導(dǎo)致其再生能力差，通常后期發(fā)展為骨性關(guān)節(jié)炎［3-5］。目前尚無(wú)方法能夠再生持久的透明軟骨來(lái)取代軟骨缺損。各種實(shí)驗(yàn)和臨床方法已開始研究軟骨缺損的修復(fù)，包括微骨折、關(guān)節(jié)成形術(shù)、鉆孔、骨軟骨移植、和自體軟骨細(xì)胞移植（ACI）等，然而目前這些方法也具有缺點(diǎn)［6-10］。例如，微骨折導(dǎo)致形成的透明軟骨纖維化；自體軟骨移植可能有并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)；ACI價(jià)格昂貴且需要進(jìn)行二次手術(shù)；為了使受損的關(guān)節(jié)軟骨完全恢復(fù)其原有的組織學(xué)和生物力學(xué)特性，仍然需要更進(jìn)一步的研究［11］。而傳統(tǒng)中醫(yī)藥在關(guān)節(jié)軟骨損傷修復(fù)中已被眾多基礎(chǔ)試驗(yàn)及臨床實(shí)踐中證實(shí)具有良好的療效。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)應(yīng)用補(bǔ)腎方右歸飲，觀察其對(duì)全層軟骨缺損的軟骨修復(fù)并探討部分機(jī)制，為臨床治療關(guān)節(jié)軟骨全層缺損提供新的治療思路。現(xiàn)報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康SPF級(jí)SD大鼠28只，4周齡，體質(zhì)量（80±5）g（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供）。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)動(dòng)物的處置符合浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處置倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：ACXK（滬）2013-0016。

1.2藥物與試劑右歸飲由熟地黃9 g，炒山藥6 g，山茱萸肉3 g，枸杞子6 g，姜炙杜仲6 g，肉桂6 g，制附子9 g，炙甘草6 g組成，藥物飲片均購(gòu)自杭州華東醫(yī)藥集團(tuán)有限公司。肉桂先提取揮發(fā)油，其余藥加10倍體積水，浸泡2 h，文火煎煮2次，每次1 h。提取液加肉桂油后以比重1∶3濃縮至浸膏，減壓干燥至干膏。最終得1 g干膏含5 g生藥。真空包裝保存?zhèn)溆谩Ｉ鲜鼋嘤烧憬嗅t(yī)藥大學(xué)制劑中心制備，減壓干燥由杭州胡慶余堂制藥廠完成。戊巴比妥鈉（中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司提供，批號(hào)F20020915）；注射用青霉素鈉（華北制藥股份有限公司，批號(hào)F3117217）；0.9%氯化鈉注射液（中國(guó)大冢制藥有限公司，批號(hào)5G70J3）；兔抗鼠Ⅱ型膠原單克隆抗體（美國(guó)Abcam公司）；羊抗兔IgG-HRP二抗（杭州華安公司）。

1.3儀器石蠟包埋機(jī)（thermo，EC350-1）組織脫水機(jī)（sakura，Tissue-Tek VIP5Jr）、組織切片機(jī)（thermo，HM325）、光學(xué)顯微鏡（ZEISS，Scope A1）。

1.4造模方法28只4周齡SD大鼠，1%戊巴比妥鈉按照0.3 mL/100 g劑量腹腔注射麻醉，取仰臥位，兩側(cè)膝關(guān)節(jié)常規(guī)消毒鋪巾，切開皮膚，沿髕韌帶內(nèi)側(cè)切開分離，將髕骨向外側(cè)半脫位，暴露股骨髁部。用電鉆鉆擊股骨髁間窩，造成直徑2 mm的圓形全層軟骨缺損，可見髓腔內(nèi)出血，術(shù)后抗生素沖洗關(guān)節(jié)腔，逐層縫合。

1.5分組及處理28只大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為兩組，每組14只。模型組造模后每日給予右歸飲等量的0.9%氯化鈉注射液灌胃，分批于第4周、第8周處死。右歸飲組按照“人-大鼠體表面積比值”折算成相當(dāng)于人的日用臨床劑量，即含生藥20 g/kg，造模后每天右歸飲灌胃，分批于第4周、第8周處死。

