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    組織型基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1、基質(zhì)金屬蛋白酶-9在老年女性壓力性尿失禁患者陰道壁中的表達及意義

    2016-06-29 09:41:30馮化杰
    中國老年學(xué)雜志 2016年11期
    關(guān)鍵詞:齊齊哈爾盆底蛋白酶

    呂 順 陳 雋 馮化杰

    (齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,黑龍江 齊齊哈爾 161006)

    組織型基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1、基質(zhì)金屬蛋白酶-9在老年女性壓力性尿失禁患者陰道壁中的表達及意義

    呂順1陳雋2馮化杰

    (齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,黑龍江齊齊哈爾161006)

    〔摘要〕目的觀察組織型基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(TIMP)-1和基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9在女性壓力性尿失禁(SUI)患者陰道壁中的表達情況及其機制。方法隨機選取25例SUI患者作為觀察組,25例盆底器官脫垂癥(POP)患者作為脫垂組,25例婦科良性疾病患者作為對照組。取所有受試者陰道壁結(jié)締組織制成切片,采用免疫組織化學(xué)法對切片進行染色,采用RT-PCR法檢測所有組織中TIMP-1和MMP-9 mRNA的表達情況。結(jié)果觀察組和脫垂組TIMP-1、MMP-9蛋白的表達及TIMP-1、MMP-9 mRNA ΔCt值差異顯著(P>0.05),對照組TIMP-1蛋白表達顯著高于觀察組和脫垂組,而MMP-9蛋白表達顯著低于觀察組和脫垂組(P<0.05)。結(jié)論在SUI和POP患者的陰道壁組織中,MMP-9呈現(xiàn)高表達,TIMP-1呈現(xiàn)低表達,二者可能參與了SUI和POP的發(fā)病過程。

    〔關(guān)鍵詞〕壓力性尿失禁;組織型基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1;基質(zhì)金屬蛋白酶-9

    盆底功能障礙性疾病(PFD)簡稱盆底疾病,主要包括壓力性尿失禁(SUI)和盆腔器官脫垂(POP)。目前對于PFD的發(fā)病機制尚未探明。有研究發(fā)現(xiàn),SUI的患者常常伴發(fā)POP,故推測二者在發(fā)病機制上可能存在相似性〔1〕。目前研究認為,盆底韌帶和筋膜組織的降解可能是導(dǎo)致PFD的原因之一〔2〕。基質(zhì)金屬蛋白酶家族(MMPs)是一類蛋白酶,對細胞外基質(zhì)具有降解功能。而組織型基質(zhì)蛋白酶抑制劑(TIMPs)被發(fā)現(xiàn)具有抑制MMPs活性的作用。本研究探討TIMP-1和MMP-9在老年女性SUI患者陰道壁中的表達情況。

    1材料與方法

    1.1一般資料隨機選取2014年6~12月我院婦科收治確診為SUI并擬行TVT或TVT-O手術(shù)的患者25例作為觀察組,年齡51~63歲,平均(56.9±6.6)歲,平均產(chǎn)次(2.04±0.56)次;另選25例確診為POP患者為脫垂組,年齡51~61歲,平均(54.2±5.3)歲,平均產(chǎn)次(1.92±0.63)次;25例擬行手術(shù)治療的婦科良性疾病作為對照組,其中子宮肌瘤者18例,宮頸上皮內(nèi)瘤變7例,年齡51~61歲,平均(55.3±7.4)歲,平均產(chǎn)次(2.11±0.41)次。三組平均年齡和平均產(chǎn)次等一般臨床資料無顯著差異(P>0.05)。

    1.2入選標(biāo)準(zhǔn)〔3〕①所有患者近6個月內(nèi)未使用過雌激素藥物;②無盆底組織手術(shù)史;③全身各處無基地組織??;④無生殖道感染性疾病;⑤脫垂組患者未合并SUI。觀察組患者入選標(biāo)準(zhǔn):① 尿常規(guī)正常,尿培養(yǎng)陰性;② 神經(jīng)系統(tǒng)功能正常;③ 膀胱內(nèi)壓、容量、感覺均正常;④參與尿量正常;⑤ 不存在非自主逼尿肌收縮。排除卵巢功能性腫瘤者、肺纖維化者、肝硬化者、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎者。

    1.3實驗方法本研究獲得醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn),所有患者簽署知情同意書,均于手術(shù)中在陰道正上方取大小為0.1 cm×0.3 cm×0.3 cm陰道壁組織各兩塊,用0.9%NaCl將血液沖凈,一塊置于10%甲醛(中性)中保存,一塊置于Ep管中,并置于液氮中保存。

