東湖通道工程對沿線底泥細菌群落結構和多樣性的影響

趙媛莉李彤彤劉新華呂錦剛章晉勇畢永紅（.中國科學院水生生物研究所，武漢 40072； 2.中國科學院大學，北京 00049； .武漢市政工程設計研究院有限責任公司，武漢 40022）

東湖通道工程對沿線底泥細菌群落結構和多樣性的影響

趙媛莉1，2李彤彤1，2劉新華1，2呂錦剛3章晉勇1畢永紅1
（1.中國科學院水生生物研究所，武漢 430072； 2.中國科學院大學，北京 100049； 3.武漢市政工程設計研究院有限責任公司，武漢 430022）

摘要：為調查東湖通道工程對沿線底泥細菌群落結構和多樣性可能造成的影響，隨著隧道施工的進程，在東湖通道沿線的3個湖區(qū)中的19個采樣點進行了3次采樣，通過PCR-DGGE結合分子克隆技術，分析了細菌群落的群落結構及多樣性。3批樣品共檢出細菌類群分別為5門18屬、6門17屬、5門11屬。在門水平上，底泥中的優(yōu)勢菌是變形菌門，但其在總量中的比例隨施工進程逐漸下降，依次為86%、80.6%和43.9%。在屬水平上，施工初期的優(yōu)勢菌是埃希氏桿菌屬，施工后期卻是Steroidobacter。通道施工初期，湯菱湖、郭鄭湖的湖心區(qū)域在屬水平上的群落結構相似性較高，與團湖差異顯著； 接近施工區(qū)樣點與遠離施工區(qū)樣點的底泥細菌群落存在顯著差異； 因施工形成的臨時封閉水域與敞水區(qū)除均有埃希氏桿菌屬外，其他菌屬類群差異顯著。施工后期的湯菱湖、郭鄭湖及團湖的湖心區(qū)的底泥微生物群落結構趨于相似； 接近施工區(qū)樣點與遠離施工區(qū)樣點的底泥細菌群落差異不顯著； 封閉區(qū)和敞水區(qū)有相似的細菌群落結構。施工期間，細菌群落的多樣性指數的最高點都有出現在靠近施工區(qū)的位置。各批次樣點的Simpson_1-D指數、Shannon_H指數、Margalef指數，均隨著施工進程而逐漸增加。因此，東湖通道修建對通道沿線近距離的底泥細菌的群落結構和多樣性產生了較顯著的影響，這種影響是暫時性還是持續(xù)性的，尚需通道完工回填后的長期評估。研究將為進一步探討通道修建等人為強干擾活動對淺水湖泊的可能環(huán)境影響和制定合理的生態(tài)修復策略提供理論基礎和數據支撐。