1.6觀察方法1）一般情況觀察。每日給藥前仔細(xì)觀察大鼠的精神狀態(tài)、姿勢(shì)、關(guān)節(jié)活動(dòng)度、皮毛色澤及其變化等全身情況。2）形態(tài)組織學(xué)觀察。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后每組各取7只大鼠雙側(cè)膝關(guān)節(jié)標(biāo)本共14個(gè)，肉眼觀察，隨后10%甲醛溶液固定72 h，進(jìn)行EDTA脫鈣處理，3 d更換脫鈣液1次，共8周，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，常規(guī)切片，行蘇木精-伊紅（HE）染色、阿利新藍(lán)（ABH）染色，觀察原缺損軟骨處新生組織性質(zhì)、表面特性、與正常軟骨連接及細(xì)胞外基質(zhì)蛋白多糖分泌情況等特征。采用文獻(xiàn)［12］Mankin關(guān)節(jié)軟骨組織學(xué)-組織化學(xué)評(píng)分法對(duì)所有標(biāo)本進(jìn)行軟骨損傷程度評(píng)分。3）Ⅱ型膠原免疫組化染色。石蠟包埋組織3 μm切片，置于60℃烘箱烘烤30 min，二甲苯脫蠟，梯度乙醇復(fù)水，浸于3%雙氧水30 min消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，純水洗4次，滴加正常山羊血清封閉液（1∶20），室溫靜置20 min；吸除余液，滴加一抗（1∶80）放濕盒內(nèi)過(guò)夜；PBS洗3次，滴加二抗（1∶1000），室溫靜置30 min，PBS洗3次，滴加DAB顯色液，光鏡下觀察效果滿意后用蒸餾水沖洗，終止染色，樹膠封片。普通光鏡下觀察染色結(jié)果。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SAS9.4統(tǒng)計(jì)軟件分析。計(jì)量資料以（±s）表示，以Wilcoxonsigned-rank test進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　果

2.1兩組大鼠一般情況比較各組實(shí)驗(yàn)大鼠術(shù)后1 d基本恢復(fù)正常進(jìn)食進(jìn)水，切口邊緣腫脹明顯，出現(xiàn)跛行，未出現(xiàn)明顯精神萎靡、食欲不振、反應(yīng)遲鈍等。術(shù)后3 d手術(shù)切口腫脹基本消失。4周后模型組動(dòng)物較為活躍，無(wú)明顯跛行，右歸飲組活動(dòng)活躍，無(wú)跛行。8周后模型組動(dòng)物活動(dòng)良好，無(wú)明顯活動(dòng)障礙；右歸飲組動(dòng)物行走活躍，關(guān)節(jié)活動(dòng)無(wú)殊；所有大鼠切口愈合良好。

2.2兩組大鼠股骨髁軟骨缺損處修復(fù)組織大體觀察結(jié)果比較第4周模型組缺損面仍清晰可見，無(wú)明顯修復(fù)跡象，缺損面有少量深色組織增生填充，表面不整，呈淺凹狀，新生組織質(zhì)軟，與周圍軟骨組織區(qū)別明顯（圖1a箭頭處）；8周模型組缺損面清晰，大量白色組織增生填充，股骨髁間窩間隙狹窄，缺損表面不整，與周圍組織區(qū)別明顯（圖1b箭頭處）；4周右歸飲組軟骨缺損處被白色新生軟骨組織填充，但未完全填充完整，表面較光滑，仍可見缺損面凹陷，缺損區(qū)與周圍軟骨區(qū)別不顯（圖1c箭頭處）；8周右歸飲組軟骨缺損處被白色有光澤的新生組織填平，尤以鉆孔處明顯，表面平整、光滑，表面白亮，與周圍軟骨分界線較清晰可辨（圖1d箭頭處）。