    1.3.1免疫組織化學(xué)(S-P)法染色將甲醛中的組織塊取出,常規(guī)石蠟包埋,每例標(biāo)本切成厚3 μm的切片3片,采用S-P法對切片進行TIMP-1和MMP-9的檢測。選用兔抗人TIMP-1單克隆抗體和鼠抗人MMP-9單克隆抗體(均購自上海研晶生物科技有限公司),陰性標(biāo)本采用磷酸鹽緩沖液(PBS)作為一抗。SP試劑盒與DAB顯色劑均購自北京北瑞達醫(yī)藥科技有限公司。所有操作均嚴(yán)格按照試劑或試劑盒相應(yīng)說明書操作。10×40倍鏡下,選取4個互不重疊的視野觀察。用Image pro plus 4.0計算染色顆粒的累積光密度值(IOD),其IOD與染色程度呈正比。

    1.3.2RT-PCR法檢測RNA將液氮中的組織塊取出,在4℃環(huán)境中將組織切成小塊,研磨、離心后用Trizol裂解液將組織中總RNA提取。用MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶與隨機引物進行RT-PCR(5333,Eppendorf),合成cDNA,反應(yīng)體系:Buffer 5 μl、dNTP 1.25 μl、RNA酶抑制劑0.65 μl、MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶1 μl、oligo-dT 1 μl,mRNA 1 μl、DEPC蒸餾水10.1 μl。逆轉(zhuǎn)錄條件:42℃下60 min,95℃下5 min。然后利用熒光定量PCR,檢測TIMP-1 mRNA和MMP-9 mRNA相對含量,TIMP-1 mRNA序列:5′-TTCCACAGGTCCCACAACCGCAGC,3′-CGTCCACAAGCAATGAGT,片段長度228 dp;MMP-9序列:5′TGTGGCAGCACCAGGGCAGC GTGGGAGCCAGGGCC,3′-GCCTGCCACTTCCCCTTCATC,長度473 dp,反應(yīng)體系:SYDR Green 8 μl、plus 2 μl、上游引物、下游引物各1.2 μl、去RNA酶6.6 μl、cDNA 1 μl,擴增條件:94℃下30 s,45℃下30 s,72℃下60 s,進行40個循環(huán),后72℃下300 s。將PCR產(chǎn)物進行3%瓊脂凝膠電泳,EB染色后置于紫外燈下觀察。根據(jù)RT-PCR曲線計算其△Ct值。

    1.4統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS18.0軟件進行χ2檢驗、t檢驗、單因素方差分析和Spearmon相關(guān)性檢驗。

    2結(jié)果

    2.1TIMP-1、MMP-9在組織中的染色情況TIMP-1和MMP-9均主要在結(jié)締組織細胞的細胞質(zhì)內(nèi)表達,均為淡黃色至棕黃色顆粒,見圖1,圖2。

    圖1 TIMP的表達情況(10×40)

    圖2 MMP-9的表達情況(10×40)

    2.2各組TIMP-1和MMP-9的表達情況三組TIMP-1、MMP-9蛋白表達差異顯著(P<0.05),觀察組和脫垂組無顯著差異(P>0.05),對照組TIMP-1蛋白表達顯著高于觀察組和脫垂組,而MMP-9蛋白表達顯著低于觀察組和脫垂組(P<0.05),見表1。

    2.3PCR產(chǎn)物觀察電泳結(jié)果各目的基因在各組中的表達,見圖3。

    2.4三組患者TIMP-1和MMP-9 mRNA△Ct值結(jié)果三組TIMP-1、MMP-9 mRNA△Ct值差異顯著(P<0.05),觀察組和脫垂組間無顯著差異(P>0.05),對照組TIMP-1 mRNAΔCt值顯著高于觀察組和脫垂組,而MMP-9 mRNAΔCt值顯著低于觀察組和脫垂組(P<0.05),見表2。

    表1 各組TIMP-1和MMP-9的

    與對照組比較:1)P<0.05;下表同

    1、3、5條帶分別為觀察組、脫垂組和對照組的TIMP-1;2、4、6條帶分別為觀察組、脫垂組和對照組的MMP-9圖3 TIMP-1和MMP-9 mRNA電泳結(jié)果

    組別TIMP-1MMP-9觀察組1.996±0.2641)16.241±0.7111)脫垂組1.908±0.4131)15.982±0.6491)對照組3.682±0.44910.124±0.816

    2.5TIMP-1和MMP-9在SUI中表達相關(guān)性TIMP-1與MMP-9的表達呈負相關(guān)(r=-0.916,P<0.001)。

    3討論

    SUI是由多種致病因素相互作用導(dǎo)致的,年齡、妊娠與分娩情況、體內(nèi)雌激素水平都是造成SUI的原因,但對于SUI的發(fā)病機制尚不明了,目前大部分學(xué)者贊同盆底支持結(jié)構(gòu)的薄弱化與SUI密切相關(guān)〔4,5〕。而盆底的支持主要來自肌肉、韌帶和筋膜,而連接膠原、彈性硬蛋白、網(wǎng)硬蛋白的細胞外基質(zhì)(ECM)是在這些組織中起到十分重要的作用。