關鍵詞：東湖通道工程； 底泥細菌群落； 種類組成； 群落結構； 多樣性； 影響； PCR-DGGE

東湖（114°23′E，30°22′N）位于武漢市武昌區(qū)東北部，最大水深4.75 m，平均水深2.21 m，年平均氣溫18.3℃，年均水溫18.5℃，是長江中下游的一個中型淺水湖泊，流域面積187 km2，由多個大小不同的子湖組成［1］。隨著武漢城市的不斷發(fā)展，東湖環(huán)湖路已成為武珞路車輛分流的一條交通干線，景區(qū)超負荷車流日益破壞景區(qū)生態(tài)環(huán)境，為了加強東湖風景名勝區(qū)保護，合理利用與開發(fā)景區(qū)資源，武漢市開啟了東湖通道建設［2］。東湖通道工程位于AAAAA級東湖風景名勝區(qū)內。通道起點與二環(huán)線水東段主線高架橋紅廟立交銜接，于九女墩北側進入隧道，隧道下穿郭鄭湖北側，過湖心島，再下穿湯菱湖、沿湖路、郭鄭湖南側、梅園大門和磨山小區(qū)，穿過魯磨路、訪梅路與團山路路口后，起坡出地面。經過0.3 km地面段后再次于團山以北進入隧道，下穿團山后，于喻家湖北路以北出隧道，以地面段與喻家湖北路相接，止于喻家湖路光谷大道主線高架橋（虹景立交），全長12.14 km，其中湖底隧道全長約6.2 km［3］。隧道施工不可避免會影響東湖生態(tài)環(huán)境，并可能導致生態(tài)環(huán)境惡化，造成水環(huán)境污染，其中施工區(qū)廢水是主要污染源［4］，明渠開挖造成的湖底裸露與施工造成的底泥再懸浮等也將對隧道周邊微生物群落結構造成不同程度的影響。湖泊底泥是一個微生物物種豐富、物質交換頻繁、生物活性高的環(huán)境［5］，且底泥微生物在物質循環(huán)及能量流動中起著重要作用。湖泊底泥微生物群落結構是水體環(huán)境變化和演替的重要標志，湖泊水環(huán)境質量的改變使其底泥微生物在數量和群落結構上發(fā)生變化，同時底泥中的微生物也會反過來影響湖泊水環(huán)境的質量。

為了考察東湖通道工程對沿線底泥細菌群落結構和多樣性造成的可能影響，本研究以武漢東湖通道修建的周邊底泥細菌為研究對象，運用PCRDGGE及分子克隆、測序技術，初步研究了通道修建期間武漢東湖3個主要受影響湖區(qū)底泥細菌類群的群落組成及多樣性的變化，進而探討通道修建的人為強干擾活動對淺水湖泊的可能影響，為制定合理的生態(tài)防護與修復策略提供理論基礎和數據支撐。

1 材料與方法

1.1 采樣時間和采樣位置

根據GPS定位系統(tǒng)在東湖隧道周邊的3個湖區(qū)內設置了19個采樣點（圖 1），紅色虛線指的是建通道的位置，其中選取沙灘浴場4個（1—4#）、湯菱湖4個（5—8#）、郭鄭湖10個（9—17#）、團湖2個（18—19#），并于2014年3月26日（第一批）、2014年4月22日（第二批）、2014年5月23日（第三批）各采樣一次。其中第一批和第二批屬于施工初期，第三批屬于施工后期。施工初期，北岸敞口段，北側岸邊及湖底隧道暗埋段，沙灘浴場段隧道，湖底隧道暗埋段，半敞口式隧道和南岸敞口段均處于正在施工中。施工后期，沙灘浴場段隧道水已完全抽干，北岸敞口段，北側岸邊及湖底隧道暗埋段，湖底隧道暗埋段，半敞口式隧道和南岸敞口段也均處于施工中。用SBR-1型便攜式沉積物-界面水采樣器對底泥表層進行取樣，順序編號后用錫箔紙包裹，迅速置于4℃保存并帶回實驗室，部分底泥保存于-80℃?zhèn)溆谩?/p>

圖 1 東湖建隧道的采樣點示意圖

1.2 樣品分析

細菌總基因組提取 采用MP FastDNA土壤自旋提取試劑盒，具體操作參照說明書，提取完畢即用或保存于-20℃?zhèn)溆谩?/p>

16S rDNA V3區(qū)PCR擴增 使用通用引物R518和5′端帶40 bp GC夾的細菌特異性引物F338擴增基因組DNA［6］。采用50 μL PCR體系的降落PCR方法，程序如下:94℃預變性4min； 94℃變性30s，61℃退火30s，72℃延伸30s，然后每循環(huán)一次，降低0.5℃，進行10個循環(huán)； 94℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，共20個循環(huán)； 72℃延伸10min。PCR產物用含有EB（溴化乙錠）染色劑的1.0%瓊脂糖凝膠電泳進行檢測，紫外成像并保存結果。其中為了便于對污染源進行追蹤，在每一組PCR擴增過程中都設立了一個陰性對照（陰性對照除了不加模板DNA外，其余組分均加）。