圖1　兩組關(guān)節(jié)軟骨缺損修復(fù)情況大體觀察

2.3各組大鼠股骨髁軟骨缺損處修復(fù)組織組織學(xué)觀察結(jié)果第4周模型組軟骨缺損處軟骨修復(fù)組織以纖維組織為主，缺損處粗糙不規(guī)則，僅見少量的細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)異常，纖維組織填充（圖2a）；第8周模型組軟骨缺損處關(guān)節(jié)面破壞嚴(yán)重，纖維增生，表面粗糙，可見細(xì)胞纖維化，伴有軟骨壞死、軟骨下骨硬化（圖2b）；第4周右歸飲組軟骨缺損處可見修復(fù)軟骨，表面欠光滑，未見明顯纖維增生，各層結(jié)構(gòu)較清晰，新生軟骨細(xì)胞數(shù)量明顯增多，排列已經(jīng)類似正常軟骨（圖2c）；第8周右歸飲組軟骨缺損處修復(fù)軟骨表面較光滑，細(xì)胞纖維化不明顯，各層結(jié)構(gòu)清晰，排列已經(jīng)類似正常軟骨潮線明顯，新生軟骨細(xì)胞數(shù)量增多，形態(tài)正常，但未完全填充缺損區(qū)（圖2d）。

第4周模型組軟骨缺損處軟骨修復(fù)組織多以組織滲出纖維化為主，未見明顯軟骨組織，缺損修復(fù)處關(guān)節(jié)面粗糙（圖3a）；第8周模型組軟骨缺損處關(guān)節(jié)面嚴(yán)重破壞，表面粗糙，組織纖維化嚴(yán)重，軟骨細(xì)胞可見肥大化（圖3b）；第4周右歸飲組軟骨缺損處可見修復(fù)軟骨組織蛋白多糖分布均勻，軟骨組織表面較光滑，關(guān)節(jié)面較模型組平整，未見明顯纖維增生，類似正常軟骨（圖3c）；第8周右歸飲組軟骨缺損處，軟骨組織蛋白多糖完整，軟骨細(xì)胞形態(tài)良好，關(guān)節(jié)面光滑，形態(tài)正常，但未完全填充缺損區(qū)（圖3d）。

圖2　兩組關(guān)節(jié)軟骨缺損修復(fù)組織的蘇木精-伊紅（HE）染色情況（×50）

圖3　兩組關(guān)節(jié)軟骨缺損修復(fù)組織的阿利新藍(lán)（ABH）染色情況（×50）

2.4兩組改良mankin法評(píng)分比較改良mankin法通過(guò)對(duì)軟骨缺損處修復(fù)組織的表面結(jié)構(gòu)、軟骨細(xì)胞形態(tài)、基質(zhì)染色、潮線完整性情況4個(gè)方面進(jìn)行評(píng)分，總分14分，正常關(guān)節(jié)軟骨為0分，總分越高，軟骨質(zhì)量越差。能夠比較客觀評(píng)價(jià)修復(fù)組織的性質(zhì)（表1）。模型組與右歸飲組比較，在第4周時(shí)組間和第8周時(shí)組間都具有顯著性差異（第4周時(shí)組間：P = 0.001，第8周時(shí)組間：P＜0.0001）。同時(shí)，模型組組內(nèi)和右歸飲組組內(nèi)在第4周時(shí)組間和第8周時(shí)組間也分別都具有顯著性差異（模型組P=0.004，右歸飲組P=0.0118）。提示右歸飲能促進(jìn)關(guān)節(jié)軟骨全層缺損的修復(fù)。

2.5兩組大鼠軟骨缺損處修復(fù)組織Ⅱ型膠原免疫組化染色觀察結(jié)果比較第4周、8周模型組軟骨缺損修復(fù)組織Ⅱ型膠原免疫組化染色均為陰性（圖4a、圖4b）；第4周、8周右歸飲組軟骨缺損修復(fù)組織Ⅱ型膠原免疫組化染色呈陽(yáng)性，可見缺損修復(fù)組織呈棕黃色或棕褐色染色（圖4c、圖4d）。