    近年來,MMPs和TIMPs在SUI發(fā)病中的作用逐漸受到重視,并被認為是導(dǎo)致SUI的重要機制之一。MMP-9是一種明膠酶,可以將明膠水解,當(dāng)盆底筋膜組織中MMP-9存在過表達時,對筋膜中Ⅰ型和Ⅲ型膠原大量降解,從而減弱了筋膜的支持作用〔6〕。本研究結(jié)果與劉穎琳等〔5〕的研究結(jié)果一致,提示MMP-9在SUI和POP患者的陰道壁組織中表達增強,MMP-9可能參與了SUI和POP的發(fā)病。結(jié)合本次研究結(jié)果可以推測,SUI和POP的共同發(fā)病機制使MMP-9的過量表達,而導(dǎo)致陰道壁的Ⅰ型和Ⅲ型膠原大量降解,減弱了其支持功能造成的。本研究還提示由于陰道壁組織細胞內(nèi)MMP-9基因的活化造成了MMP-9的過表達。

    目前已探明的人體內(nèi)對于MMPs具有抑制作用的主要有兩大類:一類為血源性,即纖溶酶原激活劑抑制物;另一類為組織源性,即TIMPs。TIMPs是人體內(nèi)對MMPs起到監(jiān)管作用,目前已知的TIMPs有TIMP1~4。馬雙玲等〔6〕發(fā)現(xiàn)TIMP-1和TIMP-2具有較強的對MMPs的抑制作用,幾乎可以抑制目前所有已發(fā)現(xiàn)的MMPs活性。本研究結(jié)果與Choi等〔7〕的研究結(jié)果一致,這提示TIMP-1在SUI和POP患者的陰道壁組織中表達降低,而結(jié)合前面的結(jié)果,可以推測,是由于TIMP-1的表達降低,導(dǎo)致TIMP-1和MMP-9之間的平衡被打破,導(dǎo)致膠原降解增強。曾有學(xué)者認為SUI是由于盆底結(jié)締組織中成纖維細胞合成和分泌膠原蛋白的能力下降所致,但本次研究結(jié)果說明SUI和POP是由于膠原降解過多所致〔8〕。本次研究還提示SUI和POP患者陰道壁組織中TIMP-1的基因被抑制,從而造成TIMP-1的表達減少,但具體機制仍需要進一步研究。

    綜上,在老年SUI和POP患者的陰道壁組織中,MMP-9呈現(xiàn)高表達,TIMP-1呈現(xiàn)低表達,二者可能參與了SUI和POP的發(fā)病過程。

    4參考文獻

    1Li GY,Cui WS,Zhou F,etal.Pathology of urethral fibromuscular system related to parturition-induced stress urinary incontinence and TGF-β1/Smad pathway〔J〕.Mol Cell Biochem,2012;364(1/2):329-35.

    2Kim IG,Piao S,Hong S,etal.The effect of a bioactive tissue-engineered sling in a rat of stress incontinence model〔J〕.J Biomed Mater Res A,2012;100A(2):286-92.

    3Mostafa A,Lim CP,Hopper L,etal.Single-incision mini-slings versus standard midurethral slings in surgical management of female stress urinary incontinence:An updated systematic review and meta-analysis of effectiveness and complications〔J〕.Eur Urol,2014;65(2):402-27.

    4Kim JH,Shin SH,Oh MM,etal.Factors affecting transient urinary retention after transobturator tape mid-urethral sling surgery for female patients with stress urinary incontinence:A single center experience〔J〕.Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol,2013;168(1):107-11.

    5劉穎琳,譚玉清,丁紅,等.水中待產(chǎn)產(chǎn)婦盆底組織MMP-1、TIMP-1的表達及臨床意義〔J〕.中山大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)科學(xué)版),2013;34(4):568-73.

    6馬雙玲,王魯文,馬學(xué)玲,等.TGF-β1/CTGF信號傳導(dǎo)通路在女性壓力性尿失禁發(fā)生中的研究〔J〕.中國婦幼保健,2014;29(11):1763-6.

    7Choi SJ,Oh SH,Kim IG,etal.Functional recovery of urethra by plasmid DNA-loaded injectable agent for the treatment of urinary incontinence〔J〕.Biomaterials,2013;34(20):4766-76.

    8Jiang YH,Wang CC,Chuang FC,etal.Positioning of a suburethral sling at the bladder neck is associated with a higher recurrence rate of stress urinary incontinence〔J〕.J Ultrasound Med,2013;32(2):239-45.

    〔2015-10-20修回〕

    (編輯李相軍/滕欣航)

    基金項目:黑龍江省衛(wèi)生廳科研基金資助(No.2014-278)

    通訊作者:陳雋(1975-),女,副主任醫(yī)師,主要從事婦產(chǎn)科疾病研究。

    〔中圖分類號〕R694+.54

    〔文獻標(biāo)識碼〕A

    〔文章編號〕1005-9202(2016)11-2723-03;

    doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2016.11.072

    1齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院

    2齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院病理學(xué)院微形態(tài)實驗中心

    第一作者:呂順(1993-),男,主要從事麻醉及泌尿外控研究。

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