變性梯度凝膠電泳 通過DGGE（Dcode system，BioRad）將細菌總基因組DNA的擴增產物進行變性梯度凝膠電泳，從而來分析細菌群落特征。所選用的聚丙烯酰胺的變性梯度范圍為40%—60%，緩沖液為1×TAE，電泳參數為110 V、16h，溫度為60℃，電泳結束采用銀染法進行染色。

細菌16S rDNA片段克隆和測序 將DGGE圖譜上的優(yōu)勢條帶和特征條帶割膠回收，放入1.5 mL的離心管，加入10 μLTE（pH 8.0），4℃浸泡一夜，以使DNA從凝膠中釋放，然后取1 μL作為模板，使用F338（不帶GC夾）和R518作為引物進行PCR擴增，擴增反應，熱蓋溫度99℃，94℃預變性5min，94℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，30個循環(huán)，最后在72℃延伸10min，4℃保存。純化PCR產物之后連接到pMD18-T載體（TaKaRa，日本）質粒上，連接產物轉入感受態(tài)DH5α大腸桿菌，之后挑選陽性克隆送往武漢擎科創(chuàng)新生物科技有限公司測序。

數據處理和統(tǒng)計分析 通過Quantity One4.2.3軟件導出變性梯度凝膠電泳圖譜條帶豐度數據矩陣。運用PAST軟件對生成的數據矩陣（屬水平）進行基于Jaccard similarity/distance的PCoA分析，且計算出Simpson_1-D、Shannon_H、Margalef指數，來分析細菌群落結構的多樣性。測序得到的序列去除載體序列后，在RDP（Ribosomal Database Project Ⅱ-Release 9 website，http://rdp.cme.msu.edu）上進行細菌分類分析，置信度閾值為80%［7］。并用R語言軟件對數據矩陣（屬水平）作出Heatmap圖（http://www.r-project.org/）來對3批樣品屬水平的細菌群落進行聚類［8］。由于本文分析測試的數據分布不屬于正態(tài)分布，因此采用獨立樣本的非參數檢驗對樣本進行分析（SPSS，v19.0），多個組間計量資料比 較采用Kruskal-Wallis檢驗。數據顯著性水平確定為P<0.05。

2 結果

2.1 種類組成

施工初期，第一批樣品共檢出5門18屬，分別是Proteobacteria（變形菌門）、Acidobacteria（酸桿菌門）、Firmicutes（厚壁菌門）、Chloroflexi（綠彎菌門）、Bacteroidetes（擬桿菌門），各占86%、7.2%、2.6%、2.3%和1.9%（圖 2A），種類最多的門是變形菌門，有11屬細菌類群； 其次是酸桿菌門，有4屬細菌類群； 厚壁菌門，有2屬細菌類群，綠彎菌門和擬桿菌門均1屬細菌類群。沙灘浴場處（樣點1、2、3、4）所在的封閉區(qū)域與湯菱湖（樣點6、7、8）和郭鄭湖（樣點10、11、12）的敞水區(qū)域均有埃希氏桿菌屬（圖 3A），但其他菌屬存在顯著差異（P<0.05；Kruskal-Wallis）。在湯菱湖中，最靠近通道的5、6號樣點與較通道稍遠的7、8號樣點的種類組成，除優(yōu)勢菌群相同，其他菌屬存在顯著差異（P<0.05；Kruskal-Wallis）； 在郭鄭湖中，通道兩側的15、16樣點的種類組成相近，但與這個湖中其他的樣點（9、10、11、12、13、14）的菌屬存在顯著差異（P<0.05； Kruskal-Wallis）； 在團湖中，最靠近通道的17與18號樣點的種類組成也略有不同。且在湯菱湖的湖心區(qū)域（樣點7、8）和郭鄭湖的湖心區(qū)域（樣點11、12）在屬水平上的群落結構存在一定的均一性，而與團湖差異顯著（P<0.05； Kruskal-Wallis）。