表1　兩組不同周別的Mankin評(píng)分比較（分，±s）

表1　兩組不同周別的Mankin評(píng)分比較（分，±s）

與本組治療前比較，*　P＜0.05。

組別　n4周　8周模型組14　 9.29±1.9011.43±1.45右歸飲組14　 7.00±1.30*　5.79±1.05*

圖4　各組關(guān)節(jié)軟骨缺損修復(fù)組織Ⅱ型膠原免疫組化染色結(jié)果情況（×50）

3　討　論

骨關(guān)節(jié)病、外傷等均可能造成關(guān)節(jié)軟骨破壞、軟骨損傷及多種臨床表現(xiàn)［2］。由于關(guān)節(jié)軟骨缺乏神經(jīng)、血管、淋巴分布及其系統(tǒng)性調(diào)節(jié)，軟骨缺損后，特別是全層軟骨缺損，由于其自身特點(diǎn)導(dǎo)致其再生能力差，通常后期發(fā)展為骨性關(guān)節(jié)炎。傳統(tǒng)中醫(yī)藥在關(guān)節(jié)軟骨損傷修復(fù)中已被眾多基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)及臨床實(shí)踐中證實(shí)具有良好的療效。張景岳首次明確將“陰陽(yáng)互濟(jì)”貫徹到陰陽(yáng)精氣水火不足證的立法組方中，于實(shí)踐中制定了右歸飲，腎陽(yáng)得以一定的恢復(fù)，陰陽(yáng)相生，腎精得以逐漸恢復(fù)生長(zhǎng)，骨髓得以充盈，精氣得以滑利關(guān)節(jié)，筋骨關(guān)節(jié)因此逐漸可以堅(jiān)強(qiáng)，從而達(dá)到治病求本，標(biāo)本兼治，取得了滿意得臨床療效。右歸飲具有補(bǔ)腎壯陽(yáng)、填精補(bǔ)髓的作用，不僅可以增強(qiáng)軟骨細(xì)胞活力，還能抑制關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡，從而有效地改善全層軟骨缺損造成的創(chuàng)傷性骨性關(guān)節(jié)炎病理表現(xiàn)。中醫(yī)理論認(rèn)為“腎主骨，生髓”，腎精的盛衰與骨骼的生長(zhǎng)代謝密切相關(guān)。腎精足，髓腔充，則骨骼堅(jiān)；腎精虧，髓腔空，則骨骼脆。軟骨則同屬于骨的范疇，因此補(bǔ)腎的中藥方能促進(jìn)軟骨的再生與修復(fù)［13］。

本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型采用SD大鼠髕股關(guān)節(jié)股骨髁間滑車關(guān)節(jié)面鉆孔，直徑2 mm，深2 mm的軟骨缺損模型。大鼠常處于半蹲位站立，行走過(guò)程中，髕股關(guān)節(jié)經(jīng)常處于相互擠壓的負(fù)重狀態(tài)，能滿足軟骨修復(fù)的生物力學(xué)要求。形態(tài)學(xué)觀察顯示4周和8周模型組缺損面仍清晰可見，可見修復(fù)紊亂，缺損面有增生組織填充，表面不整，呈淺凹狀，新生組織質(zhì)軟，與周圍軟骨組織區(qū)別明顯；4周和8周右歸飲組軟骨缺損處被白色新生軟骨組織填充，表面較平整、光滑，缺損區(qū)與周圍軟骨區(qū)別不顯。組織學(xué)觀察結(jié)果顯示，第4周模型組軟骨缺損處軟骨修復(fù)組織以纖維組織為主，缺損處粗糙不規(guī)則，僅見少量的細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)異常，纖維組織填充；第8周模型組軟骨缺損處關(guān)節(jié)面破壞嚴(yán)重，纖維增生，表面粗糙，可見細(xì)胞纖維化，伴有軟骨壞死、軟骨下骨硬化；第4周右歸飲組軟骨缺損處可見修復(fù)軟骨，表面欠光滑，未見明顯纖維增生，各層結(jié)構(gòu)較清晰，新生軟骨細(xì)胞數(shù)量明顯增多，排列已經(jīng)類似正常軟骨；第8周右歸飲組軟骨缺損處修復(fù)軟骨表面較光滑，細(xì)胞纖維化不明顯，各層結(jié)構(gòu)清晰，排列已經(jīng)類似正常軟骨潮線明顯，新生軟骨細(xì)胞數(shù)量增多，形態(tài)正常，但未完全填充缺損區(qū)。通過(guò)Mankin評(píng)分也反映了相似的軟骨缺損處軟骨修復(fù)情況，從表1中可發(fā)現(xiàn)模型組軟骨病損程度較右歸飲組Mankin評(píng)分差別有顯著性。正常軟骨中，軟骨細(xì)胞合成的大量膠原纖維（主要是Ⅱ型膠原纖維）［14］、蛋白多糖（aggrecan）等物質(zhì)分泌到細(xì)胞外基質(zhì)中［15］，構(gòu)成細(xì)胞外纖維網(wǎng)架，支持和保護(hù)軟骨細(xì)胞，軟骨細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)成分是相輔相成、相互作用的［16］。本實(shí)驗(yàn)中，在大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨缺損處修復(fù)組織免疫組化染色觀察結(jié)果可以看出，4周、8周模型組軟骨缺損修復(fù)組織Ⅱ型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)染色均為陰性；4周、8周右歸飲組軟骨缺損修復(fù)組織Ⅱ型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)染色呈陽(yáng)性，可見缺損修復(fù)組織呈棕黃色或棕褐色染色明顯。實(shí)驗(yàn)表明右歸飲組軟骨缺損處修復(fù)組織含有正常軟骨的主要成分Ⅱ型膠原。