第二批樣品共檢出6門1 7屬，分別是Proteobacteria（變形菌門）、Chloroflexi（綠彎菌門）、Verrucomicrobia（疣微菌門）、Fusobacteria（梭桿菌門）、Aminicenantes，各占80.6%、6.6%、2.2%、0.8%和2.2%（圖 2B），其中種類最多的門是變形菌門，有12屬細菌類群； 其次是綠彎菌門和梭桿菌門均有2屬細菌類群，疣微菌門和Aminicenantes均有1屬細菌類群。沙灘浴場處（樣點2、3）所在的封閉區(qū)域與湯菱湖（樣點6、7、8）和郭鄭湖（樣點10、11、12）的敞水區(qū)域均有埃希氏桿菌屬（圖 3B），但其他菌屬存在顯著差異（P<0.05； Kruskal-Wallis）。在湯菱湖中，最靠近通道的5號樣點與6、7、8號樣點的種類組成，除優(yōu)勢菌群相同，其他菌屬存在顯著差異（P<0.05； Kruskal-Wallis）； 在郭鄭湖中，通道兩側的15、16樣點的種類組成相近，但與該湖中其他的樣點（9、10、11、12）差異顯著（P<0.05； Kruskal-Wallis）； 在團湖中，最靠近通道的17與18、19號樣點的優(yōu)勢菌群都不同，且種類組成相比略少。盡管各湖湖心區(qū)域細菌種類組成存在明顯差異（P<0.05； Kruskal-Wallis），但各自湖心樣點的細菌種類組成均較為相似，如湯菱湖（7、8樣點）、郭鄭湖（11、12樣點）、團湖（18、19樣點）。

圖 3 以屬水平的細菌類群在每個樣點的分布情況

施工后期，第三批樣品共檢出5門11屬，分別是Proteobacteria（變形菌門）、Acidobacteria（酸桿菌門）、Chloroflexi（綠彎菌門）、Firmicutes（厚壁菌門）、Spirochaetes（螺旋體門），各占43.9%、25.1%、7.4%、3.7%和3.7%（圖2C），其中種類最多的門仍是變形菌門，有5屬細菌類群，但所占比例有所降低； 其次是酸桿菌門有4屬細菌類群，螺旋體門有1屬細菌類群。沙灘浴場處（樣點1）所在的封閉區(qū)域與湯菱湖（樣點6、7、8）和郭鄭湖（樣點10、11、12）的敞水區(qū)域的細菌類群很相似（圖 3C），與施工初期的前兩批細菌類群差異顯著（P<0.05； Kruskal-Wallis）。在湯菱湖中，最靠近通道的5號樣點與6、7、8號樣點的種類組成略有不同； 在郭鄭湖中，通道兩側的15、16樣點的種類組成相近，但與這個湖中其他的樣點（9、10、11、12）差異顯著（P<0.05；Kruskal-Wallis）； 在團湖中，最靠近通道的17與18、19號樣點的種類組成相同。且各湖湖心區(qū)域細菌種類組成較相似。以上三批樣品，由以上數據可得知，施工后期的樣品（第三批）和施工初期（前兩批）種類組成上發(fā)生了顯著變化。

2.2 群落結構

在對這三批樣品的屬水平的菌群結構做基于Jaccard similarity/distance的主坐標分析時發(fā)現（圖4），沿著PC1坐標的方向（貢獻率為38.5%）的第三批樣品（施工后期）與第一批、第二批樣品（施工初期）遠遠分開。總體而言，經主坐標分析所得的2個主坐標，累計貢獻率為52.1%。得出第三批樣品（施工后期）的屬水平的菌群結構與前兩批（施工初期）存在顯著差異（P<0.05； Kruskal-Wallis）。

如圖 5，以屬為水平的細菌類群，主要有Escherichia/Shigella（埃希氏桿菌屬）、Halochromatium（鹽著色菌屬）、Acinetobacter（不動桿菌屬）、Bacillus（芽孢桿菌屬）、Pseudomonas（假單胞菌屬）、Spirochaeta（螺旋體屬）、Steroidobacter、Gp22等。熱圖中顏色的漸變可以形象的看出，各樣點的細菌類群的組成及數量的變化。同時，熱圖可以很明顯的看出，施工后期的樣品（第三批）和施工初期（前兩批）沒有聚在一起，而是獨自聚在一簇，說明施工后期的以屬為水平的各樣點的細菌類群的群落結構與施工初期有明顯的區(qū)別。由此可推測施工后期，細菌類群的群落結構發(fā)生了變化。

圖 4 以屬為水平的細菌類群，三批樣品基于Jaccard similarity/ distance的主坐標分析圖

2.3 物種多樣性

在施工初期的樣品（第一批）中，Simpson_1-D指數、Shannon_H指數、Margalef指數最高的采樣點均是5號，5號是一個在湯菱湖中最靠近通道的采樣點； 在第二批樣品中，Simpson_1-D指數、Shannon_H指數、Margalef指數最高的采樣點分別是13（14、15）號、16號、16號，15和16號是在郭鄭湖中最靠近通道的采樣點； 在施工后期的樣品（第三批）中，Simpson_1-D指數、Shannon_H指數、Margalef指數最高的采樣點均是6（15）號，其中15號是在郭鄭湖中最靠近通道的采樣點，6號是在湯菱湖中較靠近通道處，而9號采樣點的三種多樣性指數均低于5、15、16號采樣點，9號是和通道隔著一條路。由此可知，在每一批樣品中的細菌群落的各種多樣性指數最高的都有出現在靠近通道處的采樣點。各批次樣點的Simpson_1-D指數、Shannon_H指數、Margalef指數，隨著施工進程的變化范圍分別為0.5781—0.947、1.099—2.944和1.303—6.113，且隨著施工的進程，相應樣點的指數（除5、6）都是逐漸增加的（表 1）。3批次相同樣點的微生物群落的多樣性指數存在顯著差異（P<0.05；Kruskal-Wallis）。因此可知，隨著施工的進程，細菌的多樣性也相應增加。

3 討論

本文是采用DGGE結合分子克隆技術，來分析東湖通道工程對沿線底泥細菌群落結構和多樣性可能造成的影響，DGGE技術盡管與理論預期存在一定的差距，但依舊能夠較好地反映環(huán)境中微生物群落結構的多樣性［9］。外界環(huán)境條件的改變等因素是造成環(huán)境微生物群落變化的主要原因［10，11］，環(huán)境細菌的群落結構特征及其變化能靈敏地反映環(huán)境的現狀與變化趨勢，在環(huán)境監(jiān)測及污染治理工程中有非常重要的指示作用［12］。