基于上述結(jié)果，筆者認(rèn)為右歸飲對(duì)于關(guān)節(jié)全層軟骨缺損具有良好的治療作用，深化了中醫(yī)“腎主骨，生髓”的理論認(rèn)識(shí)，為臨床治療關(guān)節(jié)全層軟骨損傷中，通過(guò)早期運(yùn)用右歸飲促進(jìn)損傷軟骨的修復(fù)以降低關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)功能障礙等發(fā)病率提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持，進(jìn)一步有助于中藥治療關(guān)節(jié)全層軟骨缺損的新藥開發(fā)研究。

參考文獻(xiàn)

［1］Cavalcanti Filho MMC，Doca D，Cohen M，et al. Updating on diagnosis and treatment of chondral lesion of the knee［J］. Rev Bras Ortop，2012，47（12）：12-20.

［2］Reverte -Vinaixa MM，Joshi N，Díaz -Ferreiro EW，et al. Medium-term outcome of mosaicplasty for grade III-IV carti-lage defects of the knee［J］. J Orthop Surg，2013，47（21）：4-9.

［3］Pombo-Suarez M，Castano-Oreja MT，Calaza M，et al. Differential upregulation of the three transforming growth factor beta isoforms in human osteoarthritic cartilage［J］. Ann Rheum Dis，68（24）：568-571.

［4］Bhosale AM，Richardson JB. Articular cartilage：structure，injuries and review of management［J］. Br Med Bull，2008，87（19）：77-95.

［5］Magnussen RA，Dunn WR，Carey JL，et al. Treatment of focal articular cartilage defects in the knee：a systematic review［J］. Clin Orthop Relat Res，2008，466（27）：952-62.

［6］Baums MH，Heidrich G，Schultz W，et al. Autologous chondrocyte transplantation for treating cartilage defects of the talus［J］. J Bone Jt Surg Am，2007，88（20）：303-308.

［7］Chen H，Sun J，Hoemann CD，et al. Drilling and microfracture lead to different bone structure and necrosis during bone -marrow stimulation for cartilage repair［J］. J Orthop Res，2010，32（27）：1432-1438.

［8］Chuckpaiwong B，Berkson EM，Theodore GH. Microfracture for osteochondral lesions of the ankle：outcome analysis and outcome predictors of 105 cases［J］. Arthroscopy，24：106-112.

［9］Jiang Y，Chen LK，Zhu DC，et al. The inductive effect of bone morphogenetic protein-4 on chondral lineage differentiation and in situ cartilage repair［J］. Tissue Eng Part A，2009，16 （2）：1621-1632.

［10］Scranton PJ，F(xiàn)rey CC，F(xiàn)eder KS. Outcome of osteochondral autograft transplantation for type-V cystic osteochondral lesionsofthetalus［J］.JBone Jt Surg Br，2012，88（32）：614-619.

［11］Kreuz PC，Steinwachs M，Erggelet C，et al. Mosaicplasty with autogenous talar autograft for osteochondral lesions of the talus after failed primary arthroscopic management：a prospective study with a 4-year follow-up［J］. Am J Sports Med，2012，34（12）：55-63.

［12］Liu RO，Connell M，Johnso K，et al. Extracellular signal-regulated kinase 1/extracellularsignal-regulated kinase 2 mitogen-activated protein kinase signaling and activation of activator protein 1 and nuclear factor kappaB transcription factors play central roles in interleukin-8 expression stimulated by monosodium urate monohydrate and calcium pyrophosphate crystals in momocytic cells［J］. Arthris Rheum，2000，43（5）：1145-1155.

［13］童培建，厲駒，季衛(wèi)鋒，等.干細(xì)胞凝膠復(fù)合體加右歸飲修復(fù)家兔軟骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中醫(yī)正骨，2005，21（6）：3-5，65.

［14］Milz S，Benjiamin M，Putz R. Molecular parameters indicating adaptation to mechanicalstress in fibrous connective tissue［J］. Adv Znat Embryol Cell Biol，2005，178（21）：71-74.

［15］Hollander AP，Heathfield TF，Webber C，et al. Increased damage to typeⅡcollagen in osteoarthritic articular cartilage detected by a new immunoassay［J］. J Clin Invest，1994，93 （14）：1722-1732.

［16］曹林忠.細(xì)胞因子對(duì)關(guān)節(jié)軟骨損傷修復(fù)影響的研究進(jìn)展［J］.廣州醫(yī)藥，2009，40（1）：5-7.

Research on Yougui Drink Treating Full-thickness Articular Cartilage Defects of Rats

YING Jun，LUO Cheng，ZHANG Yuanbin，et al.
The First Clinical Medical College，Zhejiang Chinese Medicine University，Zhejiang，Hangzhou 310053，China.

【Abstract】Objective：To observe the effects of Yougui drink on full-thickness articular cartilage defects of rats，explore the mechanism and guide clinical practice. Methods：28 SD rats were randomly divided into the model group and Yougui drink group. Full thickness cartilage defect models were made with subchondral drilling by operating on articular cartilage of the knee. Yougui drink group was administered with Youyin drink every day for 8 weeks；the model group was given equal volume of 0.9% sodium chloride solution to fill the stomach every day. Animals in each group were sacrificed at fourth and eighth weeks after operation，and were collected and detected. Results：The morphological observation showed that in fourth week and eighth week，the cartilage defects of the model group were filled with white fibrous hyperplasia，and the surface roughness increased. In Yougui drink group，transparent cartilages formed；the defects were healed；the surface was relatively even and smooth. Histological observation showed in fourth week and eighth week，the model group had a bad repair of cartilage defect；fiber hyperplasia was obvious with rough surface and less cartilage tissue composition. In Yougui drink group，cartilage tissue repair was better in cartilage defects；the articular surface was clear and complete，and the cartilage tissue was abundant，and the situation in 8th week was better than that in 4th week. Mankin scores showed that Yougui drink group was better than the model group at the same period in cartilage tissue repair in 4th week and 8thweek（P＜0.05）；type II collagen immunohistochemical results showed that in 4th and 8th week，type II collagen fiber protein，main components of cartilage in repairing tissue in Yougui drink group was positive，however in model group，negative. Conclusion：Yougui drink has a good therapeutic effect on full-thickness articular cartilage defects，providing new treatment ideas for clinical treatment.

【Key words】Yougui drink；Articular cartilage defect；Subchondral drilling

中圖分類號(hào)：R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1004-745X（2016）02-0193-05

doi：10.3969/j.issn.1004-745X.2016.02.002

*基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金（81373669）；浙江省科技廳重大專項(xiàng)（2014C13G2120082）

收稿日期（2015-09-15）