3.1 東湖通道工程對沿線底泥細菌群落的種類組成和群落結構的影響

目前報道的淡水湖泊沉積物中的優(yōu)勢菌群通常是變形菌門［13，14］，在我們這3批樣品中均有體現，但可以看出3批樣中變形菌門占總量的比例在逐漸下降，依次為86%、80.6%和43.9%。特別是第三批，變形菌門下降了近一半，酸桿菌門填補了空缺，占據總量的25.1%，說明在門水平的細菌群落結構發(fā)生了變化。屬水平的優(yōu)勢菌群也發(fā)生了明顯的變化:施工初期的樣品（第一批和第二批）是埃希氏桿菌屬，到施工后期的樣品（第三批）是Steroidobacter，說明在屬水平上的細菌群落結構發(fā)生了明顯的變化。通道施工初期，湯菱湖、郭鄭湖的湖心區(qū)域在屬水平上的群落結構相似性較高，說明東湖主湖底泥細菌群落結構存在一定的均一性，而與團湖差異顯著，這可能與團湖面積小而又與主湖隔離、蓮藕栽種形成的底泥性質差異等有關； 在接近施工區(qū)樣點與遠離施工區(qū)樣點的底泥細菌群落存在顯著差異； 在沙灘浴場處，通道建設形成的臨時封閉區(qū)域（樣點1、2、3、4）與在湯菱湖（樣點6、7、8）、郭鄭湖（樣點10、11、12）敞水區(qū)域，除均有埃希氏桿菌屬外，其他菌屬類群差異顯著。施工后期，湯菱湖、郭鄭湖及團湖的湖心區(qū)的底泥微生物群落結構趨于相似； 接近施工區(qū)樣點與遠離施工區(qū)樣點的底泥細菌群落差異不顯著； 封閉區(qū)和敞水區(qū)有相似的細菌群落結構，很可能是隧道施工的原因。由于東湖隧道施工區(qū)廢水氮磷含量高于東湖原水，施工區(qū)廢水TN是東湖原水的2—5倍，TP是東湖原水的5—7倍［15］，而環(huán)境因素（OrgC，OrgN，TN，TC，TP等）對湖泊沉積物細菌群落結構多樣性具有非常重要的影響［16，17］，且水體環(huán)境的變化會影響沉積物中的細菌群落結構［18］。由此可推知，在東湖長期處于施工中，導致施工后期時東湖的水質較均一，均含有氮磷含量較高的廢水，這是使得各處中底泥微生物的群落結構相似的原因之一。所以東湖通道工程對沿線底泥細菌的群落種類組成與結構產生了顯著的影響。

3.2 東湖通道工程對沿線底泥細菌的多樣性的影響

圖 5 以屬水平的細菌類群的熱圖

DGGE圖譜中條帶的多少可直觀地反映每個采樣點細菌的多樣性的豐富程度，但多樣性指數是研究群落物種數和個體數及其分布均勻度的綜合指標［19］。Simpson指數（1-D）是隨機取樣的兩個個體屬于不同種的概率。Shannon均勻度指數是通過Shannon多樣性指數計算出來的均度，包含兩個因素:一是種類數目，即豐富度； 二是種類中個體分布的均勻度。種類數目越多，多樣性越大； 同樣，種類之間個體分配的均勻性增加也會使多樣性提高［20］。Margalef指數反映群落物種豐富度，指數越大，細菌群落物種越豐富。在底泥細菌群落多樣性指數中，每一批樣品中的細菌群落的多樣性指數最高的都有出現在靠近施工區(qū)采樣點。隨著通道施工的進程，Simpson_1-D指數、Shannon_H指數、Margalef指數均呈現逐漸升高，除了樣點（5、6）外，這兩個樣點出現反常現象有可能是提取DNA的泥樣，不具有該樣點的代表性。細菌群落的3種多樣性指數普遍是5月份大于4月份，4月份大于3月份，從3月到5月份，由春天逐步過渡到初夏，氣溫慢慢升高，有可能季節(jié)變化對微生物的多樣性有一定的影響，推測溫度［21］是影響湖泊沉積物中細菌群落結構多樣性的因素之一，對其產生正相關的作用。然而在人為污染嚴重的環(huán)境中，較高的微生物多樣性能夠完成更多的生物地化循環(huán)過程，從而保持生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性，因此微生物豐度的增加是微生物群落適應環(huán)境變化的表現［22］。由此可推知，隨著施工的進程，通道周邊底泥細菌群落的多樣性增加，是底泥微生物為了更好的適應變化的生態(tài)環(huán)境而出現的一種現象。所以東湖通道工程對沿線底泥細菌多樣性產生了顯著的影響。

表 1 細菌多樣性指數Tab.1 Bacterial diversity index

在東湖建通道中，對周邊底泥細菌群落造成影響的很可能的環(huán)境因子是明渠開挖造成的湖底裸露與施工造成的底泥再懸浮。但是如何減少這些干擾因子對生態(tài)環(huán)境的影響，還需要更多的數據資料，進行更深入的研究。本文為東湖通道工程實施完后，進行填補東湖，探討是否能恢復原來生態(tài)環(huán)境提供理論依據和數據支持。

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THE POSSIBLE EFFECT OF TUNNEL CONSTRUCTION ON THE SEDIMENT BACTERIAL COMMUNITY AND DIVERSITY IN LAKE EAST

ZHAO Yuan-Li1，2，LI Tong-Tong1，2，LIU Xin-Hua1，2，Lü Jin-Gang3，ZHANG Jin-Yong1and BI Yong-Hong1
（1.Institute of Hydrobiology，Chinese Academy of Sciences，Wuhan 430072，China； 2.University of Chinese Academy of Sciences，Beijing 100049，China； 3.Wuhan Municipal Engineering Design & Research Institute Co.，Ltd.，Wuhan 430022，China）

Abstract:To evaluate effects of tunnel construction on the sediment bacterial community and diversity in Lake East，19 sampling points were selected and analyzed for 3 consecutive time points during the construction process.The PCRDGGE and molecular cloning were applied to analyze the bacterial species composition，community and diversity of all sampling sediment.A total of 18 bacterial genera belonging to 5 phyla，17 bacterial genera belonging to 6 phyla and 11 bacterial genera belonging to 5 phyla were identified from 3 different batches of sediment samples，respectively.At the level of phylum，Proteobacteria was predominant bacteria among all three batches，but its percentage among the total diversity was decreased with the tunnel construction，presenting 86%，80.6% and 43.9%，respectively.At the level of genera，Escherichia/Shigella was predominant bacteria at the first sampling while Steroidobacter at the third sampling.Attheearly stage of tunnel construction，bacterial community structure of the middle area of Lake Tangling and Lake Guozheng were similar at the level of genus，which was significantly different from those of Lake Tuan.The effect of tunnel construction on the sediment bacterial community was distance dependent.The bacterial community of the temporarily producing closed area for tunnel construction was remarkably different from that of open water area，although both contain Escherichia/Shigella.However，the community diversity and composition of the middle area of Lake Tangling，Lake Guozheng and Lake Tuan became similar at the late stage of tunnel construction.The distance dependent effect of tunnel construction on the bacterial community was not significant at the late stage of tunnel construction.Additionally，temporarily forming closed area was similar to open water area regarding their sediment bacterial community composition.During the construction，the highest diversity index of bacterial community for all three batches of samples appeared in the sampling point adjacent the tunnel.The Simpson_1-D index，Shannon_H index and Margalef index gradually increased with the tunnel construction.Therefore，our results indicated that the tunnel construction had a remarkable influence on the bacterial community and diversity of Lake East sediment，although the long-term effect should be further evaluated.

Key words:Tunnel construction in Lake East； Sediment bacteria； Species composition； Community structure；Diversity； The possible effect； PCR-DGGE

中圖分類號：Q145+.2

文獻標識碼：A

文章編號：1000-3207（2016）03-0565-09

doi:10.7541/2016.76

收稿日期：2015-06-12；

修訂日期：2015-12-12

基金項目：武漢市“重度人工干擾下水環(huán)境污染處置及綜合控制關鍵技術研究”項目資助［Supported by the Research of Key Technologies for Disposal and Control of Water Environmental Pollution Caused by Severe Aritifical Intereference］

作者簡介：趙媛莉（1991—），女，湖北鄂州人； 碩士研究生； 研究方向為微生物生態(tài)學。E-mail:zhaoyl@ihb.ac.cn

通信作者：章晉勇，E-mail:zhangjy@ihb.ac.cn； 畢永紅，E-mail:biyh@ihb.ac.cn